谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
¾ 谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。如果以过氧 化氢为底物进行检测，则同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本 试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH 催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中，谷胱甘 肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。
e. 所有试剂使用前须在水浴中或PCR仪等设备上温育到25℃。
3. 样品测定：
表1
空白对照 (blank)
样品本底对照
样品 (sample)
谷胱甘肽过氧化物酶l
176-184 µl
待测样品
－
2-10 µl
2-10 µl
GPx检测工作液
10 µl
10 µl
10 µl
谷胱甘肽还原酶
0.4 µl
4 µl
8µl
GPx检测工作液体积
10.4 µl
104 µl
208µl
d. 15mM过氧化物试剂溶液的配制。取21.5微升过氧化物试剂(t-Bu-OOH)加入10毫升Milli-Q级纯水，混匀，即配制成
15mM过氧化物试剂溶液。配制好的15mM过氧化物试剂溶液仅限当日使用，且需尽量在冰浴上存放。
产品编号 S0056
谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4494
γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4494规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二液体12.5mL×1瓶4℃保存试剂三液体44.5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂三倒入试剂一瓶中，混匀后室温保存。
产品说明：γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。
γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。
也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约0.1g样本，加提取液1.0mL充分研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液待测。
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）检测是一种用于测定谷胱甘肽还原酶活性的实验方法。
谷胱甘肽还原酶是一种关键的抗氧化酶，参与谷胱甘肽（glutathione，GSH）的再生过程，从而保护细胞免受氧化损伤。
以下是一种简化的谷胱甘肽还原酶检测说明：
1.实验原理：谷胱甘肽还原酶检测主要依赖于酶促
反应的光度测定。
在此反应中，谷胱甘肽还原酶将氧化型谷胱甘肽（glutathione disulfide，GSSG）还原为还原型谷胱甘肽（GSH），同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADP+）。
反应过程中，NADPH的消耗可以通过其吸光度的变化来监测。
2.实验试剂：主要试剂包括缓冲液、还原型谷胱甘
肽、氧化型谷胱甘肽、NADPH、谷胱甘肽还原酶标准品等。
3.实验步骤：
a.样品处理：收集需要测定谷胱甘肽还原酶活
性的样品（如血清、组织或细胞提取物等），
并进行适当的处理和稀释。
b.反应体系建立：在96孔板中，分别加入缓冲
液、样品、GSSG和NADPH，然后添加谷胱
甘肽还原酶标准品。
c.光度测定：在340nm波长下，定时测定各孔
的吸光度变化，记录吸光度值。
d.计算结果：根据吸光度变化值，计算样品中
谷胱甘肽还原酶的活性。
4.注意事项：
a.在操作过程中，请遵循实验室安全规程，佩
戴必要的防护装备。
b.实验过程中，请保持试剂的纯净和稳定。
c.光度测定时，请确保仪器的准确性和稳定性。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。
现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 比色法)说明书
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒自备材料：1、匀浆器或研钵、离心管或小试管、低温离心机、水浴锅2、蒸馏水、PBS或生理盐水、70%乙醇3、分光光度计、比色皿操作步骤(仅供参考)：1、配制GSSG标准储存液：取12.5mgGSSG标准加入2mlddH2O，溶解并混匀，即为GSSG 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制GSH清除剂工作液：在1mlGSH清除剂中加入9ml70%乙醇，溶解并混匀，即为GSH 清除剂工作液。
3、配制NADPH工作液：在33.2mgNADPH中加入4mlddH2O，即成NADPH工作液，一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
4、配制DTNB储存液：在79.2mgDTNB中加入16mlDMSO，溶解并混匀，即为DTNB储存液(12.5mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
5、配制GR工作液：按GR：GSSGassaybuffer=1:49的比例混合，即为GR工作液。
-20℃保存，1个月有效。
注意：试剂(I)量较少，使用前应先4℃离心后再使用。
6、配制标准品：把GSSG标准储存液(10mM)用蛋白清除试剂稀释成50μM标准溶液，然后依次稀释成25、12.5、6.25、3.125μMGSSH标准溶液，取空白、3.125、6.25、12.5、25、50μMGSSG标准溶液6个点作标准曲线。
注意：由于GSSG标准在蛋白清除试剂中不太稳定，用蛋白清除试剂配制的GSSG溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。
7、准备样品：①红细胞或血浆样品：取新鲜血液，600r/min离心10min，沉淀为红细胞，上清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次，取约50μl红细胞沉淀或血浆，加入50μl蛋白清除试剂，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置10min，4℃10000r/min离心10min，取上清，用于GSSG测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
谷胱甘肽过氧化物酶
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒
微量法100T/96S
测定意义：
GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：
GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)ELISA检测试剂盒说明书
小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）ELISA检测试剂盒说明书小鼠谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
南京建成GPX试剂盒说明书
南京建成GPX试剂盒说明书一、产品简介南京建成GPX试剂盒是一种用于测定谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性的试剂盒。
谷胱甘肽过氧化物酶是一种重要的抗氧化酶，在生物体内起到清除自由基的作用。
该试剂盒采用酶促反应原理，通过检测GPX酶催化反应的速率，反映样品中GPX活性的强弱。
二、试剂盒组成1.GPX试剂盒2.GPX标准品3.过氧化氢（H2O2）稀释液4.反应底物液5.转化液6.二恶吖啶试剂7.芳醛显色剂液8.脱氧胆酸液三、操作步骤步骤一：样品处理1.将待测样品离心收集沉淀，去除杂质；2.取适量样品，加入过氧化氢（H2O2）稀释液，混匀；3.将处理后的样品转移至离心管，进行离心提取。
步骤二：制备标准曲线1.取GPX标准品不同浓度的工作液，依次加入反应孔；2.使用空白对照孔作为空白对照；3.分别加入转化液和反应底物液，混匀。
步骤三：反应过程1.加入样品提取液和转化液，混匀；2.加入反应底物液，混匀；3.加入二恶吖啶试剂，混匀；4.加入芳醛显色剂液，混匀；5.加入脱氧胆酸液，混匀。
步骤四：测定吸光度使用酶标仪在450nm波长下测定样品、标准品和空白对照的吸光度值。
四、结果判读根据标准曲线，计算出样品中GPX活性的浓度，进行数据分析。
根据浓度值的高低，可以判断出样品中GPX活性的强弱。
五、注意事项1.试剂盒的各组分应在4℃保存，开封后应尽快使用；2.不同批次的试剂盒不能混合使用；3.操作前，必须严格按照说明书操作，确保实验的准确性；4.不同样品的处理方式可能不同，请参照具体样品类型的处理方法；5.操作过程中应佩戴实验手套，避免接触试剂；6.尽量避免阳光直射，保持试剂的保存质量。
六、故障排除1.若标准曲线呈线性上升趋势，则说明实验条件符合要求，结果可信；2.若标准曲线呈非线性趋势，则可能是试剂盒保存不当或过期，需更换新的试剂，重新进行实验；3.若实验结果不符合预期，可能是样品处理不当或操作过程中出错，请检查并重新进行实验。
人谷胱甘肽过氧化酶3 (GPX3)ELISA Kit中文实验说明书
溶液后每隔一段时间观察一下显色情况以控制反应时间（比如每隔 10 分钟）。当肉眼可
见标准品前 3-4 孔有明显梯度蓝色，后 3-4 孔显色不明显时，即可加入终止液终止反应，
此时蓝色立刻变为黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
7、 底物溶液应为浅蓝色或无色，如果颜色严重变深则必须弃用。底物溶液易受污染，请避
光妥善保存。
【数据处理】
可将标准品及样本值减去 S0 孔数值后绘制曲线，如果设置复孔，则应取其平均值计算。以标
准品的浓度为纵坐标（对数坐标），OD 值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准
曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，可从我们的网站下载专业软件 "Curve Expert"，
并根据提示制作标准曲线。根据样本 OD 值，由标准曲线查出相应的浓度；或用标准品的浓度
3、 生物素标记抗体工作液 生物素标记抗体液按 1:100倍用生物素标记抗体稀释液进行稀释。如 10μl生物素标记抗体加
990μl生物素标记抗体稀释液，轻轻混匀，在临用前10分钟内配妥。
4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液 辣根过氧化物酶标记亲和素 按 1:100 倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。 如
1、 血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4°C 过夜后于 2 - 8°C 1000 x g 离心 15 分钟，取
上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20°C 或-80°C 保存，但应避免反复冻融。 解冻后的样品应再次离心，然后检测。 2、 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8°C 1000 g 离心 15 分钟，取上清即可立即检测；或进行分装， 并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免 反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。 3、 组织裂解液：取 100mg 组织，用 1X PBS 洗去血污。剪成小块放入组织研磨器（匀浆 管）中，加入 1 ml 1X PBS，制成匀浆，然后置于-20°C 过夜。经过反复冻融 2 次处理破 坏细胞膜后，将组织匀浆于 2 - 8°C 5000 g 离心 5 分钟取上清。取适量上清液立即进行实 验，或将上清分装保存于-20°C 或-80°C。解冻后的样品应再次离心，然后检测。避免反 复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 【样本稀释】 血清，血浆样本用样本稀释液进行1:2000倍稀释后进行检测，具体操作如下：取2μl 样本 加入到98μl 的样本稀释液（1:50稀释）中混匀。再从上述稀释液中取6μl加入到234μl 样本稀 释液（1:40稀释）中混匀。二步完成后得到的即为 1:2000倍稀释后的样本。此推荐稀释倍数 仅供参考，用户应根据实验自行确定其最优稀释倍数。 【试剂配制】 1、 标准品 (1) 从试剂盒中取出一支标准品，于 6000-10000rpm 离心 30 秒。用 1ml 样本稀释液溶解， 并用枪头对准冻存管底部反复吸打 5 次以助溶解，充分混匀得到标准品 S7，放置备用。 (2) 取 7 个 1.5 ml 离心管(S0-S6)依次排列，各加入 250µl 样本稀释液。吸取 250µl 标准品 S7 到第一个离心管中(S6)，轻轻吹打混匀。从 S6 中吸取 250µl 到第二个 EP 管中(S5)，
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书
氧化型谷胱甘肽含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态，也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理：利用2-VP法测GSSG含量。
自备仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体300μL×1支，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体30μL×1瓶，-20℃保存。
临用前加入0.6 mL试剂三稀释，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入40 mL试剂三溶解，现配现用。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心10min，取上清液（如上清不清澈，再离心3min）的蒸馏水混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
测定操作:1. 分光光度计预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3. 测定管：取1 mL EP管，加入100 μ L上清液，5μ L试剂二，盖紧后混匀，置于37℃水浴30min；依次加入100 μ L试剂四，10 μ L试剂五，700 μ L试剂六，迅速混匀后，立即测定30 s和150 s光吸收A1和A2，计算ΔA=A2-A1。
第十节 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力测定
1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定1.3.6.2.1 原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。
对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。
1.3.6.2.2 试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0N a N316.25mg 终浓度2.5mmol/LEDTA-N a27.44mg 终浓度0.2mmol/LN a2HPO4 1.732g 终浓度0.2mol/LN a H2PO4 1.076g 终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL，用少量HCL、N a OH调pH7.0，4℃保存。
1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1－2日。
1.25－1.5mmol/LH2O2溶液取30％H2O20.15－0.17mL，用双蒸水稀释至100mL，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。
偏磷酸沉淀液HPO316.7g（先用蒸馏水溶解）EDTA 0.5gN a Cl 280g加蒸馏水至1000mL，用普通滤纸过滤，室温保存。
0.32mol/LN a2HPO4溶液:N a2HPO422.7g加蒸馏水至500mL，室温保存。
DTNB显色液DTNB 40mg柠檬酸三钠 1.0g加蒸馏水至100mL，4℃避光保存1个月。
0.2M磷酸缓冲液pH7.40.9%生理盐水1.3.6.2.3 实验步骤1.3.6.2.3.1 样品制备溶血液：取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，使之全部溶血1:100待测，4h内测定酶活力。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0170规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体160 μL×1支2-8℃保存试剂三液体11 mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体0.5mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：使用前先离心再吹打混匀。
根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释10倍后使用，当天用完。
2、试剂四：根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释5倍后使用，当天用完。
产品说明：SOD（EC 1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H2O2和O2。
SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm 处有吸收；SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
鸭子谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX酶联免疫分析
鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -PX)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.1 pmol/ml -24 pmol/ml使用目的：本试剂盒用于测定鸭子血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -PX)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。
用纯化的鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)，再与HRP标记的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-PX)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鸭子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
凯基谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒
注意
注 1：空白管、标准管一般只需做 1-2 只。
注 2：最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同，其 GSH-PX 活力不一。根据酶的百分抑制率与酶的活 力呈抛物线关系，各种测定样品取样量及取样浓度不一样，在每测定一种新的样品前最好选择一个最佳取
样量及最佳取样浓度。
最佳取样浓度的摸索
测试前先预试以确定最佳取样浓度：当您第一次使用本试剂盒测试某一种新的样品时最好先做三只不同浓
4℃或室温保存 6 个月
4℃保存 6 个月 4℃避光保存五天
4℃保存
GSH 的分子量为 307，每次测定前将 1 支 3.07mg 的 GSH 标准品粉剂加到 GSH 标准品的溶剂应用液 中，定容至 10ml 即为 1mmol/L 的 GSH 溶液，现用 现配。
取 1mmol/L GSH 溶液 2ml 加 GSH 标准品溶剂应用 液 18ml 定容至 20ml，作标准曲线用，若不做标准 曲线可以不配。
保存条件 4℃
3 5 7
GSH 应用液的配制： 1mmol/L GSH 溶液
100u mol/L GSH 溶液 20umol/L 的 GSH 标准溶液
试剂二应用液的配制：将已配好的 甲乙两种混合。此为过饱和溶液， 室温静置冷却后，如有结晶，则取 上清进行实验。 加蒸馏水 100ml 溶解 每支加蒸馏水 10ml 溶解 标准品溶剂应用液：GSH 标准品 溶剂贮备液：双蒸水=1：9 即 10 倍稀释配成应用液；按所需量现用 现配。
二．试剂盒的组成和配制
25 Tests (50 Tubes)试剂盒的组成和保存： 试剂编号 1
2
3 4 5
名称 贮备液
甲粉 乙液 粉剂 液体 粉剂
6
GSH 标准品粉剂
谷胱甘肽过氧化物酶检测方法
谷胱甘肽过氧化物酶检测方法
谷胱甘肽过氧化物酶检测方法是一种用于测定生物体内谷胱甘
肽过氧化物酶（GPx）活性的方法。
本方法基于GPx的催化作用，将
过氧化氢还原成水，并在反应过程中消耗还原型谷胱甘肽（GSH），使其转变为氧化型谷胱甘肽（GSSG）。
测定反应前后GSH和GSSG的比例变化，即可计算出样品中GPx的活性。
常用的谷胱甘肽过氧化物酶检测方法包括紫外-可见分光光度法、荧光法和色谱法等。
其中，紫外-可见分光光度法是常用的定量方法，其原理是利用GPx催化剂将过氧化氢还原为水，测定反应前后NADPH 浓度的变化。
荧光法利用GSH与荧光探针的反应性，在荧光信号变化的同时测定GPx活性。
色谱法则是在高效液相色谱仪上使用GSH和GSSG标准品，通过检测样品中这两种化合物的浓度，计算出GPx活性。
总体而言，谷胱甘肽过氧化物酶检测方法是一种有效的检测生物体内GPx活性的方法，适用于疾病诊断和治疗效果评估等领域。
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索莱宝氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量检测试剂盒说明书
第 1 页，共 3 页氧化型谷胱甘肽（GSSG ）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC1180规格：50T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体50 mL×1瓶4℃保存试剂二液体170 μL×1支4℃保存试剂三液体60 mL×1瓶4℃保存试剂四液体8 mL×1瓶4℃保存试剂五粉剂×1瓶4℃保存试剂六液体40 μL×1瓶4℃保存标准品粉剂10 mg×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：有毒易挥发试剂，涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。
2、试剂五：临用前加入8 mL 蒸馏水，溶解后-20℃分装保存；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP 管中。
临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按1:20（V:V ）的比例配制备用，现用现配；4、标准品：用1 mL 蒸馏水溶解，浓度为10 mg/mL ，4℃保存。
产品说明：氧化型谷胱甘肽（GSSG ）是谷胱甘肽（GSH ）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。
GSSG 会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH ，因此机体中大多数是以还原型形式存在。
测定细胞内GSH 和GSSG 含量以及GSH/GSSG 比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid ，DTNB ）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm 处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG 还原为GSH ，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
技术指标：最低检出限：1.369 μg/mL线性范围：1.5625-50 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
GSH-PX谷胱甘肽过氧化物酶
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测试盒测定意义谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。
它特异的催化还原性谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。
GSH-PX的活性中心是硒半胱氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含量含4克原子硒。
测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
测定原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）可以促进过氧化氢（H2O2）与还原型谷胱甘肽（GSH）反应生成H2O氧化性谷胱甘肽（GSSG），谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。
GSH-PX的活力一催化GSH的反应速度来表示，由于这2个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应所引起的GSH减少的部分。
GSH量的测定：GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-二硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在421nm处测其吸光光度即可计算出GSH的量。
试剂盒的组成和配制试剂编号名称数量及保存条件1 试剂一贮备液2ml×1瓶：4℃冷藏保存6个月试剂一应用液的配制：用时取0.1ml加蒸馏水至10ml,也就是等于是100倍稀释配制成应用液，现配现用，需要多少配多少：4℃保存。
2 试剂二甲粉一瓶：4℃冷藏保存6个月甲粉：加90-100℃的热蒸馏水170ml，充分完全溶解乙液50ml×1瓶：4℃冷藏保存6个月。
试剂二应用液的配制：将已经配好的甲液和乙液充分混合。
此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验；4℃冷藏保存6个月。
3 试剂三粉剂1瓶：4℃保存6个月。
试剂三应用液的配制：加蒸馏水200ml溶解；4℃避光保存6个月4 试剂四粉剂1瓶：4℃避光保存6个月。
试剂四应用液的配制：每支加蒸馏水50ml溶解；4℃避光保存6个月5 试剂五粉剂4支：4℃避光保存6个月。
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谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1190规格:50T/24S 产品简介：
谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px/GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容：
提取液：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入6.6mL 蒸馏水溶解备用；
试剂三：液体20μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。
现用现配；
试剂四：液体60mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；
试剂五：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入15mL 蒸馏水溶解备用；
标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤：
一、粗酶液的提取：
1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
2、细菌、真菌：按照细胞数量104个：提取液体积（mL）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
3、血清（浆）等液体：直接测定。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、将20μmol/mL标准液用提取液稀释为0.25μmol/mL的标准溶液。
再吸取100μL标准溶液与400μL试
剂四混匀待用，此标准液混合物的浓度为0.05μmol/mL。
标准液混合物现用现配。
3、将150μL样本与150μL试剂一混合后室温放置5min。
4、操作表：(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂)
测定管对照管样品混合物（µL）100-
试剂二（μL）100100
37℃下预热5min
试剂三（µL）100100
37℃下反应5min
试剂四（mL）11
样品混合物（µL）-100
4000rpm常温离心5min，取上清。
试剂名称（μL）测定管对照管标准管空白管上清液500500--标准液混合物--500-试剂四---500
试剂五200200200200
试剂六200200200200
蒸馏水100100100100
混匀后室温放置2min，测定412nm下的吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。
计算△A测定=A对照管-A测定管，△A标准=A标准管-A空白管。
GPX活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝(A对照管-A测定管)÷（A对照管-A空白管）×100%
尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。
如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。
如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、GPX活性计算
（1）按蛋白浓度计算
活力单位定义：每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。
GPX(U/mg prot)=ΔA测定÷（△A标准÷C标）×1000×V酶促÷（Cpr×V样）÷T
=260×ΔA测定÷△A标准÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算
活力单位定义：每g样品在反应体系中每分钟催化1nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。
GPX(U/g鲜重)=ΔA测定÷（△A标准÷C标）×1000×V酶促÷(V样÷V样总×W)÷T
=260×ΔA测定÷△A标准÷W。
(3).按细胞数量计算
活力单位定义：每104个细胞在反应体系中每分钟催化1nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。
GPX(U/104cell)=ΔA测定÷（△A标准÷C标）×1000×V酶促÷（细胞数量×V样÷V样总）÷T =260×ΔA测定÷△A标准÷细胞数量。
(4).按液体体积计算
活力单位定义：每毫升液体在反应体系中每分钟催化1nmol GSH氧化定义为一个酶活力单位。
GPX(U/mL)=ΔA测定÷（△A标准÷C标）×1000×V酶促÷V样÷T=260×ΔA测定÷△A标准。
C标：标准液混合物的浓度：0.05μmol/mL；V酶促：酶促反应体系体积，1.3mL；V样：样本混合物中
含有的样本体积，0.05mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；T：反应时间，5min；细胞数量：以万计；W：样品质量，g；1000：换算系数，1μmol=1000nmol。
注意事项
1、反应完成后建议在10min内检测完成。
2、吸光度若大于1.2时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。