电导法测定酶活力

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酶活性的测定原理

酶活性的测定原理
酶活性是指单位时间内酶所催化的底物转化的速率。

测定酶活性的原理主要基于酶和底物之间的反应，通常采用比色法、发光法、电化学法等不同技术来测量产物的生成量。

一种常用的测定酶活性的方法是比色法，该方法主要通过测量底物转化后所产生的色素的强度或吸收率来反映酶活性的大小。

具体操作步骤如下：
1. 首先，准备好所需的实验试剂和设备，包括底物、酶溶液、缓冲液、比色剂等。

2. 将酶溶液加入适当的量的缓冲液中，以调节pH值和酶的浓度。

此步骤有助于提供适宜的反应环境，以发挥酶的最佳催化效果。

3. 在试管中加入适量的底物溶液。

4. 立即加入酶溶液，并立即开始计时。

为了确保测量的准确性和可比性，要确保每个实验条件下反应时间一致。

5. 在一定时间内（通常为几分钟或数十分钟），停止反应。

这可以通过加入酶活性停止剂、改变反应条件或其他合适的方法来实现。

6. 加入比色剂，使产物产生明显的颜色。

比色剂的选择要根据具体试剂和底物的特性来进行，以保证在所使用的检测设备
（如分光光度计）的波长范围内有明显的差异。

7. 使用合适的仪器（如分光光度计）测量产生的色素的吸光度或强度。

根据吸光度或强度的变化，可以通过对比标准曲线或对照组的结果，计算出酶活性的数据。

需要注意的是，在测定酶活性时，实验条件的控制非常重要。

包括温度、pH值、底物浓度和酶浓度等因素的选择和控制，都会对测定结果产生影响。

因此，在进行酶活性测定时，应该对这些因素进行合理的控制和调节，以提高实验结果的准确性和可比性。

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。

（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。

（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。

（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。

酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。

2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。

纤维素酶酶活测定可编辑全文

纤维素酶酶活测定纤维素酶活测定方法一、原理纤维素酶能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，具有还原性末端的纤维二糖糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。

反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。

酶活定义纤维素酶活力单位是指55℃、pH5.0的条件下，以每分钟催化羧甲基纤维素钠水解生成1μmol还原糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。

二、实验试剂羧甲基纤维素钠（聚合度1700-2000），内切纤维素酶（苏柯汉）50mmol NaAC-HAC、DNS试剂三、实验仪器容量瓶（1000ml ×2、500 ml×3、100 ml ×4、50ml×4 ml）、移液器、烧杯（500ml×3、50ml×3）、具塞试管、电热套、水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平四、标准曲线的绘制五、酶活测定由于苏柯汉给定的pH范围为4.8-5.2，故选用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液测定纤维素酶酶活。

1、样品的制备CMC-Na溶液的制备：用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液配置0.5%的CMC-Na （羧甲基纤维素钠）溶液，准确称量CMC-Na0.05g，精确至0.001g，溶于蒸馏水中，45℃水浴锅中搅拌溶解，冷却后定容至100ml。

纤维素酶液的制备：准确称取纤维素酶，精确到0.001g。

用50mmol NaAC-HAC pH5.0的缓冲液配置成适当的浓度10000倍，保证吸光度在0.2-0.6之间。

2、DNS法测酶活：取1.8ml 0.5% CMC-Na的溶液于25ml 具塞刻度试管中，55℃预热10min左右，加入0.2ml 适当稀释的酶液，于55℃水浴锅中保温30min后，然后加2ml DNS，混匀，沸水浴5min，冷却至室温，定容到25ml。

混匀测OD540nm。

三种常用检测种子生活力方法比较(1)

三种常用检测种子生活力方法比较(1)随着种子在种植中所占的重要地位，各种检测种子生活力的方法也应运而生。

常用的检测种子生活力的方法有三种，分别是发芽率法、荧光法和电导率法。

本文将对这三种方法进行详细介绍，并进行比较。

一、发芽率法发芽率法是最常用的检测种子生活力的方法之一。

其主要原理是把一定数量的种子在一定的条件下进行发芽，然后通过计算发芽率来推断种子的生活力。

条件包括温度、湿度、光照和通风等，不同的作物和品种有不同的最适条件。

发芽率法检测种子主要有以下几个优点：一是操作简单；二是可大批量检测；三是检测结果真实可靠。

但是同时也存在着一些缺点，如检测时间长、结果受环境因素的影响等。

二、荧光法荧光法是一种新兴的检测种子生活力的方法。

荧光法主要利用了种子的细胞色素氧化酶体系在氧化还原体系下发生反应而使荧光物质荧光素产生荧光。

通过测定产生的荧光的强度来判断种子的生活力。

三、电导率法电导率法是一种利用种子中质量和导电能力的变化来测定种子生活力的方法。

其主要原理是将一定数量的种子放入导电液中，通过测定电导率的变化来判断种子的生活力。

导电液可以是盐水、糖水、电导液等。

三种方法比较从上述的介绍可以看出，每种方法都有其优点和缺点，没有一种方法是完美的。

所以在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。

一般来说，发芽率法适用于大批量检测，荧光法适用于单个种子检测，电导率法适用于不同品种间的比较。

除此之外，也可以选择不同的方法相互协作，如发芽率法和荧光法或者电导率法和发芽率法组合使用。

酶活力测定方法

空白和对照试验：空白试验：是指杂质反应和自发反应引起
的变化量，它提供的是未知因素的影响。空白值可以通过不加酶，或不加底物，或二者都加（酶预先经过失效处理）。
对照试验：是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要作为比较或标定的标准。
3）测定方法：
取样测定法：
酶变性剂：5% 三氯醋酸 3% 高氯酸其它酸、碱、醇类
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽图法和胰蛋白酶切ＲＰＨＰＬＣ肽图法。返回练习与思考
1．何谓：生化药物、生物技术药物、基因工程药物和生物制品？ 2．生化药物和基因工程药物各分哪几种？ 3．与化学合成药物的分析相比，生物药物的分析有何特点？
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加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进行直接连续检测。
检测方法：紫外-可见分光光度法旋光法荧光分光光度法电化学测定法酶偶联测定法离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定胰蛋白酶肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸）水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
2．酶活力测定法
1）基本原理：酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越高。

电导率测定

逆境胁迫对植物膜透性的影响——电导法【实验目的】1.了解逆境胁迫对植物体膜透性的影响2.掌握电导率的测定方法【实验原理】植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。

在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。

当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，电导率增大。

膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。

【实验材料】 1.材料：小麦幼苗：（1）对照（2）100mM 、200mM NaCl 处理48h （3）5%、15% PEG-6000处理48h 2.试剂：双蒸水3.器材：水浴锅，电导仪【实验内容】1、取0.1g 对照和盐或PEG-6000处理的小麦叶片，切成小段（每种处理两组平行）；2、用双蒸水冲洗几遍以除去表面粘附的电解质；3、加10 ml 双蒸水，25℃振荡温育1小时，期间经常摇动，测定此时的电导率为C1；4、将盛有小麦叶片的试管100℃煮沸 15 min ，冷却到室温后，测定此时的电导率为C2；5、相对电导率根据公式计算得出：Relative ion leakage = (C1 - C0) / (C2 - C0) *100 （注C0为双蒸水的电导率）【实验结果】各种处理数据及结果见下表：双蒸水电导率C0=1.6处理平行质量（g ） P1 P2相对电导率对照 1 0.0989 0.1008 9.9 10.6 151.4 154.7 5.8459 2 0.1026 11.2 158.0 100mM NaCl 1 0.1024 0.1033 111.1 108.1 570.0 535.0 19.9569 2 0.1042 105.0 500.0 200mM NaCl 1 0.1078 0.1056 92.6 89.6 640.0 564.5 15.6333 2 0.1034 86.6 489.0 5% PEG-6000 1 0.0997 0.1022 7.9 7.6 113.8 114.0 5.2936 2 0.1046 7.2 114.2 15%PEG-6000 10.10220.101321.3 31.5195.9 191.115.78252 0.1004 41.7186.2【实验讨论】1.从结果中可以看出，逆境胁迫会导致小麦叶片的膜透性增加，且胁迫程度越大，溶液电导率越大。

测定方法——精选推荐

测定⽅法指标测定⽅法1.相对电导率(REC) 参见郝再彬主编《植物⽣理实验》材料与⽤品电导仪、真空泵、恒温⽔浴锅、平⼝试管（或⼩烧杯）、打孔器、移液管（10ml）、去离⼦⽔、滤纸、搪瓷盘实验步骤1）将处理组叶⽚和对照组叶⽚⽤⾃来⽔轻轻冲洗叶⽚，除去表⾯玷污物，⽤去离⼦⽔冲洗2次，然后⽤洁净滤纸吸净表⾯⽔分。

⽤6-8mm的打孔器避开主脉打取圆⽚（或切割成⼤⼩⼀致的叶块），每试管10⽚（或1g），三次重复。

2）在装有叶⽚的试管中各加⼊10ml去离⼦⽔，放⼊真空⼲燥箱中⽤真空泵抽⽓10min以抽取细胞间隙的空⽓，当缓缓放⼊空⽓时，⽔即渗⼊细胞间隙，叶⽚变成半透明状，沉⼊⽔下。

3）将以上试管置室温保持1h，期间要多次摇动，或者将其放在震荡器上震荡1h4）1h后将各试管充分摇匀，⽤电导仪测其初电导值（S1）5）测毕，将各试管置⽔浴中10min，以杀死植物组织。

取出试管后⽤⾃来⽔冷却⾄室温，并在室温下平衡10min，摇匀，测其终电导值（S2）.计算相对电导率计算式为L=S1/S2 (L值的⼤⼩表⽰细胞膜受伤害的程度)如果⽤普通蒸馏⽔，需要设置蒸馏⽔空⽩试管，测值S0，则L=（S1- S0）/（S2- S0）注意事项测电导率时防⽌CO2⽓源和⼝中呼出的CO2进⼊试管，也要避免⽤⼿直接接触叶⽚。

2.丙⼆醛（MDA）硫代巴⽐妥酸法，参见李合⽣《植物⽣理⽣化实验原理和技术》材料与⽤品研钵，试管，恒温⽔浴锅，冷冻离⼼机，分光光度计；5%三氯⼄酸（TCA）[称取5g⽤蒸馏⽔定容⾄100ml],0.67%硫代巴⽐妥酸（TBA）[称取0.67g⽤5%TCA定容⾄100ml，若难溶在磁⼒器上微热]实验步骤1)取不同处理的植物样品0.5g，加5%TCA5ml（总共），研磨后所得匀浆在3000r/min下离⼼10min。

2)取上清液2ml，加0.67%TBA2ml，混合后在100℃⽔浴上煮沸30min，冷却后再离⼼⼀次（据实际情况⽽定）。

酶活测定基本方法

前处理：称取叶片0.5克，加5ml（1+4）提取液PH7.8 Pbs，冰浴研磨，12000g，4℃，20min，上清液即为粗酶提取液。

注：粗酶提取液要全部转移；加入石英砂后离心需配平1.SOD测量取透明度好的指形管，按下表加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）0.05M磷酸缓冲液 1.565mM Met溶液0.3500uM NBT溶液0.3100uM EDTA-Na20.3200uM核黄素0.3酶液0.1（对照管加缓冲液）蒸馏水0.5总体积 3.3混匀后将一支对照管置暗处作空白对照，其余各管于4000lx光下反应20-30min，反应结束后，以不照光的对照管为空白，560nm测定OD值。

按下式计算SOD活性。

SOD总活性=[(ACK —AE)×V]/[ ACK×1/2×W×a]SOD比活力=SOD总活性/蛋白质浓度SOD总活性以每克鲜重每单位表示：比活力单位以酶单位/mg蛋白表示ACK—照光对照管的消光度值AE—样品管的消光度值V—样液总体积（ml）a—测定时样品用量（ml）W—样重（g）蛋白质浓度单位为：mg蛋白/g样重。

【试剂配制】磷酸缓冲液配制：母液：A：Na2HPO4•12H2O 36g，稀释至500mlB：NaH2PO4•2H2O 15.92g，稀释至500ml提取液配制：取0.0186gEDTA（0.1mM），5g PVP （1%（g/ml））,用磷酸缓冲液（PH7.8）稀释至500ml。

PH7.8 Pbs配制：A 114.35ml + B 10.625ml，定容至500ml。

PH7.0 Pbs配制：A 152.5ml（76.25ml）+ B 97.5ml（48.75ml）稀释至1000ml （500ml）。

65 mmol/L Met: 取0.97g Met 用磷酸缓冲液（PH 7.8）定容至100ml；500 umol/L NBT:取0.0409g NBT用磷酸缓冲液（PH 7.8）定容至100ml（避光保存）；100 umol/L EDTA-Na2: 0.03721g（0.0186g）EDTA-Na2磷酸缓冲液（PH 7.8）定容至1000ml（500ml）；200 umol/L 核黄素：0.0753（0.03765）g核黄素磷酸缓冲液（PH 7.8）定容至1000ml（500ml）；（现用现配）注：若要抑制Cu-Zn/SOD的活性，可加入30mM的KCN0.3ml；若要抑制Cu-Zn/SODFe-SOD的活性，可加入50mM的H2O2（0.52ml 30%的H2O2稀释至100ml） 0.3ml；2.CAT酶提取液：取材料0.5g，置研钵中，加入5ml 4℃下预冷的提取液和少量石英砂研磨，12000g，4℃，20min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，4℃下保存备用。

浅谈活力检测在我国种子质量检测体系中的重要性

浅谈活力检测在我国种子质量检测体系中的重要性
种子作为重要的农业生产要素，其质量直接关系到农业生产的成败。

种子质量检测是
种子生产、供应、销售和使用中非常重要的环节，也是保障农业生产质量的基础。

活力检
测作为种子质量检测的重要组成部分，对于保障种子质量、提高生产效益具有重要意义。

活力检测是指通过种子发芽试验、溶胀试验、电导率测定、酶活性测定等方法，评估
种子的活力水平，从而判断种子的生长势和发芽能力。

种子活力是指种子在一定条件下，
表现出萌发后能够形成正常幼苗并快速发芽和生长的能力。

活力高的种子通常具有较强的
适应性和抗逆性，能够更好地适应环境条件和病虫害等压力因素。

因此，在种子生产、供应、销售和使用的各个环节中，对种子的活力进行检测具有十分重要的意义。

首先，在种子生产环节中，活力检测可以对种子进行分级和筛选，将活力高的种子选
出来，作为优质种子进行保留、繁殖和推广。

同时，还可以避免因种子活力低导致的生产
失败，提高生产效益。

其次，在种子供应和销售环节中，活力检测也能起到重要作用。

通过检测种子的活力，可以避免因不良种质、不良储存等因素导致的种子活力下降而影响发芽和生长，保障种子
的质量和安全。

最后，在种子使用环节中，活力检测也是非常必要的。

在种植季节中，种子的生长势
和发芽能力对农业生产的成败至关重要。

通过检测种子的活力，可以对种子进行优化配比、合理施肥、科学技术管理等，提高种子利用率和农业生产效益。

酶活力的测定

4. 抑制剂和激活剂
抑制剂和激活剂是影响酶活力的其他因素。抑制剂会抑制酶的活性，而激活剂则会增强酶的活性。在测定酶活力时，需要排除抑制剂和激活剂的影响，并进行适当的样品处理和数据处理以确保实验结果的准确性
酶活力的测定
酶活力的测定
三、实验步骤与操作要点
酶活力测定的实验步骤包括样品准备、反应体系配制、温度控制、时间记录、产物或底物浓度测定等。在操作过程中需要注意以下几点
酶活力是指酶催化特定化学反应的能力，通常以单位时间内转换底物的摩尔数来表示
通过测定酶活力，可以了解酶的性质、作用机制以及底物特异性等方面的信息一、酶活力测定的基本原理
酶活力测定的基本原理是利用酶催化的化学反应速率与酶浓度成正比的性质，通过测定反应速率来推算酶的浓度和活力。常用的方法有终点法、动力学法和连续监测法
酶活力测定结果受到多种因素的影响，包括温度、pH值、底物浓度、抑制剂和激活剂等。为了获得准确的测定结果，需要严格控制实验条件，并进行适当的样品处理和数据处理
酶活力的测定
1. 温度
温度是影响酶活力的重要因素之一。大多数酶在一定的温度范围内具有最佳活性，温度过高或过低都会影响酶的活性。因此，在测定酶活力时，需要选择适当的温度，并进行温度控制以确保实验结果的准确性
酶活力的测定
四、时间记录
时间记录是酶活力测定的关键步骤之一。在酶促反应过程中，需要准确记录反应时间，以便计算反应速率和产物生成量。在时间记录过程中，需要注意控制反应时间，避免过长或过短的反应时间对实验结果的影响
酶活力的测定
五、产物或底物浓度测定
产物或底物浓度的测定是酶活力测定的关键步骤之一。通过测定产物或底物的浓度，可以计算出酶的活性。在浓度测定过程中，需要注意选择适当的测定方法，并进行准确的浓度计算。常用的浓度测定方法有分光光度法、色谱法等

化学物质的电导率与酶催化反应

化学物质的电导率与酶催化反应电导率是衡量溶液中离子传导能力的重要物理性质。

酶催化反应则是生物体内许多关键化学过程中起到催化剂作用的酶的参与下进行的化学反应。

本文将探讨化学物质的电导率与酶催化反应之间的关系及其重要性。

一、电导性与离子浓度电导性是指物质在电场中传导电流的能力。

电导率则是衡量溶液中离子浓度的一种指标。

通过测量电导率，可以得知溶液中溶解物质的离子浓度。

常见的强电解质溶液，如酸、碱和盐，其离子浓度高，因此具有较高的电导率。

相反，非电解质溶液中离子浓度低，电导率也较低。

酶催化反应通常发生在生物体内，它们能够加速化学反应速率，增强细胞代谢过程。

酶是特殊的蛋白质催化剂，能够通过降低活化能使反应速率更快。

然而，酶催化反应不涉及大量的离子生成和消耗，因此电导率的变化相对不明显。

二、酶活性与电导率的关系虽然酶催化反应对电导率的影响微小，但它们之间存在一定的关联。

酶催化反应的速率取决于酶的活性。

而酶的活性受多种因素影响，包括温度、pH值、底物浓度以及离子浓度等。

其中，离子浓度对酶的活性有一定的调节作用。

离子能够通过改变酶的空间构象、调节底物与酶的亲和力等方面来影响酶的活性。

在细胞内环境中，离子的浓度是相当稳定的，维持着正常的生物活性。

当细胞内离子浓度发生改变时，酶的活性也会受到影响。

三、电导率在酶催化研究中的应用尽管电导率与酶催化反应之间的直接关系较弱，但电导率技术在酶催化研究中仍具有重要应用。

特别是在监测酶催化过程中底物浓度的实时变化方面，电导率技术可以提供非常有用的信息。

通过测量反应过程中电导率的变化，可以间接地了解酶催化反应的进行情况。

例如，在酶促生物燃料电池中，可以利用电导率监测底物的消耗过程，从而实时了解反应速率。

此外，电导率技术在酶催化药物筛选、酶动力学研究等领域也有广泛的应用。

四、结论综上所述，化学物质的电导率与酶催化反应之间存在一定的关系，尽管这种关系相对较弱。

电导率通过反映离子浓度间接地反映了溶液中离子的含量，而酶催化反应对电导率的影响相对较小。

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mM甲硫氨酸溶液：取1.9399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。

（3）100μM EDTA-Na2溶液：取0.03721gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml。

（4）20μM核黄素溶液：取0.0753g核黄素用蒸馏水液定容至1000ml，避光保存。

（5）750uM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.06133g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。

2、酶活性测定（1）取10ml试管（要求透明度好）测试管：分别依次加入3.5ml缓冲液+0.5ml甲硫氨酸（Met）溶液+0.5ml氮蓝四唑（NBT）溶液+0.5ml EDTA-Na2溶液+0.4ml蒸馏水(混合后摇匀)+0.1ml酶液+0.5ml核黄素溶液；对照管（2个）：分别依次加入3.5ml缓冲液+0.5ml甲硫氨酸（Met）溶液+0.5ml氮蓝四唑（NBT）溶液+0.5ml EDTA-Na2溶液+0.5ml蒸馏水(混合后摇匀) +0.5ml核黄素溶液；其中1支试管照光后测定作为最大光还原管，另1支置于暗中测定时用于调零。

脂肪酶活力测定方法及其比较

脂肪酶活力测定方法及其比较一、本文概述脂肪酶是一类能够催化脂肪酸酯水解的酶类，广泛存在于动物、植物和微生物中，其在生物体内起着重要的代谢作用。

脂肪酶活力测定方法的研究对于了解脂肪酶的催化性质、生物合成、调控机制以及在工业、医药和农业等领域的应用具有重要意义。

本文旨在介绍常见的脂肪酶活力测定方法，包括滴定法、比色法、荧光法、高效液相色谱法等，并比较它们的优缺点，以期为读者提供一个全面、系统的脂肪酶活力测定方法参考。

通过本文的阐述，读者可以了解各种测定方法的基本原理、操作步骤、适用范围以及注意事项，从而根据自身研究需求选择最合适的测定方法。

本文还将探讨脂肪酶活力测定方法的未来发展趋势，以期为相关领域的研究提供有益的参考和启示。

二、脂肪酶活力测定的基本原理脂肪酶活力测定主要基于脂肪酶水解脂肪酸的特性，通过测量水解产物的生成速率来评估酶的活性。

脂肪酶是一种能够催化脂肪酸酯水解的酶，其催化反应可以表述为：脂肪酶 + 脂肪酸酯→脂肪酸 + 醇。

在测定脂肪酶活力时，通常使用特定的底物，如三乙酸甘油酯（p-nitrophenyl butyrate）或橄榄油等，这些底物在脂肪酶的作用下会水解生成相应的脂肪酸和醇。

在测定过程中，通常使用比色法、滴定法或高效液相色谱法等方法来检测水解产物的生成量。

例如，当使用p-nitrophenyl butyrate 作为底物时，水解产生的p-nitrophenol在碱性条件下会呈现黄色，其颜色深浅与浓度成正比，因此可以通过比色法来测定其浓度，从而推算出脂肪酶的活力。

不同的测定方法具有各自的优缺点，比如比色法操作简便，但可能受到颜色干扰和pH值变化的影响；滴定法则需要精确的化学计量和反应条件控制；高效液相色谱法则具有更高的灵敏度和准确性，但设备成本较高，操作相对复杂。

因此，在选择脂肪酶活力测定方法时，需要根据实验条件和目的来综合考虑各种因素。

脂肪酶活力测定的结果还受到多种因素的影响，如酶浓度、底物浓度、反应温度、pH值等。

酶活力测定的方法

酶活力测定的方法
酶活力测定的方法有多种，下面列举常用的几种方法：
1. 比色法：通过测定酶反应产生的可见光吸收或色素形成来间接测定酶活力。

常用的比色法有尼林蓝法、间苯二酚法、对苯二酚法等。

2. 发光法：利用酶催化的氧化还原反应产生的发光信号来测定酶活力。

常用的发光法有荧光发光法、葡萄糖氧化酶法等。

3. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。

4. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。

5. 凝胶电泳方法：通过观察酶在凝胶上的迁移距离或酶活性的带状图案的强度来测定酶活力。

6. 标记物法：利用酶催化与标记物反应产生的物质变化来测定酶活力，常用的标记物有放射性同位素、酶标记物等。

以上是常用的酶活力测定方法，不同方法适用于不同类型的酶和反应体系。

在实
际应用中，需要根据具体情况选择最合适的方法来测定酶活力。

酶活力测定的原理和方法

• 次碘酸钠法：果胶酶水解果胶生成 β - 半乳糖醛酸，可用次碘酸钠法进行半乳糖醛酸的定量，从而测定果胶酶活力，对于分离纯化的外切聚半乳糖醛酸酶也采用本法测定活力。 • 粘度法：果胶被果胶酶水解后粘度下降。粘度下降至20～80%范围内时，与酶浓度成正比。
七、碱性磷酸酶的活力测定
• 碱性磷酸酶在碱性条件下催化磷酸单脂水解生成无机磷酸，该酶的测定一般采用 NPP 法或定磷法。 • 1 、 NPP 法：以对硝基酚磷酸（ NPP ）为底物，在酶作用下， NPP 水解生成黄色的对硝基酚，可用分光光度计测定。 • 2、定磷法：以腺苷酸 (AMP)为底物，按上述方法进行酶反应，生成的磷酸用钼兰定磷法测定 650nm 波长下的光密度变化，从而测定酶活力。
术主要基于酶促反应的初速度原理，下
面介绍两种方法。
定时法
• 定时法是指在线性范围内，定时记录反应过程中读数的变化（如吸光度），由于这一变化值直接正比于初速度，故可分析出相应的物质浓度。 • 这种分析仪多用分光光度法检测或选用离子选择性电极，对大批量样品进行单一成分分析或对每一样品进行多因素分析，效率很高。
酶反应的中止
• 使酶停止作用常使用强酸、强碱、三氯乙酸或过氯酸，亦可用SDS（十二烷基硫酸钠）使酶失活，或迅速加热使酶变性等。酶反应的底物或产物一般可用化学法，放射性化学法，酶偶联法进行测定。
三、连续法测定酶活力
• 连续法测定酶活力，不需要取样中止反应，而是基于反应过程中光谱吸收，气体体积、酸碱度、温度、粘度等的变化用仪器跟踪监测反应进行的过程，记录结果，算出酶活性。连续法使用方便，一个样品可多次测定，且有利于动力学研究，但很多酶反应还不能用该法测定。
1、一般的连续法

各种酶活力测定方法及注意事项

碱性蛋白酶及各种蛋白酶活力测定方法及测定有感因长期测定碱性蛋白酶酶活力与角蛋白酶活力与胶原酶活力和弹性蛋白酶活力，碱性蛋白酶活力测定还好，因有国家标准，测定按照国标来便可大大减少误差。

其余酶活力测定过程中因无统一标准且底物差异大，导致长期酶活力测定的混乱，各种酶活力测定方法与各种试剂添加，最后实际测定的酶活力只能仅作参考。

以下是各种蛋白酶活力测定方法及标曲绘制：碱性蛋白酶测定方法根据国标GB/T 23527-2009 附录B 蛋白酶活力测定福林法以下是方法碱性蛋白酶的测定方法参考 GB/T 23527-2009 附录 B 中福林酚法进行，即 1 个酶活力单位（U/mL）定义为 1 mL 酶液在 40℃、pH= 10.5 条件下反应 1 min 水解酪蛋白产生 1 μg 酪氨酸所需要的酶量，主要步骤如下。

2.2.6.1 标准曲线的绘制（1）L-酪氨酸标准溶液：按表 2-6 配制。

表 2-6 L-酪氨酸标准溶液配置表Table 2-6 L-Tyrosine standard solution form管号酪氨酸标准溶液的浓度/（μg/mL）取 100 μg/mL 酪氨酸标准溶液的体积/（mL）取水的体积/（mL）0 0 0 101 10 1 92 20 2 83 30 3 74 40 4 65 50 5 5（2）分别取上述溶液各 1.00 mL，各加 0.4 mol/L 碳酸钠溶液 5.0 mL，福林试剂使用液 1.00 mL，置于 40 ℃±0.2 ℃水浴锅中显色 20 min，用分光光度计于波长 680 nm，10mm 比色皿，以不含酪氨酸的反应管作为空白，分别测定其吸光度值，以吸光度值 A 为纵坐标，酪氨酸浓度 C 为横坐标，绘制 L-酪氨酸标准曲线。

图 2-1 L-酪氨酸标准曲线Fig. 2-1 L-tyrosine standard curve根据作图或用回归方程计算出当吸光度为 1 时的酪氨酸的量（μg），既为吸光度常数 K 值。

自然科学实验中酶的活性测量技巧与方法

自然科学实验中酶的活性测量技巧与方法酶是一类生物催化剂，能够加速化学反应的速率。

在自然科学研究中，测量酶的活性对于了解生物体内的化学过程以及开发新药物具有重要意义。

本文将介绍一些常用的酶活性测量技巧与方法。

一、酶活性的测量原理酶活性通常通过测量酶催化反应产生的产物的生成速率来间接反映。

酶活性的测量原理可以分为两类：连续测量法和间断测量法。

连续测量法是指在酶催化反应过程中，通过连续监测反应物浓度的变化来计算酶活性。

这种方法常用于反应物浓度较高的情况下，如酶催化的酶促反应。

其中，常用的连续测量法包括比色法、荧光法和发光法等。

比色法是通过测量反应物或产物的吸光度来间接测量酶活性。

例如，过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应产生的水可以与碘化钾反应生成碘，通过测量碘的吸光度来计算酶活性。

荧光法是通过测量反应物或产物的荧光强度来间接测量酶活性。

例如，琼脂糖酶催化琼脂糖水解反应产生的葡萄糖可以与荧光探针结合，通过测量荧光强度的变化来计算酶活性。

发光法是通过测量反应物或产物的发光强度来间接测量酶活性。

例如，ATP酶催化ATP水解反应产生的ADP可以与荧光素结合，通过测量发光强度的变化来计算酶活性。

间断测量法是指在酶催化反应过程中，通过在一定时间间隔内取样，然后测量样品中反应物或产物的浓度来计算酶活性。

这种方法常用于反应物浓度较低的情况下，如酶催化的酶抑制反应。

其中，常用的间断测量法包括比色法、滴定法和高效液相色谱法等。

二、酶活性测量技巧与方法1. 比色法比色法是一种简单且常用的酶活性测量方法。

它通过测量反应物或产物在特定波长下的吸光度来计算酶活性。

这种方法适用于颜色变化明显的反应体系。

例如，过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应产生的水可以与碘化钾反应生成碘，通过测量碘的吸光度来计算酶活性。

2. 荧光法荧光法是一种高灵敏度的酶活性测量方法。

它通过测量反应物或产物在特定波长下的荧光强度来计算酶活性。

这种方法适用于荧光探针与反应物或产物结合的反应体系。

电导法测定酶活力

电导法测定酶活力摘要我们已经测定了脲酶，脂肪酶，葡萄糖苷酶水解过程中的电导率的变化，这些变化严格地与前两个体系中碳酸铵的释放和第三个体系中氨基的数目成正比。

电导率的方法运用在酶和各种生理液浓度的测定中。

引言Sjoquist，Oker-Blom，Henri，des Bancels 和Bayliss 证实了用电导法测定酶活性的可能性。

最近，Northrop在他的课程中也用了这种方法研究胃蛋白酶，测定了卵蛋白盐酸盐的的水解，解释了水解底物的依赖性电离，并研究有关机制的胰蛋白酶消化的动力学。

Euler 欧拉一直采用这种方法研究甘肽的水解。

Bayliss通过研究脲酶，脂肪酶，葡萄糖苷酶的行为证实了电导率的可能性，但没有报道过任何与这些系统相关的研究。

以电导判断为目的，酶反应可以归类为：（1）那些释放强烈电子的，（2）释放那些弱离的电解质，（3）那些传统被认为非电解质的。

脲脲酶，sinigrin- myrosin，和丙酮醛-乙二醛是属于第一类，而蛋白质水解系统，会有氨基酸的产生，属于第二类。

第三组的代表是碳水化合物和大多数的葡萄糖苷酶，作用于他们各自的底物，释放糖类。

该反应属于第一组，显然最适合电导研究。

第二组反应有一定的局限性和一定的困难，但是随后能使用一个敏感的设备。

第三组反应，就目前来说，超过了其研究的范围，在他们的使用范围内，有一定的优势，在硼酸盐，硫酸盐，和钼酸存在条件下，多元醇像糖一样表现出导电性增强。

最强烈的反对意见,提出了该方法不能研究缓冲系统。

反应过程中不仅有因为反应的变化，而且有水解产物的累积，为了确定酶的活性,我们必须关注最初阶段的反应过程，使干扰因素控制在最小值。

在这段阶段,电导率的方法也许是唯一一个有任何的优势且可以应用方法。

因为它能够给人们提供早期反应阶段的大量数值。

由于在这些反应中介质的pH值很少有变化，Northrop在pH值6.2至6.4胰蛋白酶明胶的水解不伴pH值的改变而改变。

西安大学生物工程学院2020级《生物化学》考试试卷(2295)

西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 测定酶活力时，一般测定产物生成量比测定底物消耗量更为准确。

（）答案：正确解析：2. G蛋白一定是通过其α亚基发挥作用的。

（）答案：错误解析：某些G蛋白是通过其βγ亚基复合物取得成效的。

3. 原核细胞DNA是环状的，真核细胞中的DNA全都是线状的。

（）答案：错误解析：4. 茚三酮与氨基酸的反应是通过氨基还原作用。

（）答案：错误解析：茚三酮在弱酸溶液中与α氨基酸共热，即使氨基酸起造就氧化脱氨催生酮酸，酮酸脱羧成醛，茚三酮单纯即消去变为还原茚三酮，后者拉艾再与茚三酮和氨作用产生蓝紫色物质。

5. 用定位点突变方法得到缺失某一个氨基酸残基的突变体，这个突变的酶蛋白不再具有催化活性，因此可以认为该缺失残基一定是酶结合底物的必需基团。

（）答案：错误解析：6. 维生素E是一种抗氧化剂，对线粒体膜上的磷脂有抗自由基的作用。

（）答案：正确解析：7. tRNA的二级结构是倒“L”形，三级结构是三叶草形。

（）答案：错误解析：8. 用碱水解核酸时，可以得到2′和3′核苷酸的混合物。

（）答案：正确解析：9. 糖链的合成无模板，糖基的顺序由基因编码的转移酶决定。

（）答案：正确解析：10. 球蛋白与球状蛋白质是不同的。

（）答案：正确解析：2、名词解释题（25分，每题5分）1. 分段盐析答案：分段盐析是指利用不同蛋白质盐析时所可需电导率不同，逐渐增加中性盐（常用硫酸铵）的浓度，从而使不同蛋白质先后方式析出的方法。

例如血清中加入50的（NH4）2SO4可使球蛋白析出，加入100的（NH4）2SO4可使清蛋白析出。

解析：空2. 单核苷酸答案：单核苷酸是指核苷与磷酸缩合生产的磷酸酯。