阿托品

附件6

中药学院综合设计性实验方案

实验课程名称：对阿托品半数致死量的测定实验分组号：填写日期：

改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈s型曲线而设计的方法，又称Karber发或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各组剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死亡率>80%。

1．预实验得到使动物全部死亡的最小剂量和使动物一个也不死的最大剂量。

2．确定组距、组数和各组剂量。

3．得出实验结果的死亡率

4．根据公式得出lgLD50

特点：动物的死亡率要呈正态分布，具有一定的局限性。

二、序贯法

1．预实验得到使动物全部死亡的最小剂量和使动物一个也不死的最大剂量。

2．确定组距、组数和各组剂量。

3．从最大剂量开始实验，给药后，10min内死亡则用“+”表示，下一组用低一级剂量，10min 内不死则用“-”表示，下一组用高一级剂量。

4．计算X·R、∑（X·R）

5．按公式计算普萘洛尔的半数致死量

LD50＝lg-1（C/n）(mg/kg)

特点：用动物少是此法最大优点，但它只适用于那些作用出现快的药物，不能计算参数[3]。

三、bliss法[4]

1．将实验所得的反应率由百分率与概率单位转换表查出概率单位称经验概率单位（yem）2．在坐标纸上, 根据对数剂量与yem构成点, 用目测法绘制一条直线, 绘制时应适当照顾靠近概率单位等于5的点, 并由直线找出各对数剂量（包括产生P=0或P=1的对数剂量）相当的概率单位称期望概率单位称期望概率单位（Y），见图

3．通过公式计算出作业概率单位（y），以便对Y进行校正，计算公式如下：

y=（Y-P/Z）+P/Z(1-1)

y=（Y+Q/Z）-Q/Z(1-2)

式中y极小值（Y-P/Z）为所有动物都生存时的概率单位，y极大值（Y+Q/Z）为所有动物都死亡时的概率单位，全距（1/Z）为极大值与极小值间的距离，P为实验所得的死亡率，q=1-p 为存活率，公式(1-1) (1-2)计算结果相同，可任意选用。Y-P/Z、1/Z、Y+Q/Z、W均由作业概率单位的极大值、极小值、全距与权重系数表查出。

4．将各点加权（nw），用x2作直线性测验，如各点不显著偏离直线，即可计算回归直线方程。如果由直线方程得到的期望概率单位（Y1）与前次的不够接近，则对Y1再次校正。（1）由公式计算x与y的离均差平方和、离均差积和：

Sxx=∑nwx2-（∑nwx）2/∑nw (2-1)

Syy=∑nwy2-（∑nwy）2/∑nw (2-2)

Sxy=∑nwxy-（∑nwx）（∑nwy）/∑nw (2-3)

(2)直线性测验：

（Sxy）2

X2=Syy - (2-4)

Sxx

自由度=剂量组数-2，查x2表。P>0.05，各点偏离直线无显著意义。P<0.05，各点偏离直线有显著意义，期望概率单位需重作图估计剂量，一定要使各点偏离无意义。

（3）由公式计算x、y的加权平均数：

x=∑nwx/∑nw (3-1)

y=∑nwy/∑nw (3-2)

(4)计算斜率：

b= Sxy/ Sxx (4-1)

（5）由公式求回归直线方程

Y1=y+b（x-x） (4-2)

将各x值代入方程后，得到Y1与目测直线的期望值（Y）相差在0.2或0.2以上，应进行第二次校正。这时以Y1代替Y，同样按上述步骤进行计算。

5．将各x值代入直线方程Y2=y+b（x-x），如得到的期望概率单位Y2与Y1相差在0.2以下，则满足要求，不必继续进行校正。

6．反应率=0.5时，Y2=5代入方程，Y2=y+b（x-x）得到的值即为LD50的对数值（m）。

特点：虽然计算过程复杂繁琐，但计算结果准确。

四、点斜法

本法要求剂量按等比级数排列，动物分为4～9组为宜，每组小鼠数相同，通常10只、20只。每只小鼠给药液容量应合适，一般以0.1～0.2mL/10g体重为宜，药物死亡率大致符合常态分布，不一定出现0％或100％死亡率。

1．预实验：

1）探索剂量范围：按文献参考值设计，在预实验中先找出100％与0％的致死剂量为实验的上下限剂量（D max和D min）。实验时可参考表4-1。

100％致死量：全部动物出现死亡的最小剂量。

0％致死量D min：全部动物都不死亡的最大剂量。

2）选择合理的剂量分组方案：组数（G）以4～9组为宜，组间剂量之比值为r。计算r:

根据r值，D max和D min计算出另外几组的剂量。

正式实验后，观察记录结果：记录动物死亡数，应观察到动物不再死亡为止，一般观察24h，可根据药物作用快慢，而缩短或延长观察时间。

2．根据实验结果计算LD50

1）原理：是通过“定点”与“斜率’’来计算回归方程。定点即是X=log LD50，Y=5之中心点，根据改进并发展了的寇氏面积法求算，点斜法采用近似权重几率单位法求算。

2）点斜法的公式及计算步骤

a．基本公式：

不含0％及100％死亡率的LD50：

LD50＝Log-1 [Xm-i（∑p-0.5）]+i/4（1-P m－P n）

含0％及100％死亡率时的LD50：

LD50＝Log-1 [Xm-i（∑p-0.5）]

b. 其他全部有关公式：

LD50的95％可信限＝Log-1（logLD50±1.96Sx50）

LD50的95％平均可信限值（L95）＝4.513×LD50×Sx50

X m：最高死亡率P m组的对数剂量，

i为组距的对数，