ABC法亲和素与生物素系统的操作流程

ABC法亲和素与生物素系统的操作流程

亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法是许世明于1981年在BAB法和LAB法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC法与LAB法、BAB法不同的是第一抗体不为生物素所标记，生物素标记的第二抗体与ABC复合物相连接，最后进行显色反应定位。

复合物是将过氧化物酶结合在生物素上，再将生物素—过氧化物酶连接物与过量的亲和素反应而制备的。ABC法与LAB法、BAB法相比较具有敏感性高、特异性强、背景染色淡等优点。

ABC法染色流程如下。

(1)4um石蜡切片常规脱蜡至水，PBS洗3X3min。

(2)IHC的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR)，PBS洗3X3min。

(3)3％过氧化氢孵育10min(可省略)，以阻断内源性过氧化物酶活性。

(4)PBS洗3X3min。

(5)10％非免疫性动物血清孵育10min(可省略)，以减少非特异性背景，无需冲洗只需吸去多余血清。

(6)滴加适当稀释的第一抗体，37℃孵育60min或4℃过夜。

(7)PBS洗3X3min。

(8)滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30～60min。

(9)PBS洗3X3min。

(10)滴加ABC复合物(提前30min，A液与B液等量混合)，37℃孵育30～60min。

(11)PBS洗3X3min。

(12)0．04％DAB(含0．03％H：02)显色5～10min。

(13)复染，脱水，常规树胶封固和结果观察。