实验九 人类X小体、Y小体检测
X小体的检测和多倍体诱发实验
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实验材料： • 口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。 实验器具和药品： • 1.器具：普通显微镜、恒温水浴锅、载玻
片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 • 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红。
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实验步骤：
1.取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除 去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔 两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去， 将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻 片上。
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Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细 胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在 失活状态所致，Morishima等利用放射性标 记的方法证实了失活状态的性染色体与其他 异 染 色 质 （ heterochromatin ） 一 样 ， 在 DNA 复 制 时 总 落 后 于 其 他 常 染 色 质 ， 且 大 多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染 色体数减1。故可以根据X小体的有无、数 目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。
二、实验原理
• 秋水仙碱是细胞有丝分裂的抑制剂，它的主要 作用是抑制纺锤丝微管的形成，因而抑制了染 色体移向两极的运动，使细胞停滞在中期状态 而不能分裂成二个新的子细胞，而秋水仙碱对 染色体结构并无明显的影响，对细胞也不产生 严重毒害，细胞解除秋水仙碱环境后仍可正常 生长分裂，因而出现细胞含有多个染色体组的 情况，亦即构成了多倍体细胞。如果用秋水仙 素处理植物的根尖，则在根尖分生区内可检测 到大量染色体加倍的细胞，若处理植物幼苗的 芽，则可以得到染色体加倍的植株。
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实验原理：
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞 时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染 料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中 都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有 哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一般 认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发 生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色 质，又称为Barr小体。
人类X染色质小体的检测
山东大学遗传学实验人类X染色质小体的检测摘要在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体。
又称X小体，通常位于间期核膜边缘。
本次实验通过对口腔粘膜细胞和毛囊细胞的染色和压片观察，了解X染色质体形成的机理、观察识别巴氏小体的形态特征及所在部位。
前言巴氏小体又称X小体，正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。
巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
Lyon的剂量补偿学说认为，女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。
该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。
体育运动会上的性别鉴定主要采用巴氏小体方法。
材料与方法材料1.实验材料口腔粘膜细胞、毛囊细胞2.实验器具显微镜一台、解剖针、牙签、载玻片、盖玻片、滤纸3.实验试剂硫堇、苯酚品红、HCl、95%的乙醇、无水乙醇、蒸馏水、生理盐水方法1．口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。
室温干燥3-5分钟，用HCl 水解3-5分钟，水洗3次，每次1分钟，再用硫堇染色15-20分钟，水洗一次，显微镜观察，95%的乙醇分色3-5秒。
盖上盖玻片，开始镜检。
染液采用改良苯酚品红染液。
母液Ａ：3ｇ碱性品红，溶于100Ml70％酒精中（可长期保存）。
母液Ｂ：取10ml母液Ａ，加入90ml5％苯酚水溶液。
取45ml母液Ｂ，加入6ml冰醋酸和6ml37％福尔马林溶液，此即为苯酚品红染液。
改良苯酚品红：取2～10ml苯酚品红染液，加入98～90ml45％冰醋酸和1～1.8ｇ山梨醇。
即为所需染液。
染液配制过程中应注意：山梨醇的含量不可过多，以免出现结晶。
实验九人体X-染色质的观察
① 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的；
② 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的；
③ 失活现象发生在胚胎发育的早期。
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3.剂量补偿效应 (dosage compensation)
由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也 称为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞 中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。
Barr小体的数目 ＝ X染色体数目 － 1
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4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）
（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X≠46，XX；47XXY≠46，XY， 这两个不等式是否成立的疑问。
（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但 45，X与47，XXY实际是两种综合症。
实验九 人类X染色质的观察
哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院 遗传学教研室 2010年3月
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一、实验目的
1. 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法； 2. 识别X染色质的形态特征及所在部位。
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Hale Waihona Puke 二、实验原理1. X-染色质的发现
1949年M.L.Barr等研究发现： 雌猫神经元细胞间期核内——凝缩的深染小体。
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三、实验材料、器具和药品
材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。
器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌 牙签等。
药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、 石炭酸品红。
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人类X染色质小体的检测实验报告
实验十二人类X染色质小体的检测实验报告赵宁宁（郭强，赵蔚，赵凯强）生物103班1002040310 2011年11月9日摘要在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，通常称为X染色质小体（或称巴氏小体，性染色质小体，X小体等）。
巴氏小体通常位于间期核膜边缘。
1949年，美国学者巴尔（M.L.Barr）等发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体而雄猫却没有，这表明这种小体与。
在人类，男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性则有1个。
以后研究表明，巴氏小体就是性染色体异固缩（细胞分裂周期中与大部分染色质不同步的螺旋化现象）的结果。
伴随着巴氏小体的进一步研究，科学家们对X染色体失活的研究产生了极大地兴趣。
1.引言学者们对X染色质小体的研究一直没有中断过，而且在逐步地取得着突破，并在遗传学研究中具有着很多重大的意义。
早期的研究因为取材的问题不便而收到限制。
现在制备和观察X染色质小体有两种传统的方法，分别用两种不同的材料。
本次试验利用人类的毛囊细胞作为实验材料制片染色，观察染色质以及X染色质小体。
2．实验材料、器具和试剂每个同学：女生的头发，显微镜，解剖针；载玻片，盖玻片。
每组同学：固定液（95％酒精冰醋酸=3:1，装在染色缸中），蒸馏水;45％醋酸，二甲苯，香柏油，镜头纸；卡包品红染液。
图1 头发及臂毛的结构图3.实验步骤3.1 获取实验材料本次试验所用的实验材料是毛囊细胞。
因男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性细胞中则有1个，所以选取女生的毛囊细胞作为实验材料。
拔取一根毛根比较大的毛发,一般是女生的头发。
尽量选择颜色较浅的或者是白色的头发，这样就可以在制片中减少色素的干扰。
3.2 制片在一张干净的载玻片中央滴一滴45％的醋酸，将毛根浸渍在其中。
静置约5分钟，待毛根稍软后用镊子尖或解剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下。
注意，此时不能用太大力量，否则可能将毛发上的色素细胞一起刮下，影响制片的效果。
实验九 人类染色质体的检测
实验九人类染色质体的检测
一、实验目的
1．了解X染色质体形成的机理；
2．观察巴氏小体的位置和形态并绘制几种巴氏小体；
3．观察男性Y小体的特征。
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、倒置显微镜一台（通用）、冰箱1台（通用）、荧光显微镜一台（通用）干燥箱1台（通用）
2．器械（均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、剪子2、玻片架1、
3．药品（4人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、0.05%吖啶橙（通用）、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、牙签2、口杯1、擦镜纸1本（通用）、
5．材料
口腔上皮细胞
三、实验原理
Lyon假说：
1．哺乳动物雌性动物个体中的2条X染色体必定有一条失活，成异固缩状态——X染色质体；
2．失活的X染色体来源是随机的，可能来自父亲，也可能来自母亲；
3．失活发生在4000~6000个细胞时。
一旦X染色体失活，不再发挥作用。
四、实验步骤
1．X染色质体的鉴定
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→洋红染色20~30min→盖盖玻片→覆滤纸→压片→吸去多余染液→低倍观察→高倍镜下绘图→计算女性中有X染色质体的数目和百分率。
另：可分别拔取男、女各一头发→将发根毛囊细胞涂与干净玻片上，其他方法同上。
2．Y小体的观察
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→滴一滴吖啶橙染液→迅速在荧光显微镜下观察Y小体→绘图
五、作业
1．绘女性X染色质体图
2．计算正常女性具有X染色质体的数目
3．描述Y小体的结构和特征。
9人类性染色质小体的制备与观察
人类在受精后的第16天（受精卵分裂到 5000-6000），植入子宫壁时发生lyon化。
剂量补偿：
由于雌性细胞中的两个X染色体中的一 个发生异固缩（也称Lyon化），失去活性， 这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染 色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物 的量保持在相同水平上。这种效应称为X染 色体的剂量补偿。
➢ 进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人 类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不 仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以 见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色 质。大小在1µm左右，呈三角形、卵形、短棒形 等。
研究发现，间期核内X染色质的数目总是 比X染色体的数目少1。
进一步研究表明： X染色质是一条异染 色质化（兼性异染色质）的X染色体，在间 期复制要比其他的染色体晚。
知识回顾 Knowledge Review
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实验十 人类性染色质小体 的制备与观察
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。
掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别 其形态特征及所在部位，为进一步研究人 体染色体的畸变与疾病提供参考依据。
发现
➢ 1949年，Barr在雌猫的神经元间期细胞核中首 次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没 有。
达，则产生橙黄色毛斑。
Y染色质
正常男性的间期细胞用荧光染料染色后， 在细胞核内可出现一荧光小体，直径为0.3-1μm左右，称为Y染色质。 Y染色质在间期 也呈现异固缩状态。Y染色体长臂远端部分 为异染色质，可被荧光染料染色后发出荧 光。这是男性特有的，女性细胞中不存在。 细胞中Y染色质的数目与Y染色体的数目相 同。
实验四人类X小体、Y小体检测
X小体、Y小体的形态学特征分析
总结词
X小体和Y小体的形态学特征存在明显差 异。
VS
详细描述
X小体通常较大，形状不规则，而Y小体 则相对较小，形态较为一致。此外，X小 体的荧光强度较强，而Y小体的荧光强度 较弱。这些特征有助于区分X小体和Y小 体。
X小体、Y小体的荧光原位杂交技术检测结果分析
总结词
X小体、Y小体的生物学意义
性别决定
X小体和Y小体的存在是性别决定的关键因素之一。男性具有一个X染色体和一个Y染色体，而女性具有两个X染色 体。X小体和Y小体的形成有助于维持性别比例的平衡。
遗传疾病诊断
通过检测X小体和Y小体，可以对某些遗传疾病进行诊断。例如，某些遗传性疾病与X染色体或Y染色体上的基因 变异有关，通过检测这些变异可以诊断疾病。
学习X小体、Y小体的检测方法
X小体检测方法
利用荧光染色技术对间期细胞进 行染色，观察细胞核中呈现的X小 体的数量和形态。
Y小体检测方法
利用荧光染色技术对间期细胞进 行染色，观察细胞核中呈现的Y小 体的数量和形态。
掌握X小体、Y小体检测在临床上的应用
性别鉴定
通过检测X小体和Y小体的数量和形态， 可以确定个体的性别。
肿瘤诊断
某些肿瘤细胞可能存在X小体、Y 小体的异常表达，通过检测这些 异常表达有助于肿瘤的早期发现 和诊断。
遗传性疾病研究
X小体、Y小体的异常可能与某些 遗传性疾病的发生发展有关，通 过检测这些异常有助于深入了解 遗传性疾病的发病机制。
X小体、Y小体检测的未来发展方向
检测技术的改进
随着科技的发展，未来将有更高 效、更准确的检测方法应用于X 小体、Y小体的检测中，提高检
荧光原位杂交技术检测结果显示，X小体和 Y小体在染色体上的定位不同。
形态学实验：人类X小体的检测
➢ 克氏（Klinefelter′s）综合征，先天性睾丸发育不全综 合征，患者为男性但有一个巴氏小体，核型是47，XXY 。
➢ 特纳氏（Turner‘s）综合征，先天性卵巢发育不全综合征， 患者为女性但却无巴氏小体，核型是45，XO 。
➢ 超雌：XXX, XXXY有2个巴氏小体等。
现的个数， 计算X小体的阳性率。 讨论
4.滴片：吸取细胞悬液自10—20cm高垂直向下滴在 一张预冷的载玻片上（2-3滴），标记，空气风干 或烘干。
目的是形成细胞单层，使染色体分散，便于观察，故从高处向下滴片， 让液体分散开，同时用冰片的目的是降低液体的表面张力。
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实验方法
5.水解：玻片放入盐酸缸中，室温水解10min后取 出，自来水细水漂洗数秒钟，洗去多余盐酸，空 气风干或烘干。
2.低渗：加入5ml预热的低渗液，轻轻混匀，37℃ 低渗10min。
低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘 附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形 态。
3.固定： （1）加入新鲜配制的Carnoy固定液1ml，混匀，室
温预固定2min，1000r/min离心8min，弃上清。
取材前需用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用 洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜，为防止后面的 离心损耗，应尽量多取一些。
弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应 小心吸取。
加入低渗液后，轻轻混匀，不能太用力，以防核膜破裂。 固定液使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果。 载玻片于临用前在-20度冰箱中取出，现用现取，以防温
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ12
实验方法
（2）加入固定液5ml，吹打混匀，室温固定15min， 1000r/min离心10min，弃上清。
实验九人类X小体Y小体检测
么用途？ • 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ • 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？
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• Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤 光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y 小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形
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三、实验材料
• 口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。
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四、实验器具和药品
• 1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒 温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙 签、滤纸、纱布等。
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人口腔X小体编辑课件Βιβλιοθήκη X小体的形状编辑课件
2.Y小体的观察
• 取材固定： • 染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%
乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处 理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min， 自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲 液（pH5.4～8.0），覆以盖片。
实验九 人类X小体、Y 小体检测
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一、实验目的
• 掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法， • 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 • 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色
体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗 传病临床诊断提供参考。
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二、实验原理
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜 边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体， 继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一 般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故 而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动 物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状 态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色 体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其 他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。 故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。
人类X染色质小体的检测
山东大学遗传学实验人类X染色质小体的检测摘要在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体。
又称X小体，通常位于间期核膜边缘。
本次实验通过对口腔粘膜细胞和毛囊细胞的染色和压片观察，了解X染色质体形成的机理、观察识别巴氏小体的形态特征及所在部位。
前言巴氏小体又称X小体，正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。
巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
Lyon的剂量补偿学说认为，女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。
该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。
体育运动会上的性别鉴定主要采用巴氏小体方法。
材料与方法材料1.实验材料口腔粘膜细胞、毛囊细胞2.实验器具显微镜一台、解剖针、牙签、载玻片、盖玻片、滤纸3.实验试剂硫堇、苯酚品红、HCl、95%的乙醇、无水乙醇、蒸馏水、生理盐水方法1．口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。
室温干燥3-5分钟，用HCl 水解3-5分钟，水洗3次，每次1分钟，再用硫堇染色15-20分钟，水洗一次，显微镜观察，95%的乙醇分色3-5秒。
盖上盖玻片，开始镜检。
染液采用改良苯酚品红染液。
母液Ａ：3ｇ碱性品红，溶于100Ml70％酒精中（可长期保存）。
母液Ｂ：取10ml母液Ａ，加入90ml5％苯酚水溶液。
取45ml母液Ｂ，加入6ml冰醋酸和6ml37％福尔马林溶液，此即为苯酚品红染液。
改良苯酚品红：取2～10ml苯酚品红染液，加入98～90ml45％冰醋酸和1～1.8ｇ山梨醇。
即为所需染液。
染液配制过程中应注意：山梨醇的含量不可过多，以免出现结晶。
06实验四人类X小体、Y小体检测-文档资料
三、实验材料
口腔粘膜（男、女）、发根细胞（女）
四、实验器具和药品
1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、 盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 2. 药 品 ： 95% 乙 醇 、 乙 醚 、 改 良 碱 性 品 红 、 盐 酸 喹 吖 、 Macllvaine氏缓冲液、石蜡。
五、实验步骤
2.计算出现Y小体的细胞频率。
3.什么是剂量补偿效应？ 4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什么用途？ 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？
荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或油镜观察。整个 细胞发出荧光者不计。
六、实验结果
1.X小体：
油镜下可见 X 小体为一致密 的浓染小体。轮廓清晰，约 1um ，常附着于核膜边缘或 靠边内侧，其形态有三角形、 卵形、扁平形等。 正常女性间期细胞核中 X 小 体比例约 30% ～ 50% ，男性 中则偶验结果
2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发亮的荧
光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下Y小体的出
现率为25～50%，正常女性无，性异常者，如核型 为47，XYY的个体，可见两个Y小体。
七、作业及思考题
1.统计X小体的频率，画2～3个典型细胞，示X小体的形 态和所处部位。
实验四 人类X小体、Y小体检测
一、实验目的
掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法。 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸 变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床 诊断提供参考。
二、实验原理
人类X小体Y小体检测专家讲座
醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处理 20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min，自 来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲液 （pH5.4～8.0），覆以盖片。
• 荧光显微镜检验：用低倍镜，再用高倍镜或
油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。 •
• 1949年Barr和Bertran在研究猫间期神经细胞时，发觉雌猫体细胞核膜边 缘有一个可被碱性染料染色小体而雄猫没有。以后发觉人类正常女性口 腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等细胞中都有一个这么小体，继而有些 人深入发觉全部哺乳动物雌体细胞中都有一样一个小体。普通认为这种 小体是两个X染色体中一个在间期发生异固缩形成，故而将其称为X小 体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细 胞细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处于失活状态所致， Morishima等利用放射性标识方法证实了失活状态性染色体与其它异染 色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其它常染色质， 且大多出现在核膜边缘。性染色质数目是X染色体数减1。故能够依据X 小体有没有、数目来判定胎儿性别和性别畸形。
净牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、 第三次刮取物涂在洁净载玻片上。
• 固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～
30min，空气干燥。
• 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干
燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
• 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重合，无核固缩细胞；
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六、试验结果
• 2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发
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净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、 第三次刮取物涂在干净的载玻片上。
• 固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～
30min，空气干燥。
• 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10～20min（勿使干
燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
• 1.X小体： • 油镜下可见X小体为一致 密的浓染小体。轮廓清 晰，约1um，常附着于核 膜边缘或靠边内侧，其 形态有三角形、卵形、 扁平形等。 • 正常女性间期细胞核中X 小体比例约30%～50%， 男性中则偶尔可见 （2%），且不典型。
六、实验结果
• 2．Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发
亮的荧光小体，直径0.3～0.5um，正常情况下 Y小体的出现率为25～50%，正常女性无，性 异常者，如核型为4思考题
• 1.统计X小体的频率，画2～3个典型细胞，示X 小体的形态和所处部位。 • 2.计算出现Y小体的细胞频率。 • 3.什么是剂量补偿效应？ • 4.Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？ • 5.在制片过程中使用HCl酸解的目的是什么？ • 6.为什么Barr小体一般出现在核膜边缘？
乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇处 理20min；0.5%二盐酸喹吖水溶液染色10min， 自来水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏缓冲 液（pH5.4～8.0），覆以盖片。 • 荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或 油镜观察。整个细胞发出荧光者不计。 •
六、实验结果
• 镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细
胞；并在高倍或油镜下观察。 • 若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一 滴染液后加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。 •
人口腔X小体
X小体的形状
2.Y小体的观察
• 取材固定： • 染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%
三、实验材料
• 口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。
四、实验器具和药品
• 1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒 温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙 签、滤纸、纱布等。 • 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、 盐酸喹吖、Macllvaine氏缓冲液、石蜡。
五、实验步骤
1．X小体的观察
• 取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁
实验九 人类X小体、Y 小体检测
一、实验目的
• 掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法， • 绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 • 鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色 体畸变与疾病的关系提供基础方法、为遗 传病临床诊断提供参考。
二、实验原理
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核膜 边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体， 继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一 般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故 而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺乳动 物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状 态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色 体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落后于其 他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色体数减1。 故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。 • Y小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤 光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y 小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形