磁珠提取DNA原理

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磁珠纯化DNA原理1.DNA与磁珠作用原理）的分离纯化方分选磁

珠的作用原理是基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）、以及盐离子等，在、聚乙二醇（PEG法。磁珠体系中一般包含：磁珠、DNA（即DNA可吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面一定浓度的PEG和盐离子环境中，分子可以被洗脱回固相载体），该过程是可逆的，在适当条件下，结合的DNA收。

纳米级别的磁珠表面性质不同，分离原理也不尽相同，但基本上固态的球状第最内层的核心是聚苯乙烯、材料组成并无太大差异，基础结构一般分为3层，O）修四氧化三铁（Fe），最外层表面是羧基（-COOH二层包裹磁性物质——43饰的高分子材料所构成，其中羧基行使与核酸结合的工作。

DNA回收的决定性因素（其他因素还包括DNA在整个体系中，PEG是影响存在条件PEG大小和浓度、盐离子浓度、孵育时间等等）。DNA在一定浓度的发生脱水反应，分子构象会发生急剧变NaCl或MgCl促进条件下，使DNA下，2分子量、浓度以PEG化，由线状被压缩形成卷曲球状，继而聚集沉淀，同时随可以被选择性的沉淀出来。在磁珠体系中，DNA及盐浓度的不同，不同长度的的分子DNA 的功能主要是与盐离子共同作用，特定分子量的PEG改变不同长度构象，同时增加体系的粘稠程度，使磁珠存在其中处于悬浮状态，不易沉降，增除此加磁珠在空间位置的碰撞与排斥，从而增加核酸与磁珠的聚集效率与效果，与蛋白质具有相容性，也可去除样品中的蛋白质。PEG之外，

，因脱水作用而发生分子构象改变后，当处于PEGDNA和盐离子环境中的与表面带负电荷的羧基磁珠结会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，1 / 2

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合，但如何解释负负电荷之间的作用，目前还不得而知。但普遍认为，这是由于

+）。带负电的磷酸基团借由解离的盐离子（如Na带正电荷的盐离子的作用（如Na+和盐PEG）与羧基形成离子桥，使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。当，

解除其三者之间的离子DNA类被去除之后，加入水性分子，会快速充分水化被纯化出来。DNA相互作用，使得吸附到磁珠的

磁珠的出现，使得核酸制备的实验可以实现自动化，同时相较于传统的回收磁珠的承载量DNA为例，1μL3方式，还具有个明显的优势：1）效率更高，以操作简单，3）更加安全；；2）避免使用有机溶剂，如酚类、氯仿等等，可达7μg

无需离心，也更有利于保留核酸的完整性。

K的作用2.蛋白酶而细胞膜主要是由蛋白质构成的富有弹性的K具有降解蛋白的功能，蛋白酶能够释放出来。半透性膜，因此蛋白酶K能够裂解细胞，从而DNADNA

无水乙醇沉淀3.

的方法。乙醇的优点是DNA 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀因此乙醇与核酸不会起任何化学反应，可以任意比和水相混溶，对DNA很安全，失水而周围的水分子，使DNADNA是理想的沉淀剂。当加入乙醇时，乙醇会夺去易于聚合。DNA

4.TE缓冲液溶解，不存）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris 采用

Tris-HCl（pKa=8.0系统，并Tris-HCl在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用 EDTA更能稳定DNA的活性。TE且缓冲液中的 DNA时，还要加少量的异戊酵？为什么用酚与氯仿抽提5.

这时在混合液内易时，在抽提DNA为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，所气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，产生气泡，使离心后的上层水相，以能减少抽提过程中的泡沫产生。同时异戊醇有助于分相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。2 / 2