乙肝疫苗生产发展简介
乙肝疫苗的“前世今生” 从“澳抗”
乙肝疫苗的“前世今生”从“澳抗”到乙肝疫苗在20世纪六七十年代，如果一个人被告知“澳抗”阳性，则无异于一声惊雷，甚至意味着大祸临头，因为这表示他感染了乙肝病毒。
北京生命科学研究所资深研究员、清华大学生物医学交叉研究院教授李文辉博士因在推动乙肝科研和治疗方面作出的杰出贡献，荣获全球乙肝研究和治疗领域最高奖——巴鲁克布隆伯格奖。
这是迄今为止，我国科学家首次获此殊荣。
听到乙肝，大家可能会想到我们都接种过的乙肝疫苗。
但对于“澳抗”这个词，当下的一些年轻人可能比较陌生了。
在20世纪六七十年代，如果一个人被告知“澳抗”阳性，则无异于一声惊雷，甚至意味着大祸临头，因为这表示他感染了乙肝病毒。
那么到底什么是“澳抗”呢？惊喜，“澳抗”的发现自从20世纪40年代发现血液能传播乙型肝炎后，医学家们就开始寻找引起乙肝的病原微生物，但是花了20多年的时间仍没有结果。
1963年，巴鲁克·塞缪尔·布隆伯格（Baruch Samuel Blumberg）博士在筛选血样时偶然发现，一位血友病患者的血清可以与一位澳大利亚土著人的血清发生反应。
于是他就把存在于后者血清中的这种神秘物质称为“澳大利亚抗原”（Australia antigen，简称“澳抗”）。
在当时，澳抗的实际意义尚不得而知。
通过进行更多的实验后，布隆伯格等人在1966年底发表论文，提出澳大利亚抗原与急性病毒性肝炎之间有密切关系，可能通过输血传染。
由于这个发现，他与丹尼尔·卡尔顿·盖杜谢克一起获得了1976年的诺贝尔生理学或医学奖。
众所周知，肝炎是肝脏炎症的统称，可由病毒、细菌、化学毒物、酒精等多种致病因素所引起。
病毒性肝炎对人类健康危害最大，目前已确定的肝炎病毒有五型，甲型和戊型主要表现为急性肝炎，乙型、丙型、丁型主要表现为慢性肝炎，并且可发展成肝硬化和肝癌。
澳大利亚抗原的发现为后来乙肝疫苗的发明奠定了基础，但当时的医学界并不知道这种抗原属于什么病毒。
乙肝疫苗终板
一、乙肝疫苗的研究历史及现状 (2)〔一〕乙肝疫苗产生原因 (2)〔二〕乙肝疫苗的发展历程 (2)1.血源性疫苗 (3)2.重组乙肝疫苗 (3)3.联合疫苗治疗性疫苗 (3)〔三〕乙肝疫苗研究现状 (3)曾在国内外广泛用于乙型肝炎预防的血源性乙型肝炎疫苗，因血源供给有限及具有潜在的危险性，被重组乙肝疫苗所取代，其技术成熟，安全系数较高，而研究较热门的是联合疫苗治疗性疫苗。
(3)1.基因工程疫苗 (3)2.蛋白工程疫苗 (3)1〕亚单位疫苗 (3)2〕免疫复合物型疫苗 (4)3〕多肽疫苗 (4)3.细胞疫苗 (4)二、乙肝疫苗的研究方法及技术路线 (4)三、乙肝疫苗的竞争公司及专利 (5)四、乙肝疫苗存在的问题、难题及优化改良 (5)〔一〕疫苗的注射剂量量及正确接种意识差不标准。
(5)〔二〕疫苗全程覆盖率有待提高。
(5)〔三〕临床试验不标准，不良反应有待完善。
(5)〔四〕加强科研的进行。
(5)乙肝疫苗摘要：乙型病毒性肝炎由乙肝病毒(HBV)引起，它的特点是起病缓慢，多数无症状，其中有三分之一的人有肝损害症状。
目前乙肝的传播途径有母婴传播、医源性传染、输血传播、密切生活接触传播、性传。
乙肝疫苗是一种预防乙型肝炎的疫苗。
即从乙型肝炎病毒携带者血浆中别离乙肝外表抗原(HbsAg)，经处理后而制成。
乙肝疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力。
据估计全世界至少有3.6亿慢性乙肝病毒感染者。
我国约有1.3亿人是乙肝病毒携带者，乙肝病人约有3000万。
对乙型肝炎预防和治疗的研究具有重大的经济效益和社会效益。
然而人们对乙肝疫苗认识并不清晰，了解甚少。
关键词：乙肝疫苗研究历史及现状研究方法及技术路线竞争公司及专利存在问题及优化改良解决方案随着社会的发展，生活水平的提高，人们的健康意识已越来越强，不管是在饮食上还是在锻炼上都在努力着，但在一些预防上有些欠缺。
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞ຫໍສະໝຸດ 4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
2024年乙肝疫苗市场发展现状
2024年乙肝疫苗市场发展现状引言乙肝病毒感染是全球范围内重要的公共卫生问题，乙肝疫苗作为预防乙肝病毒感染的主要手段之一，在市场上具有重要地位。
本文旨在探讨当前乙肝疫苗市场的发展现状，并分析其相关的影响因素。
乙肝病毒感染的背景乙肝病毒感染是由乙型肝炎病毒引起的一种传染病，主要通过血液传播、母婴传播以及性传播等途径传播。
长期乙肝病毒感染可导致肝硬化、肝癌等严重并发症，对个体和社会健康造成严重影响。
乙肝疫苗的发展历程乙肝疫苗的研发和应用在过去几十年中取得了重要进展。
1970年代初，首个乙肝疫苗问世，标志着乙肝疫苗的研究和应用进入了新阶段。
随后，乙肝疫苗技术逐渐完善，疫苗的安全性和有效性得到了更多验证，乙肝疫苗的应用范围也不断扩大。
乙肝疫苗市场的规模乙肝疫苗市场的规模在过去几年中呈现稳定增长的态势。
根据市场调研数据，2019年全球乙肝疫苗市场规模达到XX亿美元，预计到2025年将增长至XX亿美元。
亚太地区是乙肝疫苗市场最大的区域，其次是欧洲和北美地区。
乙肝疫苗市场的竞争格局乙肝疫苗市场存在着较为激烈的竞争。
目前，市场上主要的乙肝疫苗生产商包括广东生物制品、上海科华、贝达药业等。
这些企业通过产品质量、价格、市场推广等方面展开竞争，以争夺更多市场份额。
乙肝疫苗市场的影响因素乙肝疫苗市场的发展受到多种因素的影响。
首先，乙肝病毒感染的发病率和传播情况是影响市场需求的重要因素。
其次，政策法规对乙肝疫苗市场的监管也对市场发展起到重要作用。
此外，价格、技术水平、市场宣传等因素也会对市场格局产生影响。
乙肝疫苗市场的挑战与机遇乙肝疫苗市场在发展过程中面临着一些挑战，如市场竞争激烈、政策法规变化等。
同时，市场也存在着一些机遇，如乙肝病毒感染防控意识的提升、技术创新等。
抓住机遇、应对挑战是乙肝疫苗企业需要面对的问题。
结论总体来说，乙肝疫苗市场在过去几十年中取得了重要发展，市场规模逐渐扩大。
然而，市场竞争激烈，政策法规不断变化，为乙肝疫苗企业带来了一定挑战。
乙肝疫苗的来历
乙肝疫苗的来历1965年，在NIH工作的巴鲁克•布隆伯格在一位澳大利亚土著居民的血液中发现了乙型肝炎病毒的表面抗原，称之为澳大利亚抗原，使得乙肝疫苗的研制成为可能，他因此共享了1976年诺贝尔生理学和医学奖。
1970年在电子显微镜下看到了病毒颗粒，20世纪80年代末完成了乙肝病毒的基因测序。
布隆伯格不是病毒学家，他发现白血病病人的血液中澳大利亚抗原很普遍，又发现唐氏综合症病人也有这种抗原，但他还是不知道这种抗原到底属于哪个病毒。
纽约输血中心的病毒学家艾尔弗雷德•普瑞斯一直在病人输血前和输血后采取血样，1968年他发现一位病人患肝炎，输血前的血样没有澳大利亚抗原，输血后的血样里面就有了，因此断定这种抗原和乙型肝炎病毒有关。
纽约大学医学院儿科系主任索尔•克鲁曼得知了布隆伯格和普瑞斯的发现后，从一位乙肝病人身上采了血液，等血液凝固后，将血清取出，注射给纽约威洛布鲁克学校的25名弱智儿童，结果24名儿童得了肝炎，其中一位儿童成为慢性感染者。
克鲁曼因此做出结论，病人的血清具有高度感染性。
接下来，克鲁曼用水将血清稀释，加热1分钟，然后给弱智儿童注射，有人注射了两剂，有人注射了一剂，再给他们注射病人的血清，这一次注射了两剂的孩子没有一个孩子生病，注射了一剂的孩子有一半没有生病。
克鲁曼为此很激动，因为他只是把血清稀释后加热一下，就做成疫苗了。
但是，克鲁曼没有料到，他这样做是要受到道德的谴责的。
1967年1月10日，纽约州参议员西摩亚•泰勒提出严重的抗议，威洛布鲁克学校的校长杰克•哈曼德则认为这样做是对的，因为肝炎是威洛布鲁克学校的大问题，纽约州的卫生部门支持哈曼德，指出由于克鲁曼的成果，肝炎已经从威洛布鲁克学校消失了。
泰勒提案禁止在儿童身上做医学实验，这个提案没有被纽约州议会通过，但泰勒的行动引起了媒体和公众的注意。
克鲁曼的实验证明了有甲肝和乙肝两种肝炎，而且澳大利亚抗原可以被用为疫苗，他因此获得很多奖项并被选入国家科学院。
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
乙肝疫苗的生产工艺
市场需求与前景展望
01
随着人们对乙型肝炎认识的不断提高，乙肝疫苗的市场需求不 断增加。
02
同时，随着全球卫生事业的发展，乙肝疫苗的市场前景广阔，
具有巨大的发展潜力。
未来，乙肝疫苗将继续发挥重要作用，为人类健康事业做出更
03
大贡献。
02 生产工艺流程概述
原料选择与预处理
原料种类
选用高纯度、高效价的乙肝病毒表 面抗原（HBsAg）基因工程细胞株 或酵母菌作为生产原料。
数据统计与分析
对稳定性研究过程中产生的数据进行统计和分析， 评估成品的稳定性表现，为制定成品的储存和运 输方案提供依据。
05 设备选型和操作优化建议
关键设备选型依据和建议
疫苗生产工艺需求
根据乙肝疫苗的生产工艺流程，选 择能够满足工艺需求的设备，如发
酵罐、离心机、纯化设备等。
设备性能参数
考虑设备的生产能力、处理效率、 操作便捷性、自动化程度等性能参 数，确保设备能够满足生产要求。
开展资源回收利用
对生产过程中产生的可再生资源进行回收利 用，提高资源利用效率。
法规符合性检查清单
遵守国家法律法规和标准
确保乙肝疫苗生产过程符合国家相关法律法规和标准要求。
定期开展法规符合性检查
对生产过程进行全面检查，确保各项法规要求得到有效执行 。
及时整改不符合项
针对检查中发现的不符合项，制定整改措施并及时进行整改 ，确保生产过程的法规符合性。
原材料检验
对每批次的原材料进行检验，包括外观、纯度、微生物限度等指标， 确保原材料符合生产要求。
储存条件控制
对原材料的储存条件进行严格控制，避免潮湿、高温等不利因素对 原材料质量的影响。
生产过程监控指标设置
乙肝疫苗生产发展简介文档
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
北京天坛生物制品 股份有限公司(北京 生物制品研究所）
疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
深圳康泰生物制品 公司
华北药厂和长春生 物制品研究所等
大连高新(汉信）公 司 和华兰生物疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
重组CHO细胞乙肝 疫苗
重组汉逊酵母乙肝疫 苗
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
• 10, 大连高新（汉信）生物制药从
1998年开始重组汉逊酵母乙肝疫 苗的研制工作，在2002年6月获得 了国家药品监督管理局颁发的“新 药证书”，在2003年开始商业化生 产。
• 11 ,华兰生物在 年也将开始重组
汉逊酵母乙肝疫苗的生产。
乙肝疫苗的发展
• 第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。
• 第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家
疫苗
美国默克公司 Merck
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
比利时史克公司 Smith kline
重组酿酒酵母乙肝疫 苗
法国巴斯德研究所 重组CHO细胞乙肝 Pasteur Merieux 疫苗
中国疫苗发展史
中国疫苗发展史
自20世纪50年代开始，中国就开始开展疫苗研制工作。
1955年，中国成功研制出第一支疫苗——鼠疫疫苗。
1958年，中国又研制出了钩端螺旋体疫苗。
此后，一系列疫苗相继问世，如白喉疫苗、脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗等。
1970年代后期，中国开始研制基因工程疫苗。
1986年，中国成功研制出了乙肝疫苗，成为全球第一个成功研制乙肝疫苗的国家。
1992年，中国又成功研制出了流感疫苗。
2005年，中国启动H5N1禽流感疫苗的研究工作。
2010年，中国又成功研制出了人用H1N1流感疫苗。
近年来，中国在疫苗领域取得了更多成就。
2019年，中国成功研制出了人用新型冠状病毒疫苗，并在2020年开始进行紧急使用。
此外，中国还研制出了多种肺炎疫苗、脑炎疫苗、肝炎疫苗、风疹疫苗等。
中国疫苗的研制和生产已经成为全球疫苗领域的重要力量，为全球疫苗供应做出了贡献。
- 1 -。
乙肝疫苗简述1
食用乙肝疫苗简述乙型肝炎（简称“乙肝”）是危害全球人类健康最重要的传染病之一，它是有乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）侵染所引起的。
目前，控制乙肝发生的唯一经济有效地方法就是普遍接种乙肝疫苗。
血源性乙肝疫苗是20世纪60年代问世的第一代乙肝疫苗制品，在世界许多国家和地区广泛使用，取得了良好的效果。
但由于血源局限，加之潜在的病原体，以及加工制备过程的复杂性，目前已被基因工程疫苗所代替。
国内外现状我国是乙肝高发区，但传统免疫方法，生产成本昂贵且易二次感染，贮藏过程需要冷藏链，注射接种需要一定的专业设备及专业医务人员，难以在广大发展中国家，尤其是经济欠发达地区推广。
研制经济方便的新型乙肝疫苗是全球HBV 的现实要求。
Curtiss等于1990年证实了转基因植物所表达的抗原具有免疫活性，同时提出了用转基因植物生产疫苗的概念。
至今，利用转基因植物表达的疫苗和功能蛋白达100种以上。
烟草、马铃薯、土豆、香蕉、莴苣、羽扇豆等作为生物反应器生产口服疫苗，得到了人们的广泛关注，国内外对此进行了大量的研究工作，并取得了一定的研究成果。
现在为止，HBV基因已在马铃薯等作物中表达，在实验中小鼠和极少数志愿者中有抗原产生，但高温会破坏免疫活性，所以基因不适合在马铃薯等需加热食用的作物中表达。
选择在番茄，香蕉等可口且可生食的作物中表达具有很广大的前景。
研究方案转基因植物食用疫苗的研制过程是：先取合适的免疫原；克隆相应的基因；构建合适的表达框；适取合适的植物进行基因转化；筛选转化植株，获得稳定的高量表达免疫原的植株并扩繁；检验转基因植物组织使用免疫效果。
现取在番茄中表达为例，进行简述。
以质粒pCAMBIA1310/HB，农杆菌LBA4404，樱桃番茄种子为材料进行实验。
首先转化农杆菌，将转化好的植物表达载体导入农杆菌中。
无菌操作使番茄种子发芽，将6-8cm的下胚轴切成8mm的小段，先置于共培养基上诱导一周，然后转至不同浓度潮霉素的共培养培养基上诱导愈伤，4-6周后，把不含潮霉素的培养基上的丛生芽剪下，转到不同浓度潮霉素的1/2MS上诱导生根。
2023年乙肝疫苗行业市场调研报告
2023年乙肝疫苗行业市场调研报告乙肝疫苗是针对丙型乙型肝炎病毒的预防性疫苗，是目前防治肝炎的最主要的措施之一。
本文就乙肝疫苗行业市场进行调研分析，深入了解该行业的发展现状和未来趋势。
一、市场规模概述乙肝疫苗市场作为疫苗行业的重要组成部分，在近年来有着快速的发展。
疫苗是一种用来预防疾病的生物制品，具有重要的公共卫生意义。
在我国，乙肝疫苗市场的规模呈现逐年增多的趋势。
以2019年为例，中国乙肝疫苗市场规模达到约30亿元人民币，同比增长6.3%。
而预计到2025年，我国乙肝疫苗市场规模将达到约60亿元人民币。
二、市场竞争格局乙肝疫苗市场的竞争格局基本稳定。
主要的乙肝疫苗生产企业有：并州益起生物科技有限公司、长春生物制品研究所、上海瑞丰生物制品有限公司、同仁堂科技发展股份有限公司、生物工程所等。
以上几家乙肝疫苗主要生产企业，市场占有率较高，制造工艺和质量均能满足国家标准。
同时，竞争的主要因素也集中于品质、价格、渠道等方面竞争。
三、市场需求情况乙肝疫苗是我国广大民众所关心的主要居民接种疫苗之一。
随着国民经济的发展，消费者的经济水平不断提升，对于安全性、高品质的疫苗的需求也在逐渐增加。
尽管市场上的乙肝疫苗生产企业服务种类丰富，但是供不应求的状况仍然存在。
与此同时，我国乙肝疫苗市场还存在一些问题，即乙肝疫苗的价格过高，批发价格均高于70元每针，接种价格也高达百元。
因此，如何解决价格问题，降低消费者的经济压力也成为我国疫苗生产企业未来需要解决的首要问题。
四、市场前景展望随着国家对公共卫生投入的增加和相关政策的实施，乙肝疫苗市场的前景发展前景将会继续向好。
具体表现在：（1）生产技术长足进步，乙肝疫苗的质量不断提高，符合国际标准。
（2）投资增长、公共卫生投入的增加、医疗保险覆盖范围的扩大等因素，将会促使乙肝疫苗市场的规模扩大。
（3）市场营销方面越来越重视市场细分，不同消费者群体的需求差异越来越明显，企业将会致力于研究针对不同人群的乙肝疫苗，以提高市场占有率。
基因工程乙肝疫苗
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可 以进行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤ CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内 源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
生产工艺控制
生产工艺 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）的生产工艺包 括发酵、提取、纯化、吸附、配制、分装等工序。生产工 艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动控制，提供酵母 菌最优生长条件，发酵后经过细胞破碎和一系列微滤、超 滤、硅胶吸附、洗脱等工序，再经过疏水层析，可使产品 抗原蛋白纯度达 99% 以上。所有工艺设备可自动清洗、自 动灭菌，有效地减少了种种人为因素的干扰，确保生产稳 定和质量一致性。 质量控制 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）严格按照美国 默克公司质量标准进行质量控制，生产单位建立了全面质 量管理体系，产品原辅材料、半成品、成品检测和环境检 测等方面均有严格质控标准和检定程序。
乙肝疫苗的使用
基因工程乙肝疫苗(酵母重组)的使用：基因工程乙肝 疫苗(酵母重组)的接种对象、用法、贮存条件和有效期等 方面均同于血源乙肝疫苗，但其规格则不同于血源乙肝疫 苗 。 基因工程乙肝疫苗 (酵母重组)规格为5μg/0.5ml。之所 以采用此规格的主要原因是基因工程乙肝疫苗的免疫原性 优于血源乙肝疫苗的免疫原性。
一般情况下，打了乙肝 疫苗后不会影响日常工作 和生活，至今尚未见有关 于注射后引起严重副作用 的现象，只有少数人出现 接种部位红肿、硬结、疼 痛，手臂酸重或发热、恶 心、呕吐、乏力、皮疹等 与一般疫苗接种大致相仿 的轻微反应，多在 1 ～ 3 天 内不治自愈。
预防乙肝从新生儿开始
乙肝疫苗可以成功预防乙肝病毒 的感染，新生儿一出生就接种乙 肝疫苗，基本可以确保将来不得 乙肝。
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
纯度测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。
乙肝疫苗表面抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目前分析测定重组乙 型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是应用TSK-G5000PW分子筛。中国药品生物制品检定所 疫苗二室曾报道应用该系统对Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗和CHO细胞重组乙肝疫苗进行 纯度分析，可获得良好的分离效果。对重组汉逊酵母乙肝疫苗，现有的HPLC检测系统应用 0.1mol/L DTT与1:50吐温80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原 的纯度。
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
4.细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。
5.粗细胞裂解物用0.2微米中空纤维柱进行微滤。抗原和大部分 低分子量宿主细胞内含物通过滤膜，细胞碎片被膜拦截。
6.滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分子浪宿主细胞内含 物通过滤膜除去
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
乙肝疫苗的生产工艺
• 基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原 （HbsAg）亚单位疫苗，它系采用现代生 物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进 行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO 细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养 这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表 面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一
系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，
细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。粗 细胞裂解物用0.2um中空纤维柱进行微滤。抗 原和大部分低分子量宿主细胞内含物通过滤 膜，细胞碎片被膜拦截。
滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分 子量宿主细胞内含物通过滤膜除去。
疏水柱层析 介质： Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析平衡液电导率相 等 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓 度解析、清柱再生程序层析
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工
生产工艺控制
• 基因工程乙肝疫苗的生产工艺包括发酵、提取、 纯化、吸附、配制、分装等工序。
• 生产工艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动 控制，提供酵母菌最优生长条件，发酵后经过细 胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等 工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上
乙肝疫苗的制备
• 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝 病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清 除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
无菌过滤
收取到的HBsAg除菌过滤， 即为纯品
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重组汉逊酵母乙肝疫苗生产工艺
菌 种
小三角瓶 大三角瓶
种子发酵罐
生产发酵罐 细胞破碎
去除细胞碎片 疏水层析 离子交换层析 凝胶过滤 除菌过滤 铝 吸 附
种子批系统 SEED LOT SYSTEM
• 在乙肝疫苗的 生产过程中采用种子批
系统，即由原始种子批制备主代种子批， 由主代种子制备工作种子批，每次发酵 都由工作种子批中取一支菌种接种三角 瓶.种子批保存在液氮或－80℃的冰箱 中。其目的是为了批与批之间菌种的差 别降至最低。
阳性
阴性
5
阴性
阴性
41
结论： 阻断母婴传播的效果好，保
护率达到较高水平，（95,07%）。
由于重组汉逊酵母表达水平高，使重组汉逊酵
母乙肝疫苗含有足够量的抗原，抗原浓度比其 它乙肝疫苗高出一倍，成人：20ug/ml,婴儿， 儿童：10ug/0,5ml。因而，免疫后产生的抗体 不仅滴度高，而且抗体持续时间长。
免疫球蛋白（Immune Globulin) 免疫球蛋白是将HBsAg阴性供血者的血液 经低温乙醇分段法而制成，其中anti—HBs 的含量不确定，所以预防乙型肝炎病毒感 染的作用也是不明确的。使用免疫球蛋白 的唯一理由是当时无法获得特异性乙肝免 疫球蛋白（HBIG）
乙型肝炎病毒感染的预防：
特异性乙肝免疫球蛋白（HBIG） 特异性乙肝免疫球蛋白是将anti-HBs 阳性供血者的血液经低温乙醇分段法而 制成，其中anti—HBs的含量是确定的， 所以对乙肝病毒暴露后的预防作用也是 确定的。经低温乙醇分段法而制备的特 异性乙肝免疫球蛋白是安全的，没有证 据表明它会传播AIDS。
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限公司从 1998 年开始重组汉逊酵 母乙肝疫苗的研制工作，在 2002 年 6 月获得了国家药品监督管理局 颁发的“新药证书”，在 2003 年 开始商业化生产。 • 11 , 华兰生物在 2009 年也将开始 重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。
乙肝疫苗的发展历史
其结果如下：
重组汉逊酵母乙肝疫苗 免疫新生儿后的抗体反应
母 亲 新生 儿数 HBsAg HBeAg + + 45 抗-HBs 阳转率（%） 3个月 91,11 41/45 100,0 4/4 85,37 35/41 7个月 93,33 42/45 100,0 5/5 100,0 41/41 抗-HBs GMT 3个月 236,6 7个月 615,5
乙肝抗原的来源
• 1，乙肝患者的血液：血源性乙肝
疫苗。 • 2，利用DNA重组技术构建重组微 生物（酵母）表达（合成）乙肝抗 原：基因工程乙肝疫苗
•
•
•
乙肝疫苗发展历史 1, 1963年Blumberg发现在血友病患者的血 清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚 土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种 抗原被命名为“澳大利亚”抗原。 2, 1968 年 Prince 在血清型肝炎（乙型肝炎） 患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同 的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原 就是乙肝表面抗原。 3, 1970年 Dane用电子显微镜在乙肝患者血 清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直 径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。
特异性乙肝免疫球蛋白（HBIG）的使用
• 什么情况下使用特异性乙肝免疫球蛋白
（HBIG） • 1，伤口和黏膜意外暴露于HBsAg—阳性血 液。 • 2, HBsAg—阳性母亲所生的新生儿。 • 注意：在注射特异性乙肝免疫球蛋白 （HBIG）后，还应同时注射乙肝疫苗。
苗）。1995年停产。 n80 年代中期 ---- 基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝 疫苗）。包括： • 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想— 50mg/L 。 5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。 • 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L， 母婴阻断效果不理想 • 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L， 无法实现工业化生产。 n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的 基因工程乙肝疫苗。
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
Merck 公司签订合同，引进重组酵母 乙肝疫苗工业化生产技术。 1993年 5 月开始试生产。 • 9, 90年代德国莱茵生物技术公司发展 了一种甲基营养型酵母 ---汉逊酵母表 达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达 到 500-1000mg/L. 南韩绿十字疫苗 公司应用该表达系统实现了重组汉逊 酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。
+
-
5
223,9
677,3
-
-
41
344,3
634,5
重组汉逊酵母乙肝疫苗免疫新 生儿的阻断母婴传播保护效果
母 亲 人数 HBsAg阳转率 保护率
HBsAg HBeAg 阳性 阳性 45
3个月 2,22 (1/45) 0,00 (0/4) 2,44 (1/41)
7 个月 4,44 (2/45) 0,00 (0/4) 0,00 (0/41) 95,07%
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家 疫苗 北京天坛生物制品 重组酿酒酵母乙肝疫 股份有限公司(北京 苗 生物制品研究所） 深圳康泰生物制品 公司 华北药厂和长春生 物制品研究所等 大连高新(汉信）公 司 和华兰生物疫苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组CHO细胞乙肝 疫苗 重组汉逊酵母乙肝疫 苗
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 北京天坛的 弱项和不足：表达水平低，
抗原数量少，每剂疫苗只含5微克或 10微克的抗原，比华兰疫苗抗原含量 少一倍，所以抗体滴度低和抗体持续 时间较短。
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
表达水平
北京天坛 新乡华兰 50微克 300微克
抗原产量
低 高
北京天坛和新乡华兰疫苗 抗原含量和抗体反应的比较
•甲基营养型酵母：以甲醇为唯一能源和
炭源的酵母。
1,多个HBsAg基因拷贝被整合到染色体中，遗
传稳定性好。 2,发酵过程中不产生乙醇，黏度小，可实现高 密度培养。
3, 高 效 表 达 HBsAg 400-1000mg/L 。 4, 发酵过程中均使用化学合成培养基，不 使用酵母粉等营养成分，生产成本低。 5，生物安全性好，汉逊酵母是存在于土壤， 水中的一种酵母种群。它不含人和动物的 病原体，不产生内毒素。按照国外基因技 术法规，汉逊酵母被列为基因操作生物安 全性1组。与酿酒酵母属同一生物安全等级。 国外生物安全委员会还将汉逊酵母选为典 型的工业菌株的研究模型。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
厂家 美国默克公司 Merck 比利时史克公司 Smith kline 法国巴斯德研究所 Pasteur Merieux 德国莱茵公司下属的 韩国绿十字疫苗公司 Green Cross 疫苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组酿酒酵母乙肝疫 苗 重组CHO细胞乙肝疫 苗 重组汉逊酵母乙肝疫 苗
重组汉逊酵母乙肝疫苗 的特点：
三高
• 1，抗体阳转率高。 • 2，抗体滴度高。 • 3，母婴阻断率高。
用重组汉逊酵母表达产物—乙肝 表面抗原制备的重组汉逊酵母乙 肝疫苗是新一代的乙肝疫苗，它 在临床实验中有优秀的"三高”表 现，，即抗体阳转率高，抗体滴 度高，母婴阻断率高。
乙型肝炎病毒感染的预防： I，被动免疫：
的乙肝疫苗的基本情况： • 生产技术：从美国MERCK公司引进。 • 年产量：1000万人份，3000万支。 • 生产设备：从美国购进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
母总蛋白） • 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量： 50mg/Lх500L=25g • 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量 5,000,000/5=1,000,000支
2，减毒活疫苗
• 患者---分离出致病微生物（细菌或者
病毒）-----通过改变培养条件，获得 不再致病微生物---培养不再致病微生 物，获得大量的不再致病微生物---铝 吸附-----减毒活疫苗。
乙肝病毒的体外培养至今没有成功
• 前面，我们已经讲过，细菌要在培养基中
繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感 病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地 鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细 胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的 细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到 了严重的困难。人们不得不寻求其他的途 径去生产乙肝疫苗。
重组汉逊酵母乙肝疫苗免疫小 学生抗体阳转率和抗体GMT
3个月 疫苗 批号 人数 7个月 12个月
抗体阳 抗体 转率% GMT
抗体阳 抗体 转率% GMT
抗体阳 抗体 转率% GMT
501 502 503
114 107 127
97,87 230,5 98,25 897,1 100,0 791,6 95,19 246,6 100,0 915,6 100,0 875,1 100,0 311,6 99,21 932,5 96,77 867,6
结论：
1，重组汉逊酵母乙肝疫苗免疫小学生后 副反应轻微。 2，重组汉逊酵母乙肝疫苗免疫小学生后 抗体阳转率和抗体水平较高。
重组汉逊酵母乙肝 疫苗的人体试验结果
B，母婴传播：
选择HBsAg,HBeAg双阳性母亲所生新生儿
45名，按 0，1，6免疫程序接种
10ug/0,5ml 重组汉逊酵母乙肝疫苗,采集第1 剂免疫后3，7月血样，并检测。同时，还免疫 了41名健康母亲所生的新生儿和5名 HBsAg 阳性,HBeAg阴性母亲所生的新生儿做比较。
• 4, 1971年Krugman发现加热处理
的急性期乙肝患者的血清能部分预 防乙肝感染。 • 5, 1981 年 Merck 公司在世界上首 次研制成功第一代乙肝疫苗 —— 血 源性乙肝疫苗。 • 6, 1985 年北京生物制品研究所在 国内首次研制成功血源性乙肝疫苗. • 7, 1986 年 Merck 公司在世界上首 次研制成功第二代乙肝疫苗 ----- 重 组酵母乙肝。