饲料中氨基酸异构体的测定方法及氨基酸异构化研究
氨基酸异构体分离
氨基酸异构体分离是一种通过物理或化学方法将不同结构的氨基酸分开的过程。
氨基酸分子由共有的α-碳原子、氨基基团、羧基和一个侧链组成。
在自然界中，氨基酸存在着多种不同的立体异构体，其中最常见的是L-和D-异构体。
要进行氨基酸异构体的分离，可以采用以下方法之一：
1. 液相色谱：液相色谱是一种常用的分离技术，可以根据氨基酸分子的物理化学性质，如极性、溶解度等进行分离。
通过调整移动相（溶剂）的组成和流速，可以实现对不同异构体的选择性分离。
2. 气相色谱：气相色谱是一种利用气相载体将氨基酸分离的技术。
在气相色谱中，氨基酸样品首先被蒸发成气体，然后通过柱上的固定相进行分离。
气相色谱通常需要对氨基酸样品进行衍生化处理，以增加其挥发性和稳定性。
3. 手性色谱：手性色谱是一种专门用于分离手性化合物的技术。
手性氨基酸的分离可以通过手性色谱柱进行，其中柱上的固定相具有对手性异构体的选择性。
根据手性分离的机理，L-和D-异构体会以不同的速率通过柱，并最终分离开来。
需要注意的是，进行氨基酸异构体分离的过程可能涉及到一些专业设
备和试剂，因此在实际操作中应遵守相关的法律法规并采取安全措施。
氨基酸异构体分离
氨基酸异构体分离（原创实用版）目录1.氨基酸异构体分离的背景和意义2.氨基酸异构体的定义和分类3.氨基酸异构体分离的方法4.氨基酸异构体分离的应用5.氨基酸异构体分离的挑战和未来发展正文1.氨基酸异构体分离的背景和意义氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内起着至关重要的作用。
氨基酸的种类繁多，其中许多氨基酸存在多种异构体。
这些异构体在生物活性、代谢途径和生物学功能上可能有很大的差异。
因此，研究氨基酸异构体的分离和性质对于理解生命过程中的调控机制具有重要意义。
2.氨基酸异构体的定义和分类氨基酸异构体是指具有相同分子式但结构或空间构型不同的氨基酸。
根据其侧链结构的不同，氨基酸异构体可分为多种类型，如丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸等。
3.氨基酸异构体分离的方法目前，氨基酸异构体的分离方法主要包括以下几种：(1) 离子交换色谱法：利用样品中各氨基酸异构体与离子交换剂之间的吸附力差异进行分离。
(2) 凝胶渗透色谱法：通过样品中各氨基酸异构体在凝胶柱中的渗透速率不同实现分离。
(3) 高效液相色谱法：采用高效液相色谱法可对氨基酸异构体进行快速、准确和灵敏的分离。
(4) 气相色谱法：适用于挥发性氨基酸异构体的分离。
4.氨基酸异构体分离的应用氨基酸异构体分离技术在生物科学、药物研发、食品工业等领域具有广泛的应用。
例如，在蛋白质组学研究中，对氨基酸异构体的分离和分析有助于揭示蛋白质结构和功能的关系；在药物研发中，对氨基酸异构体的分离和筛选有助于发现新的生物活性分子。
5.氨基酸异构体分离的挑战和未来发展尽管氨基酸异构体分离技术取得了显著进展，但仍面临许多挑战，如分离效率、分辨率和灵敏度等方面的不足。
食物中氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法（1）一、氨基酸自动分析仪法1. 原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2. 适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3. 仪器和设备3.1 真空泵3.2 恒温干燥箱3.3 水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4 真空干燥器（温度可调节）3.5 氨基酸自动分析仪。
4. 试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1 浓盐酸：优级纯4.2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3 苯酚：需重蒸馏。
4.4 混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5 缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1 000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
4.6 茚三酮溶液4.6.1 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。
饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法
《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》河南省地方标准编制说明一、编制的目的和意义氨基酸是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后的化合物，氨基酸分子中含有基和氨羧基两种官能团。
与羟基酸类似，其可按照氨基连在碳链上的不同位置而分为α-，β-，γ-...w-氨基酸，但经蛋白质水解后得到的氨基酸都是α-氨基，它们是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是维持动物生长所必需的营养物质，其种类和含量是评价饲料蛋白质营养价值的根本指标，测定饲料中的氨基酸具有非常重要的意义。
随着畜牧养殖业的迅猛发展，对饲料营养成分分析也提出了更高的要求。
饲料分析已从比较单一的高含量营养成分，如蛋白质、脂肪等的总量分析，深入到比较复杂的微量营养素，如多种氨基酸、维生素、微量元素及饲料中的有害物质等分析。
目前，饲料产品国标中氨基酸的测定采用的是离子交换柱后茚三酮衍生色谱法。
但众所周知，该方法使用的氨基酸自动分析仪价格昂贵（约70万左右），专属性强，只能分析氨基酸，且分析速度慢。
而采用高效液相色谱法测定氨基酸，具有价格便宜，分析速度快、灵敏度高、操作简便的特点，其次，目前很多实验室都配置了高效液相色谱仪，其价格易于接受（约10万左右），而且它的分析范围很广，可测定饲料中的氨基酸、维生素、碳水化合物、脂肪酸、有机酸、添加剂(风味剂、防腐剂等)和有害物质(如黄曲霉素、棉酚和农药残留等)，因而实现了一机多用的可能。
相比于目前国标方法GB/T 18246-2000《饲料中氨基酸的测定》规定的氨基酸分析方法，高效液相则具有较好的通用性，应用范围广且市场占有率高，利于推广。
随着高效液相色谱技术的日趋成熟和普及，高效液相色谱法必将成为各检测机构测定氨基酸含量的主要方法。
二、任务来源及编制原则和依据2.1 任务来源根据河南省质量技术监督局文件《河南省质量技术监督局关于下达2017年第四批河南省地方标准制修订计划的通知》豫质监标发〔2017〕355号的要求，由河南海瑞正检测技术有限公司负责对项目编号为20174210667的河南省地方标准《饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法》的起草、制定工作。
发酵饲料原料氨基酸测定方法
发酵饲料原料氨基酸测定方法发酵饲料是一种常见的饲料形式，通过微生物的发酵作用，可以将一些廉价的原料转化为高质量的饲料。
而饲料中的氨基酸是动物生理功能的基本组成部分，也是评价饲料质量的重要指标之一。
因此，准确测定发酵饲料中氨基酸的含量对于饲料生产具有重要意义。
常用的发酵饲料原料氨基酸测定方法主要有以下几种：一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种常用的氨基酸测定方法。
该方法通过将样品溶解并进行适当的预处理后，将氨基酸分离并通过色谱柱进行定量分析。
这种方法具有准确度高、灵敏度高、分析速度快等优点，被广泛应用于发酵饲料中氨基酸的测定。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的氨基酸测定方法。
该方法将样品中的氨基酸通过酸水解等预处理方法转化为气体化合物，然后通过气相色谱仪进行分离和定量分析。
这种方法具有分离效果好、分析速度快等优点，但对于一些热稳定性较差的氨基酸，需要进行适当的保护处理。
三、生化分析法生化分析法是一种传统的氨基酸测定方法，主要通过酶促反应将样品中的氨基酸转化为其他化合物，并通过光度计等仪器进行测定。
这种方法操作简便，灵敏度较高，但对于一些特殊的氨基酸，可能存在反应不完全的情况，影响测定结果的准确性。
以上三种方法在发酵饲料中氨基酸测定中都有其独特的优势和适用范围。
在选择合适的方法时，需要考虑样品的特性、测定的准确度要求、设备的可用性等因素。
此外，为了提高测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存，避免外界污染和氨基酸的降解。
总结起来，发酵饲料原料氨基酸测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和生化分析法等。
选择合适的方法可以准确测定发酵饲料中氨基酸的含量，为饲料生产提供科学依据，提高饲料的质量和营养价值。
同时，为了保证测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存等实验细节。
综上所述，发酵饲料原料氨基酸测定方法对于饲料生产具有重要意义。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
一、样品制备
1.采集样品：选择有代表性的饲料样品，用干净、干燥的容器采集，避免污染和变质。
2.粉碎样品：将采集的样品进行粉碎，使氨基酸分布更均匀。
3.称取样品：按照实验室规范，精确称取一定量的样品用于后续实验。
二、衍生化处理
1.确定衍生化试剂：根据待测氨基酸的化学性质和仪器检测需求，选择合适的衍生化试剂。
2.衍生化反应条件：确定衍生化反应的温度、时间、pH值等条件，确保反应完全、稳定。
3.衍生化产物纯化：对衍生化产物进行纯化，去除杂质，提高检测的准确性。
三、分离纯化
1.选择色谱柱：根据氨基酸的性质和分离要求，选择合适的色谱柱。
2.确定色谱条件：调整流动相的组成、pH值、流速等条件，达到最佳的分离效果。
3.检测器选择：根据需要选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
4.分离纯化过程：将样品溶液进行分离纯化，得到纯化的氨基酸
溶液。
四、检测分析
1.仪器准备：根据选择的检测器类型，准备好相应的仪器设备。
2.进样分析：将纯化的氨基酸溶液进行进样分析，记录色谱图和峰信息。
3.数据处理：对色谱数据进行处理，计算各氨基酸的含量和相关参数。
4.结果分析：根据计算结果，对饲料中游离氨基酸的含量和分布进行分析。
以上是饲料中游离氨基酸的检测方法，包括样品制备、衍生化处理、分离纯化和检测分析等方面。
根据实际需求和实验室条件，可以选择合适的实验方法和仪器设备进行检测和分析。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法主要包括以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸与重金属离子或某些化学试剂形成特定颜色的配合物，通过比色反应来定量测定游离氨基酸的含量。
2. 色谱法：常用的色谱方法包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。
色谱法可以对多种氨基酸进行分离和定量，具有准确、灵敏、高效的特点。
3. 生物传感器法：利用生物传感器对游离氨基酸进行检测。
常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器和细胞传感器等，这些传感器具有高灵敏度和高选择性。
4. 光谱法：包括紫外光谱、红外光谱和质谱等分析方法，可以利用氨基酸的特征吸收峰或质谱图谱进行定量测定。
以上方法在游离氨基酸的检测中都有各自的优缺点，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行分析。
氨基酸异构体分离
氨基酸异构体分离1. 引言氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，而氨基酸异构体则指的是具有相同分子式但结构略有差异的化合物。
氨基酸异构体的分离对于生物化学、药物研发以及食品工业等领域具有重要意义。
本文将介绍氨基酸异构体的定义、分类以及分离方法，并重点探讨手性氨基酸的分离技术。
2. 氨基酸异构体的定义和分类2.1 定义氨基酸异构体是指具有相同分子式但结构略有差异的化合物。
这些差异通常体现在立体构型上，包括手性中心的配置、立体异构体的构象等。
2.2 分类氨基酸异构体可以根据不同的分类标准进行分类，如根据手性中心的配置，可以分为L-型和D-型氨基酸；根据构象的异构性，可以分为旋光异构体和构象异构体等。
3. 氨基酸异构体的分离方法3.1 传统分离方法3.1.1 结晶法结晶法是最早被应用于氨基酸异构体分离的方法之一。
通过调节溶剂、温度和pH等条件，可以使得特定的异构体结晶出来，从而实现分离。
然而，这种方法通常需要较长的时间，并且对于某些异构体的分离效果较差。
3.1.2 层析法层析法是一种常用的氨基酸异构体分离方法。
它基于异构体在固定相和流动相之间的分配系数的差异进行分离。
常见的层析方法包括薄层层析、柱层析和高效液相层析等。
这些方法具有分离效果好、操作简便等优点，广泛应用于实验室和工业生产中。
3.2 新兴分离方法3.2.1 气相色谱法气相色谱法是一种基于气相色谱仪的分离技术。
通过调节气相色谱柱的类型、温度和流速等条件，可以实现氨基酸异构体的分离。
这种方法具有分离效果好、分析速度快等优点，适用于分析复杂样品中的氨基酸异构体。
3.2.2 液相色谱法液相色谱法是一种基于液相色谱仪的分离技术。
通过选择合适的色谱柱、流动相和梯度条件，可以实现氨基酸异构体的高效分离。
液相色谱法具有分离效果好、灵敏度高等优点，广泛应用于食品工业和药物研发等领域。
4. 手性氨基酸的分离技术手性氨基酸是一类具有手性中心的氨基酸。
由于手性氨基酸的立体异构体对于生物活性和药物效果有着重要影响，因此其分离技术备受关注。
饲料中氨基酸异构体的测定方法及氨基酸异构化研究
饲料中氨基酸异构体的测定方法及氨基酸异构化研究
氨基酸是动物生长发育的重要营养成分，其中异构体的含量是衡量动物饲料质量的重要指标。
食品行业因此需要一种简便可靠的测定方法用于检测氨基酸异构体的含量。
传统的检测方法，如固相萃取-气相色谱，离子色谱，毛细管电泳等，论文研究表明，这些方法灵敏度和准确性都不够理想，加之耗时较长，分析数据也不够直观，使得试样量难以控制，成为食品行业低效检测的重要原因。
近几年来，新一代高温原子吸收分光光度仪作为快速实验室分析仪器的出现，得到了广泛的重视和应用，可以在最短的时间内进行精确的氨基酸异构体测定，具有复杂的步骤操作、高精度分析数据、精确的时间控制、低成本和低周期的特点，显然是传统检测方法所不及的。
另外，氨基酸可通过酶作用进行异构化，使营养价值有效提高。
比如，可以构建异构化氨基酸，以改善动物饲料中氨基酸的含量、结构和物化性质，从而达到调节营养比例、改善食品品质、提高饲料利用率和动物生长发育等目的。
综上所述，氨基酸异构体的测定以及氨基酸异构化都是极具实用价值的当前研究领域，标志着氨基酸异构体的检测技术正在从传统的环节不断精进，相信这一技术的发展将有助于改善食品行业异构氨基酸的检测工作，同时也为提高食品质量带来了更多可能性。
饲料中氨基酸的测定
RA+B＋
RB＋A+(RA是阳离子交换
剂，B为溶液中的离子或待分离的生物分子）
当[A+]=[B+],[RB]>[RA], 说明 R－ 与B＋的结 合力比A＋大；反之亦然。
对于两性蛋白而言，结合力取决于其等电点以及 溶液的pH值。
饲料中氨基酸的测定
A、离子交换层析基本原理
1.平衡阶段:离子交换剂与 反离子结合。
饲料中氨基酸的测定
6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）
（一）蛋白质的水解
A、盐酸水解（常规或直接水解法）
适用范围：饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中除色氨酸、含硫氨基酸以外 的15种氨基酸的准确测定。（为什么是15种？）
样品加入6 mol/L的HCl溶液，真空封口，在110℃下水解22～24 h，冷 却后定容、过滤、蒸干。上机测定。
饲料中氨基酸的测定
A、离子交换层析基本原理
离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团） 和 反离子组成。基质一般是不溶性聚合物，如 树脂，纤维素，葡聚糖，醇脂糖等；
纤维素－O — CH2— COO-— Na＋
基质
电荷基团
反离子
树脂 － N+(CH3) — OH-
饲料中氨基酸的测定
A、离子交换层析基本原理
此过程中，色氨酸全部被破坏，含 硫氨基酸被部分氧化损失，大约损 失20～30％。加入巯基乙醇可部分 保护蛋氨酸，提高测值10％～20％
天冬酰胺
谷氨酰胺
天冬氨酸
谷氨酸
饲料中氨基酸的测定
6.3 氨基酸自动分析仪法（离子交换树脂法）
（一）蛋白质的水解
B、氧化－酸水解
氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等) 用过甲酸氧化，然后进行酸解生成磺基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱 分离、测定。
氨基酸异构体分离
氨基酸异构体分离摘要：1.氨基酸异构体分离的定义和重要性2.氨基酸异构体的分类和特点3.氨基酸异构体分离的方法4.氨基酸异构体分离的应用5.氨基酸异构体分离的发展前景正文：1.氨基酸异构体分离的定义和重要性氨基酸异构体分离是指将具有相同分子式但结构不同的氨基酸进行分离纯化的过程。
在生物科学和生物技术领域，氨基酸异构体分离具有重要意义，因为它们往往具有不同的生物活性和生理功能。
对氨基酸异构体进行分离和纯化，有助于研究其性质和功能，同时也能应用于药物、农业、食品等领域。
2.氨基酸异构体的分类和特点氨基酸异构体主要分为两类：光学异构体和非光学异构体。
光学异构体是指具有手性碳原子的氨基酸，它们的分子结构镜像对称，但旋光性质不同。
非光学异构体则是指分子结构中没有手性碳原子的氨基酸。
氨基酸异构体具有不同的物理和化学性质，如溶解度、熔点、旋光性等，这些性质差异是进行分离的基础。
3.氨基酸异构体分离的方法常用的氨基酸异构体分离方法有：结晶法、离子交换色谱法、凝胶过滤法、高效液相色谱法等。
（1）结晶法：通过调节溶液的pH 值、温度、溶剂组成等条件，使目标氨基酸异构体结晶析出，从而实现分离。
（2）离子交换色谱法：利用氨基酸异构体在离子交换剂上的吸附力不同，进行分离。
（3）凝胶过滤法：根据氨基酸异构体的分子大小进行分离。
（4）高效液相色谱法：利用氨基酸异构体在移动相和固定相之间的分配系数不同，进行分离。
4.氨基酸异构体分离的应用氨基酸异构体分离技术在多个领域具有广泛应用，如生物制药、农业、食品工业等。
在制药领域，对氨基酸异构体的分离纯化有助于制备具有特定药理活性的药物。
在农业领域，通过分离氨基酸异构体，可以研制出更具有生物活性的农药、肥料等。
在食品工业中，氨基酸异构体分离技术可以用于生产高品质的食品添加剂等。
5.氨基酸异构体分离的发展前景随着科学技术的发展，氨基酸异构体分离技术将不断完善和优化。
未来，高效、绿色的分离方法将逐渐取代传统的分离方法。
饲料中的氨基酸分析方法
赛智科技（杭州）有限公司饲料中的氨基酸 检测方法包一. 仪器及试剂仪 器：1). 天平一台（精度0.1mg ）； 2). 恒温水浴锅一台； 3). 容量瓶；4). 试管（1.5×15cm 或1.5×10cm ）； 5). 微量进样器（5ul 或10µl ）一支；6). 微量可调移液枪（1000ul ）一支、吸头多个； 7). 旋涡混匀器一台；8). HPLC 系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm ）； 试 剂：1). 超纯水（≥18M Ω∙cm ）； 2). 乙腈（HPLC 级）； 3). 三水合醋酸钠（分析纯）； 4). 冰醋酸（分析纯）；5). 衍生试剂A 和衍生试剂B 溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用时请做好防护措施）； 6). 正己烷（HPLC 级）。
二：样品制备准确称取饲料10-50 mg ，置于25 mL 具塞比色管中，加1.0 mol/L 盐酸10 mL ，搅拌提取15 min ，静置10分钟，将上清液过滤到100 mL 容量瓶中，残渣加1.0 mol/L 盐酸10 mL ，搅拌3 min ，重复提取两次，合并上清液，收集滤液并加1.0 mol/L 盐酸定容至刻度，摇匀。
赛智科技（杭州）有限公司三. 流动相的配制流动相A ： 0.1mol/L 醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93：7配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g 于1000ml 水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH 值至6.5；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml 和乙腈35ml ，混合均匀，抽滤过0.45µm 滤膜；流动相B ：水：乙腈＝20：80配制方法：准确量取水100ml 和乙腈400ml ，混合均匀，抽滤过0.45µm 滤膜；四. 衍生化反应 1. 对照品溶液的制备取月旭公司17种氨基酸对照品溶液用水稀释至原来浓度的1/10倍稀释作为对照品。
氨基酸异构体分离
氨基酸异构体分离摘要：1.氨基酸异构体分离的背景和意义2.氨基酸异构体的定义和分类3.常用的氨基酸异构体分离方法4.各种方法的优缺点比较5.氨基酸异构体分离技术的发展趋势和应用前景正文：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，它在生物体内具有多种生理功能。
然而，氨基酸分子存在着互变异构现象，即同一种氨基酸可以有不同的空间结构，这就是所谓的氨基酸异构体。
氨基酸异构体的分离对于研究氨基酸的生物活性、代谢途径等方面具有重要意义。
氨基酸异构体是指具有相同分子式但空间结构不同的氨基酸。
根据它们的结构特点，氨基酸异构体可分为以下几类：立体异构体、手性异构体、差向异构体等。
为了从复杂的混合物中分离出特定的氨基酸异构体，人们研究了许多分离方法。
常用的方法包括：色谱法、电泳法、结晶法、膜分离法等。
下面简要介绍这些方法的特点。
1.色谱法：色谱法是分离氨基酸异构体的常用方法，包括纸上色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法等。
色谱法的优点是分离效果好，操作简便，但缺点是样品处理过程较繁琐，容易产生副反应。
2.电泳法：电泳法是利用氨基酸异构体在电场中的迁移速率差异来实现分离的方法。
这种方法的优点是操作简便，但缺点是分离效果受到多种因素的影响，如pH 值、电场强度等。
3.结晶法：结晶法是通过调节溶液的pH 值、温度等条件，使氨基酸异构体结晶沉淀，从而实现分离。
这种方法的优点是分离纯度高，但缺点是操作过程较复杂，对设备要求较高。
4.膜分离法：膜分离法是利用膜材料对氨基酸异构体的选择性来实现分离的方法。
这种方法的优点是操作简便，但缺点是膜材料的筛选和制备较为困难。
各种氨基酸异构体分离方法的优缺点不同，因此，在实际应用中需要根据具体样品和实验条件选择合适的方法。
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达到了基线分离 图 ∀氨基酸的 ⁄2型异构体流出先
于相应的 2型异构体∀ 本文所建议的纯化过程效果
比较理想 通过 ≤ 2 ≥ 鉴定得知所有的氨基酸峰
与杂质峰分离开 图 ∀ 笔者没有把精氨酸和组氨酸
包括在分离和测定之中 因为这二种氨基酸的衍生
需附加条件 操作难度较大 因而不适于日常应用∀
期
袁 缨等 饲料中氨基酸异构体的测定方法及氨基酸异构化研究
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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标样加到样品中的平均回收率也在 以上 而且
加工过程对氨基酸异构化作用的影响 结果表明 玉米和大豆蛋白质中 ⁄2型氨基酸占总量的 压处理可使氨基酸的异构化率提高 以上∀
以下 加热烘焙和高
关键词 饲料 加工 氨基酸 异构化作用 气相色谱法
中图分类号 ≥ 1
文献标识码
文章编号
2
22
Α Μετηοδ φορ Δ ετερμ ινατιον οφ Αμ ινο Αχιδ Εναντιομ ερσ ιν Φεεδ ανδ Ρ αχεμ ιζατιον οφ Προτειν Αμ ινο Αχιδ σ
分别水解 和 以测试水解过程中氨基酸的异
构化∀ 样品水解后加入已知量的标准氨基酸混合液
和内标 以及标准氨基酸混合液加入内标后按以上
描述的方法进行纯化 研究样品纯化过程中氨基酸
的回收率∀
结果与分析
1 方法评价
应用
的 手 性 毛 细 管 柱 ≤ °2≤
22
∂ 实现了对 种蛋白质氨基酸异构体和内标的
全部分离 除少数几种氨基酸外 绝大部分氨基酸都
1?1
2异亮氨酸
2∏
1?1
1
⁄2亮氨酸 2亮氨酸
⁄2 ∏ 2∏
1?1 1
1?1
⁄2脯氨酸
⁄2°
2脯氨酸
2°
1?1 1
1?1
⁄2丝氨酸
⁄2≥
2丝氨酸
2≥
1?1 1
1?1
⁄2天冬氨酸 ⁄2
2天冬氨酸
2
1?1 1
1?1
⁄2蛋氨酸
⁄2
2蛋氨酸
2
1?1 1
1?1
⁄2苯丙氨酸 ⁄2°
2苯丙氨酸
2°
1?1 1
1?1
稍低于 的结果 但从研究氨基酸异构化的角度
出发 水解 可以获得更可靠的结果∀
建立了一种适用于饲料中蛋白质氨基酸气谱分
析的纯化过程 回收试验结果表明 表 ∀ 纯化效果
比较理想 绝大多数氨基酸的回收率都在 以
上 纯标样的平均回收率达到
以内标为基准
中国农业科学
卷
表 氨基酸的反应因子!水解诱导异构化及纯化过程的回收率 以内标 2正缬氨酸为基准
1?1 1?1 1?1 1?1
1?1 1
? ≥⁄ 大豆粉 ≥
气 流速为 1 Ù ∀ 采用程序升温进行分离 温
度程序为 最初温度 β≤ 保持
然后以每分
β≤ 升至 β≤ 保持
再以每分 β≤ 加温到
β≤ 保持
最后以每分 β≤ 升至 β≤ 保持
∀ 进样器和检测器的温度分别设定为 β≤
和 β≤ ∀色谱图的处理和积分应用惠普工作站∀氨
基酸的鉴定应用惠普
型 ≤ 2 ≥∀
1 1 水解和回收试验 把标准 2氨基酸混合液
因为饲料中 ⁄2型异构体的含量较低 我们还测 试了不同水解时间对标样中氨基酸异构化的影响∀ 结果表明 表 水解时间不同时 氨基酸的异构化
程度不同∀当水解 时 平均有 1 的 2型氨基
酸转化为相应 ⁄2型氨基酸 其中转化率在 以上
的有丙氨酸
!天冬氨酸
!苯丙氨酸
° !苏氨酸 × ∀当水解时间降至 时 平均 异构化率小于 1 ∀ 虽然 水解出氨基酸的量
1 研究方法
1 1 样品的水解和纯化 称取被测样品 约含
1
于特制水解瓶中 德国
∏ 大学
加
Ù≤
封好盖后放入烘箱中 在
β≤ 下水解 ∀ 水解完待冷却后打开瓶盖 加入
内标 含 2正缬氨酸和 ⁄2鸟氨酸各 Λ 过滤之
后滤液用旋转蒸发仪蒸干
β≤ ∀ 氨基酸残渣用
1
Ù≤
溶解 然后全部转移到装有
强酸性阳离子交换树脂 ⁄ ¬ Ù ∗
Αβστραχτ ≤
∏
√
∏
∏
∏∏
√
Κεψ ω ορδ σ ƒ
°
≤
∏
≤
√
×
∏
ƒ
∏
√
√
∏
2 ⁄2
√
∏×
∏
×
∏
∏
∏
⁄2
∏
植物蛋白质氨基酸是以 2型手性异构体存在 所以一般饲料中蛋白质氨基酸也是以 2型异构体 存在∀但氨基酸的 ⁄2型异构体也普遍存在于自然界 中 如细菌细胞壁中的部分氨基酸以及一些抗生素 中的氨基酸≈ 食品中的 2型氨基酸可以在加工过 程中由于高温和高压等作用致使 2型氨基酸的异 构化而产生相应 ⁄2型手性异构体≈ 发酵类产品也 可因为微生物 特别是细菌 的作用导致氨基酸的异 构化产生 ⁄2型氨基酸≈ ∀ 氨基酸的异构化可以降低 饲料中蛋白质的营养价值 影响其产品的质量∀食品
Λ 二氯甲烷溶解氨基酸衍生物待测∀
1 1 气相色谱分析 吸取上述氨基酸衍生液
Λ 注入气谱中 分流比为 Β ∀ 本研究使用的气
谱为美国惠普公司生产的 型气相色谱仪 配有
ƒ ⁄ 检测器∀ 应用的分离柱为荷兰 ≤
公司
生 产 的 手 性 毛 细 管 柱 ≤ °2≤
2 2∂
Λ Λ •≤ ° ∏
∀ 应用 作为载
≠
≠
÷ ∏2
Φαχυλτψ οφ Α νιμ αλ Σ χιενχεσ Σ ηενψανγ Α γ ριχυλτυραλ Υ νιϖερσιτψ Σ ηενψανγ 110161
Οπ εν Λαβ Ι νστιτυτε οφ Αππ λιεδ Ε χολογ ψ Χηινεσε Α χαδ εμ ψ οφ Σ χιενχεσ Σ ηενψανγ 110015
材料和方法
1 试剂和材料
所有的氨基酸手性异构体标样都是由 ≥
公司生产的 乙酰氯
!异丙醇
2
!二氯甲烷
!乙硫醇
购于 ƒ ∏ 公司 五
氟乙酸酐 °ƒ °
为
公司的产品∀ 把乙
酰氯和异丙醇按 Β 1 的比例在 β≤ 下混合制取
Ù ≤ 异丙醇溶液∀
饲料样品分别为 大豆!豆粕! 膨化大豆! 玉米!
玉米脐粉!玉米脐粕∀ 所有的样品粉碎后备用∀
收稿日期
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作 者简介 袁 缨
2 女 辽宁沈阳人 硕 士 副 教授 主 要从 事 动物 营养 和饲 料的 教 学和 研究 工作∀ ×
2
∞2
¬
ƒ¬ 2
中国农业科学
卷
用∀ 因此本研究旨在选择一种有效的氨基酸异构体 气谱分离方法!建立一种可行的水解和纯化过程 并 把这种统一的方法应用于饲料中氨基酸异构化的研 究之中 为饲料的有效利用和开发奠定基础∀
2天冬氨酸 ⁄2蛋氨酸
2胱氨酸
⁄2酪氨酸
2酪氨酸 ⁄2鸟氨
⁄2
2
⁄2√
2√
⁄2
2
⁄2 ∏
2∏
2
√
⁄2 ∏
⁄2
2
⁄2
2∏
2
⁄2
2
⁄2
2
⁄2
⁄2 ∏
2
2∏
⁄2
2
⁄2
2
⁄2
2
⁄2
2
⁄2
2
ƒ1
图 标准氨基酸 Α 和大豆粉中氨基酸 Β Δ 2和 Λ2Ν2ΠΦΠ 异丙醇酯的气相色谱图
⁄2
2 2°ƒ °
∏
尽管应用三氟乙酸酐 × ƒ 可以获得更好的 分离效果 但 °ƒ° 衍生物比 × ƒ 衍生物稳定性 好≈ ∀ 从表 反应因子的变化值也可以看出 应用 °ƒ ° 乙酰化是可行的∀ 当用毛细管手性分离柱来 分离氨基酸手性异构体时 多数研究者采用氦气或 氢气作为载气以便获得更好的分离效果≈ ∀但由于 氦气价格昂贵 而氢气又比较危险 所以在保证有效 分离的情况下 氮气是一种经济有效的选择∀
的 所以 ⁄2型氨基酸可能是由于水解和贮藏期间产
期
袁 缨等 饲料中氨基酸异构体的测定方法及氨基酸异构化研究
生的∀ 由于目前还没有关于饲料中蛋白质氨基酸异 构化程度的报道 因此 大豆粉中 ⁄2型氨基酸的含
量高于玉米粉的原因还需进一步研究∀
表 样品中氨基酸的异构化率 ⁄ 占总量的百分比 次重复平均值? ≥⁄
×
∏
√∏ ∏
√
2√ 氨基酸异构体
反应因子
水解诱导异构化率
水解
∏ ⁄Ù
水解