荧光分光光度计

基本原理

由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫

外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

基本结构

1. 光源：

为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

2．激发单色器：

置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。3．发射单色器：

置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

4．样品室：

通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

5．检测器：

一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号

荧光分光光度计

科技名词定义

中文名称：荧光分光光度计

英文名称：spectrofluorophotometer;fluorescence

spectrophotometer;spectrofluorometer;spectroflurimeter

定义1：利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的分光光度计。

应用学科：机械工程（一级学科）；光学仪器（二级学科）；物理光学仪器（三级学科）

定义2：分析物质荧光特性的仪器。具有两套单色光器，对物质荧光进行定性分析时，固定入射的激发光波长可获得发射光光谱，而固定所测发射光波长时就可扫描得激发光谱，从中可以得到最大的发射光波长和最大的激发光波长。固定激发光波长和强度测量发射光强度，可作定量分析。

应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）

定义3：在荧光波长范围内,对溶液中物质进行浓度测定的仪器。

应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）

荧光分光光度计

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，通常比紫外分光光度计检测灵敏度高2~3个数量级，能在紫外“力不能及”的领域发挥作用，是现代分析测试领域尤其是痕量分析领域一种应用广泛的重要分析仪器，在生命科学、医学及临检、药学及药理学、生化、食品、环保、公安等领域有广泛应用。

目录

∙荧光分光光度计的特点

∙荧光分光光度计的功能

∙荧光分光光度计的技术参数

∙荧光分光光度计的附件选择

∙荧光分光光度计的应用

∙荧光分光光度计的特点

o1、具有荧光测试光门自动启动功能

2、具有测试数据，自动打印功能。

3、检测灵敏度高，测量范围宽。

4、可连接微机工作站，扩展分析测试功能。

5、自动曲线回归。

∙荧光分光光度计的功能

o1、波长扫描

波长扫描功能主要包括荧光强度和发光强度两种数据模式。通过荧

光强度数据模式可以得到样品的激发光谱和荧光光谱，是一种比较

常用的方法。

2、时间扫描

时间扫描是在规定的时间间隔内采集被测样品的荧光强度随时间

变化曲线。可以用来监测被测样品的物理化学变化，动力学法可被

执行。

3、光度值法

使用波长法进行定量，高达20个标准样品能被测量，通过标准浓

度的每个点来绘制多边形标准曲线，回归标准曲线的制备可使用一

次、二次、三次方的曲线或折线，同时可获得其相关系数R及R2。

4、三维扫描

可以得到三维图、等高线图，快速进行未知样品荧光峰位的测定。

5、强大的图谱处理功能

两个谱图可进行加、减、乘、除运算，也可以计算谱图面积；具有

光谱校正和快门控制等。

荧光分光光度计的技术参数

o 1.光源: 150W 氙灯

2.波长范围: 200 nm-900nm

3.灵敏度：S/N>500(峰对峰)

4.光栅: 1200grooves/250 nm blazing

5.波长扫描速度: 最大5000 nm/min

6.波长驱动器速度: 10,000 nm/min

7.波长精确度:+ 2 nm

8.波长重复性:+ 2 nm

9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm

10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H)

11.重量: 43.7kg

12.电源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz（可

选）

∙荧光分光光度计的附件选择

o固体样品反射附件：用来测量固体粉末样品

偏振附件：测量发射光的偏振角度

滤光片附件：滤除二级谱及杂散光

特殊光电倍增管：波长拓展

∙荧光分光光度计的应用

o 1.医学和临床检验———生物体试料的临床分析

2.药学和药理学———天然药物分析，药品质量控制和药物代谢的

研究

3.生物化学———对于生物体内微量物质的测定

4.食品工业———食品中痕量组分的测定

5.污染物的分析———大气污染、环境卫生检测，食品污染物研究

等

6.有机和无机化学———用吸光光度法不能测定的痕量组分分析