实验九 人类X小体、Y小体检测
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• 1.X小体： • 油镜下可见X小体为一致 密的浓染小体。轮廓清 晰，约1um，常附着于核 膜边缘或靠边内侧，其 形态有三角形、卵形、 扁平形等。 • 正常女性间期细胞核中X 小体比例约30%～50%， 男性中则偶尔可见 （2%），且不典型。
六、实验结果
• 2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发
乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处 理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min， 自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲 液（pH5.4～8.0），覆以盖片。 • 荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或 油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。 •
六、实验结果
净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、 第三次刮取物涂在干净的载玻片上。
• 固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～
30min，空气干燥。
• 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干
燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
实验九 人类X小体、Y 小体检测
一、实验目的
• 掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法， • 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 • 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色 体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗 传病临床诊断提供参考。
二、实验原理
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜 边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体， 继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一 般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故 而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动 物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状 态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色 体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其 他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。 故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。 • Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤 光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y 小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形
三、实验材料
• 口腔粘膜（男女wk.baidu.com、发根细胞（女）。
四、实验器具和药品
• 1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒 温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙 签、滤纸、纱布等。 • 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、 盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。
五、实验步骤
1．X小体的观察
• 取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁
• 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细
胞；并在高倍或油镜下观察。 • 若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一 滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。 •
人口腔X小体
X小体的形状
2.Y小体的观察
• 取材固定： • 染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%
亮的荧光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下 Y小体的出现率为25～50%，正常女性无，性 异常者，如核型为47，XYY的个体，可见两个 Y小体。
七、作业及思考题
• 1.统计X小体的频率，画2～3个典型细胞，示X 小体的形态和所处部位。 • 2.计算出现Y小体的细胞频率。 • 3.什么是剂量补偿效应？ • 4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？ • 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ • 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？
六、实验结果
• 2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发
乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处 理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min， 自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲 液（pH5.4～8.0），覆以盖片。 • 荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或 油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。 •
六、实验结果
净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、 第三次刮取物涂在干净的载玻片上。
• 固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～
30min，空气干燥。
• 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干
燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
实验九 人类X小体、Y 小体检测
一、实验目的
• 掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法， • 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 • 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色 体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗 传病临床诊断提供参考。
二、实验原理
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜 边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体， 继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一 般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故 而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动 物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状 态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色 体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其 他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。 故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。 • Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤 光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y 小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形
三、实验材料
• 口腔粘膜（男女wk.baidu.com、发根细胞（女）。
四、实验器具和药品
• 1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒 温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙 签、滤纸、纱布等。 • 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、 盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。
五、实验步骤
1．X小体的观察
• 取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁
• 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细
胞；并在高倍或油镜下观察。 • 若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一 滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。 •
人口腔X小体
X小体的形状
2.Y小体的观察
• 取材固定： • 染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%
亮的荧光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下 Y小体的出现率为25～50%，正常女性无，性 异常者，如核型为47，XYY的个体，可见两个 Y小体。
七、作业及思考题
• 1.统计X小体的频率，画2～3个典型细胞，示X 小体的形态和所处部位。 • 2.计算出现Y小体的细胞频率。 • 3.什么是剂量补偿效应？ • 4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？ • 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ • 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？