AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明

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细胞ATPADPAMP含量高效液相色谱法HPLC定量检测

细胞ATPADPAMP含量高效液相色谱法HPLC定量检测

细胞ATP/ADP/AMP含量高效液相色谱法(HPLC)定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞A TP/ADP/AMP含量高效液相色谱法(HPLC)定量检测试剂是一种旨在通过高氯酸酸性处理,碱性中和后,在高效液相色谱仪和紫外光度仪下(254nm波长)检测分析,分离出ATP、ADP或AMP波峰,以定量测定样品中腺嘌呤核苷酸含量的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种动物或人体细胞裂解样品中A TP、ADP、AMP的含量检测。

产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

技术背景腺嘌呤核苷酸(adenine nucleotides),简称腺苷,包括单磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷,是一种单体单位,为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)的组成成分,并提供化学能量,在能量代谢通路中维护诸如肌肉、胞膜等组织细胞结构的生化和生理功能,调节细胞糖酵解、三羧酸循环、电子传递系统、氧化磷酸化活动。

腺嘌呤核苷酸在细胞中浓度低,且不稳定,通常通过其类型不同、浓度差异、分布状况,来评价细胞的代谢情况和能量状态。

单磷酸腺苷(Adenosine monophosphate;AMP),又称为5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸(5'-adenylic acid),是一种在(脱氧)核糖核酸中发现的核苷酸。

它是一种磷酸及核苷腺苷的酯,并由磷酸基团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。

分子式为C10H14N5O7P,分子量347。

AMP可以通过腺苷酸激酶(adenylate kinase)催化2分子ADP生成,或通过ATP以及ADP水解产生。

AMP常以腺苷-3',5'-环化一磷酸(cAMP)形式存在于细胞中。

AMP与A TP之比反映细胞ATP生成状况以及脂肪酸氧化程度。

二磷酸腺苷(adenosine diphosphate;ADP),参与ADP-ATP循环,提供热能转换和动态平衡,尤其在线粒体需氧呼吸、光合成等实现。

BC5485 一氧化氮(NO)含量检测试剂盒说明书

BC5485 一氧化氮(NO)含量检测试剂盒说明书

一氧化氮(NO )含量检测试剂盒说明书(化学法)微量法货号:BC5485 规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体110 mL×1瓶2-8℃保存 试剂一 粉剂×1瓶 2-8℃保存 显色液A 液 液体6 mL×1瓶 2-8℃保存 显色液B 液 液体6 mL×1瓶 2-8℃保存 标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制:1、 试剂一:临用前加入6mL 蒸馏水,可50℃助溶,2-8 ℃可保存12周。

冷却至常温使用;2、 显色液:临用前根据样本数量按照显色液A 液:显色液B 液=50μL: 50μL (100μL ,1T )的比例配制显色液,充分混匀,现配现用; 3、 标准品:10μmol/mL 亚硝酸钠。

4、 0.05μmol/mL 标准溶液的配制:取50μL 10μmol/mL 亚硝酸钠,加入950μL 蒸馏水,配制浓度为0.5 μmol/mL ;再取100μL 0.5μmol/mL 亚硝酸钠和950μL 蒸馏水混匀配制成0.05 μmol/mL 的标准溶液备用。

产品说明:一氧化氮(Nitric Oxide ,NO )是一种极不稳定的生物自由基,分子小,结构简单,常温下为气体,微溶于水,具有脂溶性,可快速透过生物膜扩散,作为一种新型的生物信使分子,在细胞间及细胞内发挥传递信号的作用。

其广泛分布于生物体内各组织中,特别是神经组织中。

在机体神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中也起着十分重要的作用。

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成NO 2-。

在酸性条件下,NO 2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm 处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO 含量。

NO NO 2-NO 2- + 4-Aminobenzenesulfonamide Diazonium SaltDiazonium Salt + N-(1-Naphthyl)-Ethylenediamine Red Azo Dyes (550nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书

NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书

NADH氧化酶(NOX可见分光光度法货号:BC0630规格:50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制:试剂六:临用前加入9 mL双蒸水,用不完的试剂-20℃分装保存。

产品说明:NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD+。

该酶不仅参与NAD+的再生,而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD+,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10µL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2.将匀浆600g,4℃离心5min。

将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

3.将上清液转移至另一EP管中,即胞浆提取物,用于线粒体中泄露NOX活性测定。

4.沉淀即为线粒体,加入200µL试剂二和2µL试剂三,反复吹打充分混匀,用于NOX活性测定,并用于蛋白浓度测定。

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序

碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶(ALP)存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。

测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力,做临床辅助诊断用。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶(ALP)的活力。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶(ALP)活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理;本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶(ALP)试剂盒采用的是AMP缓冲液法。

5.原理在AMP的缓冲环境下,磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下,可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。

在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升,其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。

−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源:上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分:R1:AMP缓冲液(PH10.50)、乙酸镁;R2:AMP缓冲液(PH8.85)、磷酸对硝基苯、乙酸镁。

AMP:2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性:试剂在2-8℃避光保存,有效期1年。

试剂工作液在2-8℃避光保存,可稳定4周,15-25℃可保存稳定4天。

7.4试剂准备:试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序:使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求,并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白,经校准测定,仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装,在2-8℃冰箱可稳定到失效期,使用前用5ml去离子水复溶,待质控物充分溶解(大约30分钟)后使用。

Elabscience ATP含量比色法测试盒说明书

Elabscience ATP含量比色法测试盒说明书

(本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!)Elabscience®ATP含量比色法测试盒ATP Colorimetric Assay Kit产品货号:E-BC-K157-S产品规格:50 assays(24 samples)/100 assays(48 samples)检测仪器:紫外-可见光分光光度计(636 nm)使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题,请通过以下方式联系我们:销售部电话************,************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签),以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测动物组织样本中A TP的含量。

检测原理肌酸激酶催化肌酸和A TP 反应生成磷酸肌酸,通过比色法检测磷酸肌酸的含量,以此反应出A TP的含量。

提供试剂和物品说明:试剂严格按上表中的保存条件保存,不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂,使用前请先离心,以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器:紫外-可见光分光光度计(636 nm)、水浴锅(100°C )试剂:双蒸水、生理盐水(0.9% NaCl)试剂准备①检测前,所有的试剂平衡至室温。

②试剂二工作液的配制向试剂二中加入6 mL双蒸水,拧紧瓶盖,放入沸水中水浴使其完全溶解;使用前观察到有结晶析出,可沸水浴溶解后,放置37℃保存待用。

使用完后2-8℃保存7天。

③试剂四工作液的配制:取1.8mL双蒸水加入到试剂四中,充分溶解后放置冰盒上待用。

使用完后-20℃保存7天。

④对照工作液的配制:按试剂二工作液:试剂三:双蒸水=100:200:30的比例配制,现用现配,按需配制。

测定工作液的配制:按试剂二工作液:试剂三:试剂四工作液=100:200:30的比例配制,现用现配,按需配制。

⑤显色剂工作液配制:按试剂六:试剂七=3:1配制,37℃放置1小时,现用现配,按需配制。

莫纳(武汉)生物科技核酸提取试剂盒说明书

莫纳(武汉)生物科技核酸提取试剂盒说明书

Version 1.0核酸提取试剂磁珠法病毒核酸提取试剂盒操作手册货号:MI30301S(50次/盒) MI30301M(100次/盒)MI35301S(32次/盒) MI35301M(96次/盒)莫纳(武汉)生物科技有限公司400-928-3698核酸提取试剂说明书【产品名称】通用名称:核酸提取试剂商品名称:磁珠法病毒核酸提取试剂盒【包装规格及适配仪器】预封装:32次/盒、96次/盒(适配Auto-Ex 32全自动核酸提取仪)非预封装:50次/盒、100次/盒(手工提取和其他自动核酸提取仪)【预期用途】用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。

其处理后的产物用于临床体外检测使用。

【样本要求】拭子、组织匀浆液、血浆、血清、细胞培养上清液或各种病毒保存液等。

【检验原理】独特分离作用的磁珠和优化的试剂配方保证磁珠在一定条件下与核酸高效结合,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。

【主要组成成分】序号组分预封装非预封装列位32次/盒96次/盒50次/盒100次/盒1裂解液VPL第2、8列600μL/孔600μL/孔30 mL60 mL2洗涤液VPA第3、9列700μL/孔700μL/孔18 mL36 mL3磁珠MB1第4、10列30μL/孔30μL/孔2*1 mL3*1 mL475%乙醇700μL/孔700μL/孔// 575%乙醇第5、11列700μL/孔700μL/孔6无核酸酶水第6、12列100μL/孔100μL/孔 5 mL10 mL 组件数量96孔预封装板/2*16T6*16T/8连磁棒套2*2T6*2T【储存条件及有效期】室温(15~25℃)保存,非预封装试剂盒中磁珠MB1建议于2~8℃保存。

试剂盒有效期12个月。

【检验方法】方法一:自动法1. 试剂板准备1)预封装板:取出深孔板,颠倒数次使磁珠重悬,孔板离心机500 rpm离心1 min,使试剂及磁珠集中在孔板底部,使用前小心撕去铝箔封口膜,避免液体溅出。

NAD-NADH比率检测试剂盒说明书

NAD-NADH比率检测试剂盒说明书

NAD/NADH比率检测试剂盒关键词:NADH,NAD+,Nicotinamide adenine dinucleotide,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,还原态,还原型辅酶Ⅰ。

N指烟酰胺,A指腺嘌呤,D 是二核苷酸。

葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的,而代谢产生的NADH 或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。

NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。

NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。

监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳参数。

紫外光可以在线粒体中激发NADH产生荧光,用来监测线粒体功能。

一般来说,涉及到氧化还原的反应都用得到,比如呼吸作用,光合作用,等等氨会抑制呼吸过程中的电子传递系统,尤其是NADH。

因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。

有没有一款可以同时检测,NAD+,NADH,以及NAD+/NADH比率,这三个指标的试剂盒呢?艾美捷科技特向您推荐,已被广泛使用,发布文章不计其数的高品质试剂盒。

*样品通过NAD萃取,同时检测(NAD+NADH)与(NAD)的结果,相减计算得出NADH 含量,以及NAD/NADH的比率。

原理:Amplite 比色法NAD/NADH 比率试剂盒,提供一个比色法原理的检测培养细胞的总NAD/NADH,和NAD/NADH ratio的方法。

在这个实验中,裂解液中NAD可以被NAD萃取液提取,通过酶反应被转化为NADH,然后利用NADH探针反应,产生黄色染料,此染料可以在460nm处测吸收峰,或者加入增强剂后,可以检测635nm吸收峰。

染料产生颜色与细胞裂解液中NAD 或者NADH的浓度呈正比。

《卓越的标准曲线》《发表文章结果:Ren, T., et al. Oncogene 36.42(2017).》引用文献Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathwayAuthors: Qi Lv, Kai Wang, SimiaoQiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng WeiJournal: Cell death & disease (2018): 258Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formationAuthors: Naoki Yamamoto, RinoIsshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, TetsushiSekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi TsunedaJournal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun WangJournal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine FermentationAuthors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L InglisJournal: Fermentation (2017): 61Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing YeJournal: Cell & Bioscience (2017): 27MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cellsAuthors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H YangJournal: Oncogene (2017)Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, MitsuguAkagawaJournal: Biochemistry (2017)Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratioAuthors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping HaoJournal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL,AND MECHANISTIC ASPECTSAuthors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, GaganPaudel, Elena Tarakhovskaya, NadezhdaFrolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain TissierJournal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevationAuthors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie ZhangJournal: Aging cell (2016): 416—427艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

毒品检测板名称、英文缩写对照

毒品检测板名称、英文缩写对照
毒品检测板
毒品检测板,即为毒品快速检测试纸(试剂)。在公安机关禁毒大队、禁毒支队等使用单位俗称其“尿检板”。它采用金标法快速对人体尿液进行吸毒检测。3分钟后能出结果。且准确性高。目前公安系统、军队征兵、戒毒所、劳教所、家庭监测、社区戒毒、等行政部门,均采用该方法进行毒品的快速检测。
具体产品名称、英文缩写及检验阈值范围如下表:
测尿液
羟二氢可待因酮
100ng/ml
氯胺酮检测试剂盒
KET
测尿液
氯胺酮/K粉
1000ng/ml
吗啡/甲级安非他命检测试剂盒
MOR\MAMP
测尿液
相应类别
吗啡/甲级安非他命/氯胺酮检测试剂盒
MOR\MAMP\KET
测尿液
相应类别
多合一检测试剂盒
N IN 1
测尿液
相应类别
测尿液
吗啡检测试剂盒mor测尿液海洛因鸦片300ngml摇头丸检测试剂盒mdma测尿液摇头丸500ngml安非他命检测试剂盒amp测尿液安非他命1000ngml甲级安非他命检测试剂盒mamp测尿液冰毒1000ngml大麻检测试剂盒thc测尿液大麻50ngml可卡因检测试剂盒coc测尿液可卡因300ngml苯环己哌啶检测试剂盒pcp测尿液苯环己哌啶25ngml巴比妥检测试剂盒bar测尿液巴比妥300ngml美沙酮检测试剂盒mtd测尿液美沙酮300ngml苯二氮卓检测试剂盒bzo测尿液苯二氮卓300ngml三环抗抑郁药检测试剂盒tca测尿液三环抗抑郁1000ngml羟二氢可待因酮检测试剂盒oxy测尿液羟二氢可待因酮100ngml氯胺酮检测试剂盒ket测尿液氯胺酮k粉1000ngml吗啡甲级安非他命检测试剂盒mormamp测尿液相应类别吗啡甲级安非他命氯胺酮检测试剂盒mormampket测尿液相应类别多合一检测试剂盒nin1测尿液相应类别测尿液

人P物质SP试剂盒使用方法

人P物质SP试剂盒使用方法

人P物质(SP)试剂盒使用方法检测范围:96T2.5 n g/L -80 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中人P物质(SP)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P物质(SP)水平。

用纯化的人P物质(SP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P物质(SP),再与HRP标记的P物质(SP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的P 物质(SP)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D 值),通过标准曲线计算样品中人P物质(SP)浓度。

试剂盒组成1 •标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20 C保存,但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50山,待测样品孔中先加样品稀释液40山, 然后再加待测样品10 d (样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37 C温育30分钟。

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50 4,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50 4,再加入显色剂B50 4,轻轻震荡混匀,37 C避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50 4,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

QIAamp MinElute Virus Spin 试剂盒中文说明书

QIAamp MinElute Virus Spin 试剂盒中文说明书
实验步骤 实验前准备和注意事项: 所有离心在室温下运行(15-25℃); 平衡样品至室温; 平衡 Buffer AVE 至室温; 准备 56℃的恒温金属浴; 预先贮备好 Buffer AW1,Buffer AW2 和 QIAGEN 蛋白酶; 制备新鲜的 Carrier RNA 和 Buffer AL 的混合液; Procedure 1. 添加 25 uL QIAGEN Protease 到 1.5 mL 离心管中; 2. 添加 200 uL 血浆和血清到离心管中; 3. 添加 200 uL Buffer AL(含 carrier RNA),盖上盖子,涡旋充分混匀 15 s; 4. 56℃孵育 15 min; 5. 简短离心收集管内壁液体; 6. 添加 250 uL 无水乙醇到样品中,盖上盖子,涡旋充分混匀 15 s,室温孵育 5 分 钟;(如果室温超过 25℃,乙醇应该冰上预冷) 7. 简短离心收集管内壁液体; 8. 小心转移所有液体到离心柱中,勿触碰边缘;盖上盖子,6000 g(8000 rpm) 离心 1 分钟;转移离心柱到新的 2 mL 收集管中,弃掉含 Filtrate 的管子。 9. 建议:小心打开离心柱的盖子,添加 500 uL Buffer AW1,盖上盖子,6000 g (8000 rpm)离心 1 分钟;转移离心柱到新的 2 mL 收集管中,弃掉含 Filtrate 的管子。 10. 小心打开离心柱的盖子,添加 500 uL Buffer AW2,盖上盖子,6000 g(8000 rpm)离心 1 分钟;转移离心柱到新的 2 mL 收集管中,弃掉含 Filtrate 的管子。 11. 小心打开离心柱的盖子,添加 500 uL 无水乙醇,盖上盖子,6000 g(8000 rpm) 离心 1 分钟;转移离心柱到新的 2 mL 离心管中,弃掉含 Filtrate 的管子。 12. 放置离心柱到新的 2 mL 收集管中,全速离心(14000 rpm)3 分钟,彻底干 燥离心柱膜; 13. 建议:放置离心柱到干净的 2 mL 收集管(未提供)中,打开盖子,56℃完 全干燥离心柱膜 3 分钟;(容易污染,暂不使用) 14. 放置离心柱到干净的 1.5 mL 离心管(未提供)中,弃掉含 Filtrate 的管子。 添加 20-150 uL 的 Buffer AVE 或无酶水到离心柱膜的中间,盖上盖子室温孵育 1-5 min,全速离心(14000 rpm)1 分钟。 备注:AVE 需要室温平衡,洗脱体积小于 50 uL 时,必须加到膜中央;回收体 积可能会小于试剂添加的体积,一般减少体积在 5 uL 以内。

AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明

AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明

AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明产品简介:AMP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中,是描述细胞能量代谢状态的主要参数。

测定AMP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。

AMP在254nm下有吸收峰,可以利用高效液相色谱法测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂:高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器(水系,50个,0.22µm)、滤膜(水系和有机系各1个,0.45µm)、C18柱(4.6×150mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、甲醇(色谱级,300mL)、甲醇(色谱级,300mL)、蒸馏水产品内容:试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂三:粉剂1×1瓶,粉剂2×1瓶,4℃保存;临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中,用蒸馏水定容至1000mL,形成流动相缓冲液基质(注:试剂瓶中的粉剂要冲洗干净),4℃可保存1周;试剂四:AMP标准品5mg×1支,-20℃保存。

临用前加入1mL双蒸水,配成5mg/mL 溶液,配好后-20℃可保存1周;操作步骤:一、实验前的准备工作:1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45µm的滤膜抽滤,以除去溶剂中的杂质,防止堵塞色谱柱。

(注:双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤,甲醇用有机系滤膜抽滤)。

2、流动相的配制:将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9:0.1(v/v),即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇,10%的甲醇,双蒸水各250mL。

将2和3中的溶剂超声30分钟,以脱去溶剂中的气泡,防止堵塞色谱柱。

二、AMP的提取:1、组织的处理:准确称取组织重量0.1g,加入1mL试剂一,提取AMP,4000g常温离心15min,取上清液,加入等体积的试剂二,混匀,4000g常温离心15min,取上清,0.22µm水系微孔滤膜过滤后冰上放置,待测。

医学检验--心肌损伤的生化标志物

医学检验--心肌损伤的生化标志物

医学检验--⼼肌损伤的⽣化标志物⼼肌损伤的⽣化标志物⼀、酶学标志物⼆、肌红蛋⽩、肌钙蛋⽩检查三、钠尿肽(BNP/NT-proBNP)的临床应⽤急性缺⾎性⼼脏病典型的病例可以根据病史、症状及⼼电图(ECG)的特殊改变进⾏诊断。

⼤量的临床实践发现,约有25%的急性⼼肌梗死(AMI)患者发病早期没有典型的临床症状;约50%左右的AMI患者缺乏ECG的特异改变。

在这种情况下⼼肌损伤⽣化标志物的检测在诊断AMI时尤为重要。

AMI后梗死部位⼼肌细胞内的化学物质将释放到外周⾎中,通过对这些化学物质的测定可诊断AMI。

决定⼀种标志物⾎浓度变化的因素有:该物质的分⼦⼤⼩。

在细胞内的分布(胞浆中的⼩分⼦蛋⽩较结构蛋⽩更易进⼊⾎液循环)、释放率、清除率和⼼肌特异性等。

典型的AMI⼼肌损伤标志物改变随发作时间的推移呈现典型的变化。

酶学标志物七⼗年代⾄九⼗年代初,最常⽤的⼼肌损伤诊断标志物为⼼肌酶谱,即:CK/CK-MB,LD/LD1,AST。

九⼗年代以后,发现了⼀些早期诊断的标志物和特异性和敏感度均较佳的确定性标志物,⾎清酶学标志物因为特异性不⾼,AMI后出现异常的时间相对较晚,⽬前在AMI诊断中已逐渐少⽤以致基本不再应⽤。

(⼀)肌酸激酶(CK)1.概况肌酸激酶分⼦量为86KD,⼴泛存在于细胞浆和线粒体中,该酶催化体内ATP与肌酸之间⾼能磷酸键转换⽣成磷酸肌酸和ADP的可逆反应,为肌⾁收缩和运输系统提供能量来源。

⼈体三种肌⾁组织(⾻骼肌、⼼肌和平滑肌)中都含有⼤量CK,肝、胰、红细胞等CK 的含量极少。

胞浆CK的酶蛋⽩部分由两个亚基组成,不同亚基组合成三种同⼯酶:CK-MM,CK-MB,CK-BB。

CK在⾻骼肌、⼼肌、脑组织⼤量存在,常⽤于这些疾病的诊断。

⾎清中CK的测定⽅法是连续监测法。

2.参考值男:80~200U/L⼥:60~140U/LCK⽔平受到性别、年龄、种族、⽣理状态的影响。

在确定参考值时应注意不同“正常⼈群”的情况。

QIAamp中文说明书

QIAamp中文说明书

QIAamp试剂盒提取唾液DNA步骤此试剂盒可以提取1~100 uL的唾液样本,一般在15~25℃下操作。

准备工作:(1)样本需提前放到室温环境中,使其解冻。

(2)用于洗脱的Buffer AE或去离子水需要提取放置与室温中。

(3)开启水浴锅,设置到温度56℃。

(4)确保Buffers AW1在使用前已经加入25 mL无水乙醇,并打钩表示已加入;确保Buffers AW2在使用前已经加入30 mL无水乙醇,并打钩表示已加入,加入乙醇后,此溶液最多能使用一年。

(5)实验前检查Buffers AL或Buffers ATL是否含有沉淀,如果有需要在70℃使沉淀溶解。

步骤:(1)将1mL唾液样本放入1.5 mL EP中(自备),并12000rpm离心5 min。

(2)弃去上清后,并加入500 uL Buffer AE,然后振荡5 s。

(3)8000 rpm下离心2 min。

(4)弃去上清后,加入300 ul Buffer ATL和20 uL proteinase K,并振荡10 s。

(5)振荡后,放于56℃水浴锅中,并每隔15 min上下颠倒1.5 mL EP 15 s,整个水浴时间需1 h。

(6)1000 rpm离心1.5 mL EP 管30 s,使粘在管盖的液体离心下来。

(7)加入300 uL Buffer AL和50 uL 无水乙醇,盖紧盖子,振荡10 s。

(8)1000 rpm离心1.5 mL EP 管30 s,使粘在管盖的液体离心下来。

(9)仔细地将上清液转移到QIAamp MinElute column (在2 mL的收集管中),注意不能弄湿了管盖的边缘。

盖紧盖子,在8000 rpm离心1 min。

将QIAamp MinElute column放到另一个新的2 mL收集管中,丢弃上一个含离心液的收集管。

(10)仔细打开QIAamp MinElute column,并加入500 uL Buffer AW1,注意不能弄湿了管盖的边缘。

碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒(AMP缓冲液法)产品技术要求迈瑞

碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒(AMP缓冲液法)产品技术要求迈瑞

碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒(AMP缓冲液法)
性能指标
2.1外观
试剂应为清澈透明的液体,无沉淀、悬浮物和絮状物。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37℃±1℃,405nm波长条件下,吸光度应小于2.5A。

2.3.2试剂空白吸光度变化率
试剂以水为空白在37℃±1℃,405nm波长条件下,吸光度变化率应小于0.007A/min。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为75U/L时,吸光度变化率应不小于0.014A/min。

2.5线性范围
试剂盒在(5~800)U/L范围内:
a)线性相关系数r应不小于0.9900;
b)当样本浓度不大于120U/L时,线性绝对偏差应在±12.0U/L内;当样本浓度大于120U/L时,线性相对偏差应在±10.0%内。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数:CV应不大于3.0%。

2.6.2批间差
相对偏差:R应不大于5.0%。

2.7准确度
测定校准品,测定结果与靶值的相对偏差应在±10.0%内。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在500mg/dL内、抗坏血酸浓度在30mg/dL内、内源性酯浓度在500 mg/dL内、胆红素浓度在40mg/dL内,对试剂检测结果的偏差影响应在±10%以内。

(以下内容为空白。


1。

单宁含量检测试剂盒说明书

单宁含量检测试剂盒说明书

单宁含量检测试剂盒说明书微量法货号:BC1395规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体75mL×2瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶常温保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、标准品:10mg 单宁酸。

临用前加入1.175mL 提取液溶解为5000nmol/mL 的标准液,2-8℃保存两周。

产品说明:单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。

单宁可作为潜在的生物标记物;与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。

其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性,单宁在275nm 下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

技术指标:最低检出限:0.13nmol/mL 线性范围:0.39-18nmol/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV 板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)将样本烘干至恒重,粉碎,过30-50目筛之后,称取约0.05g ,加入1mL提取液(封口膜封口防止液体溅出),于70℃水浴,准确提取30min ,期间可摇晃数次。

12000rpm ,25℃,离心10min ,取上清,用提取液定容至1mL ,待测。

二、测定步骤Beijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至275nm,紫外分光光度计提取液调零。

Qiagen基因组提取试剂盒中文操作说明

Qiagen基因组提取试剂盒中文操作说明

Qiagen基因组提取试剂盒中⽂操作说明QIAamp DNA Blood Mini Kit简介:QIAGEN公司出品的QIAamp DNA Blood Mini Kit适⽤于使⽤微型离⼼机或真空处理从全⾎、⾎浆、⾎清、⾎沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。

该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全⾎样本,样品量可达200µl。

整套基因组的操作时间约为20–40分钟,⼀般可从200µl健康全⾎中获得4–12 µg DNA,洗脱体积可在50–200µl范围。

抽提原理:样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上,通过两次洗涤可以将PCR抑制剂,如:⼆价阳离⼦和蛋⽩完全去除,最后结合在离⼼柱上的纯核酸可⽤⽔或试剂盒中的缓冲液进⾏洗脱收集。

开始前的注意事项:1. 所以的离⼼步骤需要在室温(15-25℃)进⾏2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000,请添加载体DNA(carrier DNA)3. 200µl全⾎样品可以得到约3-12µgDNA开始前的准备⼯作:1. 将样品平衡到室温(15-25℃)2. 将⽔浴或是⾦属浴加热到56℃,以备第4步使⽤3. 将Buffer AE或蒸馏⽔平衡到室温,⽤于第11步的洗脱4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋⽩酶已经按照说明配置完毕5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物,请在56℃孵育使其溶解操作步骤:以下为整个基因组提取操作的流程图,由于真空装置并⾮所有的实验室都配置,所以这⾥介绍的是离⼼法(流程图左侧)。

以下译介⾃QIAGEN官⽅出品的说明部分,⿊粗体为实验操作的主体部分。

1. 吸取20µl QIAGEN蛋⽩酶(或者蛋⽩酶K)⾄1.5ml离⼼管的底部。

2. 加⼊200µl待提取基因组的样品⾄离⼼管中。

5'-核苷酸酶测定试剂盒(过氧化物酶法)说明书

5'-核苷酸酶测定试剂盒(过氧化物酶法)说明书

【产品名称】5′核苷酸酶测定试剂盒-5′NT(过氧化物酶法)【包装规格】R1:2×60mL;R2: 2×30mL;R1:1×60mL;R2: 1×30mL。

R1:1×40mL;R2: 1×20mL;R1:1×30mL;R2: 1×15mL。

R1:2×40mL;R2: 2×20mL;R1:3×40mL;R2: 1×60mL。

【预期用途】5'-NT测定试剂盒测定试剂盒临床上用于检测血清中5'-NT 的活性。

一般用于肝胆疾病的鉴别诊断,阻塞性黄疸、肝内占位性病变和浸润性病变时5'-NT活性通常会升高(仅供参考)。

【检验原理】应用5’-NT偶联嘌呤核苷磷酸化酶,黄嘌呤氧化酶和过氧化物酶反应连续监测法。

5’-NT水解次黄苷酸生成次黄苷;再通过偶联PNP的作用,生成次黄嘌呤;后者在XOD 氧化下生成尿酸和过氧化氢;最后在POD的作用下H2O2通过Trinder反应,生成紫红色的有色醌。

通过动态测量有色醌546nm处吸光度上升的速度计算5’-NT活性。

【储存条件及有效期】原包装R试剂在(2-8)℃条件下保存有效期为12个月,失效期见产品标签所示。

开瓶后,如放置于仪器中应在一周内使用,每次使用完毕及时盖上瓶盖。

【适用仪器】本试剂盒适用于奥林帕斯OlympusAU400、日立Hitachi7060、日立Hitachi7180、日立Hitachi7600、贝克曼Beckman Unicel DxC 800、贝克曼Beckman AU680、雅培16000、西门子Dimension xpand。

【样本要求】1、样本种类:标本为血清。

2、样本采集:常规静脉采血约3ml,置于试管中,样本采集后,立即密封送检,严格避免溶血。

3、样本干扰:对反应吸光度有干扰的样本,包括溶血和脂血的样本都可能影响检测结果,遇上述情况建议重新采集。

小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶-(NAG)-ELISA试剂盒说明书

小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶-(NAG)-ELISA试剂盒说明书

小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-M0812(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组NAG浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时了解伊莱瑞特生物科技XXX。

*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗小鼠NAG抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的NAG会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗小鼠NAG抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗小鼠NAG抗体与结合在包被抗体上的小鼠NAG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm波长处测OD 值,NAG浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中NAG的浓度。

标本收集:1.血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。

2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。

避免使用溶血,高血脂标本。

3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。

此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理:在酸性溶液中,考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在620nm处有最大吸收峰,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。

该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。

自备仪器和用品:离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:试剂一:液体30 mL×1瓶,4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:1. 液体样品:澄清液体样品可以直接测定。

2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:20的比例(建议称取约0.05 g组织,加入1mL提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。

(动物样品常常需要稀释)3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

测定操作:1. 分光光度计预热30 min,蒸馏水调零。

2. 在石英比色皿中加入:试剂(μL)测定管空白管样本500蒸馏水500试剂一500 500混匀后,测定波长620 nm吸光值,△A=A测定-A空白。

注意:空白管只需要测定一次。

计算公式:标准曲线:y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)y: 吸光值差值1.按液体样本体积计算:Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253=0.07×(△A+0.0007)2.按组织样本质量计算:Cpr(mg/g)=(△A+0.0007)÷14.253×V总÷W=0.07×(△A+0.0007)÷WV总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。

Takara 感受态制备试剂盒说明书

Takara 感受态制备试剂盒说明书

TaKaRa Code:D406Competent Cell Preparation Kit次(200量)宝生物工程(大连)有限公司目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA(Plasmid DNA、Phage DNA等),处于这种状态的细胞称为感受态细胞(Competent Cell)。

在基因工程实验中,经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。

实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种:一种是购买商品化的感受态细胞,但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难(超低温);另一种是自己制备感受态细胞,实验人员自己制作感受态细胞时,往往受到各种试剂及实验条件等限制,制备的感受态细胞效率低,达不到实验要求。

TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。

使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要,并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌,例如:E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等,转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上(转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。

使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。

●制品内容(200次量)Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存:4℃保存。

●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。

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AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明
产品简介:
AMP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中,是描述细胞能量代谢状态的主要参数。

测定AMP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。

AMP在254nm下有吸收峰,可以利用高效液相色谱法测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂:
高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器(水系,50个,0.22µm)、滤膜(水系和有机系各1个,0.45µm)、C18柱(4.6×150mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、甲醇(色谱级,300mL)、甲醇(色谱级,300mL)、蒸馏水产品内容:
试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂1×1瓶,粉剂2×1瓶,4℃保存;临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中,用蒸馏水定容至1000mL,形成流动相缓冲液基质(注:试剂瓶中的粉剂要冲洗干净),4℃可保存1周;
试剂四:AMP标准品5mg×1支,-20℃保存。

临用前加入1mL双蒸水,配成5mg/mL 溶液,配好后-20℃可保存1周;
操作步骤:
一、实验前的准备工作:
1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45µm的滤膜抽滤,以除去溶剂中的杂质,防止堵塞色谱柱。

(注:双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤,甲醇用有机系滤膜抽滤)。

2、流动相的配制:将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9:0.1(v/v),即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇,10%的甲醇,双蒸水各250mL。

将2和3中的溶剂超声30分钟,以脱去溶剂中的气泡,防止堵塞色谱柱。

二、AMP的提取:
1、组织的处理:准确称取组织重量0.1g,加入1mL试剂一,提取AMP,4000g常温离心15min,取上清液,加入等体积的试剂二,混匀,4000g常温离心15min,取上清,0.22µm水系微孔滤膜过滤后冰上放置,待测。

2、细胞处理:收集约30mL细胞,离心菌体经干燥后,加入1mL试剂一,超声破壁细胞(950W,30%,15min,工作1s间隔2s),4000g常温离心15min,取上清液,加入等体积的试剂二,混匀,4000g常温离心15min,取上清,0.22µm水系微孔滤膜过滤后冰上放置,待测。

三、AMP含量测定操作步骤:
1.开启电脑、检测器和泵,安装上色谱柱,打开empower软件,在方法组中设置进样量20µL,流速1mL/min,保留时间10min,检测波长254nm,设置完毕保存方法组。

2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。

3.用流动相洗柱子,待基线稳定后开始加样。

4.加入标准品20µL,在10min内可分离AMP,AMP的保留时间在7min左右(柱子不同,保留时间有差异),计算不同浓度的AMP标准品的峰面积。

5.加入样品20µL,在相应保留时间处检测AMP的峰面积。

AMP含量的计算:
将5mg/ml的AMP标准品用双蒸水分别稀释成100µg/ml、80µg/ml、60µg/ml、40µg/ml和20µg/ml
的AMP标准品溶液,以标准品浓度(µg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标分别计算AMP 标准曲线。

注:标准品的稀释倍数要根据样品中AMP浓度确定,样品中AMP的峰面积必须落在不同浓度的AMP标准品的峰面积之内,该标准品稀释倍数只是一个参考。

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