扫描电镜样品制备程序

扫描电镜样品制备程序

一、固定：戊二醛-锇酸双固定法

1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜）

2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15-30分钟

3．1%锇酸（试剂3）固定2-4小时

4．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟

二、脱水：乙醇系列

1．30%乙醇15－20分钟

2．50%乙醇15－20分钟

3．70%乙醇15－20分钟

4．80％乙醇15－20分钟

5．90%乙醇15－20分钟

6．95%乙醇15－20分钟

7.100%乙醇两次每次15-20分钟

三、置换：

乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。

四、干燥：

临界点干燥

五、离子溅射金

六、扫描电镜观察

附注：试剂配置

试剂1：2.5%戊二醛

取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9.5mL（B液），混合均匀（即0.2M磷酸盐缓冲液pH7.4），加入10mL浓度为25%的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。

试剂2：0.1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）

A液：0.2M磷酸氢二钠

称取3.561g Na2HPO4.2H2O（或者5.365g Na2HPO4.7H2O）; 或7.164g Na2HPO4.12H2O)，溶于100mL双蒸水中。

B液：0.2M磷酸二氢钠

称取2.760g NaH2PO4.H2O（或者3.121g NaH2PO4.2H2O），溶于100mL双蒸水中。

量取A液36.0mL, B液14.0mL，混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0.1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。

试剂3：1%锇酸

将2%的锇酸溶液与0.1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4）等体积混合，得1%锇酸。

注意：该操作在通风橱中进行。