扫描电镜样品制备程序

扫描电镜制样

扫描电子显微镜(SEM)常规样品制备技术SEM常规制样方法（一）——试样的取材、固定、脱水和置换一、实验目的掌握扫描电镜制样过程：从取材、固定、脱水、置换、干燥、喷涂这一过程中样品怎样保持生活状态，从而得出接近生活状态的样品。

二、实验原理不论动物或植物组织，要求取材时操作必须快速，组织表面要清洁，必要时需超声波清洗，原理同TEM取材，但需强调的是SEM观察表面结构，所以应注意表面结构的清洁、完整和电镜下反应真实的形貌。

取材时动作要快、轻、准、大小在1mm-1cm之间，所用的器械要锋利、洁静，避免任何牵拉和挤揉样品表面的损伤，常用的固定剂有2-4%戊二醛和1%锇酸。

三、实验器材样品（动物或植物）、双面刀片、培养皿、l.5ml离心管、牙签、2-4%戊二醛、1%锇酸、0. 1M PBS缓冲液，乙醇、乙酸异戊酯。

四、实验步骤1、取材要求动作轻、迅速、准确，为了保持生活状态，应在固定前清洗掉表面杂质，即，迅速将标本放在PBS缓冲液中冲洗，也可超声波器中超10s-30s，使样品所带的污物除去（如：气管内壁上的粘液、植物叶上的灰尘等）。

2、固定（前固定）经过清洗的样品迅速投入2-4%戊二醛囤定液中，间歇振荡且室温固定约2-4小时即可。

样品固定的目的：使样品细胞的微细结构完整真实地保存下来。

如果样品没有很好地固定，那么样品在脱水时可能变形，破坏了样品的生活状态，也就是说，固定不好的材料，电镜下不能反映真实结构，所以这一步很重要。

3、冲洗0. 1M PH7.2 PBS缓冲液洗：30分钟中间换3-4次，因戊二醛与锇酸反应生成细微的沉淀，所以在后固定之前，用0. IM PBS缓冲液洗去多余的戊二醛之后，样品才可能进入锇酸固定液。

4、后固定：1%四氧化锇后固定1-2小时。

5、冲洗：重蒸水冲洗30分钟中间换3-4次，因四氧化锇与乙醇反应，所以在脱水前充分洗去残留的四氧化锇，样品才能进行脱水。

6、脱水脱水剂为乙醇，室温进行为了减少人工损伤，需要梯度脱水：30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%，每级15-20分钟，如果是动物样品，脱水时间可5-10分钟，脱水要充分完全地进行直到除尽样品中的水份为止，最后100%乙醇要重复2-3次，保证样品绝对无水。

利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程

利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程一、引言透射电子显微镜是一种高分辨率的显微镜，能够观察到物质的原子结构，广泛应用于材料科学、生物学等领域。

制备透射样品是使用透射电子显微镜进行观察的前提，其中聚焦离子束双束扫描电镜是一种常用的制备工具。

本文将详细介绍利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程。

二、实验步骤1. 样品准备首先需要准备待制备的样品，通常情况下需要将样品切割成薄片或者薄膜。

对于不易切割或者较硬的材料，可以使用机械切割或者离子切割等方法进行处理。

2. 预处理将待制备的样品进行表面清洗和抛光处理，以保证样品表面平整光滑，并且去除可能存在的污染物和氧化物等。

3. 聚焦离子束预处理将经过预处理后的样品放入聚焦离子束双束扫描电镜中，进行聚焦离子束预处理。

该步骤的目的是利用聚焦离子束对样品表面进行刻蚀和清洗，以去除表面污染物和氧化物等，并且形成平整的表面。

4. 制备透射样品在聚焦离子束预处理完成后，需要进行透射样品的制备。

该步骤通常使用聚焦离子束扫描电镜中的离子束切割技术，将样品切割成薄片或者薄膜。

在切割过程中需要控制切割深度和角度等参数，以保证切割出来的样品厚度均匀，并且不会出现断层或者裂纹等缺陷。

5. 透射样品清洗将制备好的透射样品进行清洗处理，以去除可能存在的污染物和氧化物等。

通常情况下可以使用乙醇、异丙醇、甲苯等有机溶剂进行清洗。

6. 透射样品检测制备好的透射样品需要进行检测，以确认其厚度和质量是否符合要求。

通常情况下可以使用扫描电镜或者原子力显微镜等技术进行检测。

7. 透射样品贴片将制备好的透射样品贴在透射电子显微镜的网格上，以便于进行观察。

在贴片过程中需要注意避免产生气泡和皱纹等缺陷。

8. 透射样品观察将贴好的透射样品放入透射电子显微镜中，进行观察。

在观察过程中需要控制电子束的强度和聚焦度等参数，以保证图像清晰度和分辨率。

同时需要避免对样品产生损伤或者烧毁等情况。

三、结论通过以上步骤可以制备出高质量的透射样品，并且利用透射电子显微镜进行高分辨率的观察。

场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤

场发射扫描电镜的样品制备和操作步骤场发射扫描电镜（Field Emission Scanning Electron Microscopy）是一种高分辨率的电子显微镜技术，可用于观察和分析各种材料的表面形貌和微观结构。

为了获得清晰的显微图像，样品制备和操作步骤非常重要。

一、样品制备1. 样品的选择：场发射扫描电镜适用于不同种类的材料，如金属、陶瓷、聚合物等。

选择合适的样品很关键，它应具备研究对象的特性，并且能够承受电子束的辐照。

2. 样品的固定：为了保持样品的形状和结构不变，通常需要将其进行固定。

对于固态材料，可以使用金属夹片或导电胶进行固定。

对于液态材料，可以将其冷冻或凝胶化，以保持其形状。

3. 样品的切割和打磨：有时候，需要将样品切割成适当的尺寸，以便放入样品架中。

这可以通过使用金刚石切割机、电解或机械研磨仪器等设备来完成。

4. 样品的真空处理：在将样品放入场发射扫描电镜前，通常需要将其进行真空处理。

这可以通过将样品放入真空干燥器中、在低压下进行加热或冷冻干燥来完成。

真空处理有助于去除空气中的水分和气体，以减小背景干扰。

二、操作步骤1. 打开电镜系统：在开始操作前，需要将场发射扫描电镜系统打开并进行预热。

预热时间通常需要几十分钟，以保证系统内部达到稳定的工作温度。

2. 放置样品：将样品放置在样品架上，并确保其良好接触。

对于粉末状样品，可以使用导电胶将其固定在样品支架上。

对于固态样品，可以使用金属夹片固定在样品架上。

3. 调整显微镜参数：通过调整电子束能量、聚焦、工作距离等参数，来优化扫描电子显微镜的成像质量。

这些参数的选择取决于样品的特性和所需的分辨率。

4. 开始观察：一切准备就绪后，可以开始观察样品。

通过控制电子束的扫描和探测系统，可以获得样品的表面形貌和微观结构的信息。

在观察过程中，要注意避免样品表面的污染和损坏。

5. 数据分析：场发射扫描电镜获得的图像可以进一步进行数据分析。

可以通过对图像进行增强、测量尺寸和形状、进行结构分析等手段，来得到更详细的样品信息。

(完整)扫描电镜样品制备程序

(完整)扫描电镜样品制备程序扫描电镜样品制备程序一、固定：戊二醛-锇酸双固定法1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜)2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2)清洗3次,每次15-30分钟3．1％锇酸（试剂3)固定2-4小时4．0。

1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟二、脱水：乙醇系列1．30%乙醇 15－20分钟2．50％乙醇 15－20分钟3．70％乙醇 15－20分钟4．80％乙醇 15－20分钟5．90%乙醇 15－20分钟6．95%乙醇 15－20分钟7。

100%乙醇两次每次15-20分钟三、置换：乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。

四、干燥：临界点干燥五、离子溅射金六、扫描电镜观察附注：试剂配置试剂1:2.5%戊二醛取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9。

5mL（B液)，混合均匀（即0。

2M磷酸盐缓冲液 pH7.4），加入10mL浓度为25％的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。

试剂2：0。

1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）A液：0。

2M磷酸氢二钠称取3。

561g Na2HPO4.2H2O（或者5。

365g Na2HPO4.7H2O); 或7.164g Na2HPO4.12H2O），溶于100mL双蒸水中.B液：0.2M磷酸二氢钠称取2。

760g NaH2PO4。

H2O(或者3.121g NaH2PO4。

2H2O），溶于100mL双蒸水中。

量取A液36.0mL， B液14。

0mL,混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0。

1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。

试剂3:1％锇酸将2％的锇酸溶液与0。

1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4)等体积混合,得1％锇酸。

注意：该操作在通风橱中进行。

扫描电镜样品制备

为了提高样品的反差和固定效果，可以用综合固定液，如随意选用戊二醛、多聚甲醛、单宁酸、饿酸等按不同比例混合使用。
3、清洗：对于一些表面凹凸不平较厉害，且粘有许
多杂质的样品，在固定的前后都要进行彻底的清洗，以免影响成像的质量。
三种清洗方法——
(1)蛋白酶消化法：这种方法比较简便，适用于易清洗的样品，步骤如下：
(3)如果图像的质量不行，可以改用导电胶粘样品和适当喷涂。
2、活体样品的直接观察法：对于一些体积较小，且含
水分少的活的昆虫类等样品，如：蚊、螟、蚁、蛾等，也可以省略化学固定等一系列步骤，使之在生活状态下就可用扫描电镜观察。具体步骤如下：
(1)取样：不要碰伤样品。 (2)清洗：用生理盐水或PBS洗1—3次(不要致死样品、清
高锰酸钾后固定脱水：丙酮，叔丁醇、乙腈干燥：自然干燥、真空干燥、液体CO2临界点干燥
法、冷冻干燥法样品的导电处理：金属镀膜法（真AgNO3、醋酸铀、柠檬酸铅、重铬酸钾样品表面离子化或产生导电性金属化合物）
1、临界点干燥
(一)临界点干燥仪的结构——
临界点干燥(Critical Point Drying，CPD)是当前最常用的一种方法。(图)
有多种临界点干燥仪，如：Anderson制作的和田中敬一制作的旧式临界点干燥仪；较新型的日本电子HCP一4、 Bomar SPC、Parr 4770；以及日立HCP—l、HCP一2临界点干燥仪等。(图),
不同的物质有各自的临界点、临界压力和临界密度。物
理实验证明，某物质在其气液面消失的状态下，表面张力作用消失，分子之间的内聚力等于零。
临界点干燥仪的设计就依据了这种物理性质。
2 ．选择干燥剂：
考虑到生物样品有限的承受力，一般要选择低温和低压临界点的干燥剂。

扫描电镜SEM样品制备

主要优点：景深长，所获得的图像立体感强，可用来观察生物样品的各种形貌特征。
二、实验用品
1. 材料
2.
植物的的根、茎、叶或动物的脏器等。
3. 2. 试剂
4.
丙酮、乙醇、2％戊二醛溶液、1％锇酸、
磷酸缓冲液、醋酸异戊酯、液体二氧化碳、导
电胶等。
5. 3. 器材
6.
扫描电镜、临界点干燥法、真空喷镀仪、
6. 样品的干燥
常规临界点干燥法。
临界点干燥法
• 临界点干燥法是一种消除了物相界面(液相／气相)，也就是消除了表面张力来源的干燥方法。这种方法由于没有表面张力的影响，所以样品不易收缩和损伤。具体处理步骤如下：
• 装样：将样品从醋酸异戊酯中挑入(或倒入)样品笼中，用滤纸吸去样品笼外围的醋酸异戊酯，然后连笼移入仪器的样品杯(高压容器)内，盖上盖并拧紧以防漏气。(注：在装样前，应先打开仪器电源，将温度调节设定在0℃处预冷 10～15min，以保证液态二氧化碳有足够量进入样品杯中)。
• 排气：在保持温度不变的条件下(即不关电源)，打开流量计的排气阀门，以1.0～1.51／min的速度排气(速度慢些更好)。约经45～60min后，排气完毕，样品杯的压力下降到零，将温度调节至室温约5rain后，即可取出样品装台镀膜(若不能立即装台，应置于干燥器内保存)。
临界点干燥操作时的注意事项： • 在样品放进样品杯前，样品杯应预先冷却至0～10℃。 • 样品不宜过湿，但也不能让其表面干涸，应在半干半湿时
离子溅射镀膜法:
在低真空中进行辉光放电时，由于离子冲击，阴极金属物质有飞溅现象称为溅射。利用离子溅射仪对样品进行金属镀膜的方法，称为溅射镀膜法。溅射镀膜法的装置很简单，主要由真空部分(真空泵)和溅射部分(真空罩)组成，在真空罩内装有阴极和阳极，阴极对着阳极的一面装有用于溅射用的金属靶(黄金靶、铂靶、白金靶或钯靶等)，样品放在阳极的样品座上面。当真空罩内的真空度抽到10～ 1Pa时，在阴极与阳极之间加上1000～3000V的直流电压，两极之间产生弧光放电的电场。在电场的作用下，罩内残余的气体分子被电离为正离子和电子，正离子被阴极吸引轰击金属靶，激发出金属颗粒和电子，并被阳极吸引附着在样品表面而形成金属导电膜。

环境扫描电镜操作流程

环境扫描电镜操作流程英文回答：Scanning Electron Microscopy (SEM) is a powerful tool used to analyze the surface of materials at a high resolution. It allows us to observe the morphology and topography of samples in great detail. In this response, I will outline the step-by-step process of conducting an SEM analysis.1. Sample preparation: The first step is to prepare the sample for analysis. This involves cleaning the sample and ensuring it is dry. The sample is then mounted onto a conductive sample holder, such as a metal stub, using a conductive adhesive or carbon tape.2. Loading the sample: The sample holder is then placed in the SEM chamber. The chamber is a vacuum environment, so it is important to ensure the sample is properly sealed to prevent air leaks. Once the sample is loaded, the chamberis closed and the vacuum is established.3. Adjusting the parameters: Before starting the analysis, the operator needs to set the appropriate parameters for the SEM. This includes adjusting the acceleration voltage, beam current, and working distance. These parameters will depend on the specific requirements of the analysis and the type of sample being examined.4. Imaging the sample: Once the parameters are set, the operator can start imaging the sample. The electron beam is scanned across the sample surface, and the secondary electrons emitted from the sample are collected and used to generate an image. The operator can adjust the magnification and focus to obtain the desired level of detail.5. Analyzing the results: After capturing the images, the operator can analyze the data. This may involve measuring the dimensions of features, identifying the composition of different areas, or studying thedistribution of elements. Specialized software can be usedto enhance the images and perform quantitative analysis.6. Reporting and interpretation: Finally, the results of the SEM analysis are reported and interpreted. The operator may need to provide a detailed description of the sample, explain the significance of the findings, and draw conclusions based on the observations. The results can be used in various fields, such as materials science, biology, and forensics.中文回答：环境扫描电镜（SEM）是一种用于高分辨率分析材料表面的强大工具。

扫描电镜细胞样品制备步骤

扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。

首先呢，得把细胞好好地收集起来。

这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。

咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。

这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。

接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。

不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。

这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。

最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。

扫描电镜基本操作

扫描电镜基本操作扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，可以对样品表面进行扫描，获得高清晰度、高放大倍数的图像。

下面将介绍扫描电镜的基本操作流程。

1.准备工作：a.打开电镜室门，确保电镜室的温度和湿度处于适宜范围内。

b.穿戴好实验室所需的个人防护装备，如手套、护目镜和实验服等。

c.打开电镜主机的电源，等待电镜系统启动完成。

2.样品制备：a.选择适当的样品，并将其切割成小块，大小约为2-5毫米。

b.将样品固定在样品架上，并使用导电胶固定好。

c.将样品架放入样品台的样品仓中，并调整好样品的位置。

3.调节参数：a. 调节电子束对准仪（Electron Beam Alignment）：使用电子束对准仪对电子束进行调节，使其准直，并使束斑圆形对称。

b.调节电镜放大倍数：根据样品的大小和需要的分辨率，选择合适的放大倍数。

c. 调节工作距离（Working Distance）：调节样品与电子枪的距离，以获得最清晰的图像。

4.图像获取：a. 打开电子枪（Electron Gun）和电子镜（Objective Lens），调节电子束的亮度和对比度，使图像清晰可见。

b.调节扫描线圈和透镜电流，根据需要调整图像的聚焦和深度。

c.使用电子束扫描样品表面，通过检测电子的散射信号，生成图像。

d.调整扫描速率和扫描模式，以获得更多的图像细节。

5.图像处理：a.将图像转移到计算机上，进行存储和分析。

b.使用图像处理软件对图像进行增强、增加对比度、调整亮度等操作，以改善图像质量。

c.使用测量工具对图像中的尺寸、表面形貌等进行检测和分析。

6.清洁和保养：a.使用真空泵或气体吹枪等清理系统内的灰尘和杂质，以保持显微镜的清洁。

b.对电子枪和电子镜等关键部件进行定期维护和清洁，以保证其正常运行和寿命。

以上是扫描电子显微镜的基本操作流程。

在实际操作中，还需要根据具体的样品和要求进行一些细微的调整和处理。

电镜检测流程

电镜检测流程引言：电子显微镜（electron microscope，简称EM）是一种利用电子束代替光束进行成像的显微镜。

相比光学显微镜，电子显微镜具有更高的放大倍数和更高的分辨率，因此在各个领域都有广泛的应用。

本文将介绍电镜检测的基本流程，以及常见的几种电子显微镜的类型。

一、样品制备在进行电镜检测之前，首先需要对待检样品进行制备。

样品制备的目的是使样品具备透射电镜或扫描电镜观察的条件。

1. 透射电镜样品制备：透射电镜需要制备非常薄的样品，通常要求样品厚度在100纳米以下。

常用的样品制备方法包括切片、薄膜法、冷冻法等。

切片法是将样品切成薄片，然后使用特殊的工具将薄片转移到铜网或碳膜上。

薄膜法是通过蒸发或溅射等方法在网格或碳膜上制备一层薄膜，然后将样品放置在薄膜上。

冷冻法是将样品冷冻至极低温，然后通过切片机将样品切成薄片。

2. 扫描电镜样品制备：扫描电镜对样品的制备要求相对较低，通常只需要将样品固定在导电底座上，并进行金属镀膜以增加导电性。

常用的固定方法包括化学固定、冻干法和浸渍法。

金属镀膜通常使用金或金-铂合金进行镀膜。

二、电镜操作步骤电镜检测的操作步骤包括样品安装、对焦调节、电子束参数设置、图像获取等。

1. 样品安装：将样品安装在电镜样品台上，并确保样品与电子束的路径对齐。

透射电镜需要将样品安装在透明的网格或碳膜上，而扫描电镜则将样品安装在导电底座上。

2. 对焦调节：通过调节透射电镜的对焦环，或者调节扫描电镜的工作距离，使样品处于最佳对焦状态。

对焦时需要根据样品的特点和检测要求进行调节。

3. 电子束参数设置：根据样品的性质和检测要求，设置透射电镜或扫描电镜的电子束参数。

透射电镜的参数包括透射电镜的加速电压、聚焦电流和透射电镜的模式等；扫描电镜的参数包括扫描电镜的加速电压、孔径和扫描速度等。

4. 图像获取：根据样品的特点和检测要求，选择合适的检测模式，并进行图像获取。

透射电镜可以通过透射模式获取样品的内部结构信息，而扫描电镜可以通过扫描模式获取样品表面的形貌信息。

sem生物样品制备步骤

sem生物样品制备步骤
SEM（扫描电子显微镜）是一种高分辨率的显微镜，常用于观察生物样品的微观结构。

生物样品制备是SEM观察的关键步骤之一，以下是一般的生物样品制备步骤：
1. 固定样品，首先，生物样品需要被固定以保持其原始结构。

常用的固定剂包括乙醛、戊二醛或glutaraldehyde等。

固定样品的方法可以根据具体的样品类型而有所不同。

2. 脱水，固定后的样品需要被脱水以去除水分，通常使用酒精逐渐替代水分。

这个过程需要逐渐提高酒精浓度，最终将样品置于无水酒精中。

3. 干燥，脱水后的样品需要被干燥以去除残留的溶剂。

常用的干燥方法包括自然干燥、临界点干燥或者冻干等。

4. 样品制备，干燥后的样品需要被切割、切片或者表面处理以展示所需的结构。

这可能涉及到金属喷镀以增加导电性，或者使用特殊的切割技术。

以上是一般的SEM生物样品制备步骤，不同类型的生物样品可能需要特定的处理步骤。

在进行SEM观察之前，样品制备的质量对于最终观察结果至关重要。

希望这些信息能够帮助到你。

扫描电镜实验报告

扫描电镜实验报告一、背景介绍扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种常用于观察材料表面形貌的高分辨率显微镜。

与光学显微镜不同，SEM使用电子束来对样品进行扫描，从而获得样品表面的高清晰度图像。

本文将对扫描电镜实验进行详细描述和分析。

二、实验目的本次实验的目的是研究和观察不同样品的表面形貌及其微观结构。

通过使用扫描电镜，我们可以进一步了解材料的性质和特征，并为后续的研究工作提供有力的支持。

三、实验步骤1. 样品制备：将待观察的样品进行必要的处理，例如切割、研磨、涂覆导电剂等，以保证样品的表面光滑且导电性良好。

2. 装备样品：将处理完成的样品放置在SEM样品台上，固定好并调整角度，确保样品表面垂直于电子束的入射方向。

3. 调整参数：根据不同样品的特性和需求，调整加速电压、放大倍数、探头电流等参数，以获得最佳的图像质量。

4. 扫描观察：打开SEM仪器，开始对样品进行扫描观察。

电子束在样品表面扫描时，与样品表面相互作用，产生二次电子信号，这些信号被探测器接收并转换成图像。

四、实验结果与分析在本次实验中，我们观察了不同样品的表面结构，并获得了一系列高分辨率的SEM图像。

以一块常见的金属材料——铝为例，通过SEM观察，我们可以清晰地看到铝表面的微观结构。

观察结果显示，铝表面呈现出许多沟槽和凸起的特征，这些特征是铝晶粒的显著标记。

SEM图像还揭示了铝表面的晶粒大小和分布情况，有助于我们进一步研究金属的力学性质和形变行为。

同样，我们还观察了纳米颗粒的表面形貌。

SEM图像显示，纳米颗粒具有较大的表面积和丰富的形态结构，这使得纳米颗粒在催化剂、材料科学等领域有着广泛的应用价值。

通过SEM观察，我们可以研究纳米颗粒的大小分布、形状特征以及粒子间的相互作用，为相关研究提供了重要的依据。

五、实验的意义与应用前景扫描电镜作为一种重要的表征工具，在材料科学、生物学、纳米技术等领域具有广泛的应用和重要意义。

扫描电镜的样品制备

3。

1 试样制备技术试样制备技术在电子显微术中占有重要的地位，它直接关系到电子显微图像的观察效果和对图像的正确解释。

如果制备不出适合电镜特定观察条件的试样，即使仪器性能再好也不会得到好的观察效果.和透射电镜相比,扫描电镜试样制备比较简单。

在保持材料原始形状情况下，直接观察和研究试样表面形貌及其它物理效应（特征），是扫描电镜的一个突出优点。

扫描电镜的有关制样技术是以透射电镜、光学显微镜及电子探针X射线显微分析制样技术为基础发展起来的，有些方面还兼具透射电镜制样技术，所用设备也基本相同。

但因扫描电镜有其本身的特点和观察条件,只简单地引用已有的制样方法是不够的.扫描电镜的特点是：①观察试样为不同大小的固体（块状、薄膜、颗粒），并可在真空中直接进行观察。

②试样应具有良好的导电性能,不导电的试样，其表面一般需要蒸涂一层金属导电膜。

③试样表面一般起伏（凹凸）较大。

④观察方式不同,制样方法有明显区别。

⑤试样制备与加速电压、电子束流、扫描速度（方式）等观察条件的选择有密切关系。

上述项目中对试样导电性要求是最重要的条件.在进行扫描电镜观察时，如试样表面不导电或导电性不好，将产生电荷积累和放电，使得入射电子束偏离正常路径，最终造成图像不清晰乃至无法观察和照相。

3。

1。

1 块状试样制备1．导电性材料导电性材料主要是指金属,一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。

这类材料的试样制备最为简单.只要使试样大小不得超过仪器规定（如试样直径最大为φ25mm,最厚不超过20mm等)，然后用双面胶带粘在载物盘，再用导电银浆连通试样与载物盘（以确保导电良好）,等银浆干了（一般用台灯近距离照射10分钟，如果银浆没干透的话，在蒸金抽真空时将会不断挥发出气体，使得抽真空过程变慢）之后就可放到扫描电镜中直接进行观察。

但在制备试样过程中，还应注意：①为减轻仪器污染和保持良好的真空，试样尺寸要尽可能小些。

②切取试样时，要避免因受热引起试样的塑性变形，或在观察面生成氧化层。

细胞扫描电镜样品制备流程

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金属扫描电镜的制样流程

一、金属样品制备扫描电镜试样样品要求：样品不宜过大，过大的试样需要进行切割操作，切割后的样品经研磨、抛光和腐蚀后便可放到扫描电镜中直接进行观察。

切割设备：金属的切割设备选用沈阳科晶自动化设备有限公司生产的型号为SYJ-200外圆切割机，该设备切割金属时切割速度快，切割后的金属表面无热灼伤，表面形态好。

耗材：用来切割金属的一般有SiC锯片（一般切割有色金属）、刚玉锯片（一般切割黑色金属）、全烧结金刚石锯片（适用于绝大多数材料）切割辅助设备：沈阳科晶自动化设备有限公司生产的MTI-3040加热平台，该设备操作简单，温度≤200℃。

耗材：陶瓷树脂衬垫、石蜡试样的镶嵌：沈阳科晶自动化设备有限公司生产的型号为CXQ-2500真空冷镶嵌机、HXQ-50自动热镶嵌机、XQ-2B金相试样镶嵌机都可以作为金相实验镶嵌的设备。

耗材：镶料：胶木粉（热镶嵌）；水晶胶、硬性冷镶模、软性冷镶模、弹性样品夹（冷镶嵌）样品的磨抛：沈阳科晶自动化设备有限公司生产的手动研磨抛光机型号有UNIPOL-820、UNIPOL-830、UNIPOL-1210三种。

自动精密研磨抛光机型号有UNIPOL-810、UNIPOL-802、UNIPOL-1202、UNIPOL-1502四种。

自动压力研磨抛光机型号有UNIPOL-1000D、UNIPOL-1200S、UNIPOL-1200M、UNIPOL-800M、UNIPOL-1260五种。

及双面研磨抛光机UNIPOL-160D一种。

耗材：砂纸、金刚石磨片、树脂基金刚石磨片、研磨纸、研抛底片、磨料、抛光垫、抛光液、抛光膏、磁力橡胶样品的清洗：沈阳科晶自动化设备有限公司生产的适用于金相试样清洗的超声波清洗机的型号有VGT-1620QTD、VGT-1620TD两种。

样品表面喷金和蒸碳：沈阳科晶自动化设备有限公司生产的GSL-1100X-SPC-15E-LD小型蒸镀仪，GSL-1100X-SPC-16C溅射蒸镀膜仪是电镜实验室喷金和蒸碳常用的最佳设备。

扫描电镜样品制备方法

扫描电镜样品制备方法一、取材组织块小于3立方毫米（单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上）。

二、固定前固定：2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时或更长时间。

用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。

三、脱水＊脱水在4度冰箱内进行，所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中进行，冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。

＊整个过程，样品不要暴露于空气。

1.乙醇脱水，每一级10-20分钟：30%乙醇—50%乙醇—70%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—100%乙醇；2.然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇，纯叔丁醇每次10分钟，3次以上；此系列操作均在25度环境中进行；3.纯叔丁醇4度冰箱过夜，样品结晶。

四、冷冻干燥＊需事先预约冷冻干燥时间；第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干燥。

五、喷金附件1：细菌类样品的前处理方法1.盖玻片泡酸，清洗，烘干。

用剪刀剪碎，挑出5mm*5mm大小玻片备用。

玻片过大或者过厚影响观察效果。

2.菌液或样品悬液离心，需要可进行清洗，加入固定液，吹散固定，于4度冰箱固定2小时左右。

3.固定结束后，去固定液，加入PBS浸泡清洗，10分钟。

离心去PBS，固体沉淀根据量多少，加入适量PBS，制成浓度较高的悬液（目测较混浊）。

样品浓度对后期吸附有较大影响，浓度过低可能吸附量会很少。

4.取鸡蛋清，稀释3-5倍（一定要稀释！蛋清过浓会包裹样品），之前准备好的玻片放入液体内蘸一下，取出晾干至触摸感觉有点黏的状态（快干的状态）。

将第3步取得的悬液滴在玻片上，吸附30秒到1分钟，用滤纸吸去多余液体。

（样品悬液在玻片上停留时间过长将导致样品被蛋清完全包裹而无法观察）。

5.在玻片上滴加固定液，固定10分钟，固定后用PBS浸泡清洗10分钟，放入干燥杯开始进行脱水。

磷酸盐缓冲液(PBS)a.磷酸盐缓冲液（0.2M）甲液：0.2M的磷酸氢二钠溶液乙液：0.2M的磷酸二氢钠溶液Na2HPO42H2O 35.61g (Na2HPO47H2O) 53.65g (Na2HPO412H2O) 71.64g NaH2PO4H2O 27.60g ( NaH2PO42H2O) 31.21g加蒸馏水溶解成1000ml 加蒸馏水溶解成1000ml按下表混合甲、乙两液既得所需pH的0.2M缓冲液0.2M磷酸盐缓冲液的配制将溶液用蒸馏水1：1稀释，则配得0.1M的缓冲液。

扫描电镜流程

扫描电镜样品制备流程
1.样品准备与固定（实验室完成）
a)固体培养样品：在固体琼脂平板上培养至合适阶段，用刀片切5mm*5mm大小样
品2至4块，置于预冷的2.5%戊二醛-PBS溶液中，4℃固定2小时以上或过夜；
b)液体培养样品：在液体培养基中摇培至合适阶段，离心去上清，加入预冷的2.5%
戊二醛-PBS溶液，轻轻弹起混匀，4℃固定2小时以上或过夜；
2.样品梯度脱水（实验室或平台）
a)准备50%，70%，85%，95%，100%乙醇溶液；
b)梯度脱水操作：
i.固体样品可以直接置于2ml EP管中操作，液体样品离心后去上清，将样品取
出置于滤纸中包好；
ii.分别用50%，70%，85%，95%乙醇脱水15分钟；
iii.用100%乙醇脱水3次；
3.样品超临界流体干燥（平台）
4.样品喷金（平台）
5.扫描电镜观察（平台）。

扫描电镜制样步骤(样品小于1cm

扫描电镜制样步骤
生物样品（如动植物、细胞）需进行1-7步骤的操作（耗时长）
干燥的非导电样品（如花粉、制剂粉末、塑料等）无需进行1-5步骤操作而粘于样品台喷金再于电镜观察即可
导电样品（如金属样品）直接粘于样品台电镜观察，无需1-7步
注：取材时所需2.5%戊二醛溶液、0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液需自行配置，配方详见《电镜固定液、缓冲液、染液配方》
送样前请先与我们联系以安排时间在我处制样。

生物样品制样耗时，请安排好个人时间
生物样品（小于1cm3）于2.5%戊二醛溶液4℃固定过夜，再按下列步骤操作：
1、漂洗：弃去戊二醛固定液，用0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液漂洗3次，每次15min
2、1%饿酸固定1-2h（通风厨操作）
3、漂洗：弃去饿酸固定液，用0.1M PH7.0磷酸盐缓冲液漂洗3次，每次15min
4、梯度洗脱：50%、70%、80%、90%、95%系列浓度的乙醇溶液梯度脱水各15min，
再用100%的乙醇脱水2次每次20min
注：样品较大延长脱水时间
5、乙醇：醋酸异戊酯=1:1（V:V）处理30min，再用纯醋酸异戊酯处理1-2h
注：通风厨操作
相容性较差，需用醋酸异戊酯置换
乙醇、丙酮等脱水剂与CO
2
6、自然干燥/临界点干燥（英国EMTIECH K850）
7、日立E1010型离子溅射仪喷金30s，利用导电碳胶将样品固定于样品台，调节样品台高度，
8、日立S-3000N扫描电镜观察。

仪器操作流程扫描电子显微镜的样品制备步骤

仪器操作流程扫描电子显微镜的样品制备步骤仪器操作流程扫描电子显微镜的样品制备步骤扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，广泛应用于材料科学、生命科学、纳米技术等领域中的表面形貌和成分分析。

在使用SEM之前，样品的制备步骤十分重要，本文将介绍扫描电子显微镜样品制备的流程。

步骤一：样品选择和切割首先，根据实验需求选择合适的样品。

样品可以是均匀材料的薄片，也可以是复杂材料的小块或碎片。

对于均匀材料，可以使用切割机或者砂轮切割机将样品切割成适当大小的薄片。

对于复杂材料，可以使用砂纸和十字锯来切割。

切割时要注意选择合适的切割液、切割速度和切割角度，以避免样品损坏和变形。

步骤二：样品固定将切割好的样品放入合适的试管或者样品架中，使用合适的固定剂将样品固定。

常用的固定剂有蜡、树脂和聚合物等。

固定剂的选择要根据样品的性质和实验需求来确定。

对于坚硬的材料，可以使用聚合物来固定，对于易破碎的材料，可以使用蜡或树脂来固定。

步骤三：样品研磨和抛光为了获得平滑的样品表面，需要对样品进行研磨和抛光。

首先，使用粗砂纸或者砂轮对样品进行研磨，去除表面的粗糙度和切割痕迹。

然后，使用逐渐细化的砂纸或研磨液对样品进行抛光，直到获得所需的光洁度和平整度。

在抛光过程中，要注意使用合适的抛光液和抛光时间，避免过度抛光导致样品表面变形或者损坏。

步骤四：样品清洁抛光完成后，需要对样品进行清洁，以去除表面的杂质和污染物。

首先，使用去离子水或酒精将样品浸泡，去除表面的油脂和有机物。

然后，使用超声波清洗仪将样品进行超声波清洗，以去除较为顽固的污染物。

最后，用去离子水将样品冲洗干净，并用氮气吹干。

步骤五：导电涂层扫描电子显微镜需要样品具有良好的导电性能，因此需要对样品进行导电涂层。

常用的导电涂层材料有金、铂、银和碳等。

涂层可以使用喷雾法、溅射法或者真空蒸镀法来完成。

涂层过程中要注意涂层均匀度和厚度的控制，以确保样品的导电性能和显微观察效果。