解磷解钾微生物筛选
有机磷农药高效降解微生物的筛选与鉴定_张六六
一株高效解钾菌的筛选、鉴定及培养条件的优化
一株高效解钾菌的筛选、鉴定及培养条件的优化
张雷;邱路凡;刘丽红;赵雪钰;韩春梅
【期刊名称】《湖北农业科学》
【年(卷),期】2024(63)4
【摘要】以黑土水稻田中解钾菌为研究目标,共分离筛选出5株解钾菌,通过其形态特征以及测定菌株解钾能力筛选出1株高效解钾菌株S1。
利用16S rDNA鉴定
S1的种属,并通过单因素试验和正交试验优化该菌株的培养条件。
结果表明,分离筛选得到的5株解钾菌均能有效分解钾长石,菌株S1解钾能力最强,解钾率为57.03%,发酵液中解钾量为3.852 mg/L,为最优解钾菌。
初步鉴定解钾菌S1为伯克霍尔德菌(Burkholderia ambifaria)。
经单因素试验和正交试验优化后的培养组分为碳源1.0%甘露醇、氮源1.0%蛋白胨、无机盐0.5%K_(2)HPO_(4),培养条件为温度30℃、时间48 h、培养基装液量(培养瓶250 mL)80 mL、初始pH 6.5、接种量5.0%。
【总页数】7页(P30-36)
【作者】张雷;邱路凡;刘丽红;赵雪钰;韩春梅
【作者单位】东北石油大学地球科学学院;湖北工业大学;大庆油田第三采油厂工艺研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S154.3
【相关文献】
1.高效解磷解钾菌 NX-11菌株的分离筛选、鉴定及最佳培养条件的确定
2.一株高效解钾菌的筛选、鉴定及发酵条件的优化
3.一株高效解钾脱硅真菌的筛选、鉴定及培养条件优化
4.一株南方红壤区杉木根际高效解钾菌的筛选、鉴定及其培养条件优化
5.一株高效微生物絮凝剂产生菌的筛选鉴定和培养条件优化
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新疆核桃微生物菌肥菌种组合筛选
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ １ ｍａ ｎ ｕ ｒ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗａ ｌ ｎ ｕ ｔ ｓ
ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗａ ｌ ｎ ｕ ｔ ｓ ｇ ｒ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ｉ ｎ Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ． Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ ， ｗｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｏ ｎ ｉ ｓ ｍ ｔ ｅ ｓ ｔ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ
新 疆 农 业 大 学 学 报
２ ０ １ ６ ， ３ ９ （ ４ ） ： ２ ５ ９ ～２ ６ ５
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
文 章 编 号 ：１ ０ ｏ ７ — ８ ６ １ ４ （ ２ ０ １ ６ ） ０ ４ — ０ ２ ５ ９ — ０ ７
组合 、 Ｐ ～ ６ ＋ｐ ４ ＋ｋ ５组 合 、 ｐ 一 ７ ＋ｐ ７ ＋ｋ ｌ ｌ 组合 ， 最 终 获 得 最 佳 菌 种组 合 ： ｐ 一 ７ ＋ｐ ７ ＋ｋ １ １ 。
植物根际促生菌的筛选与应用
摘要摘要植物根际促生菌可以提高不同植物的种子萌发率，促进植株的生长，增加植物叶面积以及叶绿素含量，对植物的生物量及其根长及根的表面积也有一定程度增加，从而加速植物的生长发育进程，还可以拮抗多种植物病原菌生长，降低植物病发率。
本实验研究主要以筛选出具有较高解磷、解钾、产IAA（吲哚乙酸）、产HCN（氰化氢）、产铁载体、产ACC（1-氨基环丙烷-1-羧酸）脱氨酶活性的植物根际促生菌（PGPR）为目的，从植物根际及根际土壤中分离筛选得到具有促生活性的菌株100株，再通过定量测定分析其中22株菌具有解磷活性，11株菌具有解钾活性，9株菌具有产IAA能力，16株菌具有产铁载体能力，1株菌具有产ACC脱氨酶能力。
选取其中促生活性较高的20株菌株，进行生理生化特征测定及16srDNA序列测定。
采用平板水培法初步测定这20种菌的促生效果。
结果显示促生效果最好的是菌株2-2、3-1、5、22-2及30-4。
通过盆栽实验发现与对照组相比加菌的实验组均能提高大麦的生物量，其中具有解磷活性的菌株能提高大麦中的有效磷含量，具有解钾活性的菌株能提高大麦的速效钾含量。
盆栽实验测得菌株30-4促生活性高于其他菌株，对其进行培养基条件优化，通过单因素实验与响应面优化得到其最适培养条件：0.29%牛肉膏，1%酵母浸粉，0.78%MgSO4。
优化后产IAA量为106.11mg/L，比优化前提高23.4%。
关键词：植物根际促生菌；筛选；条件优化；大麦AbstractAbstractPlant growth-promoting rhizobacteria(PGPR)can improve seed germination rate of different plants,promote plant growth,increase leaf area and chlorophyll content of plants, increase plant biomass,root length and root surface area to a certain extent,thus accelerating plant growth process,and can also antagonize the growth of many plant pathogens and reduce the incidence of plant diseases.This experimental study mainly aims to screen plant rhizosphere-promoting bacteria (PGPR)with high phosphate-dissolving,potassium-dissolving,IAA-producing,HCN-producing,iron-producing carrier,and ACC deaminase-producing activity,from plant rhizosphere and100strains of life-promoting strains were isolated and screened from rhizosphere soil.Then,22strains had phosphate-dissolving activity,11strains had potassium-dissolving activity,9strains had IAA-producing ability,and16strains had16 strains.The ability to produce iron carriers,one strain has the ability to produce ACC deaminase.Twenty strains with higher life-promoting properties were selected for physiological and biochemical characteristics determination and16srDNA sequencing.The growth promoting effects of these20strains were initially determined by plate hydroponics.The results showed that the best promoting effects were2-2,3-1,5,22-2,30-4. The pot experiment showed that the experimental group with bacteria increased the barley biomass compared with the control group.The strain with phosphorus-dissolving activity could increase the available phosphorus content of barley,and the strain with potassium-dissolving activity could increase the available potassium content of barley.The results showed that strain30-4promoted the life more than other strains,optimized the medium conditions,and optimized the conditions by single factor experiment and response surface optimization:0.29%beef extract,1%yeast extract,0.78%MgSO4.The IAA output after optimization was106.11mg/L,which was23.4%higher than that before optimization.Keywords:PGPR;screening;condition optimization;barley目录第一章文献综述 (1)1.1植物根际促生菌 (1)1.1.1研究背景 (1)1.1.2植物根际促生菌（PGPR）的含义 (1)1.2PGPR的作用机制 (1)1.2.1解磷作用 (2)1.2.2解钾作用 (2)1.2.3生长素 (2)1.2.4铁载体 (3)1.2.51-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）脱氨酶 (3)1.2.6诱导寄主植物对干旱的忍耐力 (3)1.3PGPR的研究进展 (3)1.4PGPR展望 (5)1.5本实验研究内容 (5)第二章植物根际促生菌的分离筛选及鉴定 (6)2.1实验材料 (6)2.2培养基及试剂 (6)2.2.1培养基 (6)2.2.2试剂 (8)2.3实验仪器 (9)2.4实验方法 (9)2.4.1初步筛选 (9)2.4.2解磷活性测定方法 (10)2.4.3解钾活性测定方法 (10)2.4.4产IAA量测定方法 (10)2.4.5产HCN测定方法 (11)2.4.6铁载体测定方法 (11)2.4.7ACC脱氨酶活性测定 (11)2.4.8菌株生理生化鉴定 (12)2.4.916SrDNA序列测定和菌株鉴定 (14)2.5结果与讨论 (15)2.5.1PGPR促生能力的定性测定 (15)2.5.2解磷菌的筛选及定量分析 (17)2.5.3解钾菌的筛选及定量分析 (17)2.5.4产IAA菌的筛选及定量分析 (18)2.5.5产铁载体菌的筛选及定量分析 (19)2.5.6产ACC脱氨酶菌的筛选 (20)2.5.7各菌株生理生化与16SrDNA鉴定结果 (21)第三章植物根际促生菌促生效果研究 (24)3.1实验材料 (24)3.2培养基及试剂 (24)3.2.1培养基 (24)3.2.2试剂 (25)3.3实验方法 (26)3.3.1PGPR平板水培促生实验 (26)3.3.2盆栽实验 (26)3.4实验结果与讨论 (28)3.4.1大麦水培实验结果 (28)第四章一株产IAA菌的发酵培养基条件优化 (36)4.1培养基及试剂 (36)4.2实验方法 (36)4.2.1培养条件单因素优化 (36)4.2.2响应面优化 (36)4.3结果与讨论 (36)4.3.1发酵培养基条件优化 (36)4.3.2响应面优化分析 (39)第五章结论 (43)参考文献 (44)致谢 (48)第一章文献综述1.1植物根际促生菌1.1.1研究背景合成肥料和农药一直被认为是提高作物产量的重要途径，然而，随着化肥农药施用量的增加，引起的负面影响也日益明显。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定随着农业生产的不断发展，土壤中的养分供应问题逐渐凸显出来。
磷和钾是土壤中必不可少的元素，对植物的生长发育具有重要的影响。
由于土壤中无机磷和钾的含量有限，很大一部分呈结合态，无法直接被植物吸收利用，需要通过微生物的参与，转化为植物可利用的形态。
溶磷和解钾微生物是一类能够有效分解土壤中有机磷和结合态钾的微生物，对于提高农作物的吸收利用率具有重要的意义。
分离筛选与鉴定这些菌株可以为农业生产提供一种新的途径，用于改善土壤肥力，并减少化肥的使用。
分离筛选这些溶磷解钾菌的关键是寻找适合生长的培养基。
常用的培养基有PDA、LB 和液体MS等。
从农田土壤中采集土壤样品，并将样品带回实验室进行处理。
将土壤样品稀释后接种在已经准备好的培养基上，将培养皿密封后放置在适当的温度和湿度下培养。
在合适的时间内，从培养皿中观察出现菌落的样品，进行进一步的分析与鉴定。
鉴定这些菌株的关键是通过形态学、生理生化以及分子生物学等多种手段进行分析。
通过形态学的方法，可以观察菌落的形态、色素的产生以及孢子的形态等特征。
然后，通过生理生化的方法，可以测试菌株对不同物质的利用能力，如磷酸盐的水解能力和钾离子的溶解能力。
通过分子生物学的方法，可以利用PCR技术扩增16S rRNA基因，并进行测序分析，以确定溶磷解钾菌的亲缘关系。
通过以上的分离筛选和鉴定工作，可以得到一株具有较好解磷和溶钾能力的菌株。
之后，可以进一步对其进行大规模培养和应用试验，以验证其在农业生产中的作用。
通过利用这些菌株，可以提高土壤肥力，减少农药的使用，改善农作物的产量和品质，为可持续农业的发展做出贡献。
一株高效解钾菌的筛选鉴定及其对烟草吸收钾磷的影响
一株高效解钾菌的筛选鉴定及其对烟草吸收钾磷的影响1. 引言1.1 研究背景钾是植物生长发育过程中必需元素之一，对促进烟草的生长和发育具有重要作用。
在土壤中过量的钾对烟草生长也会产生负面影响，导致土壤中的钾磷钠钙比例失衡。
为了提高烟草的产量和质量，寻找一株高效解钾菌，通过调节土壤中的钾磷含量，减轻土壤中过量钾对烟草的影响，成为当前研究的热点和难点。
目前，传统的施肥和化肥利用率较低，对环境造成负面影响，因此开展高效解钾菌的筛选和鉴定研究具有重要意义。
高效解钾菌能够有效降低土壤中的钾盐含量，提高烟草的吸收效率，减少废弃物的排放，对于实现农业的可持续发展具有重要意义。
本研究旨在筛选并鉴定一株高效解钾菌，并探究其对烟草吸收钾磷的影响机制，为烟草生产提供新的解决方案，并为绿色农业的发展提供科学依据。
1.2 研究意义高效解钾菌在农业生产中具有重要的应用意义。
随着农业生产技术的不断发展，对土壤和作物营养的需求也越来越高。
土壤中过多的钾元素会造成土壤钾盐累积，导致作物对其他营养元素的吸收受阻，从而影响作物的生长和产量。
研究和应用高效解钾菌可以有效地降低土壤钾盐累积，提高作物对钾磷等营养元素的吸收利用率，促进作物的生长和产量。
高效解钾菌还可以减少农业对化肥的依赖，降低化肥施用量，减少环境污染，并且可以提高土壤的肥力和保护生态环境。
研究高效解钾菌的筛选鉴定及其对烟草吸收钾磷的影响具有重要的理论和实践意义。
通过深入探究这一领域，有望为农业生产提供有效的技术支持，推动农业可持续发展。
1.3 研究目的本研究旨在筛选和鉴定一株高效解钾菌，并探究该菌株对烟草吸收钾磷的影响，以期为烟草生产提供新的解决方案。
具体目的包括：1. 筛选出具有高效解钾能力的菌株，比较不同菌株的解钾效果，为选取最具潜力的菌种奠定基础。
2. 鉴定所筛选出的高效解钾菌，确定其分类地位及相关特征，为深入研究提供基础。
3. 分析烟草对钾磷的吸收情况，揭示其吸收规律。
解磷菌筛选方案
一、培养基1、无机磷发酵培养基:葡萄糖10 g,(NH4)2SO4 0.5g , MgSO4·H2O 0.3g , NaCI 0.3 g , KCl 0.3 g , FeSO4·7 H2O 0.03 g , MnSO4 H2O 0.03 g，磷矿粉5g，调节pH到7.0--7.2,蒸馏水1 000 mL.磷矿粉与其他药品分开灭菌后混合.2、无机磷固体培养基:无机磷发酵培养基中加人琼脂粉18--20 g，用于斜面保藏及平板培养.3、种子液培养基:无机磷发酵培养基中磷矿粉用0.5 g K2HPO4替代.二、耐低温解磷菌筛选方法1、初筛在0和10℃时各取样品5g，放入250 mL锥形瓶中，加95 mL 无菌水和玻璃珠，150r/min，室温振荡30 min，制备成母液。
采用梯度稀释法，将母液稀释至10-7-10-1倍，并分别用无菌移液枪取0.2 mL 接种于无机磷培养基平板中，涂布均匀，待接种液被培养基吸收后，倒置培养于对应温度的恒温恒湿培养箱中，进行低温培养，周期为5 d.以相同浓度接种液培养的菌落数、菌落直径及其周围出现溶磷圈大小作为判断解磷强弱的指标.筛选得到的耐低温解磷菌，经纯化后斜面保藏.全部操作均在无菌条件下进行.2、低温耐性锻炼将得到的菌株接种于无机磷培养基平板中，在初筛温度下培养24h后，降低1℃进行耐低温驯化，7d为1个驯化周期，每个周期结束后，培养温度再降低1℃.如降低培养温度后解磷菌仍能生长，则进行若干周期的适应性低温驯化，周期数视菌种驯化情况而定，然后进行下一阶段耐低温驯化;如果降低培养温度后菌株不能正常生长，则在原培养温度和降低温度间进行反复驯化，直到筛选出耐低温突变株.3、低温条件下解磷菌解磷能力测定分别将斜面保藏的各目的菌株活化，接种于种子培养基，0--10℃（筛选温度）培养摇床培养，120 r/min振荡48 h.菌株浓度达到108 CFU/ml后备用.设接种和不接种培养基2种处理，每种处理5个平行.接种处理中将各种子液按照5%的接种量接种于发酵培养基，培养条件同上，周期7 d.然后进行ρ（可水溶性磷)，ρ（可微生物量磷)和pH 测定。
钾细菌
钾细菌摘要从供试土壤样品中筛选出几株高效解磷、解钾和自生固氮菌菌株,其中,以菌株Ｐ1、Ｋ1、Ｎ1解磷、解钾和固氮效果最好。
盆栽试验结果显示:与对照相比,高效菌株组合Ｐ1Ｋ1Ｎ1能使番茄和油菜的生物量分别提高65.9%和68.4%。
1.1.3培养基。
①ＬＢ培养基:胰蛋白10.0ｇ,ＮａＣｌ10.0ｇ,酵母粉5.0ｇ,Ｈ2Ｏ1000ｍｌ,ｐＨ值7.2。
②阿须贝培养基:甘露10.0ｇ,ＮａＣｌ0.1ｇ,ＫＨ2ＰＯ40.2ｇ,ＣａＣＯ35.0ｇ,ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ0.2ｇ,ＣａＳＯ40.1ｇ,Ｈ2Ｏ1000ｍｌ,ｐＨ值7.0。
③解钾细菌培养基:甘露醇10.0ｇ,酵母粉0.4ｇ,ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ0.2ｇ,Ｋ2ＨＰＯ40.5ｇ,ＣａＣＯ31.0ｇ,ＭｇＣｌ20.2ｇ,Ｈ2Ｏ1000ｍｌ,ｐＨ值7.2～7.4。
④解磷细菌培养基:葡萄糖10.0ｇ,ＦｅＳＯ40.03ｇ,ＭｇＳＯ4·7Ｈ2Ｏ0.3ｇ,ＮａＣｌ0.3ｇ,(ＮＨ4)2ＳＯ40.5ｇ,ＫＣｌ0.3ｇ,ＭｎＳＯ40.03ｇ,ＣａＨＰＯ4或Ｃａ3(ＰＯ4)28.0ｇ,Ｈ2Ｏ1000ｍｌ,ｐＨ值7.0。
⑤固体发酵培养基:麸皮95.0ｇ,麦糠5.0ｇ,ＣａＣＯ31.0ｇ,ＫＨ2ＰＯ40.5ｇ,Ｋ2ＨＰＯ40.5ｇ,Ｈ2Ｏ120ｍｌ,ｐＨ值7.0。
解磷细菌的分离筛选。
在不含磷的基本培养基中添加一定量难溶性的磷酸盐[ＣａＨＰＯ4或Ｃａ3(ＰＯ4)2]制成固体选择性培养基。
将供试土样作系列梯度稀释后涂平板,根据溶磷圈大小挑取单菌落作为初筛的产物。
在250ｍｌ三角瓶中添加100ｍｌ不含磷的基本培养基,加入磷矿粉0.5ｇ,并接种初筛菌株,28℃180ｒ/ｍｉｎ培养7ｄ,钼锑抗比色法[3]检测发酵液中可溶性磷的含量。
解钾细菌的分离筛选。
挑取在阿须贝培养基和钾细菌选择性培养基上都能生长的产荚膜光滑油滴状菌落,接种在100ｍｌ,含钾长石矿粉0.5ｇ的不含钾基本培养基中,28℃180ｒ/ｍｉｎ培养7ｄ,原子吸收法[3]测发酵液中可溶性钾的含量。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定1.引言土壤微生物是土壤生态系统中极为重要的组成部分，对土壤有机质降解、养分转化、生物防治等方面具有重要作用。
其中一些微生物能够分解有机磷和溶解钾，从而提高土壤养分利用效率。
本文旨在分离筛选出一株在土壤中具有有效溶解磷和解钾功能的细菌，并对其进行初步鉴定。
2.方法与材料2.1 样品来源本实验所用的土壤样品来源于田间收集的耕地表层土壤。
2.2 分离筛选条件分离筛选出溶磷解钾菌的培养基配方：蛋白胨10g/L、葡萄糖5g/L、Ca3(PO4)26.0g/L、KCl 15.0g/L、琼脂15.0g/L、pH7.0；分离培养温度：30℃；分离培养时间：3-7天。
2.3 鉴定方法3.1 16S rDNA序列分析：利用PCR技术提取细菌DNA，然后进行16S rDNA基因扩增，并对扩增产物进行测序，最后利用生物信息学分析对其进行鉴定。
3.2 生理生化特性测定：包括对细菌的生长温度范围、pH范围、盐胁迫耐受能力等生理生化特性进行测定。
3.结果与讨论根据以上方法，我们成功分离到一株在土壤中具有溶解磷和解钾功能的细菌，经过鉴定和特性测定，得到如下结果：3.1 经16S rDNA序列分析，鉴定出该菌株为一株假单胞菌属(Pseudomonas)细菌。
经与GenBank数据库比对，该细菌的16S rDNA序列与Pseudomonas属中已知细菌的序列高度相似，确认了该菌株的分类地位。
3.2 该菌株的生理生化特性测定结果显示，其最适生长温度为30℃，pH范围为6.0-8.0，对较高盐浓度也具有一定的耐受能力。
4.结论本研究成功分离出一株溶磷解钾的Pseudomonas属细菌，并对其进行了初步的鉴定与特性测定。
该菌株的分离与鉴定为今后在土壤改良和养分利用方面提供了极为重要的资源基础。
对该菌株的深入研究还将有助于揭示其在土壤生态系统中的生态功能和应用潜力。
解磷细菌的分离筛选及培养条件优化
解磷细菌的分离筛选及培养条件优化作者：郑喜清邸娜张志超纪晓贝来源：《天津农业科学》2020年第03期摘; ; 要：通过透明圈法与钼锑抗比色法，从巴彦淖尔市临河区旧气象局试验田植物根际土中分离筛选出3株解磷效果好的菌株，通过单因素试验对菌株培养条件进行了优化。
结果表明：不同碳源、氮源、温度、pH值、盐浓度等对其解磷效果存在显著差异。
PB1以木糖做碳源、硝酸铵为氮源、NaCl浓度为0.3 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著;PB2以果糖做碳源、硝酸铵为氮源、盐浓度为0.7 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为50 mL时最显著。
PB3以葡萄糖或果糖做碳源、硝酸钠为氮源、盐浓度为0.5 g·L-1、pH值为6、温度32 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著。
根据形态特征及生理生化特性，结合《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》将3种菌株初步鉴定为：PB1为沙门氏菌、PB2为金杆菌属、PB3为芽孢杆菌属。
关键词：解磷菌;条件优化;解磷能力中图分类号：S144.9; ; ; ; ;文献标识码：A; ; ; ; ; ; DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.01.004Isolation and Screening of Phosphate-solubilizing Strains and Optimization of Culture ConditionsZHENG Xiqing， DI Na，ZHANG Zhichao， JI Xiaobei（Agriculture Department， Hetao College， Bayannaoer， Inner Mongolia 015000， China）Abstract： Through transparent circle method and molybdenum antimony colorimetric method，3 strains with good phosphorus-solubilizing effect were isolated and screened from the rhizosphere soil of; plants， in the experimental field of Linhe District of Bayannaoer City. The culture condition of strain was optimized by single factor test.The results showed that different carbon sources，nitrogen sources， temperature， pH and salt concentration had significant differences in their phosphorus removal effects. When PB1 used xylose as carbon source， ammonium nitrate as nitrogen source， NaCl concentration was 0.3 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. PB2 was most significant when fructose was used as carbon source， ammonium nitrate was used as nitrogen source， salt concentration was 0.7 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34 ℃， and liquid dosage was 50 mL. When PB3 used glucose or fructose as carbon source， sodium nitrate as nitrogen source， salt concentration was 0.5 g·L-1， pH is 6， temperature was 32 ℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. According to the morphological characteristics and physiological and biochemical characteristics， combined with the Manual for Identification of Common Bacterial Systems and Berger's Manual for Identification of Bacteria， the three strains were preliminarily identified as： PB1 was Salmonella， PB2 was Bacillus genus， and PB3 was Bacillus.Key words： Phosphate solubilizing Bacteria;medium optimization; phosphate dissol- ving ability磷是植物生長所必需的矿质元素，在植物生长、发育等生命活动中起着积极的作用。
解磷、解钾根际促生菌的筛选与鉴定
摘要 ： 试 验 从 樱 桃 根 围采 集根 际 土壤 样 品 ， 采 用 ＭＲ Ｓ培 养基 和 改 良麦 氏培 养基 ， 分别在 ２ ８ ℃、 ３ ７ ℃条件 下培养 ２ ～３ ｄ ， 进
行分 离， 利 用 系列 稀 释 涂 布平 板 筛 选 出分 离物 ＤＹ一 ３和 ＤＹ一 ４ 。根 据 茵 体 形 态 、 茵 落 形 态观 察 和 生 理 生 化 试 验 结 果 ， 结 合 １ ８ Ｓ或 １ ６ Ｓ ｒ Ｄ ＮＡ 序 列 的 测 定 ， 将 Ｄ Ｙ一３鉴 定 为 酿 酒 酵 母 菌 （ Ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｃ ｅ ｒ ｅ ｖ ｉ ｓ ｉ ａ ｅ ） ， Ｄ Ｙ一 鉴 定 为 干 酪 乳 杆 菌 （ Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｂ ａ —
ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ａ ｓ ｅ ｉ ） 。测其解磷解钾能 力， 酿酒酵母 茵 Ｄ Ｙ一３有 较 好 的 解钾 能 力 Байду номын сангаас 干 酪 乳 杆 菌 ＤＹ～４有 较 好 的 解磷 能 力 。 因此 ， 该 研
究 筛选 的 ２菌株 可 望进 一 步 研 究 开 发 成 为 微 生物 肥 料 的 生 产 菌 种 。
解磷 、 解 钾 根 际促 生 菌 的筛 选 与 鉴 定
马 海 林 ， 杜 秉 海。 ， 邢 尚 军 ， 丁延 芹。 ， 刘 方春 ， 姚 良同 ， 马 丙尧 ， 杜 振 宇
2株溶磷、解钾与产IAA的内生真菌菌株的筛选、鉴定及促生作用研究
研制高效生物肥料接种剂方面可能具有较大潜力ꎮ
关键词: 溶磷ꎻ 解钾ꎻ 生长素ꎻ 内生真菌ꎻ 促生作用
中图分类号: Ｑ９４９ ３ 文献标识码: Ａ 文章编号: １６７３ － ６２５７ (２０１７) ０３ － ０１４２ － １０
中国土壤与肥料 ２０１７ (３)
ｄｏｉ: １０ １１８３８ / ｓｆｓｃ ２０１７０３２４
２ 株溶磷、 解钾与产 ＩＡＡ 的内生真菌菌株
的筛选、 鉴定及促生作用研究
詹寿发ꎬ 卢丹妮ꎬ 毛花英ꎬ 熊蓉露ꎬ 黄 丹ꎬ 陈 晔 ∗
( 九江学院药学与生命科学学院ꎬ 江西 九江 ３３２０００)
养液过滤ꎬ 用去离子水定容至 １００ ｍＬꎬ 取 ５ ｍＬ 培
养液用四苯硼酸钾重量法测定培养液中可溶性钾的
含量ꎬ 以加入 ５ ｍＬ 灭活的菌株种子液 ( 与培养基
一起灭菌) 作对照ꎬ 每组设 ６ 个重复ꎮ 按下式计算
实验组培养液中可溶性钾的含量ꎬ 以 Ｋ２ Ｏ ｍｇ / １００
ｍＬ ( 培养液) 为单位:
磷无 机 磷 培 养 基
液)
[１０]
ꎮ
[６]
ꎬ 金 氏 培 养 基 Ｂ ( Ｋｉｎｇ 培 养
１ １ ４ 供试种子
承玉 １１ 玉米种子 ( 九江市种子管理局种子供
应站购置) ꎮ
１ ２ 方法
中ꎬ 灭菌后接入 ５ ｍＬ 初步筛选得到的具有解钾活
性菌株种子液ꎬ 按 １ ２ １ 节的方法培养 ３０ ｄ 后将培
分离自钾矿区优势 蕨 类 植 物 － 芒 萁 ( Ｄｉｃｒａｎｏｐｔｅｒｉｓ
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一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定一株具有溶磷解钾功能的细菌对于农业生产具有重要意义。
溶磷解钾菌可以促进土壤中的固定磷和铵态氮溶解，提高土壤中的磷和钾素的有效性，从而增强作物对磷和钾的吸收利用能力，促进植物生长和发育，提高作物产量。
对具有溶磷解钾功能的细菌进行分离筛选与鉴定，具有十分重要的意义。
本文将介绍一种分离筛选一株溶磷解钾菌的方法以及对其的鉴定过程。
分离筛选一株溶磷解钾菌需要制备携氧试验的培养基。
携氧试验的培养基成分包括：葡萄糖1g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.25g、酵母提取物1g、硫酸铵1g、硫酸铁(FeSO4)0.05g、硫代硫酸钠0.5g、石英砂10g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
以上材料按比例混合均匀后，装入试管或蒸煮瓶中，压紧无菌煤炉棉塞后于121℃高压蒸汽灭菌，即可使用。
接着，从不同土壤样品中取样，分别于1g土样中分离出来的溶磷解钾菌。
将土样加入适量生理盐水中，制备土样悬浊液。
然后，将悬浊液在40℃下震荡振动1h，接着利用稀释平板法将液体均匀地平铺在含有携氧试验培养基的琼脂平板上，放置于30℃恒温培养箱中孵育3-5d。
在孵育期间，从分离得到的溶磷解钾菌中挑选溶磷解铵类磷酸盐(Pi)菌株。
特别地，溶磷强度不低于0.3mmol/L的菌株被认定为溶磷阳性菌，溶铵效率不低于20%的菌株被认定为解铵效率阳性菌。
接下来，对分离得到的溶磷解钾菌进行生理生化特性鉴定。
通过形态学特征观察，包括菌落形态、细胞形态、颜色、透明度等，来初步鉴定菌株。
然后利用生化试剂盒对细菌进行生化鉴定，如氧化酶试验、嫌氧发酵试验、尿素酶试验等。
还可以利用16S rRNA序列鉴定技术对细菌进行鉴定，即将菌株的DNA提取出来，进行PCR扩增和测序，最后通过与GenBank数据库比对，来鉴定出菌株的属种信息。
同时还可以通过质谱技术（MALDI-TOF MS）鉴定菌株。
对已经分离筛选和鉴定出的溶磷解钾菌株进行进一步的功能评价。
大柳塔矿区土壤乡土解磷菌和解钾菌的筛选与鉴定
大柳塔矿区土壤乡土解磷菌和解钾菌的筛选与鉴定煤炭资源的开发利用极大地促进了区域经济的快速发展,但同时也引发了严重的生态环境问题。
井工开采导致地下形成采空区,采空区的沉陷严重破坏地形地貌,造成地下水位下降、土壤养分转移、植被衰退、加剧土地盐碱化和贫瘠化。
采矿沉陷区土地治理与生态修复是目前恢复生物学所关注的重大课题之一。
土壤微生物作为物质循环过程中的关键一环,对于改善沉陷区土壤性质、土壤肥力以及增强植物抗病能力都起着非常重要的作用,采煤沉陷区的生态修复离不开微生物的参与。
为了获得具有应用潜力且环境亲和性好的微生物菌剂活性菌株,本文以陕西省神木县大柳塔采矿区作为样地,利用选择性培养基,对土壤中的土壤微生物进行分离、筛选,利用常规检测方法测定菌株的解磷、解钾能力,筛选出具有较强分解能力的菌株,根据菌株的形态特征、生理特性和16SrDNA序列分析对菌株进行鉴定。
主要结果如下:1、初步筛选到21株解磷菌和4株解钾菌。
通过形态学观察发现解磷菌的菌落形态为圆形不透明、湿润光滑、有突起、颜色淡黄;解钾菌的菌落形态是圆形透明、湿润光滑、边缘整齐、较为黏稠。
筛选获得的菌株均为革兰氏阴性菌。
2、复筛得到的15株解磷菌中CW01-2、CW01-5、CW01-9菌株的解有机磷活性最强,分别为46.32μg/mL、45.17μg/mL、45.49μg/mL。
解钾菌K-9、K-10、K-11的解钾率分别为4.49 mg/kg、7.84mg/kg、7.05 mg/kg。
3、解磷菌可以利用蔗糖、麦芽糖、甘油和葡萄糖为碳源,所有解钾菌均可利用蔗糖和甘油为碳源。
解磷菌CW01-2、CW01-5、CW01-9、WC23-14、WC23-30在硝酸盐和铵盐为氮源的培养基上均可以生长,解钾菌K-5、K-11以硝酸盐为氮源,K-10以铵盐为氮源,K-9能以硝酸盐和铵盐为氮源,具有一定的固氮能力,可在pH7-11,NaCl含量3%的培养基上生长,有一定的耐盐碱性。
固氮菌、解磷菌的分离筛选
精品固氮菌、解磷菌的分离筛选一、目的要求:1、掌握选择培养基的筛选原理。
2、掌握固氮菌、解磷菌的分离方法。
3、学习平板划线分离法。
二、实验原理：选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。
固氮菌可以利用空气中的氮作为氮源进行自身代谢，根据这一原理可以利用无氮培养基将固氮菌从混合菌中分离出来。
解磷菌可以在含有难溶性磷酸盐或有机磷的固体培养基产生溶磷圈，根据这一特性可以分离出解磷菌。
同样，可以根据解钾菌的生理特性选择合适的培养基将其分离出来。
在本实验中，分离固氮菌我们采用阿须贝氏( Ashby ) 培养基，分离解磷菌采用无机磷培养基。
选择培养基的配方如下Ashby 培养基：磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g硫酸镁(MgS04 7H2O) 0.2 g氯化钠(NaCI) 0.2 g碳酸钙(CaC03) 5.0 g甘露醇(C6H14O6) 10.0 g硫酸钙(CaSO4 2H2O) 0.1 g精品18.0 g1000 mL6.8 〜7.0 10.0 g 0.5 g 0.3 g 0.3 g 0.3 g 0.03 g0.03 g10 g 18 g 1000 ml无机磷培养基、无菌水、土壤样品(自带) 2、 仪器及其它用具：培养皿、玻璃棒、烧杯、量筒、天平、高压蒸汽灭菌锅、 生化培养箱、超净工作台、接种环、酒精灯、 PH 试纸等。
四、方法步骤 :培养基 的配制1、根据要求，配置好三种培养基，115 C 条件下高压灭菌25min琼脂蒸馏水 pH 无机磷培养基：葡萄糖(NH ?)?SO?NaClKClMgSO ??7H ?OFeSO??7H ?OMnSO ?? 4H?O Ca?(PO?)?琼脂蒸馏水三、 实验材料 : 1、 试剂及样品： Ashby 培养基、精品2、将灭菌后的培养基在超净工作台倒平板，备用。
样品处理3、在离心管中，将自带土壤样品按5g 土样\10ml无菌水的比例溶解，土壤样品要充分溶解，使土壤中的微生物全部溶解在无菌水中。
核桃根际解磷、解钾、固氮菌株的筛选及分布特征研究的开题报告
核桃根际解磷、解钾、固氮菌株的筛选及分布特征研究的开题报告一、研究背景核桃是我国重要的果树之一，其品质与产量受到许多因素的影响，其中磷、钾等元素供给是关键因素之一。
传统的土壤施肥虽然可以增加土壤中的磷、钾含量，但会对环境造成负面影响。
因此，利用微生物降解土壤有机磷、钾，提高土壤元素的利用效率，减少农业对环境的污染受到研究者的广泛关注。
同时，固氮菌也被认为是促进植物生长的重要微生物之一，其广泛存在于植物根系中，可以通过生物固氮的过程来提供植物的氮源。
因此，对核桃根际解磷、解钾、固氮菌株的筛选及分布特征的研究具有重要的理论意义和实践价值。
二、研究目的本研究旨在筛选核桃根际解磷、解钾、固氮菌株，并分析其分布特征，为提高核桃的产量和品质提供科学依据。
三、研究内容与方法1. 核桃根际微生物样品的采集：收集核桃根际土壤及根系，分离和纯化出菌株，进行系统鉴定。
2. 磷、钾的生物解吸实验：根据培养出的菌株，测定其对不同磷、钾化合物的生物解吸效果。
3. 固氮菌株的分离和特性分析：在分离的核桃根际微生物中筛选出固氮菌菌株，分析其生理代谢特性与生物固氮效率。
4. 菌群结构分析：通过高通量测序技术分析核桃根际微生物的菌群结构和多样性。
四、研究意义1. 筛选出核桃根际解磷、解钾、固氮菌株，为核桃生产提供生物肥料和增效菌株资源。
2. 了解核桃根际微生物的多样性及菌群结构，对研究微生物在促进核桃生长中的作用有重要指导意义。
3. 通过生物代替化学改善土壤肥力，总体上有助于减少化学肥料的使用，减少环境负担，为可持续农业发展提供理论依据。
五、进度安排年度 | 工作内容第一年 | 核桃根际微生物样品的采集和分离，并鉴定出相关菌株；进行生物解吸实验，筛选具有高效生物解吸能力的菌株。
第二年 | 对筛选出的固氮菌株进行分析；进行高通量测序分析核桃根际微生物的菌群结构和多样性。
第三年 | 对第一、第二年的实验结果进行整合和分析；撰写论文并提交。
解磷微生物细菌筛选及其性能研究
解磷微生物细菌筛选及其性能研究贵州拥有丰富的矿产资源,其中磷矿、煤炭均为全国主要产区。
2000年,我国开展西部大开发战略工程—西电东送,是利用西部地区丰富的煤炭资源,通过火力发电,将西部的能源资源转化为电能,运输到能源紧张的东部地区。
大量煤炭的开采,伴随产生大量的煤矸石,煤矸石一种固体废弃物,呈现持续增长现状,不仅占用土地资源、造成环境污染,而且阻碍煤炭产业的可持续发展。
近几年国家对废弃固体物的关注度逐渐上升,列入国家发展的战略方针之中,其中煤矸石的综合利用成为目前急需解决的难题。
煤矸石的综合利用主要采用化学方法,研究发现,由于煤矸石组成及结构因素,造成实际应用过程中受到阻碍,探索一种绿色、环保、高效的煤矸石处理方法,是研究人员重点关注的问题。
本研究组长期以来针对煤矸石进行了较为系统的研究,最初利用浮选方法提取煤矸石其中含有的碳,提高煤炭的回收离率及使用率。
通过对煤矸石成分分析,其中除含少量碳外,还富含丰富的矿物质,包括磷、钾等。
磷素是植物生长发育所必需的营养物质之一,若对其进行充分利用,不但将煤矸石变废为宝,同时也可以解决土壤缺磷的现状。
前期研究发现利用商业解磷、解钾细菌能够有效释放煤矸石其中富含的矿物质成分。
通过对贵州产煤区生态环境的广泛采样调研,发现针对区域生态条件自主筛选的解磷、解钾细菌具备更高效解离煤矸石的能力。
本论文通过采用平板法和砂培法两种方法相结合筛选得到新型多株高效的解磷细菌,利用开发的新型生物细菌能将煤矸石其中的难溶性磷转化为可溶性磷,制备煤矸石微生物复合肥料,使煤矸石资源化利用成为可能。
本论文通过平板初筛方法得到90多株具有解磷效果的细菌,从中筛选得到20株具备较好解磷能力的菌株,分别编号为GZ-1—GZ-20。
将最终初筛得到的菌株通过解离煤矸石,测定解离后有效磷含量,复筛得到三株高效解磷细菌,编号分别为GZ-8、GZ-12、GZ-15。
对三株细菌进行生理生化性质研究和16S r RNA分子生物学鉴定。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定引言溶磷解钾菌是一类能够利用有机磷和无机磷、溶解磷酸盐和解钾的微生物。
它们在土壤营养元素的循环中起着重要的作用，不仅可以提高土壤中磷和钾的有效性，也有利于植物的吸收利用。
对于这类细菌的分离筛选和鉴定具有重要意义。
一、溶磷解钾菌的分离筛选1.1 样品采集我们需要通过采集不同土壤样品来寻找可能存在溶磷解钾菌的环境。
可以选择农田、森林、草原等不同类型的土壤样品。
还可以通过不同植物根系附近的土壤来采集样品。
这样获取的样品中可能存在多样化的微生物资源。
1.2 分离培养将采集到的土壤样品进行稀释并分装到不同培养基中，添加适当的磷、钾源以及生长因子，利用稀释平板法将土壤样品中的微生物分离出来。
待菌落出现后，再进行单菌落分离，最终得到纯培养的单一微生物。
1.3 溶磷解钾菌的筛选通过溶磷解钾菌的生理特性，我们可以利用含有无机磷盐和钾盐的培养基来筛选出具有溶磷解钾功能的菌株。
分离出的微生物在溶解磷酸盐和解钾作用上表现出显著的特异性时，则可认定其为溶磷解钾菌。
1.4 筛选结果经过上述步骤，我们可以获得多个可能具有溶磷解钾功能的菌株。
在鉴定这些菌株前，还需要进一步加以鉴定验证，以确保结果的准确性。
2.1 形态学特征将分离出的菌落进行鉴定，首先需要进行形态学特征的观察。
包括菌落形态、细胞形态、颜色、大小、孢子、芽孢等特征。
根据这些特征可以初步判断该菌属于哪一类细菌。
2.2 生理生化特征接着，我们需要对细菌进行生理生化特性的检测。
比如对其生长温度、耐盐性、碱酸度、氧气需求等特性进行测试。
还可以对其代谢产物进行分析，判断其对溶磷解钾的能力。
2.3 分子生物学鉴定根据现代分子生物学的技术手段，可以利用PCR扩增细菌的16S rRNA基因序列，并根据序列比对，进行系统发育关系分析，确定细菌的分类地位。
这是鉴定细菌的一种较为准确和有效的方法。
2.4 鉴定结果经过以上步骤的鉴定，我们可以确定出一株真正具有溶磷解钾功能的细菌。
解磷解钾微生物筛选
解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定微生物是土壤肥力的核心，土壤中的微生物不仅数量巨大，而且种类极多。
许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。
氮、磷和钾均是作物生长发育必需的大量元素。
根瘤菌可以与豆科植物共生固氮, 在生物固氮中占有重要的地位。
溶磷菌、硅酸盐细菌(又名钾细菌)能够分解土壤中的固定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。
因此，高效的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。
一、实验目的1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程二、实验原理分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一磷源或钾源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。
因为磷酸钙、钾长石不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够利用磷酸钙、钾长石，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选目的菌株。
分别筛选细菌和真菌。
为筛选到真菌，采用在培养基中加入链霉素方法来抑制细菌生长。
三、材料和方法1、材料各处取得的土样；培养基种类如下（g/l）：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：（2）解磷菌株筛选培养基：无机磷固体培养基：葡萄糖l0 g，(NH4)2SO40.5 g，酵母粉0.5 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，Ca3(PO4)2 2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
（3）钾长石固体培养基：蔗糖 5 g，葡萄糖 5 g，(NH4)2SO4 0.5 g，酵母粉0.5 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，磷酸氢二钠2 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，钾长石2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
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解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定
微生物是土壤肥力的核心，土壤中的微生物不仅数量巨大，而且种类极多。
许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。
氮、磷和钾均是作物生长发育必需的大量元素。
根瘤菌可以与豆科植物共生固氮, 在生物固氮中占有重要的地位。
溶磷菌、硅酸盐细菌(又名钾细菌)能够分解土壤中的固定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。
因此，高效的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。
一、实验目的
1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株
2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程
二、实验原理
分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一磷源或钾源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。
因为磷酸钙、钾长石不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够利用磷酸钙、钾长石，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选目的菌株。
分别筛选细菌和真菌。
为筛选到真菌，采用在培养基中加入链霉素方法来抑制细菌生长。
三、材料和方法
1、材料
各处取得的土样；
培养基种类如下（g/l）：
（1）牛肉膏蛋白胨培养基：
（2）解磷菌株筛选培养基：
无机磷固体培养基：葡萄糖l0 g，(NH4)2SO40.5 g，酵母粉0.5 g，
MgSO4·7H2O 0.3 g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，Ca3(PO4)2 2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
（3）钾长石固体培养基：
蔗糖 5 g，葡萄糖 5 g，(NH4)2SO4 0.5 g，酵母粉0.5 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，磷酸氢二钠2 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，钾长石2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2，ll5℃灭菌20 min。
2、方法
(1) 筛选：
1、配制0.85%的生理盐水，灭菌备用。
2、取5 g采集的土样溶解到45ml 0.85%的生理盐水中，37度。
摇床摇30 min 左右，定为原液。
制作浓度梯度10-2、10-4稀释度，分别取原液、-2、-4 各100 μl 分别涂布于解磷、解钾筛选及牛肉膏蛋白胨培养基平板上，28℃倒置培养，牛2天，筛选3天。
观察菌落生长，透明圈产生情况。
牛肉膏蛋白胨培养基菌落计数，计算菌数/g土壤。
（2）菌落挑取与纯化并保存：
用接种环挑取较大透明圈的单菌落至筛选培养基平板，划线分离单菌落。
培养后观察是否为纯菌，菌落形态一致，且验证是否有透明圈后挑取单菌落至解磷或解钾培养基斜面中培养至长好。
若不纯则分别挑取形态不同的菌落分别在筛选平板划线，确定透明圈，重复挑取和纯化步骤。
挑取至斜面培养基中培养后，将斜面4度冰箱保存。
（3）菌株复筛
将有透明圈的解磷、解钾菌株各自从斜面上用接种环挑取一环，小心点种在筛选培养基上，每个平板点四个不同菌落，注意不要相互污染。
28℃倒置培养2~3天观察比较透明圈大小，进行记录。
（4）菌种初步鉴定：牛肉膏蛋白胨培养基。
平板菌落、显微镜菌体形态观察、革兰氏染色、半固体穿刺（运动性）等，查伯杰手册，相关生理生化，定属。