大环内酯类抗生素理化检测方法

大环内酯类抗生素理化检测方法

大环内酯类抗生素(macrolide antibiotics，MALs)是由放线杆菌或小单孢菌产生的一类抗生素。近年来，该类药物被广泛应用于畜禽、水产养殖业中。已成为全世界需求量和销售速度增长最快的抗生素之一。大环内酯类抗生素在结构上都具有大环内酯环，如红霉素、麦迪霉素、乙酰螺霉素、阿奇霉素等。由于MALs 具有广谱抗菌作用，可抵抗革兰氏阳性菌、支原体菌属和部分革兰氏阴性菌，因此被广泛应用于治疗猪、牛、羊、虾及家禽的呼吸性和肠道传染性疾病，或作为饲料添加剂促进动物生长发育。本文主要对MALs残留分析中理化检测方法进行了综述。

一、光度法

现行的“卫生部药品标准”与地方标准和常用对于大环内酯类抗生素所采用的鉴别反应一般都是硫酸显色分光光度法和紫外分光光度法。

1、薄层-紫外分光光度法

该法以正己烷-丙酮(V(正己烷)/V(丙酮)=7/3)作展开剂，在HF254 硅胶板上点样展层后，刮取有效斑点，用甲醇溶出，测定的244nm 处吸光度，与标准曲线对照求出其含量，工作曲线在10～60μg 范围内线性良好，相关系数r = 0.9996，平均回收率在99.8%，变异系数小于0.6%。该方法操作较简便，快速、准确。

2、荧光光度测定法

在硫酸存在下，四价铈的氧化物与MALs类抗生素发生反应，还原成三价铈，分别在255nm 和348nm 处测三价铈的荧光，在42.6～1200ng/mL 浓度范围内成线性关系，标准加入法测得抗生素的回收率为97.7%～100.9%。

3、电荷转移分光光度法

本方法主要针对罗红霉素的测定。罗红霉素与紫色素在乙醇介质中发生电荷转移反应，电荷转移络合物在544 nm 处有最大吸收；该络合物的组成为1/1，稳定常数是3×104。药物浓度在0～120mg/L 范围内服从朗伯比尔定律，

ε=6.56×103L·mol-1·cm-1。

4、差示分光光度法

本方法主要针对红霉素的测定。此方法利用红霉素在碱性条件下反应产物的紫外吸收特征，波长为235nm，结果红霉素在8～80mg/L 浓度范围内与吸收度呈良好

的线性关系。此法快速、简便、准确，适用于医院制剂分析。

二、化学方法

1、薄层色谱法（TLC）

TLC是20世纪50年代发展起来的一种色谱技术，具有操作简单、应用性广、灵敏度高、快速和检验成本低的特点，特别适用于无紫外吸收的杂质的检测。现经过改进的TLC采用有利于推广的以甲苯-无水甲醇-吡啶(V(甲苯)/V(甲醇)/V(吡

啶)=14/2/1)为展开剂、硅胶H-CMC-Na 薄层板、碘熏回视显色的方法进行测定。

2、毛细管电泳法（CE）

CE是20世纪80年代中后期迅速发展起来的一类以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，具有高效、样品及耗溶剂少、成本低。分析快速等优点。该方法也逐渐应用于MAL的分析当中。

三、气相色谱-质谱法

MALs的分子量较大。且极性较高。上机前为了降低待测物的极性、提高质谱检测的灵敏度。必须经过衍生化处理。由于操作繁琐．该方法在MALs分析中的应用也不多见。

采用电喷雾离子化源，正离子检测方式对各主要成分进行一级全扫描，将对应的准分子离子峰进行二级全扫描质谱分析，通过与对照品的色谱和质谱行为对比，以对MALs残留进行分析。

四、高效液相色谱法

由于MALs具有发光团。多数具有较强的UV吸收。因此可用紫外检测器(UV)包括二极管阵列检测器(DAD)对其进行检测。目前该方法已成为大多数实验室MAL残留检测的常用方法。以下为HPLC 法对大环内酯类抗生素的分析。

五、结语

综上所述，可以看出，对大环内酯类抗生素的分析领域越来越广泛，分析手段也逐渐复杂，分析抗生素的种类也趋于多样化，可以预见，随着人们各种安全意识的增强，以及现代仪器自动化和联用技术的发展、普及和完善，对大环内酯类抗生素的分析研究也将会增加，而且必将趋于更加简单、快捷、灵敏和高效。