荧光分光光度计
荧光分光光度计简介
荧光分光光度计简介一. 光分光光度计的主要部件由激发光源、激发单色器(置于样品池前)和发射单色器（置于样品池后)、样品池及检测系统组成。
其结构如图所示。
二仪器的校正(1)灵敏度校正：荧光分光光度计的灵敏度可用被检测出的最低信号来表示，或用某一对照品的稀溶液在一定激发波长光的照射下，能发射出最低信噪比时的荧光强度的最低浓度表示。
由于影响荧光分光光度计灵敏度的因素很多，同一型号的仪器，甚至同一台仪器在不同时间操作，所得的结果也不尽相同。
因而在每次测定时，在选定波长及狭缝宽度的条件下，先用一种稳定的荧光物质，配成浓度一致的对照品溶液对仪器进行校正，即每次将其荧光强度调节到相同数值(50％或100％)。
如果被测物质所产生的荧光很稳定，自身就可作为对照品溶液。
紫外-可见光范围内最常用的是1 μg/ml的硫酸奎宁对照品溶液(0.05 mol/L)硫酸中。
(2)波长校正：若仪器的光学系统或检测器有所变动，或在较长时间使用之后，或在重要部件更换之后，应该用汞灯的标准谱线对单色器波长刻度重新校正，这一点在要求较高的测定工作中尤为重要。
(3)激发光谱和荧光光谱的校正：用荧光分光光度计所测得的激发光谱或荧光光谱往往存在较明显的误差，其原因较多，最主要的原因有：光源的强度随波长的改变而改变、每个检测器(如光电倍增管)对不同波长光的接受程度不同及检测器的感应与波长不呈线性。
尤其是当波长处在检测器灵敏度曲线的陡坡时，误差最为显著。
因此，在用单光束荧光分光光度计时，先用仪器上附有的校正装置将每一波长的光源强度调整到一致，然后以表观光谱上每一波长的强度除以检测器对每一波长的感应强度进行校正，以消除误差。
目前生产的荧光分光光度计大多采用双光束光路，故可用参比光束抵消光学误差。
三、荧光分析新技术简介1．激光荧光分析: 激光荧光法与一般荧光法的主要区别在于使用了单色性极好，强度更大的激光作为光源，因而大大提高了荧光分析法的灵敏度和选择性，特别是可调谐激光器用于分子荧光具有很突出的优点。
荧光分光光度计的工作原理
荧光分光光度计的工作原理在激发阶段，样品被激发光源发出的激发光照射。
激发光通过光源产生，并经过单色器产生具有特定波长和能量的单色激发光。
这个单色激发光通过一个镜片聚焦到样品上。
在这个过程中，样品吸收光的一个部分，将其激发到激发态。
在发射阶段，样品的激发态荧光发出。
样品中的分子经过激发态转换成能量较低的荧光发射态。
发射光的波长较激发光长，且具有比激发光显著更低的能量。
发射光通过样品室中样品表面进入分光器。
在分光器内，发射光被分为不同波长的成分。
分光器的主要作用是将光按波长分散成不同的光束，方便探测器进行接收和处理。
分光器将不同波长的发射光分别引导到探测器上。
探测器接收并检测发射光的强度。
常见的探测器包括光电二极管（Photomultiplier Tube, PMT）和光电二极管阵列（Photodiode Array）。
探测器可以测量发射光的强度，并将结果传输到计算机上进一步处理和分析。
通过测量样品荧光发射光的强度和特定波长下的荧光发射光，我们可以确定样品中特定成分的存在和浓度。
具体而言，对于有荧光标记的样品，其荧光发射强度与其浓度成正比关系。
因此，我们可以通过测量发射光的强度来测定样品中特定成分的浓度。
1.高灵敏度。
荧光分光光度计能够检测非常微量的荧光发射光，因此对于低浓度样品的检测非常敏感。
2.宽波长范围。
荧光分光光度计能够检测多个波长范围内的光，因此适用于多种样品的测量。
3.选择性。
通过选择特定的激发波长和检测波长，可以选择性地测量特定组分的浓度。
4.可定量分析。
荧光分光光度计能够通过测量荧光发射光的强度来定量分析样品中特定成分的浓度。
总结起来，荧光分光光度计是一种基于样品在吸收光激发下发出荧光发射的光学仪器。
通过测量样品发射光的强度和特定波长下的发射光，我们可以确定样品中特定成分的存在和浓度。
荧光分光光度计具有高灵敏度、宽波长范围、选择性和可定量分析等优点，因此在科学研究和化学分析等领域得到了广泛应用。
荧光分光光度计原理
荧光分光光度计原理荧光分光光度计是一种用来测量物质荧光特性的仪器，它通过激发样品产生荧光，然后测量样品发出的荧光强度来分析样品的成分和结构。
荧光分光光度计原理的理解对于正确操作和数据解释至关重要。
首先，荧光分光光度计的原理基于样品受到激发光照射后发出的荧光现象。
当样品受到特定波长的激发光照射后，其内部原子或分子处于激发态，随后会发生非辐射跃迁，从而发出荧光。
荧光分光光度计利用荧光强度来定量分析样品中的成分，因此对激发光源和荧光检测器的选择十分重要。
其次，荧光分光光度计的原理还涉及荧光发射光谱的测量。
荧光分光光度计通过选择合适的激发波长和检测波长来测量样品发出的荧光光谱，从而获得样品的荧光特性信息。
这种原理的应用使得荧光分光光度计成为一种重要的分析仪器，在生物医学、环境监测、材料科学等领域有着广泛的应用。
另外，荧光分光光度计的原理还包括荧光强度的标定和校准。
在进行荧光分光光度计测量之前，需要进行荧光强度的标定和校准，以确保测量结果的准确性和可靠性。
荧光分光光度计的原理要求对仪器进行精确的校准，同时还需要考虑到样品的荧光特性和测量条件的影响。
最后，荧光分光光度计的原理还涉及到荧光强度与样品浓度或成分之间的关系。
通过建立荧光强度与样品浓度或成分之间的标准曲线，可以实现对样品中目标成分的定量分析。
这种原理的应用使得荧光分光光度计成为一种灵敏、快速、准确的分析方法。
总之，荧光分光光度计原理的理解对于正确操作和数据解释至关重要。
通过对荧光分光光度计原理的深入了解，可以更好地应用该技术进行样品分析和研究，为科研和实验工作提供有力的支持。
全波长荧光分光光度计 用途
全波长荧光分光光度计用途全波长荧光分光光度计的用途全波长荧光分光光度计是一种用于测量物质荧光强度的仪器。
荧光是指物质在受到激发后发出的短波长光。
荧光分光光度计是一种专门测量荧光光谱的仪器，它能够测量物质在不同波长的光激发下所发出的荧光光谱，并根据荧光强度的变化来分析物质的性质和浓度。
全波长荧光分光光度计具有广泛的应用领域。
以下是一些主要的用途：1. 化学分析：全波长荧光分光光度计可以用于分析和检测化学物质。
通过测量物质的荧光光谱，可以确定物质的组成、浓度、结构和化学性质。
这对于药物研发、环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
2. 生物医学研究：在生物医学领域，全波长荧光分光光度计被广泛应用于细胞生物学、免疫学、药物研发等方面。
通过测量荧光光谱，可以研究细胞内的生物分子、药物与细胞相互作用的过程，以及疾病的发生机制。
3. 环境监测：全波长荧光分光光度计在环境监测中有着重要的应用。
它可以用于检测水体、大气和土壤中的污染物，如重金属、有机污染物、光学增白剂等。
荧光分析技术具有高灵敏度、高选择性和快速分析的特点，可以在环境监测中发挥重要作用。
4. 材料科学：全波长荧光分光光度计在材料科学中也具有重要的应用价值。
它可以用于研究材料的光学性质、表面缺陷、结构特征等。
通过荧光光谱的测量，可以了解材料的荧光发光机制，为材料的设计和改进提供重要参考。
总的来说，全波长荧光分光光度计是一种功能强大的仪器，广泛应用于化学分析、生物医学研究、环境监测和材料科学等领域。
它通过测量物质的荧光光谱，可以提供详细的物质信息，帮助科学家们深入研究物质的性质、结构和相互作用机制。
随着技术的不断发展，全波长荧光分光光度计将继续在各个领域发挥重要的作用，并为科学研究和应用创新提供有力支持。
荧光分光光度计的基本原理
荧光分光光度计的基本原理荧光分光光度计（Fluorescence Spectrophotometer）是一种测量物质荧光强度的仪器。
它可用于分析、研究、检测生物分子的结构、功能和相互作用等领域，在生物学、化学、生物医学、制药等领域有着广泛的应用。
本文将介绍荧光分光光度计的基本原理及其测量过程。
荧光的基本原理荧光是自然界中一种常见的现象，指的是物质受到激发后放出的短波长光线，这种现象与物质的分子结构和化学成分有关。
当物质受到激发后，外部能量使得其激发态能量提高，分子内部发生跃迁，最终返回到基态时发出荧光。
荧光的光谱分布范围通常从400nm到750nm，与吸收光谱的重叠区有关。
荧光测量的原理荧光的强度与物质的分子结构、环境条件和激发波长等因素有关。
荧光分光光度计采用的测量原理是荧光分析，它通过激发光激发荧光，然后测量荧光发射的强度，从而分析样品中某种荧光物质的含量。
在荧光分析中，激发光的波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
当荧光物质受到激发后，分子会从基态到激发态跃迁，然后辐射出相应的荧光。
荧光的强度与荧光物质的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来计算荧光物质的浓度。
荧光强度的测量需要使用荧光分光光度计。
该仪器可以选择恰当的激发波长，测量荧光发射的强度，并将荧光强度转换为相应的荧光物质浓度值。
荧光分光光度计的组成及测量过程荧光分光光度计的组成包括光源、单色器、样品室、检测器和记录装置等。
在测量过程中，样品需放置在样品室内，通过调节激发光波长和荧光发射波长来测定样品中荧光物质的浓度。
荧光分光光度计的具体测量过程如下：1.设定激发波长：荧光分析中，激发波长需要与目标荧光物质的吸收光谱重叠，以激发目标荧光物质的分子。
通过调节单色器可以选择恰当的激发波长。
2.注入样品：样品通过样品室，可以防止激发光对测量的影响。
样品需要与激发波长重叠，并且需要稳定地放置在样品室内。
3.测量荧光强度：通过检测器测量样品产生的荧光强度。
荧光分光光度计的优缺点
荧光分光光度计的优缺点荧光分光光度计是一种广泛使用的光学仪器，主要用于分析化学、光学、生物医学和环境科学等领域。
以下是该仪器的优缺点及其应用。
优点高灵敏度荧光分光光度计可以对微弱的荧光信号进行检测和分析，灵敏度高。
其检测限可以达到纳摩尔级别，适用于低浓度荧光分子检测。
例如，在制药工业中，荧光分光光度计被用于药品的纯度检测和杂质检测。
良好的选择性荧光分光光度计可以根据不同的分子的荧光特性进行分析，并且可以选择性地对不同的荧光信号进行检测，避免了背景信号的干扰。
例如，在生物医学领域，荧光分光光度计被广泛应用于检测细胞、分子、蛋白质和DNA等生物分子。
快速分析荧光分光光度计可以实现非破坏性、快速分析，可以大大缩短分析时间。
例如，在环境保护领域，荧光分光光度计被用于检测大气和水中的污染物，并可以快速分析样品中的各种污染物的成分和含量。
缺点灵敏度受环境影响荧光分光光度计的灵敏度受环境影响，例如光的强度、温度和湿度等因素，这些因素会影响分子的荧光特性，从而影响荧光分析数据的准确性。
因此，在实验操作时，必须对环境条件进行严格控制和稳定。
背景信号影响荧光分光光度计检测荧光信号时，可能会受到背景光的影响。
例如，样品中存在其他有机物或杂质等，可能会与目标荧光物质发生相互作用，并产生背景荧光信号，这将会影响荧光信号的准确性和测量结果的可靠性。
价格昂贵荧光分光光度计通常是一种昂贵的仪器，因为它需要使用高质量的光学元件、探测器以及高功率的激光和激发源等设备。
因此，它比其他光学分析仪器更昂贵。
应用荧光分光光度计是一种多功能的分析仪器，被广泛用于科学研究、医学、环境、制药和化学等领域。
以下是一些常见的应用场景：生物医学荧光分光光度计用于生物医学研究中的DNA和蛋白质检测、单细胞信号研究和药物筛选等。
制药荧光分光光度计可用于药物的纯度和杂质检测，如荧光显微镜检测药物中的活性成分。
环境保护荧光分光光度计可以用于大气和水体中污染物的检测，帮助环境保护部门分析污染源并判断区域环境是否受到污染。
荧光分光光度计
固定某一激发波长，测定荧光发射强度随发射波长
变化得到的光谱。
1 二维荧光光谱（常规荧光光谱）
2 三维荧光光谱
三维立体图
等高线图
（2）吸收特征频率的光后，应可产生具有一定量子效率 的荧光，即量子效率K足够大
3 荧光分析的特点
三、荧光分光光度计的构成
四、荧光分光光度计的应用
任何荧光化合物都具有两种特征光谱：
荧光激发光谱（吸收光谱） 固定某一发射波长，测定该波长下的荧光发射强度 随激发波长变化所得的光谱。 荧光发射光谱（荧光光谱）
荧光分光光度计
一. 概述
二.荧光分析的基本原理
三.荧光分光光度计构成
四.荧光分光光度计的应用
一、概述
荧光分析可以定性或定量分析。
荧光分光光度计就是利用荧光这一特性进行物质 分析的仪器。
二、荧光分析的基本原理
1 荧光的产生
2 荧光强度与浓度之间的关系 荧光强度与浓度的关系
F = K（I0—I）
I0——入射光辐射功率； I——透射光辐射功率；荧光 量子产率（K）。 根据前面所学习朗伯－比尔定律可以得到 F = KI02.303 εbc 即在低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度 成正比，这是荧光法定量的基础。
产生并观察到荧光的条件： （1）分子具有与辐射频率相应的荧光结构
荧光分光光度计结构
荧光分光光度计结构一、引言在现代科学研究和工业生产中，荧光分析技术被广泛应用于物质组成分析、生物分子探测、环境监测等领域。
而荧光分光光度计作为荧光分析技术的核心装置之一，其结构设计对于荧光信号的检测和分析至关重要。
二、荧光分光光度计的基本结构荧光分光光度计一般由以下部分组成：1. 光源系统光源系统是荧光分光光度计的重要组成部分，主要用于提供激发荧光的光源。
常见的光源包括氘灯（deuterium lamp）和氙灯（xenon lamp）。
氘灯主要产生紫外光，而氙灯则能发出更宽的波长范围的光。
光源通常通过准直器和聚光系统来调节光线的形状和聚焦程度。
2. 单色器系统单色器系统用于选择特定波长的光线，以提供给样品的激发光或检测荧光信号。
常见的单色器系统有光栅单色器和干涉滤光片单色器。
光栅单色器通过调节光栅的角度来选择所需波长的光线，而干涉滤光片单色器则通过利用干涉现象来实现波长选择。
3. 采样系统采样系统是荧光分光光度计中用于容纳样品的部分。
荧光分光光度计中常使用的采样系统包括光纤探头和比色皿。
光纤探头可以用于固体样品或液体样品的荧光检测，而比色皿则适用于液体样品的测量。
4. 探测器系统探测器系统用于检测样品中的荧光信号，并将信号转化为电信号进行处理和分析。
常见的探测器包括光电倍增管（photomultiplier tube, PMT）和光电二极管（photodiode）。
光电倍增管具有高灵敏度和宽波长范围的特点，适用于弱荧光信号的测量；而光电二极管则更加紧凑和便于使用。
5. 信号处理系统信号处理系统在荧光分光光度计中起到对荧光信号进行放大、滤波、数字化等处理的作用。
荧光分光光度计通常配备有放大器、滤波器、模数转换器等组件，以实现对荧光信号的精确测量和分析。
三、荧光分光光度计的工作原理荧光分光光度计利用样品在受激发后发出的荧光信号进行分析。
其工作原理大致可以分为以下步骤：1. 激发光的入射荧光分光光度计通过光源系统提供特定波长的激发光，该光线由单色器系统选择并聚焦到样品上。
荧光分光光度计原理
荧光分光光度计原理
荧光分光光度计是一种用于测量物质荧光强度的仪器。
它利用激发光源激发样品产生荧光，然后测量样品发射的荧光强度。
荧光分光光度计的基本原理是荧光分光。
它首先通过一个激发光源产生激发光，该激发光与样品之间的相互作用激发样品分子的电子跃迁到高能级，从而产生荧光。
然后，荧光发射光由样品发射到光度计器件中进行测量。
在激发光源产生激发光的过程中，通常使用的光源有氘灯、汞灯和钨丝灯等。
其中，氘灯和汞灯主要用于紫外荧光的激发，而钨丝灯则用于可见光荧光的激发。
在荧光分光的过程中，需要使用一个光栅或光圈来分离发射光的不同波长组分，以便进行定量和定性分析。
光栅或光圈将荧光发射光分散成不同波长的光，并通过一个光学系统将其聚焦到光度计器件中。
光度计器件中通常采用光电二极管（Photodiode）或光电倍增管（Photomultiplier）来检测和测量荧光发射光。
光电二极管是一种直接转换光信号为电信号的装置，而光电倍增管则是一种通过电子倍增过程来放大光信号的装置。
在测量荧光强度时，需要将样品放置在荧光分光光度计的样品池中，通过调节激发光源的强度和样品与激发光之间的距离，可以控制激发光的强度和样品的激发程度。
然后，荧光发射光经过光栅或光圈分离后，由光电二极管或光电倍增管检测和测
量。
最后，荧光分光光度计会将测量到的荧光数据进行分析和处理，例如计算荧光强度、绘制荧光光谱等。
总之，荧光分光光度计利用激发光源激发样品产生荧光，再测量样品发射的荧光强度。
它的原理包括激发光源产生激发光、荧光发射光的分散和检测。
通过荧光分光光度计可以实现对样品荧光性质的研究和分析。
荧光分光光度计
第七章荧光分光光度计物质的分子吸收了照射光的能量后，处于基态最低能量级的分子被激发到电子激发态的各个振动能及。
被激发的分子与周围的分子碰撞，并把部分能量以热能的形式传给周五的分子，自己降落到单线第二电子激发态的最低振动能级。
然后，由此最低振动能级向基态的各个振动能级跃迁，同时以发光的形式释放出其能量，这种光即称为荧光。
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析，而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。
可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
1．荧光分光光度计的基本原理由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
2．荧光分光光度计的装置测试荧光的仪器主要由五个部分组成：光源、激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。
荧光分光光度计基本结构和原理
荧光分光光度计基本结构和原理荧光分光光度计是一种应用广泛的光学分析仪器。
它利用样品所发生的荧光现象进行分析和测量，能够对分子结构和特性进行研究。
本文将介绍荧光分光光度计的基本结构和原理。
基本结构荧光分光光度计由以下部分组成：光源光源是荧光分光光度计的重要组成部分，能够提供稳定的光照射样品的能量。
常用的光源包括氙灯、汞灯、钨灯等。
其中氙灯是最常用的光源，因为其稳定性好，能够提供广泛的光谱范围。
单色器单色器是荧光分光光度计的关键组件，用于分离不同波长的光线。
荧光分光光度计使用紫外线通过样品，当紫外线所包含的能量高到一定程度时，样品会发生荧光现象，在荧光光谱上会产生一个峰值，这个峰值可以用单色器来检测。
常用的单色器有单色棱镜单色器和光栅单色器。
样品室样品室是荧光分光光度计中放置样品的位置。
样品室通常是一个长方体玻璃腔体，内部涂有荧光性涂料，并有入光和出光口。
荧光分光光度计中的样品室通常要求在光学性能、耐药性和化学惰性等方面具有优异的性能。
探测器探测器是荧光分光光度计的另一个关键部分。
它能够测量样品室中荧光发射的电流信号，将之转化为数字信号，然后通过计算机进行处理。
通常使用具有高量子效率和线性范围的二极管阵列探测器。
计算机荧光分光光度计的数据处理都是由计算机完成的。
计算机能够控制光源、单色器、样品室和探测器的工作，进行测量、数据处理和结果输出。
通过计算机的操作，可以实现更高效、更精准的荧光分光光度计分析。
原理荧光分光光度计的原理是利用物质在可见紫外光谱范围内吸收能量而发生荧光现象。
通过紫外线激发样品，样品吸收能量后会发生能级跃迁，一般从基态到激发态或低能级到高能级，随后又迅速从激发态退回到基态时，会放出一些能量，或称为荧光，荧光光谱上一般能观察到一个峰值。
荧光分光光度计通过将紫外线转化为荧光，并测量荧光的信号强度来定量分析样品中的化合物。
多种荧光现象可以用来检测样品的不同特性或成分，如化学成分、含量、质量、结构等。
荧光分光光度计
互作用研究，DNA 密码的改变导致癌症病因研究，能断裂DNA 限制酶测定，荧光PCR(DNA 的放大)的研
究等;蛋白质和酶的作用研究，如DNA 的表达、细胞膜流动性及细胞膜内蛋白质研究、涉及抗体、蛋白 质和酶的ELISA 测定研究、酶活性测定等。尤其是各种新型蛋白和核酸荧光标记物的引入，各种荧光酶 联免疫分析技术 、偏振荧光测定技术以及为克服生物样品紫外区背景荧光和散射光的严重干扰而提出
的近红外区荧光测定技术的发展，为医学和生命科学领域提供了丰富的研究手段。
特点
ห้องสมุดไป่ตู้
（1）灵敏度高 比紫外/可见光分光光度法高2~4个数量级，为什么? 分光光度法所检测的是两个较大信号的微小差别，荧光光度法 检测的是很小背景值上的荧光强度。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱 （3）试样量少 （4）可提供比较多的物理参数 缺点：应用范围小
光源：
光源应具有强度大、适用波长范围宽两大特点,常用光源有高压汞灯、氙灯、氙-汞弧灯等。此外，
紫外激光器、固体激光器、高功率连续可调染料激光器和二极管激光器等荧光光源把荧光法的应用范围 拓宽。 滤光片和单色器： 在荧光光度计中，通常采用干涉滤光片和吸收滤光片作为激发光束和荧光辐射的波长选择器。在荧 光分光光度计中至少选用一个，而常常是用两个光栅单色器，且均带有可调狭缝，以供选择合适的通带 。理想的单色器应在整个波长区内有相同的光子通过效率，不幸的是这种理想的单色器不存在。 检测器： 一般普通的荧光分光光度计均采用光电倍增管作为检测器。它是很好的电流源，在一定条件下其电 流量与入射光强度成正比。此外，还有光导摄像管、电子微分器、电荷耦合器阵列检测器。
III. 工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定,无磁场、电场干扰.根据样
荧光分光光度计原理和使用方法
荧光分光光度计原理和使用方法
荧光分光光度计是一种用于分析荧光的仪器，它可以测量物质吸收荧光时产生的发光强度。
其基本原理是将样品在特定波长下激发，使其发生荧光，然后通过荧光的发射波长来确定样品的化学成分和浓度。
荧光分光光度计的使用方法如下：
1. 准备样品：准备好需要分析的样品溶液，并将其置于荧光分光光度计的样品池中。
2. 设置激发波长：根据样品的特性和需要分析的化学物质，选择适当的激发波长。
3. 设置荧光检测波长：根据需要分析的物质和荧光特性，选择适当的荧光检测波长。
4. 调整荧光分光光度计参数：根据荧光信号强度和需要分析的物质，调整荧光分光光度计的增益、滤波器等参数。
5. 测量荧光信号：启动荧光分光光度计，测量样品的荧光信号强度。
6. 分析荧光信号：根据荧光信号的强度和波长，分析样品的化学成分和浓度。
荧光分光光度计应用广泛，可以用于分析生物分子、环境污染物、食品添加剂等多种化学物质。
- 1 -。
荧光分光光度计结构
荧光分光光度计结构
荧光分光光度计是一种用于测量样品荧光强度的仪器，由荧光激发源、样品室、荧光检测器、光学滤光片和数据采集系统等组成。
以下是详
细介绍：
荧光分光光度计结构简介：
1.荧光激发源：荧光分光光度计的荧光激发源通常为氙气灯或汞灯。
这些灯具有稳定的高辐射能力，可以发出一系列不同波长的光线，以激
发样品的荧光发射。
2.样品室：荧光分光光度计的样品室通常由两个平行的固定面组成。
样品通过夹在这两个面之间的物理空间中进行测量。
此外，样品室还包
括温度控制器和稳定的气氛控制，以确保实验精度。
3.荧光检测器：荧光分光光度计的荧光检测器常常是光电倍增管。
当发射荧光的样品通过样品室时，荧光着陆在检测器上。
荧光发射可以被
荧光检测器感应并转换成电信号输出。
4.滤光片：荧光分光光度计还配备有一系列光学滤光片，使得荧光检测器只能检测到特定的波长范围内的光。
这有助于减少杂质荧光的干扰
并增加实验的灵敏度。
5.数据采集系统：荧光分光光度计的数据采集系统对信号进行放大、采集、数字化和处理。
该系统提供了两个输出信号，一个用于荧光强度测量，另一个用于波长扫描测量。
荧光分光光度计是重要的分析实验仪器，被广泛应用于科学研究和工业制造等领域。
它具有高分辨率、高信噪比、低检测限和广泛范围的荧光检测能力。
它是分子荧光学、荧光检测等领域中必不可少的仪器之一。
荧光分光光度计课件
202211//1122//99
光学(guāngxué)分析仪器培训
29
精品PPT
荧光(yíngguāng)分光光度法
3、荧光分光光度法的特点
3.3、荧光和分子的关系：
减弱荧光的有—COOH、—NO2、—NO、—SH等得电子 取代基，它们n电子的电子云并不与芳环上π电子平面。 影响不明显的取代基有—NH3、—R、—SO3H等。
（4）电子跃迁类型：含有氮、氧、硫杂原子的有 机物，它们的荧光强度与电子跃迁类型有关。
202211//1122//99
光学(guāngxué)分析仪器培训
202211//1122//99
光学(guāngxué)分析仪器培训
26
精品PPT
荧光(yíngguāng)分光光度法
3、荧光分光光度法的特点
3.3、荧光和分子的关系： （2）鳌合物中配位体的发光：不少有机化合物虽
然具有共轭双键，但由于不是刚性的分子不处于同一 平面，因而不发荧光。若这些化合物和金属离子形成 鳌合物，随着分子的刚性增加，平面结构增大，常常 会发荧光。
202211//1122//99
光学(guāngxué)分析仪器培训
16
精品PPT
荧光(yíngguāng)分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构
紫外-可见分光光度计 测量池(吸收池)
荧光分光光度计 样品池
It
It
IF,p
I
I
0 0
202211//1122//99
光学(guāngxué)分析仪器培训
荧光分光光度计使用说明 光度计常见问题解决方法
荧光分光光度计使用说明光度计常见问题解决方法荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650nm，发射波长扫描范200～800nm。
可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。
荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。
荧光分光光度计使用说明：开机时，请先开氙灯电源，再开主机电源。
每次开机后请先确认一下一起两边排热风扇工作正常，以确保仪器正常工作，发觉风扇有故障，应停机检查。
主机工作时顶部排热器温度很高,切勿触摸,以免受伤.氙灯点亮后需确定时间稳定，故进行精密测试应在30分钟以上。
当氙灯未能触发，并连续发生“吱吱”高频声或“叭叭”打火声时，请立刻关掉氙灯电源，稍后数秒重新触发。
请尽量削减不必要的氙灯触发次数，避开氙灯在高压下反复触发。
封闭氙灯电源后，若要重新使用，请等待60秒以后重新触发。
运行未知浓度的样品测试时，灵敏度设置请从低位向高围（0—7）渐渐设置，当灵敏度较高时（>3），为了保护光电倍增管，请拥护勿将强光置进样品室内。
当（仅当）操纵者错误操纵或其他干扰引起微机错误时，应当立刻关断主机电源，重新启动，但无须关断氙灯电源。
单色器内用螺丝紧固处不得松动，光学器件和仪器运行环境需保护清洁。
清洁仪器外表时,请勿使用乙醇乙MI等有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩.比色皿保持清洁。
荧光分光光度计(分子荧光)
荧光分光光度计（分子荧光）Fluores_cence •1楼1、基本原理在室温下分子大都处在基态的最低振动能级，当受到光的照射时，便吸收与它的特征频率相一致的光线，其中某些电子由原来的基态能级跃迁到第一电子激发态或更高电子激发态中的各个不同振动能级，这就是在分光光度法中所述的吸光现象。
跃迁到较高能级的分子，很快通过振动弛豫、内转换等方式释放能量后下降到第一电子激发态的最低振动能级，能量的这种转移形式，称为无辐射跃迁。
再由第一电子激发态的最低振动能级下降到基态的任何振动能级，并以光的形式放出它们所吸收的能量，这种光便称为荧光。
荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、需样量少和方法简便等优点，它的测定下限通常比分光光度法低2~4个数量级，在生化分析中的应用较广泛。
荧光分析法是测定物质吸收了一定频率的光以后，物质本身所发射的光的强度。
物质吸收的光，称为激发光；物质受激后所发射的光，称为发射光或荧光。
如果将激发光用单色器分光后，连续测定相应的荧光的强度所得到的曲线，称为该荧光物质的激发光谱（ex citation spectrum）。
实际上荧光物质的激发光谱就是它的吸收光谱。
在激发光谱中最大吸收处的波长处，固定波长和强度，检测物质所发射的荧光的波长和强度，所得到的曲线称为该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱（fluorescence spectrum）。
在建立荧光分析法时，需根据荧光光谱来选择适当的测定波长。
激发光谱和荧光光谱是荧光物质定性的依据。
某些物质的分子能吸收能量而发射出荧光，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法（fluoresc ence analysis）。
对于某一荧光物质的稀溶液，在一定波长和一定强度的入射光照射下，当液层的厚度不变时，所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。
2、检测荧光的仪器测定荧光可用荧光计和荧光分光光度计，其二者的结构复杂程度不同，但其基本结构是相似的。
荧光分光光度计
荧光分光光度计Fluorescence Spectrophotometer原理及应用HITACHI F-4500一、荧光分光光度计的工作原理二、荧光分光光度计的构造三、荧光分光光度计的应用四、影响荧光分析的因素荧光光度分析法任何荧光化合物都具有两种特征光谱荧光激发光谱（吸收光谱吸收光谱））固定某一发射波长，测定该波长下的荧光发射强度随激发波长变化所得的光谱化所得的光谱。
荧光发射光谱（荧光光谱荧光光谱））固定某一激发波长，测定荧光发射强度随发射波长变化得到的光谱。
分子荧光光谱与物质本身的结构有关，荧光强度的大小与物质的含量有关，利用物质荧光光谱的形状和强度的大小即可对物质进行定性和定量的分析。
工作原理定性分析::定性分析将未知物测定到的光谱参数与已知化合物进行比较,从而确定未知物的基本性质。
不同物质，由于其分子结构的不同，其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱，因此，可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
定量分析::定量分析利用荧光分子发射荧光的强弱进行定量测定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时，其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系，利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析。
荧光分析的特点专一性强:利用荧光物质的发光性质来检测其发射光谱，使测定的物质更具有特性。
灵敏度高:测定同样浓度物质的含量,通常比吸收光谱灵敏度高2-4个数量级，可检测出10-12克数量级的物质。
选择性强:可分析发射光谱,也可分析激发光谱。
如果某几个物质的发射光谱相似，难以做出判断，就可以测量其激发光谱。
发光方式多:物理、化学、生物发光。
可分析参数多:荧光光谱、荧光强度、荧光效率、荧光寿命等。
荧光分光光度计的构造光源要求:在全波长范围提供恒定连续的光强，低噪声，使用寿命长，稳定性好，足够的输出功率。
紫外光源:氢灯----190-360nm氘灯----180-500nm(辐射能量强度大,使用寿命长,较常用)可见光源:钨灯----320-2500nm钠灯----400-1000nm紫外-可见兼用:氙灯----180-1000nm分光光度计的光源装置:反射聚光系统(J (J光源灯光源灯光源灯，，M2平面镜平面镜，，M1M1球面镜球面镜球面镜，，F 消除杂散光的滤光片消除杂散光的滤光片))光源的稳定性影响测量的重复性和精确度光源的强度影响测量的灵敏度单色器在辐射能的照射下，能够将连续复合光源分解成单一波长的单色光或者具有一定宽度谱带的分光器，称为单色器。
荧光分光光度计原理
荧光分光光度计原理荧光分光光度计是一种利用物质在吸收紫外或可见光后产生荧光发射的原理来进行分析的仪器。
其原理基于激发和发射的光谱特性，通过测量样品在特定波长下的荧光强度来确定其成分和浓度。
下面将详细介绍荧光分光光度计的原理。
首先，荧光分光光度计利用激发光源对样品进行激发。
在激发过程中，样品中的某些分子吸收光子的能量，电子跃迁至激发态。
这些激发态的分子具有较短的寿命，会在很短的时间内退激发，释放出荧光光子。
荧光光子的能量和波长与激发光子的能量和波长有关，通常荧光波长比激发波长长，这种现象称为斯托克斯位移。
荧光分光光度计利用这一原理来测量样品的荧光强度。
其次，荧光分光光度计包含激发光源、样品室、荧光检测器和数据处理系统。
激发光源通常为氙灯或汞灯，能够提供足够的能量来激发样品中的分子。
样品室用于容纳样品，并确保激发光能够充分照射到样品上。
荧光检测器用于测量样品在不同波长下的荧光强度，并将信号传输给数据处理系统进行处理和分析。
最后，荧光分光光度计的原理还涉及荧光光谱和荧光强度的测量。
荧光光谱是指样品在不同波长下的荧光强度分布，可以反映样品中不同成分的荧光特性。
荧光强度的测量通常通过单光束或双光束模式进行，单光束模式用于测量样品的荧光强度，而双光束模式用于消除背景干扰。
荧光分光光度计通过测量样品的荧光光谱和荧光强度来确定样品的成分和浓度。
总之，荧光分光光度计是一种利用物质在吸收光子后产生荧光发射的原理来进行分析的仪器。
其原理基于激发和发射的光谱特性，通过测量样品在特定波长下的荧光强度来确定其成分和浓度。
荧光分光光度计在生物化学、环境监测、药物分析等领域有着广泛的应用，是一种重要的分析仪器。
荧光分光光度计课件
定期校准与维护
定期校准
按照仪器说明书要求，定期进行校准，以确保仪器准确性。
维护保养
根据仪器使用情况，定期进行保养，包括清洗光学元件、更换滤光 片、清洁机械部分等。
联系专业人员
如遇到无法解决的问题，应联系专业人员进行维修。
05 荧光分光光度计的实验技术与应用
CHAPTER
荧光光谱的测量技术
荧光光谱的测量技术
激发光谱的测量
通过测量荧光物质在不同波长激发光下的 发射光谱，可以了解荧光物质的性质和结 构。
通过改变激发光的波长，测量荧光发射光 谱的变化，可以得到荧光物质的激发光谱 。
发射光谱的测量
同步荧射光谱。
特点
具有高灵敏度、高分辨率和高精度等 优点，广泛应用于化学、生物学、医 学和环境科学等领域。
工作原理
激发光源
通常采用高压氙灯或激光器作为激发 光源，能够发出紫外或可见光。
激发光照射样品
激发光照射到样品上，使样品中的荧 光物质吸收光能并跃迁至激发态。
荧光发射与光谱分离
荧光物质从激发态回到基态时释放出 荧光，通过光谱分离技术将不同波长 的荧光分开。
数据采集与分析
数据采集
启动测量程序，开始采集数据，记录荧光光谱图及相关参数。
数据处理
对采集到的数据进行平滑处理、背景扣除等操作，以提高数据质量。
结果分析
根据测量需求对数据进行进一步分析，如荧光量子产率计算、动力 学分析等。
04 荧光分光光度计的维护与保养
CHAPTER
日常保养
清洁仪器表面
每天使用后，用软布擦拭仪器表面，保持清洁。
通过比较不同浓度的标准荧光物质的量子产率，可 以得到荧光物质的量子产率。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
基本原理
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．
不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫
外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
基本结构
1. 光源：
为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2．激发单色器：
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
3．发射单色器：
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。
筛选出特定的发射光谱。
4．样品室：
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。
测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
5．检测器：
一般用光电管或光电倍增管作检测器。
可将光信号放大并转为电信号
荧光分光光度计
科技名词定义
中文名称：荧光分光光度计
英文名称：spectrofluorophotometer;fluorescence
spectrophotometer;spectrofluorometer;spectroflurimeter
定义1：利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的分光光度计。
应用学科：机械工程（一级学科）；光学仪器（二级学科）；物理光学仪器（三级学科）
定义2：分析物质荧光特性的仪器。
具有两套单色光器，对物质荧光进行定性分析时，固定入射的激发光波长可获得发射光光谱，而固定所测发射光波长时就可扫描得激发光谱，从中可以得到最大的发射光波长和最大的激发光波长。
固定激发光波长和强度测量发射光强度，可作定量分析。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）
定义3：在荧光波长范围内,对溶液中物质进行浓度测定的仪器。
应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）
荧光分光光度计
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，通常比紫外分光光度计检测灵敏度高2~3个数量级，能在紫外“力不能及”的领域发挥作用，是现代分析测试领域尤其是痕量分析领域一种应用广泛的重要分析仪器，在生命科学、医学及临检、药学及药理学、生化、食品、环保、公安等领域有广泛应用。
目录
∙荧光分光光度计的特点
∙荧光分光光度计的功能
∙荧光分光光度计的技术参数
∙荧光分光光度计的附件选择
∙荧光分光光度计的应用
∙荧光分光光度计的特点
o1、具有荧光测试光门自动启动功能
2、具有测试数据，自动打印功能。
3、检测灵敏度高，测量范围宽。
4、可连接微机工作站，扩展分析测试功能。
5、自动曲线回归。
∙荧光分光光度计的功能
o1、波长扫描
波长扫描功能主要包括荧光强度和发光强度两种数据模式。
通过荧
光强度数据模式可以得到样品的激发光谱和荧光光谱，是一种比较
常用的方法。
2、时间扫描
时间扫描是在规定的时间间隔内采集被测样品的荧光强度随时间
变化曲线。
可以用来监测被测样品的物理化学变化，动力学法可被
执行。
3、光度值法
使用波长法进行定量，高达20个标准样品能被测量，通过标准浓
度的每个点来绘制多边形标准曲线，回归标准曲线的制备可使用一
次、二次、三次方的曲线或折线，同时可获得其相关系数R及R2。
4、三维扫描
可以得到三维图、等高线图，快速进行未知样品荧光峰位的测定。
5、强大的图谱处理功能
两个谱图可进行加、减、乘、除运算，也可以计算谱图面积；具有
光谱校正和快门控制等。
荧光分光光度计的技术参数
o 1.光源: 150W 氙灯
2.波长范围: 200 nm-900nm
3.灵敏度：S/N>500(峰对峰)
4.光栅: 1200grooves/250 nm blazing
5.波长扫描速度: 最大5000 nm/min
6.波长驱动器速度: 10,000 nm/min
7.波长精确度:+ 2 nm
8.波长重复性:+ 2 nm
9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm
10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H)
11.重量: 43.7kg
12.电源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz（可
选）
∙荧光分光光度计的附件选择
o固体样品反射附件：用来测量固体粉末样品
偏振附件：测量发射光的偏振角度
滤光片附件：滤除二级谱及杂散光
特殊光电倍增管：波长拓展
∙荧光分光光度计的应用
o 1.医学和临床检验———生物体试料的临床分析
2.药学和药理学———天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的
研究
3.生物化学———对于生物体内微量物质的测定
4.食品工业———食品中痕量组分的测定
5.污染物的分析———大气污染、环境卫生检测，食品污染物研究
等
6.有机和无机化学———用吸光光度法不能测定的痕量组分分析。