武汉科前生物猪繁殖与呼吸综合征ELISA试剂盒使用说明书
猪的病毒性传染病——猪繁殖和呼吸障碍综合征
猪的病毒性传染病——猪繁殖和呼吸障碍综合征概述猪繁殖和呼吸障碍综合征(Porcine reproductive and respiratorysyndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染性疾病，又称“猪蓝耳病”，本病以妊娠母猪的繁殖障碍(流产、死胎、木乃伊胎)及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病为特征。
本病是20世纪80年代末发生于养猪业发达国家的一种病毒性疾病，在世界各国引发了空前的“流产风暴”，给世界养猪业造成巨大的经济损失，现已成为规模化猪场繁殖障碍和呼吸道疾病的主要疫病之一。
本病于1987年在美国首先发生，随后加拿大也报道了本病， 90年代初欧洲开始流行，在我国，本病首先于1995年底在华北地区规模化猪场发生，其后短短几年时问在我国大部分养猪地区流行。
本病曾称为“神秘猪病”、“新猪病”、“猪流行性流产和呼吸综合征”、“猪生殖与呼吸综合征”、“蓝耳病”、“猪瘟疫”等。
1991年，欧洲学者提出将本病命名为“猪繁殖与呼吸综合征”，1992年在美国的明尼苏达州召开的第一届国际研讨会正式采用该命名，也是世界动物卫生组织(OIE)正式定名。
OIE将该病列为B类传染病，我国也将其列为二类传染病。
病原猪繁殖与呼吸综合征病毒为单股正链RNA病毒，属套式病毒目、动脉炎病毒科(Arterividdae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)。
呈球形，有囊膜，直径在40～60nm之间，表面有约5nm大小的突起。
核衣壳呈二十面体对称，直径为25～30nm。
无血凝活性，不凝集哺乳动物或禽类红细胞。
有严格的宿主专一性，对巨噬细胞有专嗜性。
病毒的增殖具有抗体依赖性增强作用，即在亚中和抗体水平存在的情况下，在细胞上的复制能力反而得到增强。
病毒在氯化铯中的浮密度为1.13～1.19g/mL，在蔗糖梯度中的浮密度为1.18～1.23g/mL。
病毒的稳定性受pH和温度的影响比较大。
简述使用elisa试剂盒的操作流程
简述使用elisa试剂盒的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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猪繁殖与呼吸综合征弱毒苗免疫抗体水平研究
免 疫猪 繁 殖与 呼 吸综 合 征弱 毒 苗猪 群一 般 在 １ ５天 以 内会 出现 猪 繁 殖 与 呼 吸综 合 有 效 免 疫 抗 体 。 一 个 月左 右达 到抗 体 高峰期 ， 体 有效 时 间 在 抗 可 以持续 大约 ４个月 。其 中 ， ８号猪 在免 疫 ７ Ａ ５天 后 ， 疫抗 体 已经 低 于试 剂盒 检测 要 求 ， 免 这有 可 能 是 由于个体 差 异所致 。
猪 繁殖 与 呼 吸综合 征 病 毒 Ｅ ＩＡ抗体 检 测 试 ＬＳ
剂盒 购 自武汉 科前 动物 生物制 品有 限责 任公 司 。 １ ． 苗 ． ２疫 １
１ ＿ 猪繁殖 与 呼吸综 合 征 Ｅ ＩＡ试 剂盒 对 ． ３用 ３ ＬＳ
采 取 的血清进 行抗 体检 测 。
２结 果 ２１三 组 猪 群 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 抗 体 检 测 结 ．
内复 制 可 以保 持 相 当长 一
段 时 间（ 毒 的复制 程 度取 病
决 于其 致弱ห้องสมุดไป่ตู้的程 度１ ，因此
能 够使 猪 的免 疫 系 统 反复
接 触 到 完整 的病 毒 抗原 刺
２２免 疫 猪 繁 殖 与 呼 吸综 合 征 弱 毒 苗 猪 群 抗 ．
体 分 布
激， 产生 免疫 保护 。 本 研究 通过 对 免疫 猪 繁殖 与 呼吸 综合 征 的 弱 毒 苗 的猪群 进 行免 疫抗 体 检测 ，发现 猪群 疫 苗免 疫 后 ．５天之 内就会 出现 免 疫抗 体 ， 月达 到免 １ １个
的 防制 ， 要坚 持 以防为 主 ， 治结合 的原 则 。坚 持 防 自繁 自养 ， 止 购入 隐性感 染猪 。实 行全 进全 出 的 禁
方 ， 检 完 以后要 对 现场 进 行 清 理 ， 底 消 毒 ， 剖 彻 撒 上石 灰 粉 ， 以防止 细菌传 染 。其次 肌 肉注射尽 量选 在 下午 进行 ， 果 比较 明显 ， 头和 注射 器 要经 常 效 针 用 高压 蒸 汽锅 消毒 ．保证 一 猪换 一个 针 头 避免 交 叉感 染 。最后 治疗 时坚 持抗菌 消 炎 ， 解热 镇痛 利水
猪繁殖与呼吸综合征的监测与分析
综合 征 Ｅ ＩＡ抗体 检测 试剂 盒 、 ＬＳ 猪繁 殖 与呼 吸综 合
征体 外 诊 断试 剂 （ Ｔ Ｐ Ｒ）进 行 了猪 繁 殖 与 呼 吸 Ｒ —Ｃ ，
表 １ ２ ｏ ～ ｏ ９年 猪 繁 殖 与 呼吸 综 合 征血 清 学 、 原 学 监测 结 果 统计 ０ ８ ２ｏ 病
１２ 被 检血清 －
猪 主要 以发 热 、 厌食 和流产 、 木乃伊 胎 、 产 、 仔等 死 弱 繁殖 障碍为 主要表现 ；仔猪 则表 现呼吸症 状和 高死 亡率 。２ ０ ０ ６年 ６月 以后 ， 国各地 相继 出现 以高 热 全 为 主要 症状 的“ 高热病 ” 。经 农业部 兽医诊 断 中心 系 统 的工 作 ， 明引起 “ 证 高热病 ” 的原 因为“ 异株蓝 耳 变 病病毒 ” 目前 ， 。 各地 主要采取 以免疫 预 防为主 的综 合性 防控措施 来预 防和控制猪 繁殖 与呼 吸综 合征 。 为 了解猪 繁殖 与呼吸综合 征免疫 抗体保 护情 况 及 病原 感 染 状况 ，０ ８ ２ ０ ２ ０ 、０ ９年 利 用猪 繁 殖 与 呼 吸
采 自新ห้องสมุดไป่ตู้ ５个规 模养 殖场 、２个 养殖 小 区的血 ３
清样 品 ７ １ （ 中包括 种公 、 猪 ， ０份 其 母 后备 种 猪 和仔
猪 ） 。
１３ 疫 苗 ．
采 用洛 阳普莱柯 生物工 程有 限公 司生 产 的猪 繁 殖与 呼吸综合 征灭 活疫苗 （ Ｖ Ｃ Ｊ Ａ 株 ） Ｎ Ｄ —Ｘ Ｉ 。 ２ 结果 ３ 小 结 与 讨 论
猪 繁殖与 呼吸综合 征 （ Ｒ Ｓ ， Ｐ Ｒ ） 目前 已成 为世界 性分 布 的传 染病 ， 被认为 是 ２ ０世 纪末 影 响最大 的一 种新 的高度传 染性猪 病综合 征 。 近几年 以来 ， 地不 各
发酵床猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒和沙门菌混合感染的诊治
液进 行涂 片 ， 氏染色法 染 色后光 学显 微镜检 查 。 瑞
病 理 学 检 查 ： 常 规 方 法 进 行 尸 体 剖 检 ， 录 眼 按 记
通 讯 作 者 ： 玲 ， — ｉ： ｈ ｎ ｌ ｇ ５ ５ ＠ ｙ ｈ ｏ ｃ ｒ． ｎ 张 Ｅ ｍａｌ ｚ ａ ｇｉ ． ６ ８ ａ ｏ ． ｏ ｃ ｎ ｎ
覆 盖 一 层 黄 色 豆 渣 样 厚 厚 的 增 生 物 ， 开 见 底 部 红 剥 色 、 缘不 规则 的溃疡 面 。 边 ３ 实验 室 诊 断
３ ５ 分子生 物学诊 断 ．
，
３ ５ １ 无菌 取病 死猪 的肺 、 、 巴结 组织 ， Ｒ ．． 脾 淋 用 Ｔ— Ｐ Ｒ检测 猪瘟病 毒 、 Ｃ 猪繁 殖 与呼 吸综 合 征病 毒 变异 株， 引物序列 和具体检 测方 法见 参考 文献 ［ —］ １２ 。结 果见 图 １ 。由 图可见 ， 繁殖 与 呼 吸 综 合征 病 毒 变 猪 异株 为 阳性 ， 猪瘟病 毒为 阴性 。 ３ ５ ２ 采集 呼 吸道 病症 较 为 典 型猪 只 血清 １ ．． ２份 ，
１ ２方 法 ． 剖 检 时 ， 病 死 猪 的 血 液 、 包 液 和 腹 腔 取 心
检 测 试 剂 Ｔ ｑ 酶 、 Ｃ 缓 冲 液 （ Ｍ ｇ ） ａ Ｐ Ｒ 含 、
收稿 日期 ： ０ ０Ｏ — ６ ２ １ 一 ５２ 基 金 项 目 ： 南 省 科 技 攻 关 项 目“ 别 山 区 猪 血 虫病 防 治技 术 的 河 大
ｄ ＮＴＰ为宝 生物 工程 （ 连 ） 限公 司产 品 ； 白酶 大 有 蛋 Ｋ 为 Ｍｅｃ ｒｋ公 司产 品 ； 形 虫 抗 原 Ｅ Ｉ Ａ 检 测 试 弓 ＬＳ 剂盒购 自武 汉科 前 生 物技 术 有 限 公 司 ； 鼠购 自信 小
猪繁殖与呼吸综合征的监测与分析
２０ ～ ０９ ０ ８ ２ ０ 年猪繁殖与 呼吸综合征病原学监测场点统计 ３ 从监测场点统计结果来看 ， ． ３ 规模场免疫状况明显优 于养殖区
结果见表 ３ 。
３小结 与讨论
收 稿 日期 ：０９ １ ２ ． ２ ０－ 卜 ３
３ 签于目前的情况， ． ４ 建议认真贯彻落实 Ｐ Ｒ 强制免疫程序， ＲＳ 提倡
表３ ０８ ＇０年ＰＲ 病原 学监测 场 点 结果统计 ２０￣ ００ Ｒ Ｓ ２
监测 项 目
母
猪繁殖与呼吸综合征 Ｅ ＩＡ抗体检测试剂盒由武汉科前动 ＬＳ
物生物制品有限责任公 司提供 腻 剂批号 ２ ０ ０ ０ 、０ ９ ５ ８； ０ ７ ７ ８２０ ０ ２） 猪繁殖与呼吸综合征体外诊断试剂（Ｔ Ｐ Ｒ ， Ｒ — Ｃ １北京世纪元 亨动 物 防 疫 技 术 有 限 公 司 提 供 （ 剂 批 号 ：Ｐ Ｒ ２００ 、 试 Ｈ Ｒ Ｓ ０ ７ ８
Байду номын сангаас
・ 通讯作者 ： 多￣（ ５ ， 一）男 ， 冉 １ ７ ０ ， 教授 ， ９ １ 主要从 事畜禽传染病科研与 自 自 ， 繁 养 加强检疫、 检测， 强化对疫苗的管理和使用 ， 加强猪群的饲
教 育工作 ；ｊ ｌ＠１ ３ＣＩ。 ｘｒ ７ ６ ． Ｔ ｄ Ｏｔ
养管理和消毒， 预防其他病毒和细菌 毒素的 侵害， 提高机体免疫力。
年 度
生数
髓
表 ２ ０ ８ ＇０ 年Ｐ Ｒ 血清 学监 测 场点 结 果统 计 ２０￣ ０ｇ Ｒ Ｓ ２
猪繁殖与呼吸综合征体外诊断试齐（Ｔ Ｐ Ｒ， Ｊ Ｉ — Ｃ） Ｒ 进行了猪繁殖与呼吸 综合征血清学、 病原学监测， 以便
姗鲥
８ ６
猪繁殖与呼吸综合征的检测与免疫试验
维普资讯
２０ ０６年 第 ２期
浙 江畜牧 兽 医
５
半 胱 胺 不 同 添 加 方 式 对 育 肥 猪 生产 性 能 的 影 响 试 验
Ｒ ｓｉ ｔｒ Ｓｎ ｒｍｅ Ｐ Ｒ ） ２ ｅｐ ａ ｙ ｙ ｄｏ ， Ｒ Ｓ 是 Ｏ世 纪 ８ ｒｏ ０年代末 期
检 测前用 血清 稀 释 液作 ４ Ｏ倍 稀 释 。 方法 采 用 酶 联 免 疫吸 附试验 （ ＬＳ ， 定 标 准 ：／ Ｅ ＩＡ）判 ＳＰ值低 于 ０ ４ ． 为 ＰＲ Ｒ Ｓ阴 性 ；／ ＳＰ值 大 于 或 等 于 ０ ４为 Ｐ Ｒ 阳 ． ＲＳ
（０ ２ ０ １０ 。 ２ ０ ） １０ １
１ ４ 试 验 方 法 ．
通 过抽样 检测 ， ３个规 模 场 有 ２个 阳性 反 应 ， 阳 性 率达 ６ ．％ ， ６７ ５家散 养 户 ， 阳性 率 达 ８ ，％ ， ０ Ｏ 门诊 送 检样 本 的 阳性 率 达 ７ ． ％ ， 本 总 体 阳性 率 达 ８６ 样
物疫病 诊断 中心 提供 。
２１ Ｐ Ｒ ． Ｒ Ｓ感 染情 况
通 过 随机 抽 样 ， 对 送 检样 并
本进 行血 清检 测 ， 结果 见表 １ 。 表１ ＰＲ Ｒ Ｓ随机抽 样 及送检 样 本检 测 结果
１２ 试验动 物 ．
免 疫 试 验 用猪 均 为 桐 乡市 农 户 饲
养 的内三元 生长 肉猪 ， 中一户饲 养 ２４头 ， 其 ３ 另一 户 饲养 １７头 。 为 免 疫 试 验 组 ； 一 农 户 饲 养 １８ ７ 作 另 ７ 头 ， 为免 疫对 照组 。饲 养条件 基本 相 同。 作 １３ Ｐ Ｒ ． Ｒ Ｓ疫 苗 由吉林 正业 生 物 制 品有 限责 任 公 司 生 产 ， ０ ｌ瓶 ， 准 文 号 ： 兽 药 生 试 字 ２ ｍ／ 批 吉
猪繁殖与呼吸综合征
3.精液（公猪感染后，会通过精液长期排毒）
传播途径
接触 垂直传播
14
.
节肢动物传播
人工授精
.
传播途径
空气传播
.
禽类粪便
流行特点
1.无明显季节性 2.初发地区呈爆发式，发生过的地区则流行缓和，多为散发
15
3.呈现“三高一低”的流行特点
危险因素
引种
1 购猪 3
16
毗邻感染猪群
5
2 检疫不合格
4 猪群密度过大
.
主要结构蛋白
5
病原学
PRRSV只有一个血清型 根据遗传进化的差异可分为： 1.欧洲型（基因1型，代表毒株为LV株） 2.美洲型（基因2型，代表毒株为VR-2332株）
病原学
根据PRRSV致病力的不同可分为： 1.经典性猪繁殖与呼吸综合征（代表毒株为CH-1R） 2.高致病性猪繁殖与呼吸综合征（代表毒株为NVDC-JXA1）
性
质
易溶于有机溶剂，用一般消毒 剂就能将其杀灭
10
宿主
传染源
流行特点
传播途径
危险因素
11
宿主
猪是唯一的天然宿主。家猪 野猪有自然感染。不同年龄， 性别，品种的猪均可感染，妊 娠母猪，仔猪更易感染。
12
传染源
1.PRRSV感染猪（急性发病猪，亚临床感染猪和流产胎儿） 2.野猪（自然感染宿主）
13
诊断方法
组织病理学
27
1 2
临床诊断
抗原检测
3 4
抗体检测
血清中和试验.
5
防控措施
坚持自养 规模化猪场实施全进全出 建立生物安全体系 做好猪群饲养管理
28
免疫接种
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测与分析
72猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2016年33卷第8期猪场兽医VETERINARY猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测与分析刘 鸽，于会举，张培生，张 倩，屈勇刚*，杨慧敏(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）基金项目 ：新疆石河子市农业科技攻关项目（编号：2013NY04）作者 ：刘 鸽（1986-），男，山东省淄博人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作* 通讯作者 ：屈勇刚（1971-），男，陕西省渭南人，副教授，主要从事动物传染病诊断与防治工作摘 要：为了解北疆地区的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的免疫抗体水平，以便及时发现问题，及时淘汰病猪和做好PRRS 的补免工作，本试验从北疆地区的19个现代规模猪场采集血液样品1 027份，采用ELISA 抗体检测试剂盒对样品进行检测，结果发现有965份免疫抗体阳性血清，阳性率为93.96%；样品KQ 平均值为80.25，变异系数平均值为0.36；免疫抗体阳性率超过90%的猪场有17个，占89.47%；有6个猪场的PRRS 免疫抗体阳性率超过95%。
本试验研究结果发现：北疆地区猪群的PRRS 免疫抗体整体水平较高；不同构成成分的试验猪群间PRRS 免疫抗体水平存在差异，种公猪的免疫抗体水平最高；虽然仔猪的整体PRRS 免疫抗体水平较高，但免疫抗体水平有随日龄的增长而下降的趋势。
希望本试验的研究成果对养猪企业的生产有所帮助，并为猪病研究的组织机构提供有价值的参考。
关键词：PRRS；ELISA；抗体水平；阳性率猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），又被称为猪蓝耳病（因猪感染后有耳朵发紫的症状而得名），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度接触性传染病[1]。
PRRSV 是冠状病毒科动脉炎病毒属的病毒。
PRRS 常会引起母猪的繁殖障碍、仔猪的呼吸道疾病和高死亡率[2]、公猪的生殖机能下降[3]。
PRRS被国际兽医局（OIE)列为B 类传染病，我国将之列为二类动物传染病。
猪繁殖与呼吸综合征病毒检测
猪繁殖与呼吸综合征病毒检测1 范围本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测原理、试剂和仪器设备、检测程序和结果判定。
本标准适用于猪临床样品（肺脏、脾脏和血清）和细胞培养物中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测；同时适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒经典型、高致病性、类NADC30型三种基因亚型的分型检测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版）适用于本文件。
GB 19489 实验室生物安全通用要求GB/T 27401 实验室质量控制规范动物检疫。
NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范SN/T1193 基因检验实验室技术要求3 缩略语PRRSV: porcine reproductive and respiratory syndrome virus，猪繁殖与呼吸综合征病毒LAMP：loop-mediated isothermal amplification, 环介导的恒温扩增RT-LAMP：Reverse transcription, loop-mediated isothermal amplification，反转录环介导的恒温扩增。
4 原理猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）主要引起猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病)。
该病毒有美洲型和欧洲型两个血清型。
美洲型又有多个基因亚型。
我国流行的美洲型PRRSV主要有传统型、高致病性和类NADC30型毒株，其主要区别存在于病毒的Nsp2基因。
环介导的恒温扩增（LAMP）是一种体外恒温核酸扩增技术，用于快速检测DNA。
RT-LAMP是一种逆转录LAMP，用于检测RNA。
本标准RT-LAMP，根据PRRSV开放阅读框架7（ORF7）基因序列、ORF1a（非结构蛋白Nsp2）基因序列设计4组引物，建立4种RT-LAMP检测方法（即LAMP1、LAMP2、LAMP3和LAMP4)，其中LAMP1的特异性引物识别ORF7基因，LAMP2、LAMP3和LAMP4的特异性引物识别Nsp2基因。
猪流感病毒(H1亚型)ELISA抗体检测试剂盒
等特点， 适合基层实验室技术人员使用； 可用于检测猪流
感病毒 （ Ｈ１ 亚型 ） 的抗体 ， 有利于猪 场对该病 的控 制 ； 试剂 盒重复性好 ， 批 间变异系数小 ， 特异性 良好 ， 敏感性高 。
四、 检 测 原 理
一
流感病毒亚型分 类的关键是 Ｈ Ａ基 因， 以猪流感病毒 猪 流感病 毒 （ ｓ Ｉ Ⅵ 属正 粘病 毒 科成 员 ， 可 引起 猪 流感 （ ＨＡ） 基 因的原核 表达产物 作为 包被抗原 ， 可以特 异性检 （ ｓ Ｉ ） 。ｓ Ｉ 是一种 以突然发病 、 咳嗽 、 呼吸 困难 、 发热和 衰竭 ， 测猪血清中的流感病毒 Ｈ１ 亚型的抗体水平。 五、 试 剂 盒 质 量 的 相 关 试验 以及随 后的迅速恢 复或死 亡 为特征 的急性感 染的呼 吸系 １ ． 特异性试验 统疾病。各品种 、 性 别和年龄 的猪 均能感染 ， 发病率高。猪 群 暴发流感时 ， 发病率可高达 １ ０ ０ ％。近年来 中国 的养猪业 使用试剂盒检测猪繁殖与呼吸 综合征 、猪伪狂犬病 、 由过去的家庭式 饲养模 式逐步向规模化 发展 ， 但由于饲养 猪萎缩 性鼻炎 、 猪胸膜肺 炎 、 副猪嗜血 杆菌 、 猪 口蹄疫 、 猪 规模大 、 饲养 密度 高 、 应 激 因素多 ， 加上 中国独特 的生态 、 瘟、 猪 弓形 虫、 猪水疱性 口炎 、 猪衣原 体 、 猪流感病毒 Ｈ３亚 地理 、 气候 条件和人们的生活 习惯 ， 使得候鸟 、 水禽 、 猪、 人 型、 猪流感病 毒 Ｈ９亚型 、 猪流感病 毒 Ｈ１ 亚型 １ ３种病原 频繁接触并交叉循环感染 ， 极 易引起 ｓ Ｉ 等群发性疾病的反 的阳性 参考血 清 ，结果显 示非猪 流感 病毒 Ｈ１亚型 血清 复流行。因此 ， 了解 ｓ Ｉ 在中国流行情况及开展 Ｓ Ｉ Ｖ流行病 ＯＤ６ ３ ０ ｎ ｍ 值均低于阳性判定标准 ， 判为阴性 ， 而猪流感病 学的研 究 ， 不 仅可 促进中 国畜牧业 的健康稳 定发展 ， 满足 毒 Ｈ１ 亚型阳性参考血清则为阳性（ 见表 １ ） ； 试剂盒对来 自 疫病防制的需要 ， 也将为流感 的预测预报及 防制对 策的制 未 免 疫 猪 流 感 病 毒 Ｈ１亚 型 疫 苗 的 猪 血 清 ３ ０份 进 行 定提供 根本 立足 点和理论 依据。因此 ， 快速 、 特 异、 敏感、 便于操作 的诊 断和检测方 法的使用 ， 阳 性 猪繁殖 猪 伪狂 猪萎缩 猪胸膜 副猪嗜 猪口蹄 猪瘟 猪 形 猪水疱 猪在原 猪流感 猪流癣 猪流感 口性 对 阴 性 犬 瘸 性鼻炎 肺炎 ｍ杆菌 疫 虫 性口擞 摘 毒 桶 毒 病 毒 照 对照 将为有 效预 防和 控制猪 流 感的 发生提 供有 力 ｍ清 与砰 综 合 征 Ｈ ３ Ⅱ ｍ Ⅱ Ｈ １ Ⅱ 型 型 型 的手段和重要的工具。
国家三类新兽药——猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒
国家三类新兽药——猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检
测试剂盒
王绍关;董晓辉;徐高原
【期刊名称】《兽药市场指南》
【年(卷),期】2015(0)2
【摘要】2014年11月13日，猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒获得农业部审批，被批准为三类新兽药，证书号为：【（2014）新兽药证字41号】。
本试剂盒由华中农业大学、武汉科前生物股份有限公司共同研制。
本刊特邀请该试剂盒的研制单位之一——武汉科前生物股份有限公司对本产品的研发、特点及临床应用作一介绍，为试剂盒在临床上的应用提供依据。
【总页数】2页(P27-28)
【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒;抗体检测试剂盒;三类新兽药;ELISA;华中农业大学;临床应用;研制单位;农业部
【作者】王绍关;董晓辉;徐高原
【作者单位】武汉科前生物股份有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
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猪繁殖与呼吸综合征病毒-(1)
一、PRRSV的形态特征
1、套式病毒目 动脉炎病毒科 动脉炎病毒属
2、基本形态及核酸 病毒粒子呈卵圆形，直
径50～65nm。 核衣壳直径30～35nm，
呈二十面体对称。 有囊膜。 单分子线状单股正链RNA
病毒。
3、病毒蛋白有核衣壳蛋白（N， 分子质量120000u）和两种主要囊 膜蛋白（M和GP5）。
或禽类红细胞。
二、PRRSV的增殖与变异 1、病毒的增殖
病毒增殖的细胞：
猪的单核细胞巨噬细胞系统内增殖
猪肺泡 巨噬细胞
外周 单核细胞
肺间质 巨噬细胞
在宿主细胞浆的空泡膜及 滑面内质网小池膜上“出 芽”，成熟的病毒粒子多 蓄积在空泡腔内。
最为敏感
病毒增殖数量与其适应宿主细胞程度有密切关系。
病毒增殖的过程：
采用血清学抗体检测技术是应用最为广泛的实验室诊 断方法。
目前有4种不同的方法用于检测血清中的 PRRSV抗 体，包括：
方法
优点
缺点
间接免疫荧光抗 特异性高 早期诊断 抗原变异会影响结果
体试验 （IFA）
结果主观判定
免疫过氧化物酶 特异性高 敏感性高 结果主观判定
单层试验（IPMA） 早期诊断
高背景
鼻黏膜或 上呼吸道系统 (巨噬细胞)
初级复制部位
血液循环
其他器官 （单核巨噬细胞系统）
病毒增殖的特点：
增殖的特点
有严格的宿主专一性
对巨噬细胞有专嗜性。
抗体依赖性 增强作用
即在亚中和抗体 水平存在的情况 下，在细胞上的 复制能力反而得 到增强。
2、病毒的变异
PRRSV分为两个型： （1）以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型（简称A亚群）。 （2）以ATCC VR-2332毒株为代表的美洲型（简称B亚群）。 两者在抗原上有显著差异， 只有很少的交叉反应。 A亚群：广泛的基因组变异。 B亚群：呈较为保守性。 不同毒株之间在毒力和致病力上有明显的差异。 我国的PRRSV均属美洲型，迄今还没有发现欧洲型株，同
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】
使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。
【样品和对照稀释】
样品稀释：在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。
对照稀释：在血清稀释板中按1:4分别稀释阳性对照和阴性对照（180μl样品稀释液中加60μl对照血清）。
【注意事项】
1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2~8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3 不要用口移液。
4 底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
5 未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。
6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。
7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果。
【操作步骤】
1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉液体，并在吸水纸上拍干，共计洗板2次。
再分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl。
轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次，
3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。
4 洗涤5次, 方法同2。
切记每次在干净吸水纸上拍干。
5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l）,混匀,室温(18℃~25℃)避光显色10分钟。
6 每孔加终止液一滴(50μl)，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
【结果判定】在酶标仪上测各孔OD630nm值。
试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。
样品OD630nm值＞0.42，判为阳性；样品OD630nm值介于0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630nm值＜0.38，判为阴性。
注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。