磷酸盐缓冲液配制方法

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH

PBS缓冲液（～）：NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L

称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=的配制：

先配 0.2M PB (pH=，100ml)：取19ml L的 NaH2PO4， 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=按相应比例适当稀释即可，如：

0.1M PB（PH=）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至%（g/100ml）即可。

另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：

pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）

92 8 90 10

85 15

51 49

45 55

38 62

33 67

28 72

23 77

19ml 81ml

16 84

13 87

7 93

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH

H2O 1000 1000 1000 1000

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS缓冲液

称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~

的PBS配方详细

1. NaCl 137mmol/L，KCl L，Na2HPO4 L， KH2PO4 L

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：

甲液：L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸馏水至1000ml ;

乙液：L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH 甲液ml 乙液mI

你要配制pH=的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。