盐酸普鲁卡因半数致死量的测定
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的死亡数。
DJY
7
实验:普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【目的】 理解LD50的概念，掌握LD50的测定方法及计算。 【测定LD50的意义】 LD50反映药物的毒性大小。
DJY
1
安全性：治疗指数＝LD50/ED50 比值大安全
盐酸普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项， 再进入半数有效量选项。
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关 数据。
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
C母
D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
【实验材料】
实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，
实验前禁食12h,不禁水。
实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。
实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:
盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量（LD50） 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C＝∑（R·logD）
R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值；
N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只，腹腔注射第一个剂量即2.2％普鲁 卡因0.1ml/10g，若第一只小鼠用药后未出现死亡， 下一只动物则用高一剂量，如出现死亡，下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时，动物死亡用 “＋”表示，未死亡用“－”表示。若在同一剂量中 连续出现“－”两次，则下一次实验结束，最后一 只动物不做实验，但在表格中占一个，用E表示。
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算
权重 系数 0.343 0.576 0.66.37 3.43 ΣW
WX WX2
2.1554 1.3545 4.1766 3.0284 5.2374 4.3062 3.1525 2.8975 ΣWX ΣWX2
* 权重＝权重系数×各组动物数(n)
11.586 18.99 14.7219 6
表11-6 小鼠腹腔注射厚朴注射液LD50计算表
剂量 logD DX
X2
n
死亡率 机率单位
%
Y
4.25 0.6284 0.3949 10 10 3.72
5.31 0.7251 0.5258 10 30 4.48
6.46 0.8222 0.6760 10 50 5.00
8.30 0.9191 0.8447 10 90 6.28
（2）计算LD50 logD与机率单位之间有线性关系，因此将logD作为X，机率单位作为Y，用计算器作直线 回归。LD50的对数值与机率单位5相对应，故输入5(Y值)，连续按“SHIFT”和“…)]”键后显示的 X值，即为LD50的对数(称为m)，取其反对数，就是LD50。在此例，结果为： m=logLD50=0.7891 LD50=log-1m=6.1532g/kg （3）计算LD50的95%可信限 由于实验求得的LD50存在抽样误差，因此须按统计学方法确定LD50值95%可能出现的 范围(95%可信限)。在此例，由于n数相等，计算方法如下： m±1.96Sm(Sm为m的标准误) m=logLD50=0.7891(见上述计算步骤) Sm2=1/b2[(m-X)2/∑W(X-`X)2+1/∑W]
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首先用较大的剂量间距确定致死剂量的范围进而在此范围内设定若干剂量组剂量按等比方式设计相邻两个剂量间距比例在065085之间给药后观察714天内动物一般情况和死亡数根据死亡率计算ld50
普鲁卡因LD50测定
注：P138示例及P137-138 四、五剂量公式中：
X1、X2、X3 － 剂量的对数值，从小到大 P1、P2、P3 －各剂量组的死亡率 Y1、Y2、Y3 － 各剂量组死亡率转换成的概
率单位，可查表获得。
YK － 50％死亡率时的概率单位。 WC － 权重系数（查表获得） W － 权重＝ WC×n i －剂量间比值的对数
剂距 1：0.85
剂量
(mg/kg)
对数剂量 (x)
动物 数
(n)
死亡数
死亡率P (%)
概率单位 (y)
1 128
10 0
0
2 160
10 1
10
3 200
10 7
70%
4 250 5 312
10 9 10 10
90% 100%
(独立小组完成或汇集全班数据，可增加实验动物 数量，最好每组10只以上，可减小误差）
4、结果计算：
用对数剂量（x = log D）与概率单位 （y）进行直线回归（y = a + bx），以预
期0。
具体可参见书P28-29示例，按简化概率 单位法将各数值填入下表中，套用五剂量组 公式计算（手动计算）：
1、LD50 2、SX50(lgLD50的标准误) 3、95％可信限 4、直线斜率b
• 现用Casio-fx-180P计算器处理实验数据： • INV KAC，Mode 2 • 输入x按XDYD，输入y按DATA • INV A （a） • INV B (b) • INV r (r) • 5 INV x，INV 10x (LD50)
• 【注意事项】 • 1．测定LD50前，要进行预实验，摸索接近
实验 十
普鲁卡因注射液 半数致死量(LD50)的测定
普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程 度。
• 实验动物：小白鼠50只，体重18～２２g，♀♂各 半。 • 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。 • 实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记）
根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物 质危险划分为五个等级
①“0”：无毒性，LD50>15 g/kg； ②“1”：实际无毒性，5 g/kg<LD50<15 g/kg； ③“2”：轻度毒性，0.5 g/kg<LD50<5 g/kg； ④“3”：中度毒性，50 mg/kg<LD50<500 mg/kg； ⑤“4”：高度毒性，LD50<50 mg/kg
• 2.观察30min统计小鼠死亡数。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
4.钱之玉：药理学试验方法与指导
•
1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.1 2.1320. 12.13Sunday, December 13, 2020
•
2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。07:2 1:1507: 21:1507 :2112/ 13/2020 7:21:15 AM
普鲁卡因半数致死量LD的测定
严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。
•改良寇试法简便而计算较为精确。
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。
2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程
• 4.LD50的95%可信区间
• Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
传统计算方法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤：
•
启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
进入半数有效量选项。
•
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数 据。
• •
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入
一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
分组方式：
组号 鼠号 1* 1 5 4 3 2 …… 2* 2 1 5 4 3 3* 3 2 1 5 4 4* 4 3 2 1 5 5* 5 4 3 2 1
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求
• 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。
• 3.各组动物数相等或相近。
• 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最
好再80%~120%范围内。
• 计算LD50
• 1. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率
100%： • LD50=lg-1（Xm-i（Σp-0.5）） • p ——各组动物死亡率 • Xm——最大剂量的对数 • i ------相邻两组对数剂量差值
药理学系存档半数致死量的测定
5号液
4ml 5号
【实验步骤】
? 正式实验
1．分组编号:取小鼠50只，随机（如何做？）分成5组，每组10只，♀♂各 半。
2．计算给药：由腹腔注射给药。（四分法） 3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列下表：
组别
1 2 3 4 5
结果记录表
剂量
动物数
（mg/10g） （只）
10 10 10 10 10
半数致死量(LD50)（ Lethal Dose， 50%）的测定
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验 长期（慢性）毒性试验
急性毒性试验： 1～7d
? 半数致死量（lethal dose 50%, LD50）：是指能够引起
试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数值表 示。
死亡数 （只）
死亡率 （%）
小鼠的腹腔注射方法
抓好后将小鼠保持头低位
4.实验观察 30min后进行数据统计 5.计算 LD50及其 95%可信限 采用改良寇氏法计算各参数步骤：
【注意事项】
? 给药剂量准确 ? 小鼠腹腔注射 ? 分组（5组），给药从中间剂量给药
【思考题】
1. LD50和ED50定义？ 2.治疗指数的意义?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
2．确定组数、计算各组剂量：
? 组数（n）：5组
? 按公式求公比r: 1 ? n?1 D m ? 按公比求各组剂量：rD1，D2D，n …,Dn，其中D1= Dm=最大剂量、
D2= D1·r ,…，Dn= Dn-1·r, Dn 最小剂量
3．配制等比稀释溶液：要求各小鼠给药容积一样，一般0.2ml/10g，
2.了解LD50、ED50及治疗指数的意义。
盐酸普鲁卡因半数致死量的测定
药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。
【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。
LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。
此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。
【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。
【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。
方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r =（G-1）√D m/D n再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1r; D3=D2r; D4=D3r; D5=D4r; ……DG=DG-1r。
药物半数致死量的测定
药物半数致死量的测定普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定【实验目的】了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应(ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】(一)预备实验1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
盐酸普鲁卡因半数致死量的测定
药物急性半数致死量（LD50）的测定【目的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。
【原理】LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。
LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。
此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。
【实验材料】1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。
【方法和步骤】（一）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。
方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：r =（G-1）√D m/D n再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1⨯r; D3=D2⨯r; D4=D3⨯r; D5=D4⨯r; ……DG=DG-1⨯r。
普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生
全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制， 初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经 错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。
• 患者可因呼吸衰竭而死亡。
LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。 •Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无 严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。 •改良寇试法简便而计算较为精确。
传统计算方法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤： • 启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
进入半数有效量选项。 • 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数
据。 • 单击“计算”按钮，计算LD50等参数。 • 相关软件spass，sas，还有专门LD50数据处理程序。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
特殊毒性试验（致畸、致癌、 致突变） 毒性试验 长期（慢性）毒性试验
急ethal dose 50%, LD50）：是指能够引起
试验动物一半死亡的药物剂量，通常用药物致死剂量的对数 值表示。
• 测定LD50意义
(1)是衡量药物毒性大小的指标，评价药物优劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 TI=LD50/ED50 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
普鲁卡因半数致死量的测定
根据物质的半致死剂量LD50值，美国科学院把毒性物 质危险划分为五个等级
①“0”：无毒性，LD50>15 g/kg； ②“1”：实际无毒性，5 g/kg<LD50<15 g/kg； ③“2”：轻度毒性，0.5 g/kg<LD50<5 g/kg； ④“3”：中度毒性，50 mg/kg<LD50<500 mg/kg； ⑤“4”：高度毒性，LD50<50 mg/kg
• 3.标准物 • SlgLD50=i√[(Σp-Σp2)/(n-1)]
• 4.LD50的95%可信区间 • Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
Bliss法
传统计算方法
Bliss法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤： • 启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
• 1.体重相近（20±2g）。 • 2.健康，雌雄各半。 • 3.怀孕雌鼠剔除不用。Fra bibliotek随机原则
• 随机原则：是指在抽样时排除主观上有意识地 抽取调查单位，每个受试单位以概率均等的原 则，随机地分配到实验组与对照组。
【随机】
小鼠随机分组处理
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入 一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
计算LD50及其95%可信限
• 改良寇试法 • Bliss法
改良寇试法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
药物半数致死量(LD50)的测定
一、基本程序
1.立题：科学性、先进性、可行性、实用性 2.建立假说：预期结果 3.设计：实验研究的计划和方案 4.实验准备、预实验及正式实验 5.结果分析处理及撰写论文
二、实验设计的三大要素
1.实验对象：选择要求 2.处理因素：主要因素、标准化、非处理因素 3.观察指标：选择原则（特异性、客观性、重
横标目
药物半数致死量(LD50) 和半数有效量（ED50）的测定
【实验目的】 1. 测定药物LD50 和ED50 的方法 2. 理解其药理学和毒理学意义。
【相关知识】 ED50(median effective dose)：
在一定的实验条件下,一定数量的动物用药 后，约半数实验动物出现疗效的药物剂量。
LD1和ED99的比值，可靠性更高。பைடு நூலகம்
【实验步骤】
用改进寇氏法测定盐酸普鲁卡因的LD50
1. 40只小鼠，随机分成5组，称重编号 2. 按表剂量分别给药(i.p.普鲁卡因0.1ml/10g) 3. 观察30min内的中毒症状和死亡数 4. 列表，按公式计算LD50
用序贯法测定尼可刹米的LD50
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5 ~ ED95之间的距离，其值越大越安全。
可靠安全系数(certain safety factor)：
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1000 + +
20 2 6
700
-++
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药物急性半数致死量（LD50）的测定
【目的】
了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。
【原理】
LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。
LD50的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss氏法最常用。
此法要求剂量按等比级数排列，每组小鼠数相等（不应太少，一般10-20只），剂量范围接近或等于0%-100%死亡率之间，一般分5-8个剂量组。
【实验材料】
1、动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。
【方法和步骤】
（一）预备实验
1、探索剂量范围：
先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。
方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：
确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r：
r =（G-1）√D m/D n
再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1⨯r; D3=D2⨯r; D4=D3⨯r; D5=D4⨯r; ……DG=DG-1⨯r。
r值一般以1.7~1.15之间为宜。
计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。
先代入公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg, D2=76.8
1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及DG(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。
3、配制等比稀释药液系列，使每只小鼠给药容量相等，一般为0.1-0.25 mL/10g。
母液浓度C= Dm/等容注射量，如某药的Dm=187.5 mg/kg，等容注射量为0.2 mL/10g，则母液浓度C=187.5（mg/kg）/0.2（mL/10g）=0.94%。
按此配制母液25mL放入5号小烧杯，即为5号液；从中吸出20 mL 放入4号小烧杯，加水至25mL，即为4号液；再吸出20mL 4号液放入3号杯中，加水至25mL，即为3号液，如此类推，配制出2号液和1号液。
（二）正式实验
1、分组编号：称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别用苦味酸做好标记。
再按确定组数（5组）分层随机分组，使各组平均体重及性别分布尽可能一致，每组一般用小鼠10只（5只雄性，5只雌性）。
2、给药：先计算各体重组小鼠腹腔等容注射药量（0.2mL/10g），取相应的等比稀释药液，给各组小鼠腹腔注射。
给药顺序：如分为5组，先按2、
3、4组顺序给药，再根据实验结果决定是向下或向上注射。