植物组织中叶绿素含量测定

植物组织中叶绿素含量测定

（无机及分析化学实验II-设计性实验）

一、实验目的

1．设计用分光光度计测定植物组织中的叶绿素

2. 学习利用文献资料设计研究方案

3. 掌握分光光度计测定植物组织中的叶绿素的原理与方法

二、原理：

叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合

成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对

光、热较敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中

可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种，均

易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿。

叶绿素a 叶绿素b

叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm，且两吸

收曲线相交于652nm处。叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，可在663nm和

645nm测定试样吸光度（两组份混合试样测定，双波长法），根据Lambert－

Beer定律，列出浓度c与吸光度A之间的关系式：

A

663

＝82.04c a＋9.27c b (1)

A

645

＝16.75c a＋45.6c b (2)

（1）、（2）式中的A

663、A

645

为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的吸光度

度。

c

a

、c b为叶绿素a、b的浓度，单位为g/L。

82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式（1）（2），则得经验公式：

c a =12.7 A

663

-2.69 A

645

(3)

c b =22.9 A

645

-4.68 A

663

(4)

c

T

=（c a + c b）=20.2 A645+8.02 A663...... (5)

此时，c T为总叶绿素浓度，c a、c b为叶绿素a、b的浓度，单位为mg/L ，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、b总叶绿素的浓度。

仪器：分光光度计、电子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光）、小漏斗、滤纸

试剂：95%乙醇

三、实验步骤

1、试材的采集

采集新鲜植株叶片（或含叶绿素的其他组织），夹于双层报纸中，风干（不能置于太阳光下晒）。将风干材料处理成细小颗粒，装入封口塑料袋，避光保存。

2、待测液的制备

（1）叶绿素的浸提

精密称定风干后的样品（约0.1g）于20mL 95%乙醇中，在室温浸提36-48h。

（2）叶绿素浸提液定容

提取液过滤到50mL 棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光），用95%乙醇定容至50mL ，摇匀，置于暗处备用待测。 3、测量吸光度

取1cm 的比色皿，注入上述叶绿素酒精溶液，用95%乙醇为参比液，1cm 的比色皿为吸收池，分别在663nm 和645nm 波长测吸光度，每一波长读三次数，取平均值带入公式计算。如吸光度大于0.8，按倍数准确稀释（稀释倍数为n ），尽量使吸光度的测量值在0.2-0.8范围内。 4、结果计算

用测得的吸光度 A 663、 A 645，代入（3）式计算溶液中叶绿素a 的含量；代入（4）式中计算得到叶绿素b 的含量，代入（5）式计算得到叶绿素总含量。

计算植株中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子。 数据记录及处理： 表1

表2

17周星期一、星期二（全天开放）采集新鲜树叶并把样品带到实验室来领塑料密封的试管，然后称量0.1g 新鲜样品用研钵磨碎，并用少量酒精洗涤并转移到塑料密封试管，稀释到50mL 的刻度，带回家避光保存，并于星期三，星期

-1

T mg L (mL)10001000100%

T c V w m ⋅⨯=

⨯样

（）

四（全天开放）带到实验室测定吸光度，并计算浓度含量，交实验报告批改后登记成绩。

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