免疫学技术及应用ppt课件

免疫学技术及应用
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火箭电泳示意图
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双向免疫电泳（two dimentional immuno-electrophoresis）
是一种将火箭电泳与血清免疫电泳相结合 的方法。先将血清用电泳分离出各成分， 然后切下凝胶板转移至另一已加有抗血清 的凝胶上，进入垂直方向的第二次电泳， 形成呈连续火箭样的沉淀线。
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单向免疫扩散 (Single Immunodiffusion)
含抗体的凝胶 沉淀环
是将一定量已知抗体混 于琼脂凝胶中制琼脂板， 在适当位置打孔后将抗 原加入孔中扩散。抗原 在扩散过程中与凝胶中 的抗体相遇，形成以抗 原孔为中心的沉淀环， 环的直径与抗原含量成 正比相关。本法常用于 测定血清IgG、IgM、 IgA 和 C 3等的含量。
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第一节 抗原或抗体的检测
抗原和相应抗体，无论在体内或体外相遇，均 可发生各种各样的反应，统称为抗原抗体反应。
抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解 反应、补体结合反应和中和反应等。 抗原-抗 体反应可 用已知的特异性抗体检测未知的抗原； 也可用已知的抗原检测未知的抗体。
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抗原抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体溶血反应 和补体结合反应 中和反应 用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
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凝集反应 (Agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结 合后形成凝集 现象，称为凝集反应。
1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的 抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集 现象。又分为玻片法和试管法。
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补体结合反应
（Complement Fixation, CFT)
补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特
异性抗体）是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反
应。该方法敏感性和特异性均较高，但该试验影响因素较多，现在已有被
其它新方法取代的趋势。
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免疫标记技术
用荧光素、同位素或酶等示踪物质
标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接
未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，
同时标记物的性质依然存在，因而极大
的提高了反应的灵敏度，可以对微量物
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火箭电泳 （Rocket Electrophoresis)
火箭电泳也称免疫扩散，是把单向免疫
扩散同电泳结合在一起的方法。抗原在含有 定量抗体的琼脂中泳动，两者比例适宜时， 在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓 度范围内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。 此法的特点是需时较短，故可用于快速沉淀 标本中抗原的含量。
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此方法可应用于以下方面：
（1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估 算。
（2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗体）
（3）抗原或抗体相对分子量的估计
双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅 花孔型
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双向免疫扩散
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○○ ○
○○
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免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
免疫电泳为区带电泳与 双向免疫扩散的结合。 先利用区带电泳技术将 不同电荷和分子量的蛋 白抗原在琼脂内分离， 然后在与电泳方向平行 的方向上开槽，加入抗 血清。37℃下使两者扩 散，各区带蛋白在相应 的位置与抗体反应形成 弧形沉淀线。
2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细 胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗 粒凝集现象。
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血球凝集
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沉淀反应 （Precipitation)
血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸 液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现 沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉 淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。 大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介 质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。
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双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion)
位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体，当两者相对扩散时， 经一定时间后，若两者相对应，会在琼脂小孔间、两者最 恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、 形状以及对比各沉淀线之间的关系，可对抗原或抗体进行 定性分析。
免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、 发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体 反应的敏感性。
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抗原抗体反应的规律和特点
抗原与抗体能够特异性结合是基于两种分子间的结 构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分 子的一级结构决定的。
1、 特异性 ：一种抗原只能和由它刺激产生的抗体相结合，不 能跟与它无关的抗体发生反应。这种特性是由抗原的决定簇 基于抗体可变的的化学组成、空间立体构型所决定的。
2、 定比性 ：抗原一般都是多价的，而抗体（ IgG ）则是二 价的，只有二者比例适合时，抗原抗体才能结合得最充分， 形成的抗原抗体复合物最多，反应最明显，结果出现最快， 此称为等价带 。
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3、可逆性：抗原与抗体的结合虽具有稳定性，但由于二 者之间是非共价键结合，因此又是可逆的，在一定条 件下可解离，且解离后各自生物活性不变。
三孔型
○○ ○○
双排孔型
双孔型
○ ○○○
○
梅花孔型
双向免疫琼脂扩散孔型
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是将抗原与抗体分别加 入琼脂凝胶的小孔中， 二者自由向周围扩散并 相遇，在比例合适处形 成沉淀线。如果反应体 系中含两种以上的抗原 抗体系统，则小孔间可 出现两条以上的沉淀线。 本法常用于抗原或抗体 的定性 、组成和两种抗 原相关性分析的检测。
4、分阶段反应 ：第一为抗原与抗体发生特异性结合的 阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现 可见反应。第二为可见反应阶段，此阶段反应慢，往 往需要数分钟至数小时。
5 、敏感性 ：不仅可用于定性，还可用于检测极微量的 抗原抗体，其灵敏程度大大超过当前应用的常规化学 方法。
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抗原抗体比例对反应现象的影响