分支杆菌
结核分枝杆菌
结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，
简称结核杆菌，首次由德国科学家Robert Koch于 1882年由肺结核病人的痰液中分离得到，并被证实为结 核病的病原菌核杆菌在分类上隶属于放线菌目、分支杆 菌科、分支杆菌属，是种不能运动、不产芽孢、专性需 氧的短小杆菌。菌体-般细长、略弯曲，端极钝圆，多呈 单个或分枝状排列，大小约1-4×0.4μm。
革兰氏染色呈阳性；Ziehl -neelsen抗酸染色呈红色 ，非抗酸性细菌则呈蓝色。结核杆菌的抗酸性主要取决 于其胞壁内所含的分枝菌酸残基，亦和其胞壁固有层的 完整性有关。
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02 治疗性结核病疫苗的种类 2.1 活载体疫苗 2.2 亚单位疫苗 2.3 DNA疫苗 2.4 全菌灭活疫苗 2.5 其他疫苗 03 结核病治疗性疫苗的研究现状 04 结核病治疗性疫苗的展望
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04 展望
结核疫苗快速发展，并能对致病性结核杆菌产 生保护性免疫应答，为TB的防治带来了希望。然而， 迄今还没有一个重组疫苗能达到BCG的免疫水平。 其原因在于，重组疫苗虽可激活免疫系统，但不能 引起长期特异性的细胞免疫记忆，所以开发一种与B CG协同的、可产生长效免疫应答的疫苗十分重要。 初免-加强免疫策略的出现，有效联合了BCG与新型 结核疫苗，为预防结核、诱导机体产生长期免疫保 护作用提供了可能。
等
MTB肝素结合血凝
素
DNA疫苗
HG85 A/B
临床前 中国人民解放军军事 嵌合 DNA疫苗 A 医学科学院（吴雪琼） g85A/Ag85B 等
第十节 牛分支杆菌
第三篇主要的病原微生物第十节牛分支杆菌在《伯杰氏细菌鉴定手册》第9版（1994）中，分支杆菌属是作为分支杆菌类唯一属加以描述的。
该属细菌的共同特点是：各成员均好氧，菌体平直或微弯细长，革兰氏染色阳性，并均具有抗酸染色的特性。
细菌无鞭毛和芽孢，菌体内含有大量类脂质成分，对营养要求高，多数菌株生长缓慢。
本属菌在自然界广泛分布，许多是人和动物的病原菌。
对动物有致病性的主要是结核分支杆菌（简称结核杆菌，原为结核分支杆菌人型，现独立成种）、牛分支杆菌、禽分支杆菌和副结核分支杆菌。
结核分支杆菌、牛分支杆菌、禽分支杆菌许多特性相近，本节一并介绍。
一、生物学特性结核分支杆菌为细长、直或稍弯的杆菌，单在、少数成丛，大小为0.2～0.5µm ×1.5～4.0µm。
牛分支杆菌菌体短而粗，禽分支杆菌最短，呈多形性。
在陈旧的培养基或干酪性病灶内的菌体可见分支现象。
革兰氏染色阳性，但革兰氏染色时不易着色，经Ziehl-Neelsen氏抗酸染色后，本菌为红色，背景及其他非抗酸菌为蓝色。
本菌为严格需氧菌，营养要求较高，最适温度为37℃～37.5℃，禽分支杆菌可在42℃生长。
三种分支杆菌最适pH为：结核分支杆菌7.4～8.0，牛分支杆菌5.9～6.9，禽分支杆菌7.2。
常用的培养基有罗杰二氏培养基（内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐及孔雀绿等）、改良罗杰二氏培养基等。
在上述培养基中，结核分支杆菌需14～15h分裂一次，如加入5%～10%的CO2或5%甘油可刺激结核分支杆菌的生长，但5%甘油对牛分支杆菌生长有抑制作用。
菌落形成较慢，10～14d形成菌落。
在固体培养基上形成黄色菌落，显著隆起，表面粗糙皱缩坚硬，不易破碎，类似菜花状；在液体培养基中，其表面形成厚皱菌膜，培养液一般保持清亮。
本菌细胞壁含丰富的脂类而表现较强的抵抗力。
对干燥、寒冷及一般消毒药具有较强的抵抗力，但对湿热的抵抗力弱，60℃30min失去活力。
分支杆菌菌种快速鉴定
分支杆菌菌种快速鉴定目前，常规的分支杆菌菌种鉴定需采用分支杆菌培养物进行生长特性试验(生长速度、生长温度、光产色实验、多种鉴别培养基上生长试验)及生化特性试验(耐热触酶试验、硝酸盐还原实验、烟酸试验、吐温-80水解试验、尿素酶水解试验、芳香硫酸酯酶试验、铁离子吸收实验、亚硝酸盐还原试验)等10余项试验，综合分析判定结果，方法复杂、费时，慢生长分支杆菌需3~4周方可获得结果，且准确度较差，难以满足临床诊断和治疗的需要。
本实验以分支杆菌rpo β基因为靶基因序列，应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法(PCA-RDBHA)快速鉴定分支杆菌临床分离株至种的水平，结果报道如下：1材料与方法1.1材料1.1.1分支杆菌分离株经抗酸染色涂片检测阳性的分支杆菌临床分离株126株，来自我院结核科和解放军第三〇九医院。
1.1.2引物及探针引物Ⅰ和Ⅱ型及21中分支杆菌寡核苷酸探针序列参照文献有伤害生工生物工程有限公司合成。
引物Ⅰ和Ⅱ扩增360bpNDA片段。
分支杆菌属、结核分支杆菌属复合群、鸟分枝杆菌、胞内分支杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿分支杆菌、瘰疬分枝杆菌、胃分支杆菌、偶然分支杆菌、龟分枝杆菌、海分枝杆菌、猿猴分支杆菌、戈登分支杆菌、苏加分支杆菌、马尔摩分支杆菌、蟾蜍分支杆菌、微黄分支杆菌、土地分支杆菌、耻垢分支杆菌、不产色分支杆菌和草分枝杆菌菌种对应的探针分别命名为pMyc、pTub、pAvi、pInt、pKan、pAbs、pScr、pGas、pFor、pChe、pMar、pSim、pGor、pSzu、pMal、pXen、pFla、pTer、pSme、pNon和pPhl。
1.2方法1.2.1DNA模板制备刮取改良罗氏培养基上的分支杆菌临场分离株培养物少许，混悬于1ml 无菌TE缓冲液的1.5ml离心管内，10000r/min离心10min，去上清，沉淀加入DNA提取液50µl，煮沸15min，离心取上清作为NDA模板。
结核分支杆菌致病机制与免疫
结核分支杆菌致病机制与免疫结核分支杆菌是一种引起结核病的病原体，其致病机制和免疫反应一直是研究的重要领域。
本文将阐述结核分支杆菌的致病机制和免疫反应，以期对结核病的预防和治疗提供参考。
结核分支杆菌是一种短小、略带弯曲的棒状细菌，具有抗酸染色特性。
它主要通过空气传播，引起肺部感染，也可导致其他器官和全身感染。
结核分支杆菌致病机制复杂，涉及到多个因素，如细菌的毒力、细菌的数量、机体免疫力等。
结核分支杆菌的致病机制主要涉及以下几个方面：细菌黏附于呼吸道上皮细胞，定植后进入肺泡和支气管，进而侵袭肺组织；细菌在肺组织内繁殖，形成结核结节，进一步破坏肺组织，导致肺功能受损；细菌可经血液传播至全身，引起全身感染，如结核性脑膜炎、结核性腹膜炎等。
结核病的免疫反应包括细胞免疫、体液免疫和自身免疫等。
在感染早期，巨噬细胞等免疫细胞被激活，产生多种细胞因子，如白细胞介素-肿瘤坏死因子等，这些细胞因子可以激活其他免疫细胞，形成免疫应答。
随着病情发展，细胞免疫逐渐发挥主要作用。
CD4+和CD8+细胞被激活，产生一系列细胞因子，如干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α等，这些细胞因子可以促进巨噬细胞杀伤细菌，形成长期保护性免疫。
体液免疫在结核病免疫中也具有一定作用。
抗体如IgG、IgA等可以与细菌结合，形成免疫复合物，进一步激活补体系统，产生炎症反应。
自身免疫在结核病中也具有一定的保护作用。
针对结核分支杆菌感染的自身免疫反应可以清除细菌，减少病变范围。
结核分支杆菌的致病机制和免疫反应是一个复杂而多元的过程。
对于结核病的预防和治疗，需要深入研究结核分支杆菌的致病机制和免疫反应，以便更好地理解疾病的发病机制和发展过程。
需要加强公共卫生教育，提高大众对于结核病的认知和防范意识。
随着科技的不断进步，相信未来对于结核病的治疗和预防将会有更加深入的研究成果涌现。
结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是导致结核病（tuberculosis，TB）的病原体，全球每年有数百万人感染此病。
结核分支杆菌
结核分支杆菌结核分支杆菌是一种引起结核病的重要病原微生物。
它属于革兰氏阳性菌门，酸杆菌目，分支杆菌科。
结核分支杆菌主要包括结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和波氏分枝杆菌（Mycobacterium bovis）等两个物种。
这两个物种在致病性、传播途径和临床病症上存在差异。
结核分支杆菌是一种耐酸菌，这意味着它可以抵抗胃酸，穿过人体的自然防御屏障。
当结核分支杆菌进入人体后，它们会通过空气飞沫传播至呼吸道，例如咳嗽、打喷嚏或说话时。
此外，结核分支杆菌还可以通过经验性接触传播，例如与结核病患者共用衣物、餐具或通过亲密接触等方式。
结核分支杆菌感染人体后，通常会进入休眠状态，形成所谓的原发感染灶。
这时的病者可能没有任何临床症状，但仍具有传染性。
当人体的免疫力下降时，例如长期患有艾滋病、接受器官移植或使用免疫抑制剂等情况下，结核分支杆菌可能重新激活，引起所谓的继发性结核病。
结核病主要通过肺部感染，但也会影响其他器官，如骨骼、淋巴结、肠道和脑膜等。
典型的肺结核病症状包括咳嗽、咳痰、胸痛、乏力、发热以及体重下降等。
但需要注意的是，临床表现因个体差异而有所不同，有些患者可能没有明显的症状，或症状非特异，容易被误诊。
结核分支杆菌的诊断主要依靠临床症状、影像学检查以及实验室病原学检测，如菌落培养和PCR等。
目前，结核分支杆菌对常规抗生素的敏感性逐渐下降，多重耐药结核病（MDR-TB）和极耐药结核病（XDR-TB）的发生率也在上升。
因此，选择合适的抗结核药物方案非常关键。
此外，结核病的治疗通常需要长期使用药物，患者需要依从治疗计划以避免耐药菌株的产生。
为了控制结核病的传播，各国纷纷采取了多种措施，包括强化结核病的监测和报告、提供免费的诊断和治疗服务、推广结核疫苗接种（如卡介苗）、加强感染控制和教育宣传等。
全球结核病联盟和世界卫生组织在这方面发挥了重要的作用。
总之，结核分支杆菌是一种具有严重危害性的病原微生物。
分支杆菌属于放线菌属
分支杆菌和放线菌属都能够在恶劣环 境下生存，如土壤、水体和动物体内 。
抗菌素产生
部分分支杆菌和放线菌属能够产生抗 菌素，对某些病原体具有抑制或杀灭 作用。
分支杆菌与放线菌属的不同之处
形态特征
分支杆菌的菌体呈分支状，而大多数 放线菌属的菌体呈放射状。
生理特性
致病性
分支杆菌主要引起人类和动物感染， 如肺结核病等，而放线菌属则多数为 腐防措施
加强空气净化、通风换气等措施，减少空气中分支杆菌的含量；加强个人卫生 ，勤洗手、戴口罩等；避免与感染分支杆菌的人直接接触。
治疗方式
一旦感染分支杆菌，需要及时就医，根据病情采取相应的治疗措施，如药物治 疗、手术等。同时保持良好的生活方式和饮食习惯，以提高免疫力，促进康复 。
分支杆菌属于放线菌 属
汇报人：可编辑
2024-01-11
目录
CONTENTS
• 分支杆菌的分类与特点 • 放线菌属的概述 • 分支杆菌与放线菌属的关系 • 分支杆菌的生物学特性 • 分支杆菌的致病性
01
分支杆菌的分类与 特点
分支杆菌的分类
结核分枝杆菌
引起人类和动物结核病的病原菌 ，可导致肺、骨、关节、脑膜等 全身各组织和器官的结核病。
放线菌可以进行腐生、寄生和共生等多种 生活方式，其代谢类型也多种多样，包括 光合型、化能有机型和化能无机型等。
03
分支杆菌与放线菌 属的关系
分支杆菌在放线菌属中的位置
01
分支杆菌是放线菌属中的一个分 支，属于放线菌门。
02
在分类学上，分支杆菌属于原核 生物界，放线菌属则属于放线菌 门。
分支杆菌与放线菌属的相似之处
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医学微生物-第十三章 分支杆菌属
我国结核病疫情现状
据2000年全国结核病流行病学抽样调 查结果显示，我国结核病疫情现状为： （1）结核病感染率高 （2）结核病患病率高 （3）结核病耐药率高 （4）结核病死亡率高
一、生物学特性
（一）形态染色
G+ ，菌体细长微弯，具有分枝生长现象，抗 酸染色阳性（红色）,菌体排列分散，有荚膜
③能防止有害物质及药物进入； ④能抑制溶酶体与吞噬体融合。
2、脂质：含量越高，致病性越强 • 磷脂：促使单核细胞增生，使巨噬细胞
转变为类上皮细胞，形成结核结节和干 酪样坏死。 • 索状因子：能破坏线粒体膜，抑制粒细 胞游走和吞噬，形成慢性肉芽肿。
• 蜡质D：有佐剂作用，可刺激机体产生迟 发型超敏反应。
药物：利福平、异烟肼、乙胺丁醇、 链霉素
原则：早期、联合、适量、规则
2、培养：人工培养尚未成功 3、主要通过呼吸道、破损的皮肤黏膜和
密切接触传播 4、临床类型：瘤型麻风、结核样型麻风 5、以细胞免疫为主
未治疗：蓝色的天空中悬挂红色的彩虹
已治疗的：菌体呈颗粒状，排列为索状
（二）培养
1、专性需氧，最适生长温度为37℃，最 适PH为6.5—6.8
2、营养要求较高，常用罗氏(Lowenstein) 培养基，其主要成分含土豆、蛋黄、无 机盐、孔雀绿、甘油等
3、生长缓慢,一般需3—4W才见菌落生长， 最慢20W，菌落呈颗粒、结节或菜花状， 乳白色或米黄色，不透明
郭霍现象：细胞免疫与超敏反应同时 存在
（二）结核菌素试验 • 1、原理：将结核菌素注入皮内，如果受试
者已感染结核分枝杆菌，则结核菌素与致 敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超敏 反应性炎症。
• 试剂 ——旧结核菌素（old tuberculin，OT） ——纯蛋白衍生物（PPD）： 有两种：人结核分枝杆菌制成的PPD—C 和卡介苗制成的BCG—PPD
第十九章 分支杆菌属
七、防治原则
1、防——接种卡介苗
（1月龄免疫，20天产生抗体，可维持1~1.5年）。
2、治——抗结核药, 联合用药。 链霉素,利福平, 环丝霉素等。 患者休息,增加营养,供给新鲜空气, 补充维生素A、C、D等。
结核分支杆菌
人 牛 ++++ + ++++ -
牛分支杆菌
++++ ++++ ++++ ++++
3. 动物试验：将上述经处理的供分 离培养用的病料接种于动物，皮 下或腹腔注射0.5ml，
禽分支杆菌可使鸡致病； 结核杆菌对豚鼠有较强的致病性， 皮下注射3～5周可引起明显病变； 牛分支杆菌对兔有致病性，接种后3 周至3个月死亡。
• 4．变态反应 采用PPD皮内注射法，按 我国《动物检疫操作规程》规定
禽分支杆菌
结核分支杆菌
2. 分离培养：将病料中加入6％ 硫酸或 4％ NaOH溶液处理15min后，经中和、离心， 取少许沉淀物接种在培养基斜面上，每份 病料接4～6管，管口封严，置37℃培养8 周，每周观察一次，培养阳性时，需进行 培养特性和生化特性鉴定。
常用的罗杰二氏培养基国外已商品化。 菌落呈干燥、不规则、坚硬表面呈粗糙的颗粒状 。
禽分支杆菌
+ ++++ ++++
致病性
家禽 豚鼠 家兔
染色 形态染色
革兰氏染色阳性；抗酸染色阳性（结合杆菌为红色，其他细菌为蓝色） 在陈旧培养基或干酪变性病变组织，菌体可见分支。 病灶组织中，菌形比较一致，单个，成双，间或成丛。无荚膜，无芽胞。 细长、正直或微弯杆菌， 长1.5~4um,宽0.2~0.6um 比结核分支杆菌 短而粗 具有多形性，可呈杆状、 球菌状、链球状。
兽医微生物学课件- 分支杆菌及相似属
免疫与治疗
结核病的免疫是带菌免疫，即所谓传染 性免疫 (infection imnunity)，当结 核杆菌在机体消失或死亡后，其免疫也 终止。人类广泛采用卡介苗免疫接种， 免疫期达4～5年。犊牛在1月龄时也可 皮下接种卡介苗100mg，20d产生免疫， 可维持12～18个月。接种卡介苗的牛一 年后仍维持变态反应阳性，在用结核菌 素检疫时无法与自然感染牛区别，因而 不宜推广应用。
糖脂包括阿拉伯甘露聚糖、阿拉伯半乳糖脂复 合物及分枝菌酸等。糖脂的含量超过菌体总量 的10%，远远超过其他细菌类脂的含量。
糖脂成分有效地刺激哺乳动物的免疫系统，分 枝杆菌因此被制成免疫佐剂得到普遍应用。
弗氏不完全佐剂（FIA）中加卡介苗(最终浓度 为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为 完全弗氏佐剂（FCA）。
(10万lU/m1)72h后局部炎症反应明显，皮肿胀厚 度差≥4mm为阳性；如局部炎症不明显，皮肿胀 厚度差在2～4mm间，为疑似；如无炎症反应，皮 肤肿胀厚度差在2mm以下，为阴性。凡判为疑似 反应牛，30d后需复检一次，如仍为疑似，经 30～45d再次复检，如仍为疑似可判为阳性。
5、血清学检查 鉴于结核病细胞免疫与 体液免疫的分离现象，检测特异性抗体 可诊断结核病。可采用多种方法检测抗 体，酶联免疫吸附试验 (ELISA)是目前 较好的方法，此法敏感性高、特异性强、 操作简单。
3、动物接种 将上述经处理的供分离培 养用的病料接种于动物，皮下或腹腔注 射0.5ml，禽分枝杆菌可使鸡致病；结核 杆菌对琢鼠有较强的致病性，皮下注射 3～5周可引起明显病变；牛分枝杆菌对 免有致病性，接种后3周至3个月死亡。
4、变态反应 采用PPD皮内注射法，按我国《动
物检疫操作规程》规定，家畜检查时，在颈部 上1/3处剪毛消毒，皮内注射0.1ml结核菌素
分支杆菌培养技术讲解
积4％氢氧化钠 涡旋振荡30-60秒 室温静置15分钟 接种：0.1ml，2管 37C温箱培养水平向上培 养24小时 直立放置37C继续培养 观察报告结果：第3天、 7天、此后每周一次，直 至满8周
原理：
痰标本2-5ml
1－2倍 NaOH(3%)-NALC
振荡匀化
静置15分钟
污染率过高？
可能原因 解决方法 标本运输时间过长， 标本留取后尽快培养，暂时无法 保存不当(时间、温 培养应于4C冰箱保存。 度） 前处理不充分 4％，1－2倍，充分混旋，15分钟。
材料灭菌不佳
操作不当 培养基因素
接种用吸管需高压灭菌。
培训，预培养，严格按操作规程 操作。 培养基质量控制
痰标本中加入1－2倍体
分枝杆菌培养阴性： 斜面无菌落生长。 分枝杆菌培养阳性(1十)：菌落生长占斜面面积的1／4。 分枝杆菌培养阳性(2十)：菌落生长占斜面面积的1／2。 分枝杆菌培养阳性(3十)：菌落生长占斜面面积的3／4。 分枝杆菌培养阳性(4十)：菌落生长布满全斜面。
分枝杆菌培养阴性应以 “(培养阴性)”报告，不能以“(—)” 表示。菌落生长不足以斜面面积1／4时， 实报菌落数。
BACTECTMMGITTM960全自动检测系统
优点：
敏感性高 时间短（平均1~2周左右） 安全 自动化检测 缺点： 易污染（前处理） 阳性标本需进一步鉴定（MTB?NTM?污染?)
生长缓慢：在一般培养基上分裂一代需要18-24小时， 一般10-30天肉眼可见菌落生长。
菌落形态（罗氏培养基）：粗糙、凸起、致密，有 表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，浅黄色或米 色，不透明
（ 液体培养基：絮状或颗粒状沉淀。）
分枝杆菌结构特点
温馨小提示：本文主要介绍的是关于分枝杆菌结构特点的文章，文章是由本店铺通过查阅资料，经过精心整理撰写而成。
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愿本篇分枝杆菌结构特点能真实确切的帮助各位。
本店铺将会继续努力、改进、创新，给大家提供更加优质符合大家需求的文档。
感谢支持！(Thank you for downloading and checking it out!)分枝杆菌结构特点一、引言分枝杆菌是一类具有独特分支状细胞壁的细菌，因其特殊的生物学特性和在自然界中的广泛分布而引起了科学家们的极大兴趣。
分枝杆菌的研究背景可追溯至20世纪初，当时科学家们开始注意到这类细菌在自然界中的广泛存在，并逐渐揭示了它们在生态系统中的重要作用。
随后，随着分子生物学技术的快速发展，分枝杆菌的分类地位、遗传特征以及与人类健康的关系等方面得到了更深入的探究。
分枝杆菌在医学和生物学中的重要性不容忽视。
首先，分枝杆菌与多种人类疾病密切相关，如麻风病、肺结核等。
其中，麻风病是由分枝杆菌引起的一种慢性传染病，严重影响患者的生活质量。
因此，研究分枝杆菌的生物学特性，对于了解其致病机制、开发新型抗感染药物具有重要意义。
其次，分枝杆菌在生物技术和环境科学等领域具有广泛的应用前景。
例如，某些分枝杆菌能够固定氮气，具有生物肥料的作用；还有一些分枝杆菌能够降解石油等有机污染物，对于环境保护具有积极意义。
综上所述，分枝杆菌作为一种特殊的细菌，其研究背景深厚且在医学、生物学等领域具有重要价值。
深入探讨分枝杆菌的结构特点，将有助于我们更好地理解其生物学特性，为疾病的防控和环境保护提供科学依据。
二、分枝杆菌的分类与概述分枝杆菌的分类地位分枝杆菌（Mycobacterium）属于细菌界（Bacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、分枝杆菌纲（Mycobacteriaceae），是细菌的一种。
第15章分支杆菌属及相似属
液体培养基中易形成菌膜浮于 液面。
三、抵抗力
对外界环境的抵抗力很强，在干燥的环境中可存活 6～8个月。对紫外线敏感，消毒药作用不大，耐酸耐 碱。对链霉素、利福平等抗生素敏感，但易产生耐药 性。
四、致病性
主要引起牛结核病。细胞内寄生。
五、免疫性
4mm以上为阳性；2-4mm为可疑；2mm以下为阴性。
6.血清学检查 : ELISA检测特异性抗体
复习思考题
牛分支杆菌的主要生物学特性。Biblioteka 牛分枝杆菌（M. bovis）
一、形态与染色
细长、微弯的杆菌，无荚膜、芽孢 和鞭毛。
革兰氏阳性菌，细胞壁有特殊的糖 脂。不易着色，而抗酸染色为红色。
糖脂成份有效地刺激哺乳动物的免 疫系统，分枝杆菌因此被制成免疫 佐剂得到普遍应用。
抗酸染色
二、培养与生化特性
专性需氧菌，对营养要求严格， 在添加特殊营养物质的培养基 （罗杰二氏培养基）上才能生 长，但生长缓慢。
1.机体产生的抗体，无保护作用。 2.以细胞免疫为主。 3.传染性免疫(带菌免疫)。
六、变异性
卡介苗（BCG）即将牛分枝杆菌在含甘油、胆汁、 马铃薯的培养基中经13年230代传代而获得的减毒 活疫苗株，现广泛用于预防接种。
七、微生物学诊断
１.涂片镜检 ：抗酸染色红色 ２.分离培养 ：强酸或强碱处理后接种罗杰二氏培养基 ３.细菌鉴定：培养特性、生化特性 ４.动物接种 ：兔有致病性 ５.变态反应 ：PPD皮内注射法
分支杆菌培养技术详细讲解
分支杆菌培养技术详细讲解分支杆菌是一类革兰氏阳性菌，属于细菌中的好氧菌，它们具有分支形状的细胞和丰富的分支菌丝。
分支杆菌在生物领域具有广泛的应用，如发酵工业、农业、医学和环境科学等。
分支杆菌的培养技术对于研究其生物学特性和开发应用具有重要意义。
下面我们将详细讲解分支杆菌培养技术。
1. 培养基的制备：分支杆菌的培养基一般包括基础培养基和增菌剂。
基础培养基是提供菌落生长所需的基本营养成分，如碳源、氮源、矿物盐和水分等，常用的基础培养基有液体培养基和固体培养基。
液体培养基适用于观察分支杆菌在液体中的生长情况，固体培养基适用于分离纯培养物和观察菌落特征。
增菌剂是一种特殊的添加剂，可以促进分支杆菌的生长和菌落形成，常用的增菌剂有中性红、塑化剂和色素等。
2. 培养条件的调节：分支杆菌的生长需要适宜的温度、pH值和氧气含量等条件。
一般来说，分支杆菌的最适生长温度为28-30°C，pH值为7-8，适宜的氧气含量为5-10%。
可以通过调节培养基的成分和培养条件来满足分支杆菌的生长需要。
3. 分支杆菌的接种：将分支杆菌的菌落取出，用无菌的接种环或接种针轻轻刮取菌落，并均匀涂布在固体培养基的表面上。
如果是液体培养基，可以直接将菌落移植到培养基中。
接种后，将培养基培养在适宜的条件下，观察分支杆菌的生长和菌落形态。
4. 菌落的观察和鉴定：分支杆菌形成的菌落在固体培养基上呈现出特殊的形态和颜色，可以通过观察菌落的大小、形状、边缘和颜色等特征来初步鉴定分支杆菌的种类。
此外，还可以进行生理生化试验和分子生物学鉴定来进一步确认分支杆菌的身份。
5. 分支杆菌的保存：分支杆菌的保存可以选择冷冻法、干燥法和冻干法等多种方法。
常用的保存方法是将分支杆菌通过无菌操作接种到琼脂斜面上，并放置在低温（-20~-80°C）冷库中保存。
此外，还可以用甘油和琼脂培养基混合后冷冻保存。
冷冻保存对于保持菌种的活力和稳定性非常重要。
总结起来，分支杆菌培养技术包括制备培养基、调节培养条件、接种菌种、观察菌落和鉴定菌种等步骤。
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原发感染
结核分枝杆菌 肺泡 吞噬细胞 原发性感染 （渗出性炎症） 渗出性炎症） 全身性粟粒性结核 结核结节 淋巴结病 灶逐渐纤维化和钙化
吞噬细胞内繁殖
肺部感染－ 肺部感染－继发感染
• 多由原发病灶潜伏的结核菌引起 多由原发病灶潜伏的结核菌引起 原发病灶潜伏 • 多发于成年人 多发于成年人 • 病灶多局限 病灶多局限 • 易发生干酪样坏死和形成空洞 易发生干酪样坏死和形成空洞 干酪样坏死和形成 • 为开放性肺结核
分枝杆菌属
• 结核分枝杆菌 • 麻风分枝杆菌 • 非结核分枝杆菌
结核分枝杆菌
Mycobacterium tuberculosis
结核杆菌正在攻击人体细胞
流行病学
• 结核病的病原菌 – 1882年德国细菌学家 Koch 证明 年德国细菌学家 • 全球性卫生问题 – 是艾滋病高发区人群的首要死因 • 世界防治结核病日 – 3月24日 月 日
原发感染
原发后感染
肺外感染
• 免疫力低下患者 • 常见于脑、肾、骨、关节、生 常见于脑、 关节、 殖系统 • 少数形成全身粟粒性结核或播 散性结核
免疫机制
• 感染免疫、有菌免疫（infection immunity ） 感染免疫、有菌免疫（ 即只有当TB菌在体内存在时才有免疫力， 即只有当 菌在体内存在时才有免疫力， 菌在体内存在时才有免疫力 一旦体内的TB菌被杀灭， 一旦体内的 菌被杀灭，免疫也随之消失 菌被杀灭 • 结核菌免疫依赖细胞免疫 结核菌免疫依赖细胞免疫 • 可产生抗体，但其保护作用不明确 可产生抗体，
肺结核是结核病中最常见的一种。 肺结核是结核病中最常见的一种。 从临床上大致可分四种类型： 从临床上大致可分四种类型：
原发性肺结核、粟粒性肺结核、 原发性肺结核、粟粒性肺结核、浸润性肺结核和空洞性肺结核
具有强烈传染性的慢性消耗性疾病 迄今因结核病死亡人数已达2 迄今因结核病死亡人数已达2亿
谁像肺结核病人？ 谁像肺结核病人？
Mycobacterium leprae
麻风分枝杆菌--- 麻风病 麻风分枝杆菌--• 麻风病的病原菌 麻风病的病原菌 –慢性传染病 慢性传染病 • 世界各地均有报道 –主要分布在亚、非和拉丁美洲 主要分布在亚、 主要分布在亚
生物学性状
形态与染色
• 细长略弯曲 • 无芽胞，无荚膜，无鞭毛 无芽胞，无荚膜， • 抗酸染色阳性 • 典型的胞内寄生菌，麻风细胞 典型的胞内寄生菌， 胞内寄生菌
结核杆菌可以 潜伏在人体内 寻找机会…. 寻找机会
身强力壮时
身体抵抗力 弱时
不是所有结核病都具传染性 不是所有结核病都具传染性 结核病都具传染 结核病是可以被治疗好 结核病是可以被治疗好 是可以被治疗
பைடு நூலகம்
目前的药物治疗，可以有效的治疗肺結核病 目前的药物治疗，可以有效的治疗肺結核病 治疗
麻风分枝杆菌
治疗
联合应用 长期用药 要正规彻底治疗结核病必须有6 要正规彻底治疗结核病必须有6至8个月的疗程， 个月的疗程， 且必须要多种药物联合使用，才能彻底治愈。 且必须要多种药物联合使用，才能彻底治愈。
不按要求治疗（未治够规定疗程、或化疗方案不合理） 不按要求治疗（未治够规定疗程、或化疗方案不合理） 只有约45%的治愈率，50%左右治疗失败及少数病情严重 的治愈率， 只有约 的治愈率 左右治疗失败及少数病情严重 患者可导致死亡； 患者可导致死亡；而且还会使细菌对抗结核药物产生耐药 性而成为耐药结核病患者 。
致病物质
细菌增殖引起炎性反应
迟发型超敏反应性损伤
结核杆菌被小鼠巨嗜细胞吞噬
所致疾病
结核病
感染途径： 感染途径： 呼吸道、消化道、 呼吸道、消化道、破损皮肤黏膜 侵犯多种组织器官，肺部最常见 侵犯多种组织器官，肺部最常见
所致疾病： 所致疾病：
肺部感染－ 肺部感染－原发感染 • • • • • 首次感染 多发生于儿童 原发综合征 形成结核结节 转归
费雯丽 劳伦斯 肖邦
葛利格
济慈
雪莱
莫札特
鲁迅 李叔同
林徽音
林黛玉
造成结核病的祸首是谁？ 造成结核病的祸首是谁？
是它
分枝杆菌属 Mycobacterium
分枝杆菌属（ 分枝杆菌属（Mycobacterium） ）
细长略带弯曲的杆菌， 细长略带弯曲的杆菌，有分支生长的趋势 细 胞 壁 含 有 大 量 脂 质 ， 抗 酸 杆 菌 （ acid-fast bacillus） ） 无鞭毛、无芽胞，不产生内、 无鞭毛、无芽胞，不产生内、外毒素
阳性 硬结、 硬结、红肿直径 0.5-1.5cm之间 之间 硬结直径超过 1.5cm以上 以上 出现超敏反应， 出现超敏反应，不表示 正患结核病 表明可能有活动性结核， 表明可能有活动性结核， 应进一步检查
强阳性
阴性
无结核感染，但应考虑： 注射部位有针眼大的 无结核感染，但应考虑： 红点或稍有红肿， 红点或稍有红肿，硬 原发感染的早期 正患严重结核病 结直径小于0.5cm 结直径小于 正患其他传染病（麻疹） 正患其他传染病（麻疹）
现阶段结核防治过程中的主要问题
多重耐药结核杆菌（ 多重耐药结核杆菌（MDR-TB） ）
HIV与结核的双重感染 与结核的双重感染
肺结核病是怎样传染的 结核病是怎样传染的 病是怎样传染
咳嗽 打噴 嚏
说 话
吐痰
病人的衣 物、被褥 等传染
口鼻噴出 物传染
吸入结核杆菌后一定会发病吗？ 吸入结核杆菌后一定会发病吗？ 结核杆菌后一定会发病吗
1882年3月24日，世界著名德国科学家罗伯特 科赫在柏林 年 月 日 世界著名德国科学家罗伯特·科赫在柏林 向科学界宣布：在肺结核病人的痰中发现了结核杆菌， 向科学界宣布：在肺结核病人的痰中发现了结核杆菌， 从此确立了结核病的病原体。 从此确立了结核病的病原体。 1982年将每年的3月24日定为“世界防治结核病日”。 1982年将每年的3 24日定为“世界防治结核病日” 年将每年的 日定为 我国是世界上22个结核病高负担国家之一 我国是世界上 个结核病高负担国家之一 过去又称“痨病”。结核菌可侵入人体全身各器官，主要 过去又称“痨病” 结核菌可侵入人体全身各器官， 感染肺部。 感染肺部。
培养特性
不能在人工培养基中生长 抗酸特性 动物模型： 动物模型：犰狳
致病性
传染源： 传染源： 麻风病人 易感者： 易感者： 人 传播途径： 传播途径：直接接触或由飞沫传播 潜伏期： 一般是6个月至 个月至5年 潜伏期： 一般是 个月至 年 发病慢、病程长 发病慢、 麻风分为3种类型： 麻风分为 种类型： 种类型 瘤型麻风：麻风结节 瘤型麻风： 结核样型 界线类 未定类
麻风两型两类相互间的关系图
微生物学诊断
• 显微镜检查 • 麻风菌素试验
防治原则
• 特异的预防
– 尚无有效的菌苗
• 早期发现、早治疗 早期发现、 • 目前多采用二三种药联合治疗
– 氨苯砜（dapsone，DDS） 氨苯砜（ ， ）
非结核分枝杆菌
Nontuberculosis mycobacteria
免疫与超敏反应
• 细胞免疫为主 迟发型超敏反应同时存在 细胞免疫为主,迟发型超敏反应同时存在 迟发型超敏反应 • 郭霍现象 • 免疫和超敏反应的物质基础
– 结核分枝杆菌核糖核酸（rRNA）-免疫反应 结核分枝杆菌核糖核酸（ 核糖核酸 ） 免疫反应 – 结核菌素蛋白、蜡质D-超敏反应 结核菌素蛋白、蜡质 超敏反应
郭霍现象
有毒TB菌 有毒TB菌 TB
以前感染过或免疫豚鼠
正常豚鼠 局部红肿、 局部红肿、溃疡 坏死、 坏死、经久不愈
局部红肿、 局部红肿、浅溃疡 不扩散
全身扩散
结核菌素试验
结核菌素试剂
– 旧结核菌素（old tuberculin，OT) 旧结核菌素（ ， – 纯蛋白衍化物(purified protein 纯蛋白衍化物(purified derivative，PPD) ，
特异性防治
• 卡介苗预防 – 接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童 接种对象： – 免疫时间：3～5年 免疫时间： ～ 年
新生儿即使注射了卡介苗，还有潜在威胁。 新生儿即使注射了卡介苗，还有潜在威胁。 从接种卡介苗到人产生免疫力约需2个月。 从接种卡介苗到人产生免疫力约需 个月。 个月 其间，小儿基本上不具有抗结核病的免疫力。 其间，小儿基本上不具有抗结核病的免疫力。 另外，对大量、反复、毒性较强的结核杆菌感染， 另外，对大量、反复、毒性较强的结核杆菌感染，卡介 苗不一定能抵御， 苗不一定能抵御，要让孩子避免接触病人
培养特性
• 专性需氧 • 营养要求高 • 生 长 缓 慢 ， 12-24 小 时 繁 殖 一 代 ， 3-4 周 出 现 肉 眼 可见菌落。 可见菌落。 • 固体培养基上菜花状菌落 固体培养基上菜花状菌落 菜花状 • 液体培养基菌膜状生长 液体培养基菌膜 菌膜状生长
馋：营养要求较高 懒：生长缓慢 丑：菌落呈菜花状 顽：抵抗力强
主要菌体成分及作用
无内毒素、外毒素、侵袭性的酶 内毒素、外毒素、 致病作用主要依靠菌体成分（尤其是细胞壁脂质） 致病作用主要依靠菌体成分（尤其是细胞壁脂质） 菌体成分 细胞壁脂质 脂质：磷脂、脂肪酸（索状因子—6,6脂质：磷脂、脂肪酸（索状因子—6,6-双分枝菌酸海藻 ）、蜡质 蜡质D 糖）、蜡质D、硫酸脑苷脂和硫酸多酰基化海藻糖 蛋白质：结核菌素，迟发型超敏反应 蛋白质：结核菌素， 多糖 核酸 荚膜
变异性
形态、菌落、毒力及耐药性均可变异 形态、菌落、毒力及耐药性均可变异 卡介苗（ ）：毒 卡介苗（Bacilli Calmette-Guèrin，BCG）：毒 ， ）： 力减弱，对人无致病性， 力减弱，对人无致病性，但仍然保持良好的免 疫原性可用于结核杆菌预防的疫苗株。 疫原性可用于结核杆菌预防的疫苗株。 结核分枝杆菌易发生耐药