薄层色谱的操作
tlc薄层色谱法操作步骤
tlc薄层色谱法操作步骤
TLC薄层色谱法操作步骤如下：
1. 选取TLC板：选择一张标记编号的TLC板，并涂上一层固定相，常用的固定相包括硅胶和氧化铝等，这些材料通常被涂在玻璃板上，形成一个厚度为0.1-0.25mm的均匀层。
2. 制备样品：将待分析物质溶于合适的溶剂中，制备成适当浓度的溶液。
3. 点样：使用毛细管将样品“点”到左下角的板上。
该点应距离底部和边缘1cm。
4. 分离：将涂有样品的TLC板置于一个密闭的容器中，使其在室温下进行色谱分离。
分离过程中，待分析物质会随着移动液向上运动，并在固定相上留下一系列的斑点。
分离时间取决于待分离物质的性质和所使用的移动液。
5. 开发：取出分离完毕的TLC板，将其放入一个开发槽中，用适当的溶剂进行开发。
开发液的选择取决于待分析物质的性质和固定相的种类。
开发时间也取决于样品和开发液的性质。
6. 分析：开发完毕后，从开发槽中取出TLC板，将其放置在紫外灯下照射，观察样品斑点的颜色和形状。
【最新】薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法是一种常用的分离和检测技术，以下是一些操作注意事项：
1. 选择合适的色谱板：根据需要选择合适的色谱板，如硅胶板、氰化纤维素板等。
不同的样品需要不同的色谱板来实现良好的分离效果。
2. 准备色谱层：将色谱板放在合适的托盘上，均匀地涂抹上薄层色谱剂。
涂层应该均匀、细致，避免出现孔隙和不均匀的现象。
3. 样品处理：样品中的杂质和溶剂可能影响色谱的分离结果，因此在样品处理前，需要根据需要进行前处理，如稀释、过滤等。
4. 样品施加：将经过前处理的样品加到色谱层上，可以使用毛细管或者微量移液器进行施加，避免过量的样品施加。
5. 吸附和分离：将施加样品的色谱板放入合适的溶剂系统中，让溶剂自己上升或者使用上下法进行分离。
注意，溶剂上升的速度要适中，避免迅速上升导致分离不完整。
6. 显色和检测：将分离好的色谱板放在适当的显色剂中，让目标物
质显色。
可以使用紫外灯、红外线检测器或者目视观察等方法进行检测。
7. 记录结果和分析：根据实验结果，记录分离和检测的结果，并进行分析解读。
注意，结果必须要有明确的标识和记录，以便于后续的分析和比较。
这些是薄层色谱法操作时需要注意的一些主要事项。
具体操作时还需根据实验要求和仪器设备进行相应的调整和操作。
薄层色谱的操作
6．检测6.1定性分析（同一性试验）在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。
分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。
当混合物物质被测试时，参考标准物中单个馏份的Rf值可能会与纯物质的Rf有所不同，但测试物理学馏份和标准化馏份的hRf值必须相符，其DhRf在±3之内。
为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪实时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。
多波长测定将测试物和参照物的图谱情况和hRf值相关联供进一步鉴别。
6.2定量分析（仪器：存及打印。
同心部份的TLC/HPTLC增加。
，302，313，3 66，405，436图10：a)b)TLC/HPTLC7．标准条件7．1HPTLC板10x10和20x10cmHPTLC预涂板的标准条件总结如下以便于参考。
薄层商品化生产的HPTLC板规格10x10和20x10cm板；由样品数目决定点样用毛细管移液管或Nanomat进行斑状点样或用自动点样器作条状点样数量一般，斑状点样用20nl-1ml,窄条点样用2-20ml定位起点在距板下缘10mm处溶剂数量限定采用体积量或绝对量。
一般，对10x10cm双槽展开室的一个槽加5ml,对20x10cm双槽展开室的一个槽加10ml分离距离5cm展开室对10x10或20x10cm板用双槽展开室分离模式线性（上行式或水平的）饱和（A）无滤纸放入；溶剂和TLC/HPTLC板同时加入到展开室中。
（B）无滤纸放入；至少在层析展开开始前10分钟将溶剂倒入至展开室中。
（C）放入滤纸；至少在层析展开开始前30分钟将溶剂倒入至展开室中。
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法操作流程
薄层色谱法是一种常见的化学分析方法，其操作流程如下：
1. 样品的制备与稀释：首先需要将待测物质制备成可供操作的样品，
并根据实验要求加入适量的溶剂稀释。
2. 色谱板的准备：根据需要选择相应的色谱板，并将其装入色谱槽中。
3. 样品的上样：使用毛细管或者微量注射器，在色谱板的起点处滴加
适量的样品。
4. 色谱板的开发：将色谱槽加入一定量的移动相，观察样品的运移情
况并记录。
5. 结果的观察与记录：当样品在色谱板上达到一定的移动距离时，将
其取出并进行观察和记录。
6. 结果的计算与分析：根据实验结果进行比对和计算，从而得出有关
样品的相关数据。
7. 结果的报告：将实验结果进行归纳和总结，并编写出符合学术要求
的分析报告。
总之，薄层色谱法是一种操作简单、分析快速的分离技术，在实际应
用中有着广泛的应用。
通过正确的操作流程和合理的结果分析，可以为研究人员提供大量有关样品的信息。
薄层色谱操作
薄层色谱操作
薄层色谱是一种在实验室中广泛应用的色谱技术。
它可以用于化合物的分离和纯化。
以下是薄层色谱的操作步骤和注意事项：
操作步骤：
1. 准备样品和薄层色谱板。
将样品溶解在合适的溶剂中, 然后在薄层色谱板上刷上一条样品线。
2. 将薄层色谱板放入色谱槽中, 槽中可以加入一定的溶剂, 使其与样品线平齐。
等到溶剂逐渐向上爬升并到达一定高度时, 停止操作。
3. 取出薄层色谱板, 然后标记各化合物的RF值。
4. 如果需要, 可以使用紫外光或其他检测方法进行分析验证。
注意事项：
1. 选用合适的薄层色谱板和溶剂。
不同的化合物需要使用不同的薄层色谱板和溶剂。
选择错误的材料可能会导致不准确的结果。
2. 操作时应避免色谱板上有空气泡。
空气泡可能会对结果产生误差。
3. 薄层色谱板应在封闭的环境下储存。
开盖情况下储存的薄层色谱板
可能会受到空气中湿度和灰尘的影响, 从而影响测试结果。
4. 建议使用培养皿盖板盖住色谱槽。
这可以减少溶剂挥发, 从而提高色谱板的稳定性。
总之, 在进行薄层色谱操作时, 应严格按照操作步骤并遵守注意事项。
这将有助于获得准确和可重复的结果。
薄层色谱鉴别介绍
薄层色谱鉴别介绍薄层色谱（TLC）是一种常用的分离技术，可用于鉴别化合物的混合物。
它是一种简单易用、经济实惠、快速高效的分析方法，常用于药物分析、天然产物分析、农药残留分析等领域。
下面我将对TLC的原理、操作步骤和应用进行介绍。
一、TLC的原理TLC的原理基于色谱分离原理，利用物质在不同固定相上的亲疏性差异，通过毛细作用和扩散作用，使化合物被分离。
TLC的分析基质是通过固定相涂覆在玻璃、铝或塑料基质上，样品通过毛细作用在固定相上上升，而不同成分在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
TLC工作原理示意图如下：[示意图]二、TLC的操作步骤1.准备试剂和设备：准备TLC板、玻璃容器、色谱溶剂和样品溶液。
2.准备试样：将待测试物溶解在合适的溶剂中，得到试样溶液。
3.均匀涂布试样：将试样溶液均匀地涂布在TLC板上的出发线上。
4.选择合适的溶剂系统：根据待测试物的性质和分离要求，选择合适的色谱溶剂系统，如正己烷/乙醇（9:1）。
5. 开始分析：将TLC板放入玻璃容器中，添加色谱溶剂至约2cm高度，但不能触及TLC板。
盖上容器盖，让试剂与固定相接触，溶液会开始上升。
6. 结束分析：当溶剂上升到离TLC板顶端1-2cm时，将TLC板取出，迅速标记出相应的上升高度。
然后将TLC板晾干并进行显色。
最后使用UV灯或显色剂对TLC板进行观察和分析。
7.数据分析：根据显色结果，通过测量上升的高度和各样品的Rf值（Rf值=色谱前移距/色谱跑液的前行距离），得到鉴别结果。
三、TLC的应用1.鉴别混合物的成分：通过TLC的分离作用，可以鉴别混合物中的各个成分，可以用于检测药物中的杂质和控制药物的质量。
2.分析天然产品：可以用于从天然草药、植物中提取的混合物中分离和鉴定活性物质。
3.农药残留分析：TLC可以用于农产品中农药残留的快速筛查和定量分析，具有操作简单、快速、灵敏等优点。
4.食品和环境监测：可用于鉴别食品和环境样品中的各种组分，如食品中的添加剂和环境中的有机物。
薄层色谱的操作方法
薄层色谱的操作方法薄层色谱（Thin-Layer Chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，用于分离和分析混合物中的化合物。
以下是薄层色谱的基本操作方法：1. 准备薄层色谱板：选择合适的薄层色谱板，通常是由玻璃、铝箔或塑料片涂覆一层吸附性物质（如硅胶或氧化铝）制成。
根据需要，可以选择不同类型和厚度的色谱板。
2. 准备样品和标准溶液：准备待测样品和相应的标准溶液。
将它们溶解在适当的溶剂中，以得到均匀的溶液。
通常使用无色的溶剂，如氯仿、甲醇或丙酮等。
3. 准备开发槽：选择一个适当大小的玻璃槽或容器，添加足够的色谱溶剂，使其深度约为1-2厘米。
常用的色谱溶剂包括正己烷、乙酸乙酯和甲苯等。
4. 应用样品：使用微量注射器或吸管，在色谱板的一端（通常是底端）上沿直线或点状均匀地涂抹样品溶液。
注意，样品斑点的大小和浓度应适度，以避免过度扩散和重叠。
5. 进行开发：将涂有样品的色谱板垂直放入装有色谱溶剂的开发槽中，确保样品斑点不接触溶剂。
盖上盖子，使色谱槽密封。
色谱溶剂会在色谱板上升，沿着样品斑点上的吸附物向上运移。
6. 干燥和可视化：当溶剂前进到色谱板的一端时，取出色谱板，并迅速将其放在通风处晾干。
然后，根据所需的可视化方法，使用适当的染色剂、紫外线灯或热激发等技术，对色谱板上的斑点进行可视化。
7. 测量和解释：测量每个化合物斑点的迁移距离，并计算相对迁移率（Rf 值）。
Rf 值是化合物前进距离与溶剂前进距离之比，可用于标识和解释化合物。
薄层色谱操作的关键在于控制涂样、开发溶剂、色谱板和环境的条件，以获得准确、可重复和可靠的分离和分析结果。
根据需要，可以采用不同的变体和改进技术来适应特定的分离目标和样品特性。
薄层色谱法标准操作规程(SOP)
名称：薄层色谱法标准操作规程(SOP)关键词：薄层色谱；操作目的：进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定背景知识：选填项目原理：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
主体内容：1 仪器与材料1.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
1.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
1.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
1.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
1.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
2 操作方法2.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
2.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
简述薄层色谱法的操作方法 薄层色谱操作规程
简述薄层色谱法的操作方法薄层色谱操作规程（薄层色谱）法是指依据各成分对同一吸附剂的吸附本领不同，在流动相流动固定相的过程中，连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸，实现各成分的相互分别的吸附薄层色谱法分别法。
以下，依据网上的资料，整理在薄层色谱法的使用中可以做的步骤1.订立薄层板，将固定相和水用研钵向一个方向研磨混合，除去表面气泡后，放入涂布器，将涂布器顺畅地移动到玻璃板上进行涂布，取下涂布在薄层上的玻璃板，放置在水平台上在室温下干燥后，在规定的温度下干燥，放入干燥剂进行干燥使用前检查均匀度。
2.点样除另有规定外，点基线距底边规定距离，点直径和点间距与纸色谱法相同，点间距看点扩散情况，不影响检测做样品的时候，注意不要损伤薄层表面。
3.打开油缸时，事先用打开剂使之饱和。
在汽缸中加入充重量的打开剂，将与汽缸相同高度、宽度的滤纸贴在墙壁上，一端浸在打开剂中，密封汽缸顶部的盖子，使系统平衡，或依照本文的规定操作。
将样品薄片放入打开缸的打开剂中，浸渍在打开剂中的深度从薄片的底边开始（请勿将样品点浸入打开剂），密封盖板，打开至规定距离取出薄板晾干，依照各品种以下的规定进行检查。
4.用薄层扫描仪扫描检测色谱斑点，或直接扫描色谱斑点到薄层上定量上可以利用薄层扫描法。
薄层扫描的方法除另有规定外，还依据各种薄层扫描仪的结构特征和使用说明依据实在情况，选择吸取法或荧光法，以二波长或一波上进行扫描。
对薄层扫描的结果产生影响原因很多，在保证供试品的斑点在确定浓度范围内形成线形的基础上，与供试品对比品在同一薄层打开扫描，比较定量，削减误差。
有各种各样的供试品只有得到分别度和再现性好的（薄层色谱），才能得到充分的结果。
由于资料有限，因而上述内容并不全面，欢迎补充。
薄层色谱仪的适用薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分别和定性分析少量物质的一种很紧要的试验技术，属固—液吸附色谱；它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分别；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大；因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。
薄层色谱操作规程
薄层色谱操作规程
《薄层色谱操作规程》
一、实验目的
通过薄层色谱进行化合物分离和鉴定，掌握薄层色谱操作技术，提高实验操作能力。
二、实验仪器和试剂
1. 薄层色谱仪
2. 薄层色谱板
3. 色谱柱
4. 样品溶液
5. 各种溶剂
三、实验操作步骤
1. 准备薄层色谱板，标出样品点和色谱进样位置。
2. 准备好样品溶液，进行前处理工作，如筛选、过滤等。
3. 用吸头将样品溶液均匀地吸附在薄层色谱板上的样品点上，待干燥后再进行操作。
4. 将干燥后的薄层色谱板放置在色谱槽中，加入适量的色谱溶剂，使之在薄层色谱板上上升，直至触及顶部。
5. 将色谱板拿出，标记出色带位置，用紫外灯照射和标记，记录色带的长度和颜色。
6. 根据色带的长度和颜色，与标准色谱图对照，确定其成分。
7. 根据色带的长度和颜色，计算Rf值，并与标准值对照鉴定
成分。
四、注意事项
1. 操作过程中需轻拿轻放，避免薄层色谱板受损。
2. 使用各种溶剂时，要注意其挥发性和易燃性。
3. 色带观测和鉴定时，要在相应的波长下观察，如紫外灯波长254nm。
4. 操作结束后，要对薄层色谱仪进行清洁和维护。
通过《薄层色谱操作规程》的实验操作，可以掌握薄层色谱技术的基本操作流程，提高化合物分离和鉴定的能力。
薄层色谱检查法标准操作规程
依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程范围：各种检验中薄层鉴别的操作1．定义：薄层色谱法，系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上，成一均匀薄层，经点样、展开与显示以后，再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比,用于进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2．仪器与材料2.1 展开室：可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。
必要时在展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性，但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。
2.2 玻璃板：除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。
也可用载玻片进行预试验。
各种薄层板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。
玻璃板的质量有一定要求，厚度为2mm或3~4mm，预制板一般使用1mm的玻璃板。
应有良好的平面性，可用镜面玻璃或浮法玻璃，还应有一定的耐热性，以使在烘烤时不致破裂。
2.3 涂布器：有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层.2.4 点样器：玻璃毛细管2.5 吸附剂或载体首选为硅胶G、硅胶GF254.硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求为直径10~40μm。
其比表面积可达约600m2/g。
由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。
而且不同厂家生产的硅胶，其质量也有差别，甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差别。
因此要使薄层分离的结果比较稳定，应严格控制硅胶质量。
3．薄层板的制备薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25～0.5mm(供分析用).由于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。
薄层色谱的操作步骤
薄层色谱的操作步骤薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
它主要基于分子在固定相和流动相之间的相互作用，通过比较化合物在薄层载体上的移动程度来进行分析和鉴定。
本文将介绍薄层色谱的操作步骤。
材料准备在进行薄层色谱之前，我们需要准备以下材料和设备：•薄层色谱板：常见的载体有玻璃、铝板或塑料板等，载体上涂有固定相材料，如二氧化硅或氧化铝。
•样品：需要分离和鉴定的化合物样品。
•流动相：一种液体溶剂，用于将化合物溶解并帮助其在薄层载体上迁移。
•开发剂：用于可视化化合物在薄层载体上的分离程度。
•色谱槽：用于将薄层色谱板置于其中进行操作。
操作步骤以下是薄层色谱的基本操作步骤：1.准备薄层色谱板：在薄层色谱板上使用细刷均匀地涂抹固定相材料。
确保固定相均匀、细腻地附着在载体上。
2.样品的处理：将待分离和鉴定的样品溶解在适当的溶剂中。
确保样品完全溶解，并注意溶剂的选择以保证与固定相和流动相的相容性。
3.样品施加：将样品小心地在薄层色谱板的起点处滴加。
尽量避免涂抹和滴加过多的样品。
4.流动相的选择和填充：根据样品的特性选择合适的流动相，并将色谱槽中的流动相填充到一定的高度。
确保流动相不超过薄层色谱板的起点。
5.迁移：将薄层色谱板放置在色谱槽中，使起点处浸入流动相。
注意避免色谱板与容器壁接触，以免出现非均匀迁移现象。
6.迁移的控制：根据所用的固定相和流动相的属性，控制迁移速度。
若层析带（色斑）移动过快，可适当降低流动相的高度，或改变流动相的组成。
7.可视化和记录：注意观察迁移过程中的色斑。
当各组分分离良好时，取出薄层色谱板并使用开发剂处理，使各化合物形成明显的斑点或色带。
记录有关化合物迁移和染色的关键信息。
8.分析和解释：通过比较不同样品的色带位置、形态和色泽，结合先前的实验数据和文献报道，对化合物进行分析和解释。
结束步骤完成薄层色谱后，需要进行一些必要的处理和整理工作：1.停止分离：将薄层色谱板从色谱槽中取出，停止化合物的迁移。
实验---薄层色谱法
（3）测定：紫外分光光度法：洗脱液调整至一定体积，在此化合物最大吸收波长处测定。同时把样品斑点相应位置薄层吸附剂同样取下做空白对照。
比色法：选择灵敏度高、专属性好的比色反应测定化合物含量，是比较常用的方法。
其它方法：极谱、库仑滴定、荧光测定等。
2 直接测定法：
（1） 目测法：样品经色谱分离后，直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断样品中所测成分的含量。
薄层色谱法：
通常指以吸附剂为固定相的一种液相色谱法。即将固定相在玻璃、金属或塑料等光洁的表面上均匀地铺成薄层，试样点在薄层的一端，流动相借毛细作用流经固定相,使被分离的物质展开。
比移值（Rf）
Rf=原点至组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离
组分A的Rf=a/c
(2)双波长扫描：是采用两种不同波长的光束先后扫描所要测定的斑点，并记录下此两波长吸光度之差。
扫描轨迹：
直线扫描、锯齿状扫描、圆形扫描
双底展开槽
水平展开槽
4.展开方式：
(1)近水平展开：将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm，薄层上端垫高使薄层与水平成5-10o的角。
(2)上行展开：将点样后的薄层放在盛有展开剂的直立型的展开槽中，展开剂由薄层下端借毛细管作用上升至前沿。
(3)下行展开
极性较小的溶剂降低极性大的溶剂的洗脱能力，使Rf值降低。
中等极性的溶剂往往起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。
在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高分离度。
用粘度太大的溶剂时需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘度，加快展开速度。
(四)点样：
薄层色谱操作步骤流程
薄层色谱操作步骤流程简介薄层色谱是一种常见的分离和分析技术，广泛应用于有机化学、药物分析、环境监测等领域。
它基于分离物质在固定相上的吸附性质进行分离，通过不同物质在固定相上的吸附程度不同，实现对混合物的组分分离和定性分析。
实验所需设备和试剂•薄层色谱板•色谱层析溶剂（开发剂）•样品溶液•开发槽•显色剂操作步骤1.准备色谱板：将薄层色谱板切割成适当大小，并用铅笔在色谱板上标记出样品位置。
2.准备样品溶液：将待分析的样品溶解在适当的溶剂中，制备成适宜的浓度溶液。
3.样品上板：使用微量吸管直接在样品位置滴加适量的样品溶液，使其均匀地涂敷在色谱板上。
4.色谱板预处理：将样品涂敷后的色谱板放置在通风处或使用烘箱晾干，确保样品完全干燥，以免影响后续的分离和分析结果。
5.准备开发剂：根据需要选择适当的色谱层析溶剂，并在开发槽中加入足够的开发剂，使其深度达到足够的高度。
6.开发过程：将预处理后的色谱板快速且垂直地放置在开发槽中，确保样品位置不与开发剂接触。
待开发剂上升至适当高度（通常为色谱板的1-2cm）后，取出色谱板并迅速将其放置在室温下。
7.晾干过程：等待开发剂在色谱板上表现出理想的色谱迁移效果后，将色谱板再次晾干。
8.显色检测：根据待分析物的性质选择合适的显色剂，在色谱板中进行染色或者影像检测。
根据显色剂所表现的色带位置和颜色变化，可以判断混合物中各组分的迁移情况和相对含量等信息。
9.结果分析：根据色带的迁移距离、相对含量以及与已知标准品的对比等信息，对样品进行分析和定性。
实验注意事项1.色谱板在操作和处理时需小心，避免刮伤或破损。
2.各种试剂使用时需注意安全，避免接触皮肤和吸入气体。
3.色谱板处理过程中，需避免手指接触样品位置，以防止污染。
4.所使用的开发剂应遵循相应的危险品管理规定和操作规程。
5.显色剂的选择应符合实验要求，根据不同化合物的性质进行合理的选择和使用。
结论薄层色谱是一种简单、方便、快速的分离和分析方法，在实验操作中需要注意各个步骤的实施和安全操作。
tlc薄层色谱法操作流程
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薄层色谱的操作
6．检测6.1定性分析（同一性试验）在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。
分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。
当混合物物质被测试时，参考标准物中单个馏份的Rf值可能会与纯物质的Rf有所不同，但测试物理学馏份和标准化馏份的hRf值必须相符，其DhRf在±3之内。
为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪实时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。
多波长测定将测试物和参照物的图谱情况和hRf值相关联供进一步鉴别。
6.2定量分析（仪器：存及打印。
同心部份的TLC/HPTLC增加。
，302，313，3 66，405，436图10：a)b)TLC/HPTLC7．标准条件7．1HPTLC板10x10和20x10cmHPTLC预涂板的标准条件总结如下以便于参考。
薄层商品化生产的HPTLC板规格10x10和20x10cm板；由样品数目决定点样用毛细管移液管或Nanomat进行斑状点样或用自动点样器作条状点样数量一般，斑状点样用20nl-1ml,窄条点样用2-20ml定位起点在距板下缘10mm处溶剂数量限定采用体积量或绝对量。
一般，对10x10cm双槽展开室的一个槽加5ml,对20x10cm双槽展开室的一个槽加10ml分离距离5cm展开室对10x10或20x10cm板用双槽展开室分离模式线性（上行式或水平的）饱和（A）无滤纸放入；溶剂和TLC/HPTLC板同时加入到展开室中。
（B）无滤纸放入；至少在层析展开开始前10分钟将溶剂倒入至展开室中。
（C）放入滤纸；至少在层析展开开始前30分钟将溶剂倒入至展开室中。
薄层色谱法操作步骤及注意事项
薄层色谱法操作步骤及注意事项嘿，咱今儿就来聊聊这薄层色谱法！这玩意儿可有意思啦，就像是一场小小的实验冒险。
先说说操作步骤哈。
你得准备好那薄如蝉翼的层析板，这就好比是冒险的舞台。
然后呢，把样品小心翼翼地配好，就像给舞台上的主角化好妆。
接着，用那细细的毛细管或者微量注射器，把样品轻轻地点在层析板上，可别太用力啦，不然就把舞台给戳破咯！点好样后，把层析板放进那装着展开剂的层析缸里，看着展开剂慢慢地往上爬，就像看着主角在舞台上慢慢展现风采。
等展开到合适的位置，赶紧把层析板拿出来，让它晾干或者烘干。
嘿，这不，一幅漂亮的图谱就出来啦，就像主角完成了一场精彩的表演！那注意事项可不少呢！你想啊，要是不注意，这表演不就搞砸啦？首先呢，层析板得选好，质量差的可不行，那不是给表演添乱嘛！然后，样品的浓度可要把握好，太浓了就像化了个大花脸，太淡了又看不出来，这可得拿捏准咯！展开剂也很关键呀，得选对适合的，不然怎么能让主角好好发挥呢？还有啊，操作的时候要轻手轻脚的，别毛手毛脚把一切都搞乱了。
在这个过程中，就像烹饪一道美味佳肴，每个环节都不能马虎。
你要是不小心在点样的时候手抖了一下，哎呀，那图谱可能就不那么完美啦！就像做菜时盐放多了一样。
又或者展开剂没选对，那图谱就可能变得乱七八糟，好比做出来的菜味道怪怪的。
所以呀，每一步都得认真对待，可不能敷衍了事哟！咱再想想，这薄层色谱法不就像是人生的一场小旅途嘛！每一步都要走得稳稳当当，注意着各种细节，才能欣赏到最美的风景。
要是粗心大意，那可能就会错过很多精彩呢！总之呢，薄层色谱法看似简单，实则暗藏玄机。
只有用心去体会，认真去操作，才能让它发挥出最大的作用。
可别小瞧了它哟，它能帮我们解决很多问题呢！大家都好好去试试吧，相信你们会爱上这个小小的实验冒险的！。
薄层色谱仪操作方法 色谱仪操作规程
薄层色谱仪操作方法色谱仪操作规程薄层色谱仪操作方法：（1）薄层板制备除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合, 去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3 薄层色谱仪操作方法：（1）薄层板制备除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
（2）点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
点样时必需注意勿损伤薄层表面。
（3）打开打开缸如需预先用打开剂饱和，可在缸中加入充重量的打开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入打开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。
将点好样品的薄层板放入打开缸的打开剂中,浸入打开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入打开剂中）,密封缸盖,待打开至规定距离（一般为10～15cm）,取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
（4）如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
薄层扫描的方法，除另有规定外，可依据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合实在情况，选择吸取法或荧光法，用双波长或单波长扫描。
由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在确定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对比品在同一块薄层上打开后扫描，进行比较并计算定量，以削减误差。
各种供试品，只有得到分别度和重现性好的薄层色谱，才能获得充分的结果。
斑点洗脱后测定法薄层经打开后用刮刀或捕集器将斑点的吸附剂捕集后，再用适当有机溶剂洗脱，然后用可见、紫外分光光度法、荧光分光光度法测定含量。
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薄层色谱的操作1.方法原理薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。
(1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- （诱导）- 偶极相互作用，氢键和德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。
基于这点，TLC系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。
用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。
色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来评价。
2. 薄层板2.1手工自制板2.1.1玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄1~2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。
玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求2.1.2制作方法:除另有规定外，将1份吸附剂加适量的水（如1份硅胶G一般加3份水），在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为105℃~110℃)下烘约30分钟活化,贮于干燥器中备用。
薄层板的厚度一般为0.25~0.5mm.。
2.2 商品化供应的预制板和高效板2.2.1板的尺寸20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm图1 不同的板尺寸TLC/HPTLC预制板有不同的规格供应。
常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。
使用的规格取决于TLC或HPTLC的类别和样品的数目。
2.2.3 TLC/HPTLC板的预洗及活化一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇(8:2)，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。
具体操作可通过空白色谱展开来实现。
色谱板预洗完后,应在105°C加热1小时进行干燥，再在室温下置放至少2小时（需采取保护措施以防止实验室空气中的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。
3. 样品点样3．1点状点样和条带状点样每次点样前，TLC/HPTLC板应在正常光线下和紫外灯下用肉眼检查薄层的损伤情况和杂质，只有无损伤、清洁的TLC/HPTLC板方可使用。
样品可进行点状或条带状点样。
要想获得最佳的薄层分辨率，必须保证移行方向中的起点要小，常规的TLC薄层点状点样每次点0.5至5微升，相比之下，HPTLC薄层最大点样量为1微升。
点样量较大的样品可使用自动化装置点样，喷雾成条带状是一种可以点样量大而同时又能促成最有效分离的点样方法。
在常规操作过程中，人工点样一般使用微量毛细管（0.5/1/2/3和5 ?l），点样时毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方向小心接触TLC/HPTLC板面，不要损伤薄层，受损的薄层会导致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的TLC谱带。
人工点样建议使用Nanomat。
它点样位置精确并安全，使薄层免于受损。
用适当的介质干燥Nanomat也可用作单个量的多次点样。
样品体积大于5 ?l，通常用如Linomat或Automatic TLC Sampler III的方法用氮气喷雾成窄条。
若（就是）要求点状样品点样，Linomat 和Automatic TLC Sampler III应将条长度设定在1至2 mm。
3.2 样品点样位置起点的最佳位置如图2和3所示。
起点下缘的最小距离b取决于溶剂量。
两个起点之间的距离c必须令平行移行的主成份不会相互触及。
点状点样时原点的直径应小于或等于3mm（高效板原点的直径应更小）,条带的长度d由点样样品体积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。
到板侧边的距离a必须足够大以避免分离区失真变形（见图2和3）。
图2：斑状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c =两起点之间的距离。
）图3：条状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c = 两起点之间的距离，d = 条的长度）。
4.层析4.1展开室4.1.1直立式双槽展开室具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱的湿度等优点。
4.1.2 水平展开室可以从薄层板的两侧向中间水平地展开，这样可使一块薄层板所承受的样品个数比常规上行展开的薄层板增加一倍。
4.1.3 自动展开室(AMD) 可使用五种溶剂对同一薄层进行多次展开，自动控制预饱和、展开方式、展开距离和干燥条件，分离效率比传统方式提高三倍（可在80mm之分离40种成分），符合GLP/GMP要求。
4.2. 溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯+ 2 ml甲醇）。
其总量应足以使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。
在双槽展开室中，对每种类型和规格和层析板，每槽通常注入的溶剂数量如表3。
表3：板的规格板的尺寸（宽×高）溶剂量预制板20×20cm20×10cm10×10cm 25ml15ml8ml高效板20×10cm10×10cm 10ml5ml4.3展开室状况溶剂的蒸气相在展开箱中也参与色谱展开而形成三维的层析过程，展开箱的气体空间在层析过程中起着重要的作用。
以下有四种常见的情况（A、B、C、和D）。
4.3.1方法A（展开室不饱和）方法A的特点：l 不呈饱和状态l 无滤纸l 只有一个槽有溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层向里（如图4）图4：有溶剂和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法A的操作程序：TLC/HPTLC板在倒入相应量的展开剂后立即放至展开室中，薄导层板应垂直地竖放在溶剂中，薄层向里，展开室盖上后层析立即展开。
对某些分离过程，在产品专用方法中有明确的说明时，另一槽可盛放一些调节液体（乙酸，浓氨水等）。
4.3.2方法B（部分饱和，无滤纸）方法B的特点：l 不完全饱和l 无滤纸l 在两个槽盛放溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层向里（如图5）图5：有溶剂和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法B的操作程序：将展开剂倒入至两个槽，盖上盖子，置放15分钟后，将盖子移向一边，TLC/HPTLC板涂层向时地竖放入溶剂中，盖上展开室，让TLC/HPTLC板开始展开。
对某些分离过程，在产品专门方法中有明确的说明时，另一槽可放置调节液体（乙酸，浓氨水等）。
4.3.3方法C（展开室饱和，有滤纸）方法C的特点：l 用放入滤纸使饱和（至少30分钟）l 在两个槽盛放溶剂l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层面向滤纸（如图6）l图6：有溶剂、滤纸和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法C的程序：将展开剂倒入至两个槽，将与展开室相同型号的滤纸（如CAMAG序号022.5243）用规定量的溶剂湿润后贴在玻璃展开室正面，盖上盖子，放置30分钟（标准时间），然后将盖子移向一边, TLC/HPTLC板薄层面向着滤纸竖放入溶剂中，盖好展开室让板进行层析。
对某些分离过程，在产品专用方法中有明确说明时，另一槽可置放调节液体（乙酸，浓氨水等）。
4.3.4方法D（展开室饱和，薄层预稳定）方法D的特点：l 薄层预稳定，放置滤纸使展开室饱和l 溶剂量增加一倍l 每个展开室只有一块TLC/HPTLC板l 薄层面向滤纸(如图7)图7：有溶剂，滤纸和TLC/HPTLC板的双槽展开室方法D的程序：将展开剂倒入至一个槽，将与展开室相同型号的滤纸（如CAMAG序号022.5243）用规定量的溶剂湿润后贴在玻璃展开室正面，另一槽空着,TLC/HPTLC板薄层面向滤纸地置放在空槽中，除非产品专用方法另有规定，15分钟（标准时间）后，稳稳地倾斜使足够量的溶剂移至有TLC/HPTLC板的槽中（图8，只有用20x20和20x10cm的展开室才能这样做；若为10x10cm的展开室，溶剂需从外部用移液管或类似器材实现转移）。
图8：倾斜的双槽展开室图9：有溶剂，滤纸和经预稳定TLC/HPTLC板的双槽展开室，层析开始4.4参数4.4.1温度薄层色谱分析一般在室温中进行。
对这过程，温度在20 - 25?C算不上是临界值。
在这过程，中无短期的温度波动才是更为重要（避免抽风）。
展开室应放置在无直射和不通风处。
温度波动对层析结果不利，故将展开室放在靠近窗口或热源处是欠妥的。
4.4.2空气湿度空气湿度极高或极低主要影响有非极性溶剂体系的无机涂层。
相对空气湿度高于70-80%会影响薄层钝化，使Rf值增加。
样品点样后，TLC薄层可置放在适当的硫酸和水的混合物的上面不少于30分钟，调整至指定的相对湿度。
有关这方面的更多资料可从HPTLC Vario系统的操作手册中获得。
另一方面，在样品点样前，TLC/HPTLC板可在105?C再活化30分钟进行干燥。
然后薄层必须用一块玻璃板保护起来，只有起点区露出以便于样品点样。
若空气太干燥，可在干燥器中将TLC/HPTLC薄层置于水的上方以达到所要求的状况。
确定合适的层析条件的有效方法（用规定的湿度，溶剂蒸汽或溶剂调整使薄层达到要求的状况）是使用HPTLC Vario体系。
控制相对湿度用的硫酸溶液下表：相对湿度所需硫酸浓度（V/V）硫酸（ml）+ 水（ml）32%47%42%58%65%72%88% 68.0 10050.0 10057.0 10039.5 10034.0 10027.5 10010.8 1005．层析后衍生作用若层析板分离的物质肉眼看不见又不能被紫外光活化，需加试剂方能显色或发射荧光者，则需使用适当的试剂浸渍或均匀喷洒于薄层板面上，直接观察或加热显色后观察。
加热显色者须注意加热时间和温度，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板，加热温度过高或时间过长，容易引起板面的焦化，如用硫酸等显色剂更易造成板面的炭化而影响显色效果。
有的成分加试剂后，如挥发油成分经香草醛硫酸显色，加热温度和时间长短不同或放置时间不同均可能使斑点的显色有所改变。
有的品种可熏以试剂或试液的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）显色。
5.1 喷雾试剂溶液以气溶胶的形式均匀地喷洒在薄层上。