植物组织中叶绿素含量测定
叶绿素测定方法范文
叶绿素测定方法范文叶绿素是一种含有镁离子的绿色光合色素，广泛存在于植物、藻类和蓝细菌中，并且起着关键的光合作用。
因此，研究和测定叶绿素含量对于了解光合作用的过程和植物生长状况具有重要意义。
以下是几种常见的叶绿素测定方法。
1.乙醇提取法乙醇提取法是最常用的叶绿素测定方法之一、该方法主要通过乙醇提取植物组织中的叶绿素，然后通过光谱分析测定其吸收光谱。
步骤如下：-准备样品：将待测样品切碎并将其放入含有乙醇的离心管中。
-提取叶绿素：在冷暗条件下，用乙醇溶液对样品进行提取，使叶绿素溶解于乙醇中。
-离心：将提取液进行离心，分离植物碎片和乙醇提取液。
-光谱测定：取适量提取液进行光谱扫描，并记录吸收峰的波长和吸光度。
2.酸醇法酸醇法是另一种常用的叶绿素测定方法，它是通过酸化和还原醇来测定叶绿素的含量。
步骤如下：-准备样品：将待测样品切碎并将其放入含有醇的离心管中。
-酸化：向样品中加入盐酸或硫酸酸化，使叶绿素转化为酸化叶绿素。
-还原：向酸化的样品中加入还原剂（如乙醇或均苯胺），使酸化叶绿素转化为还原叶绿素。
-光谱测定：取适量还原液进行光谱扫描，并记录吸收峰的波长和吸光度。
3.二氧化碳法二氧化碳法是一种基于叶绿素与二氧化碳的化学反应来测定叶绿素含量的方法。
步骤如下：-准备样品：将待测样品切碎并将其放入含有研钵中。
-加入试剂：向样品中加入含二氧化碳的饱和氯化钾溶液及酒精，使叶绿素与二氧化碳发生反应生成产物。
-过滤：用过滤器将反应液滤过，以除去残余的植物残渣。
-光谱测定：取适量过滤液进行光谱扫描，并记录吸收峰的波长和吸光度。
4.液相色谱法液相色谱法是一种高效准确的叶绿素测定方法，可以同时测定多种叶绿素的含量。
该方法利用液相色谱仪对样品进行分离和分析。
-样品提取：将待测样品进行乙醇或醚提取，使叶绿素溶解于提取液中。
-样品净化：用净化柱净化提取液，去除杂质。
-液相色谱分析：将净化后的提取液注入液相色谱仪，通过色谱柱分离不同类型的叶绿素，并通过紫外检测器测定其吸光度。
叶绿素的测定
叶绿素的测定
叶绿素是植物中的重要色素，用于光合作用中的光能捕捉和转化。
测定叶绿素的含量可以评估植物的光合活性和健康状况。
常用的叶绿素测定方法包括：
1. 酸醇提取法：将植物组织置于酸醇混合液中，利用酸溶解细胞膜，醇提取叶绿素。
然后用光度计测定提取液的吸光度，根据吸光度与叶绿素浓度的关系计算出叶绿素的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：通过将植物样品制备成溶液，在高效液相色谱仪中进行分离和检测。
根据标准曲线或内标法，确定叶绿素的浓度。
3. 光谱分析法：通过测量叶绿素在可见光区域的吸收光谱，计算叶绿素的浓度。
常用仪器包括光度计或分光光度计。
4. 荧光光谱法：通过测量样品在激发光下发射的荧光光谱，间接推测出叶绿素的浓度。
这种方法可以通过测量不同波长下激发光和荧光信号的比值来评估叶绿素的含量。
5. 无损测定法：利用近红外光谱或其他无损技术，通过样品材料的光学特性来推测叶绿素的含量。
这种方法适用于大范围的植物样本测定。
叶绿素测定方法的选择取决于实验条件、设备和样品特性。
根据需求，可以选用适当的方法来测定叶绿素的含量。
叶绿素含量的测定实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。
2. 掌握利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
3. 了解不同植物叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的生长和发育。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，基于叶绿素在不同波长下对光的吸收特性，通过测定其最大吸收峰处的吸光度值，计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜菠菜、小麦、水稻等植物叶片。
2. 95%乙醇、无水乙醇、碳酸钙、石英砂等试剂。
实验仪器：1. 分光光度计2. 研钵3. 移液管4. 量筒5. 滤纸6. 比色皿7. 电子天平四、实验步骤1. 样品制备：- 称取新鲜植物叶片0.1g（准确至0.0001g），放入研钵中。
- 加入少量石英砂和碳酸钙，用研杵研磨成匀浆。
- 加入5ml 95%乙醇，继续研磨至叶片组织变白。
2. 叶绿素提取：- 将提取液转移至10ml试管中，用少量95%乙醇冲洗研钵、研杵及残渣，合并于试管中。
- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。
3. 叶绿素分离：- 将滤液转移至比色皿中，以无水乙醇为空白，在波长663nm、645nm和652nm处测定吸光度值。
4. 叶绿素含量计算：- 根据吸光度值和标准曲线，计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。
- 叶绿素总含量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量。
五、实验结果与分析以菠菜叶片为例，实验结果如下：| 植物种类 | 叶绿素a含量（mg/g） | 叶绿素b含量（mg/g） | 类胡萝卜素含量（mg/g） | 叶绿素总含量（mg/g） || -------- | ------------------- | ------------------- | --------------------- | ------------------- || 菠菜 | 1.23 | 0.78 | 0.45 | 2.46 |通过比较不同植物叶片的叶绿素含量，可以分析其光合作用能力和生长发育状况。
实验10叶绿素含量的测定
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长旳光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液旳吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下旳吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量旳根据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光经过溶液时，溶液旳吸光度与溶 液旳浓度和液层厚度旳乘积成正比。其数学体现式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液旳厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b旳丙酮溶液在可见光范围内旳最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处旳吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时旳 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处旳吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处旳吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），旳关系可分别用下列方程式表达：
叶绿素含量旳测定
一.试验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱旳吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素旳含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液旳吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α百分比常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质 旳吸光系数。多种有色物质溶液在不同波长下 旳吸光系数可经过测定已知浓度旳纯物质在不 同波长下旳吸光度而求得。
漏斗、大试管
三. 试验环节
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用丙酮研磨 ↓
植物生理学实验-叶绿体色素的定量测定
植物生理学实验
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2、测定光密度
以96%乙醇为空白，比色测定3份样品的光密度；
波长665nm、649nm和470nm
B126室：分光光度计 型号：22PC
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分光光度计的使用：？
功能键
显示屏
样品室
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波长调节旋钮
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测定溶液加到 比色杯的2/3初
空白对准光路
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植物生理学实验
叶绿体色素在不同溶剂中的吸收光 谱有差异。在使用不同溶剂提取色素时， 计算公式有所不同。
本实验以 96％乙醇为例。
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96％乙醇提取
已知叶绿素a、b的96%乙醇提取液在红光 区的最大吸收峰：a＝665nm；b＝649nm
根据有色物质的加和性，建立方程组： D665=Kaλ665 Ca+ Kbλ665 Cb D649=Kaλ649 Ca+ Kbλ649 Cb
Ka645＝ 16.75 Kb645＝ 45.60
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植物生理学实验
根据加和性原则列出以下关系式： D663 = 82.04Ca+9.27Cb D645 = 16.75Ca+45.60Cb
解方程组得：
Ca (mg/L)= 12.72D663 – 2.59D645 Cb (mg/L)= 22.88D645 – 4.67D663 Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： CT (mg/L)= Ca + C整b理课=件20.29D645 + 8.05D663
Enter 输入键，接受当前的状 态或进行测定；
Mode 功能键，按该键显示不 同的功能菜单；
2、测定
叶绿素的提取与分析测定
叶绿素的提取与分析测定叶绿素的提取与分析测定是一项重要的生物技术实验，主要用于研究植物光合作用中的重要色素——叶绿素。
下面将详细介绍实验的步骤、方法和数据分析。
一、实验目的本实验旨在提取和分析测定叶绿素，了解其在植物光合作用中的重要作用，并为进一步研究植物生长和发育提供基础数据。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，它能够吸收太阳光能，并将其转化为化学能，为植物的生长和发育提供能量。
叶绿素广泛存在于植物的绿色组织中，尤其在叶片中含量最为丰富。
本实验将采用有机溶剂（如乙醇、丙酮等）从植物组织中提取叶绿素。
提取后的叶绿素可通过分光光度法进行定量分析。
三、实验步骤1.样品准备：选取新鲜植物组织（如叶片），用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干表面水分，称取一定质量（m）的样品备用。
2.叶绿素提取：将样品放入研钵中，加入适量有机溶剂（如乙醇-丙酮混合液），研磨成匀浆。
将匀浆转入离心管中，于低温下离心（如4℃、10000 r/min），收集上清液备用。
3.叶绿素定量分析：取一定体积（V）的上清液，加入适量蒸馏水稀释，用分光光度计在663nm和646nm波长下测定吸光度（A）。
根据朗伯-比尔定律，叶绿素的浓度（C）可由吸光度计算得出。
公式如下：C = (11.77A663 -2.59A646) / m / V4.数据记录：记录每个样品在各波长下的吸光度，并计算出叶绿素浓度。
5.数据分析：对所得数据进行统计分析，比较不同样品间的叶绿素含量差异，并绘制柱状图或饼图等图形表示结果。
四、实验结果与数据分析假设我们选取了三种不同植物的叶片进行实验，以下是实验所得的数据：1.三种植物叶片中叶绿素的含量存在差异，其中样品1的叶绿素含量最高，样品3的含量最低。
这可能与不同植物的生物学特性有关。
2.根据所得数据绘制柱状图或饼图等图形，可以直观地展示不同样品间的叶绿素含量差异。
这有助于我们进一步了解植物间的差异以及叶绿素在植物生长和发育中的作用。
叶绿素含量测量实验报告
一、实验目的1. 掌握叶绿素提取及含量测定的方法。
2. 了解分光光度法在植物生理研究中的应用。
3. 掌握使用分光光度计进行叶绿素含量测量的原理及操作步骤。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其主要分为叶绿素a和叶绿素b两种。
叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，可通过分光光度法测定其含量。
本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿素，测定其在不同波长下的吸光度，从而计算叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：菠菜、番茄等绿色植物叶片。
2. 仪器：分光光度计、研钵、试管、剪刀、移液管、量筒、滤纸、吸水纸、碳酸镁悬浮液、乙醇溶液、石英砂、碳酸钙粉等。
四、实验步骤1. 提取叶绿素：（1）称取适量新鲜植物叶片，用剪刀剪碎。
（2）将剪碎的叶片放入研钵中，加入少量石英砂、碳酸钙粉和3～5ml 95%乙醇，研磨至组织变白。
（3）将研磨后的提取液过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
（4）用移液管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至10ml，摇匀。
2. 测量吸光度：（1）设置分光光度计的波长为665nm、649nm（叶绿素a和叶绿素b的最大吸收峰）。
（2）将提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在设定的波长下测定吸光度。
3. 计算叶绿素含量：根据朗伯-比尔定律，吸光度A与叶绿素浓度C和液层厚度L成正比，即A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数，l为液层厚度，c为叶绿素浓度。
通过计算不同波长下的吸光度，根据标准曲线（预先绘制）或叶绿素浓度与吸光度关系，求得叶绿素浓度，进而计算叶绿素含量。
五、实验结果与分析1. 通过实验，成功提取了菠菜叶片中的叶绿素。
2. 在665nm、649nm波长下，叶绿素a和叶绿素b的吸光度分别为0.68和0.32。
3. 根据叶绿素浓度与吸光度关系，计算得到叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为0.6mg/L和0.3mg/L。
实验二、植物叶绿素含量测定----丙酮提取法
二、植物叶绿素含量测定----丙酮提取法高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。
叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。
叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。
在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。
叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。
[原理]叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。
叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。
利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。
其数学表达式为：A=Kbc式中：A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于663、645nm处。
叶绿素a和b 在663nm处的吸光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据Lambert-Beer定律,叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（C a、C b、C a十b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示：A663=82.04C a+9.27C b （1）A645=16.76C a+45.60C b（2）解方程（1）和（2）得：C a=12.7 A663—2.59 A645 (3)C b=22.9 A645—4.67 A663(4)C a十b＝20.3 A645—8.04 A663(5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。
[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定
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[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A,aCL。
,)各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ,丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式:A663=82.04Ca +9.27Cb………………A645=16.75Ca+45.6Cb………………式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值;Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度。
解联立方程、可得以下方程:Ca=0.0127A663-0.00269A645…………Cb=0.0229A645-0.00468A663…………如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，、式则可改写为:Ca=12.7A663-2.69A645…………Cb=22.9A645-4.68A663…………叶绿素总量CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点，两者有相同的比吸收系数，因此也可以在此波长下测定一次吸光度求出叶绿素总量: CT=A652/34.5CT=A652×1000/34.5………因此，可利用、式可分别计算叶绿素a与b含量，利用式或式可计算叶绿素总量。
实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定
C—叶绿素的浓度（mg/L)；v—提取液体积(ml)； n—稀释倍数；m—样品鲜重（g)
作业：
比较阳生植物和阴生植物的叶绿素有何不 同？
下周实验：植株磷素的测定(钼蓝法)
三、实验器料
1、材料： 菠菜或其它绿色植物叶片
2、试剂： 80% 丙 酮 或 96% 乙 醇 ； 石 英 砂 ；
CaCO3； 3、仪器：分光光度计（分光光度计
的使用）、高速离心机
四的植物叶片，称取0.2g剪碎后置 于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和 石英 砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙 酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定 容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80% 丙酮 定容至25ml。
2. 测定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙 酮
作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸
光度。 3.计算：
把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶 绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。 根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：
实验六 叶绿素含量的测定
一、实验目的
1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶 液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素 的方法及计算；
2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量 的意义。
二、实验原理
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和 类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又 存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同 时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度， 可分别测定在663nm、645nm、470 nm （分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红 光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素 a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。
叶绿体色素定量测定及性质实验报告-叶绿素的定量测定
.取两支试管，向一支试管中加入 5mL 叶绿体色素提取液，然后将其 存在的问题，改进栽培方式，提高产量，这对于农业生产有很大的现实意
一部分倒入另一支试管中，作为对比。向试管里加入 1~2 滴 0.5mol/L HCl 义；在水体治理中，通过测定叶绿素含量，了解水中植物的光合能力，借
后摇匀。
此查找治理方案。总之，测定植物叶片叶绿素含量对于我们生产实践具有
光物质〔稀溶液〕时，其吸光值与吸光物质的浓度 C 及汲取层厚度 d 成正
式中，C、Cb 和 Cx·c 分别为叶绿素、b 和类胡萝卜素的浓度。
比，及=KCd。
2、叶绿素理化性质鉴定
假如溶液中含有数种吸光物质，则混合液在某一波长下的总吸光值等
叶绿素是一种双羧酸，其中一个羧基被甲醇所酯化，另一个被叶醇所
于各组分在此波长下吸光值的总和。如欲测定叶绿素混合提取液中叶绿素、 酯化。故可与碱起皂化反应而生成醇〔甲醇和叶绿醇〕和叶绿素的盐。皂
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叶绿体色素定量测定及性质实验报告:叶绿素的定量 测定
应选择叶绿素在红光区的最大汲取峰。 已知叶绿素、b 分别 663nm 和 645nm〔80％丙酮提取〕有最大汲取值；
同时已知在波长 663nm 下，叶绿素、b 汲取系数分别为 82.04 和 9.27；在
4、在分管光度计上，分别测定 663nm，645nm 和 470nm 处的吸光值，
夹，酒精灯。
以 80％丙酮为空白对比。
2、试验试剂：80％丙酮，纯丙酮，碳酸钙，20％KOH 甲醇溶液，苯，
5、结果计算
0.5molmol/L?HCl，醋酸铜粉末。
按原理中的公式分别计算叶绿素、b 和类胡萝卜素的浓度〔mg/L〕，
植物含量测定实验报告
一、实验目的1. 掌握植物全氮、全磷、全钾含量的测定方法。
2. 了解植物叶绿素含量的测定原理和方法。
3. 掌握植物可溶性蛋白质和糖含量的测定方法。
二、实验原理1. 植物全氮、全磷、全钾含量的测定：采用H2SO4-H2O2消煮法，将植物样品消煮后，分别测定氮、磷、钾含量。
2. 植物叶绿素含量的测定：根据朗伯-比尔定律，利用分光光度计测定叶绿素在特定波长下的吸光度，从而计算叶绿素含量。
3. 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定：采用考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定植物组织中可溶性蛋白质和糖含量。
三、实验材料与试剂1. 植物材料：生菜、苹果等。
2. 试剂：H2SO4、H2O2、靛酚蓝、苯酚、次氯酸盐、碳酸钙粉、石英砂、95%乙醇、80%丙酮、考马斯亮蓝G-250、蒽酮、氢氧化钠、草酸等。
3. 仪器：分光光度计、电子天平、研钵、试管、小漏斗、滤纸、吸水纸、移液管、量筒、剪刀等。
四、实验步骤1. 植物全氮、全磷、全钾含量的测定（1）将植物样品烘干、磨碎，过筛。
（2）准确称取0.2g样品，置于消煮管中。
（3）加入10mL浓H2SO4，小火加热消煮至样品完全消解。
（4）加入5mL H2O2，继续加热消煮至溶液澄清。
（5）冷却后，用蒸馏水定容至50mL。
（6）采用靛酚蓝比色法测定氮含量。
（7）采用钼锑抗比色法测定磷含量。
（8）采用火焰光度法测定钾含量。
2. 植物叶绿素含量的测定（1）准确称取0.1g新鲜植物叶片，加入少量石英砂和碳酸钙粉，用95%乙醇提取。
（2）过滤，收集滤液。
（3）在分光光度计下，分别测定叶绿素在波长652nm、663nm、645nm处的吸光度。
（4）根据吸光度计算叶绿素含量。
3. 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定（1）采用考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量。
（2）采用蒽酮法测定可溶性糖含量。
五、实验结果与分析1. 植物全氮、全磷、全钾含量根据实验结果，生菜全氮含量为2.5%，全磷含量为0.5%，全钾含量为1.5%；苹果全氮含量为1.2%，全磷含量为0.3%，全钾含量为0.8%。
叶绿素含量测定方法
实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。
为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。
2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。
计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
植物叶绿体色素含量的测定
实验四植物叶绿体色素含量的测定高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素吸收的。
叶绿体色素含量与光合作用密切相关，是反应叶片生理状态的重要指标。
在植物光和生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。
叶绿素含量也是知道作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。
一、原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公事计算出提取液中个色素的含量。
根据朗博—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A=aCL。
式中：a为比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合溶液在某一波长下的吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿体a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
二、植物材料、仪器设备及试剂配制：（一）植物材料：完全液和缺素溶液培养的烟草苗叶片（二）仪器设备：分光光度计、电子天平、剪刀1把、镊子一把、玻璃研钵2个、4个25mL具塞棕色容量瓶、漏斗2个、移液管若干只、吸球、洗瓶、玻璃棒、吸水纸、保鲜膜等。
（三）试剂配制：95%乙醇（分析纯）、石英砂和碳酸钙三、实验步骤：1.称取新鲜植物叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2.称取剪碎的新鲜叶片0.2g，共4份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙及2mL95%乙醇，研成匀浆，在加入乙醇10mL，继续研磨至组织变白。
静置3~5min。
3.取滤纸1张，置漏斗中，用95%乙醇湿润，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25mL棕色容量瓶中，用少量95%乙醇冲洗钵体、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
叶绿素含量的测定
植物叶绿体色素的提取、分离、及含量测定（一）叶绿体色素的提取一、实验目的1．掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2．了解皂化-萃取提取β−胡萝卜素原理。
3. 了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素原理。
二、实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象，它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中，叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a、叶绿素b、β−胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表12.1。
叶绿素(chlorophylls)是叶绿酸的酯，它在植物进行光合作用中吸收可见光，并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a（C55H72O5N4Mg）和叶绿素b（C55H70O6N4Mg）两种结构相似的形式存在，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图47.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环，它们由四个甲烯基联结成卟啉环，在卟啉环中央有一个镁原子，它以两个共价键和两个配位键与四个吡咯环的氮原子结合成内配盐，形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基，其中一个与甲醇酯化成COOCH3，另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素(carotenoids)是一类不饱和的四萜类碳氢化合物（例如胡萝卜素，carotenes)，或它们的氧化衍生物（例如叶黄素类，xanthophylls)。
所有的类胡萝卜素均源于非环状的C40H56结构。
类胡萝卜素在强光下可防止叶绿素的光氧化；在弱光下，可作为辅助色素吸收光能并传递给叶绿素分子。
胡萝卜素有三种异构体，即α−、β−和γ−胡萝卜素，其中β−胡萝卜素含量最多，也最为重要。
β−胡萝卜素还具有维生素A的生理活性，其结构是由两分子维生素A 在端链失去两分子水结合而成。
植物叶绿素含量测定丙酮乙醇混合液法
植物叶绿素含量测定丙酮乙醇混合液法一、本文概述本文旨在介绍一种测定植物叶绿素含量的常用方法——丙酮乙醇混合液法。
叶绿素作为植物进行光合作用的关键色素，其含量的高低直接关系到植物的生长状况和光合效率。
因此，准确测定植物叶绿素含量对于研究植物生理生态、评估植物健康状况以及优化农业生产等方面具有重要意义。
丙酮乙醇混合液法因其操作简便、结果准确等优点而被广泛应用于植物叶绿素含量的测定。
本文将详细介绍该方法的实验原理、所需材料、操作步骤、注意事项以及叶绿素含量的计算方法，以期为相关研究和应用提供有益的参考。
二、丙酮乙醇混合液法原理丙酮乙醇混合液法是一种常用的植物叶绿素含量测定方法。
其原理基于叶绿素在特定溶剂中的溶解性和颜色特性。
叶绿素是植物进行光合作用的关键色素，主要吸收光能并将其转化为化学能，驱动植物的生长和发育。
丙酮乙醇混合液法利用叶绿素在有机溶剂中的溶解性，通过将植物组织浸泡在丙酮乙醇混合液中，使叶绿素从植物组织中提取出来。
丙酮和乙醇的混合液具有良好的溶解能力，能够有效地提取叶绿素，并且它们的沸点较低，易于后续的蒸发和浓缩操作。
提取后的叶绿素溶液呈现绿色，其颜色深浅与叶绿素含量成正比。
通过测定叶绿素溶液的吸光度或颜色强度，可以间接推算出植物组织中叶绿素的含量。
常用的测定方法包括分光光度法和比色法，通过测量特定波长下的光吸收或颜色变化，从而计算出叶绿素含量。
丙酮乙醇混合液法具有操作简便、提取效率高、测定结果可靠等优点，在植物生理生态学、农业科学研究等领域得到了广泛应用。
通过该方法，可以快速准确地测定植物叶绿素含量，为植物生长发育、逆境胁迫响应等研究提供重要依据。
三、实验材料与方法本实验主要使用新鲜绿色植物叶片（如菠菜、生菜等），以及丙酮、乙醇、去离子水、研钵、滤纸、离心管、分光光度计等实验试剂和器材。
选取新鲜绿色植物叶片，清洗干净后去除叶柄和主脉，将叶片剪碎成约1cm²的小块，以备后续实验使用。
叶绿素测定方法
分光光度法测定叶绿素含量一、实验目的1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。
2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
二、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。
2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。
因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
三、仪器、原料和试剂仪器分光光度计、电子顶载天平(感量0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。
原料新鲜(或烘干)的植物叶片试剂1. 96％乙醇(或80％丙酮)2. 石英砂3. 碳酸钙粉四、操作步骤取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。
称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白。
静置3～5min。
取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至100mL，摇匀。
取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm 和652nm 下测定吸光度，以95％乙醇为空白对照。
叶绿素含量测定原理
叶绿素含量测定原理叶绿素含量测定原理是通过光谱分析方法，使用叶绿素分子对特定波长的光的吸收特性来间接判断叶绿素的相对含量。
叶绿素是植物和一些藻类等光合生物中的重要色素，它们能吸收光能，并转化为化学能，参与光合作用的进行。
因此，测定叶绿素含量可以提供对光合作用效率和植物生长状态的反映。
叶绿素分子在吸收光能时，对不同波长的光具有不同的吸收效果。
尤其是在可见光区域，叶绿素a和叶绿素b这两类主要叶绿素分子对不同波长的光有明显的吸收峰。
其中，叶绿素a的吸收峰位于红光和蓝光之间，吸收峰最大值位于近红外和近紫外区域；而叶绿素b的吸收峰位于蓝光和红光之间，吸收峰最大值位于绿光区域。
利用这一特性，测定叶绿素含量的方法通常采用光谱仪或光度计进行测量。
首先，以适当的溶剂将叶绿素从植物组织中提取出来，形成叶绿素提取液。
然后，将叶绿素提取液置于光谱仪或光度计中，分别对不同波长的光进行扫描或定性测定。
在测定中，首先选择波长范围内的一个特定波长作为参考波长，此处不在叶绿素吸收峰附近。
接着，测定样品液对不同波长光的吸收情况。
根据叶绿素的吸收特性，会在吸收峰附近出现吸光峰，其吸光值与叶绿素含量呈正相关。
最终，通过比较样品吸光峰的吸光值与参考波长的吸光峰吸光值之间的差异，可以间接计算出叶绿素的相对含量。
需要注意的是，叶绿素测定原理是基于光谱分析和叶绿素分子的吸收特性，因此测定结果受到测量条件的影响较大。
为了获得更准确的结果，应严格控制测量的光线强度、波长范围、样品液浓度等参数，并与标准样品进行比对校准。
叶绿素含量测定原理的应用广泛，不仅可以用于植物生态学研究和农业生产中，还可以用于水质监测、环境污染评估等领域。
叶绿素测定原理
叶绿素测定原理
叶绿素测定是一种常用的生物化学分析方法，用于确定植物组织中叶绿素的含量。
其原理基于叶绿素的吸收光谱特性以及叶绿素与吸光度之间的线性关系。
下面是叶绿素测定的原理步骤：
1. 植物组织样品制备：将需要测定叶绿素含量的植物组织（如叶片）切碎并加入适量的提取液，通常使用乙醇、醋酸乙酯等有机溶剂来提取叶绿素。
2. 提取叶绿素：样品与提取液混合后，将其搅拌或超声处理，使叶绿素充分释放到溶液中。
3. 测定吸光度：取适量的提取液转移至光密度管或比色皿中，使用紫外可见分光光度计选择适当的波长进行测定。
叶绿素的吸收峰位于波长范围为400-700纳米之间，其中最常用的是波
长为660和640纳米。
4. 计算叶绿素含量：通过构建标准曲线，根据吸光度测定值计算出样品中叶绿素的浓度。
标准曲线是通过不同浓度的已知叶绿素标准溶液测定吸光度而得到的。
以标准曲线上对应样品吸光度的浓度值来表示样品中的叶绿素含量。
叶绿素测定的原理基于叶绿素的特性和吸光光谱，通过测定吸光度来间接测量叶绿素的含量。
这种方法广泛应用于农业、生态学等领域中，帮助人们了解植物生长状况和生态系统的健康程度。
叶绿素实验
叶绿素的提取及稳定性实验一、实验目的1. 掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
2. 通过测定光、加热等对叶绿素稳定性的影响，了解果蔬加工中的护绿措施。
二、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。
2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。
因此测定提取液在652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可计算出叶绿素含量。
三、仪器、原料和试剂仪器：S54紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、天平、研钵、小漏斗、滤纸、烧杯、容量瓶、试管、量筒、刻度管。
原料：菠菜试剂：1. 丙酮；2. 石英砂；3. 碳酸钙粉；4. 硫酸铜晶体；5. 0.1mol/LNaOH6. 0.1mol/LHCL四、操作步骤1.将菠菜洗净擦干，称取菜叶5g，放入研钵中，加少量石英砂(0.5g~1g)和25ml冷丙酮，研成均浆，倒入100ml容量瓶中，再用丙酮定容至100 ml。
充分振摇后用滤纸过滤。
即为叶绿素提取液。
取提取液在652nm处测其吸光度。
以95％丙酮为空白调零。
2．光对叶绿素稳定性的影响取两支试管，编为1号管和2号管，分别取5ml叶绿素提取液中注入1号管和2号管，一支置暗处,一支置强光下,2h后,分别在分光光度计652nm处测定其吸光值。
3.热对叶绿素稳定性的影响取5支试管，编号为1、2、3、4、5号，分别取5ml叶绿素提取液注入其中，再分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的水浴中加热10min，加热后，待冷至室温后在625nm处测定其吸光值。
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植物组织中叶绿素含量测定
（无机及分析化学实验II-设计性实验）
一、实验目的
1．设计用分光光度计测定植物组织中的叶绿素
2. 学习利用文献资料设计研究方案
3. 掌握分光光度计测定植物组织中的叶绿素的原理与方法
二、原理：
叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合
成叶绿体。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对
光、热较敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中
可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。
高等植物中叶绿素有两种，均
易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿。
叶绿素a 叶绿素b
叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm，且两吸
收曲线相交于652nm处。
叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，可在663nm和
645nm测定试样吸光度（两组份混合试样测定，双波长法），根据Lambert－
Beer定律，列出浓度c与吸光度A之间的关系式：
A
663
＝82.04c a＋9.27c b (1)
A
645
＝16.75c a＋45.6c b (2)
（1）、（2）式中的A
663、A
645
为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的吸光度
度。
c
a
、c b为叶绿素a、b的浓度，单位为g/L。
82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。
解方程式（1）（2），则得经验公式：
c a =12.7 A
663
-2.69 A
645
(3)
c b =22.9 A
645
-4.68 A
663
(4)
c
T
=（c a + c b）=20.2 A645+8.02 A663...... (5)
此时，c T为总叶绿素浓度，c a、c b为叶绿素a、b的浓度，单位为mg/L ，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、b总叶绿素的浓度。
仪器：分光光度计、电子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光）、小漏斗、滤纸
试剂：95%乙醇
三、实验步骤
1、试材的采集
采集新鲜植株叶片（或含叶绿素的其他组织），夹于双层报纸中，风干（不能置于太阳光下晒）。
将风干材料处理成细小颗粒，装入封口塑料袋，避光保存。
2、待测液的制备
（1）叶绿素的浸提
精密称定风干后的样品（约0.1g）于20mL 95%乙醇中，在室温浸提36-48h。
（2）叶绿素浸提液定容
提取液过滤到50mL 棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光），用95%乙醇定容至50mL ，摇匀，置于暗处备用待测。
3、测量吸光度
取1cm 的比色皿，注入上述叶绿素酒精溶液，用95%乙醇为参比液，1cm 的比色皿为吸收池，分别在663nm 和645nm 波长测吸光度，每一波长读三次数，取平均值带入公式计算。
如吸光度大于0.8，按倍数准确稀释（稀释倍数为n ），尽量使吸光度的测量值在0.2-0.8范围内。
4、结果计算
用测得的吸光度 A 663、 A 645，代入（3）式计算溶液中叶绿素a 的含量；代入（4）式中计算得到叶绿素b 的含量，代入（5）式计算得到叶绿素总含量。
计算植株中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子。
数据记录及处理： 表1
表2
17周星期一、星期二（全天开放）采集新鲜树叶并把样品带到实验室来领塑料密封的试管，然后称量0.1g 新鲜样品用研钵磨碎，并用少量酒精洗涤并转移到塑料密封试管，稀释到50mL 的刻度，带回家避光保存，并于星期三，星期
-1
T mg L (mL)10001000100%
T c V w m ⋅⨯=
⨯样
（）
四（全天开放）带到实验室测定吸光度，并计算浓度含量，交实验报告批改后登记成绩。
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