样 本 的 采 集

加入1.5%硫代硫酸钠2ml，中和水样中的
余氯。
⑤采水量为瓶容量的80%，以便在检验
时充分震摇水样。
⑥水样作大肠菌群检测时，取水量为
350ml。
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⑦水中病毒检测样本的采集（1）水中病毒数
>103/L可直接将水样接种细胞无需浓缩，病
毒数>102/L样本量为1~5L，=10/L，样本
量为10~20L，<1/100L样本量是
现场卫生状况，是否无菌操作。
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⑦国际食品微生物专门委员会（ICMSF） 提出食品采样进行检验，应从统计学原理为 基础，来考虑对一批食品应检测多少样本， 才能具有代表性？目前一般使用的方法是每 批样品中只采一个检样进行检验，该批食品 是否合格全由一个样品的结果来决定。
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目前世界粮农组织已采用ICMSF提出的建议 作为规定，其中食品中大肠菌群数的检验为 一批食品中应采5个样进行检验，而沙门菌 则要采10个样来综合判断其卫生状况，现已 有加拿大、以色列等国采用此法，作为该国 的国家标准。
中，以冷的状态送到实验室越快越好，如48h
内未能进行接种，标本应放低温（最好-70℃）
以下进行保存。鼻腔或咽部洗液送到实验室后，
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用手将装标本的管充分振荡，将粘液打碎，置 4℃5～10min，待其自然沉淀，取上清液3ml 按每毫升青霉素1000u，链霉素1000μg，混 匀置4℃2h后就可接种。含棉拭子的标本，先 将棉拭子在管壁反复挤压后取出，而后按上述 加以处理。器管组织标本，需先用灭菌的乳钵 磨碎用生理盐水配成200g/L县液，离心沉淀， 取3ml上清液与上述一样用青、链霉素处理之。
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2．病人血液 采血应在病人发病后5d
内，愈早愈好。无菌采静脉血5ml，
放冰壶内立即送实验室，分离血清(如
将血液4℃保存，不应超过24h，将血
清和血块分别冻存于一40'C以下或液
氮中备用。
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选双份血清抗体检查确诊病例的第1份血清 标本(最好是抗体反应阴性的血清或血块) 作病毒分离标本之用。血清可直接用于接 种细胞或动物，血块经研磨制成5％悬液后 应用。另外有采用“床边接种”，即采血 后立即将全血接种到敏感动物或细胞，因 标本新鲜，有可能提高分离率。
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为了获得正确而检出率高的效果，最 好同时采集动脉血和静脉血，或由左右两 侧肘静脉同时采集。因为采集部位不同， 其血液中的菌数常可不同；同时双部位的 标本培养对于检出菌是病原菌，或为污染 菌的判定有所帮助。此外，在感染病灶局 部附近的血管采集标本，也能提高检出率。
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② 采血部位，一般多由肘静脉采集。采血量 一般以培养瓶中培养基量的1/10为宜，如此 可使存在于血液中的补体、抗体、调理素及 溶菌酶等增殖抑制因子被稀释，使之减弱或 失去抑制作用。对于应用抗菌药物中的病人 血液，以培养基量的1/20为宜。成人一次采 血为5~10ml，婴幼儿为1~2ml。
尽量选样清洁的空间地点，以无菌操作的方式，
开启包装，采集样品装入灭菌容器内并将容器 密封。
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⑤防止样品中细菌的菌量及菌相的变化，为 了防止样本中细菌的变化，必须严格控制温度， 从采样到检验室时间不得超过了3小时，最适温 度为0℃~4℃，如为冷冻样品则仍需保持在冷 冻状态。 ⑥要有明确的标签：样品必须立即贴上标签， 表明品名、来源、数量、采样地点采样人及采 样年月日地点，必要时注明采样温度、湿度及
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有人采用病人的白细胞分离病毒，获得良
好结果。分离白细胞的方法是：用注射器先
抽取肝素lml，用它可采病人静脉血5～10ml，
置试管内混匀，再加入60g／L葡聚糖1份于5
份含肝素的全血中，于30'C静置30min后，
将上清液离心10min(1 500r／min)，用Hank 液洗沉淀2次，再用Eagle液稀释白细胞到一 定浓度后，直接接种敏感动物或细胞培养。
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世界粮农组织规定的各种食品微生物的限量标准
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（二）病原微生物样本的采集 1. 血液样本的采集 （1）血液样本中可能有的细菌
金色葡萄球菌、链球菌、产单核李斯特菌、
炭疽杆菌，脑膜炎奈瑟菌、伤塞及副伤塞沙 门菌，绿脓杆菌，气单胞菌，鼠疫耶尔森菌、 布鲁菌、钩端螺旋体等。
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（2）样本采集及应注意事项 ① 采血时期及次数，对血液标本的细菌培 养是否能检出病原菌的影响较大。一般情况下， 多在病人发热初期或发热高峰时采集。原则上 应选择在抗菌药物应用之前，对已用药而不能 中止的病人，也应在下次用药之前采集。于用 药前24小时内，如采集3~4次血液标本，其 检出率可达90%以上。
统（特别是颈和腰部的脊髓灰质和桥脑）
和降结肠标本，置于灭菌容器内，保存送
检。
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（二）标本处理
粪便标本2g加Hank液10ml制成20%悬液。
3000r/min离心30min，取上清4～5ml，加
活性炭200～250mg混匀，4℃1h后，
3000r/min离心30min，取上清加抗生素
（终浓度每毫升1000u青霉素，1000μg链霉 素，下称“双抗”）4℃作用4h，接种肉汤培 养。如有细菌生长，重复处理一次。处理好的 标本-20℃保存。
盛入无菌试管或保存液中送检。
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粪便标本的采集应注意下述问题： ① 粪便标本应尽量在病程早期和治疗前
采集。疾病急性期致病菌往往占优势，以
后数日即迅速减少；一般认为，服用抗菌
药物3d，标本中病原菌即转阴性。
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②应采集新排出的新鲜粪便。若无法 获得时，可作采便管或直肠拭子采集。采 集时要注意先取有脓血、粘液、上皮碎片 等病理成分。一般固体标本采2～3g，液 体标本采1～3ml盛于小盒或试管中及时 送检。
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2. 脊髓灰质炎病毒样本 （一）标本采集 标本的采集应尽快进行，常在患者发病
7d内采集，采集后的标本低温送检（4℃），
低温保存（-25℃）。粪便标本是最为常用
的标本。可取患者粪便（即4～8g），置于
干燥、洁净、不漏的容器内，保存送检。
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肛拭子与咽拭子标本可放入1～2ml无菌营 养液或Hank液中送检，保存。 脑脊液2～3ml，直接放入灭菌管内送检， 保存。 尸体解剖标本采集要考虑取中枢神经系
副溶血性弧菌、假丝酵母菌等。
（2）样本的采集
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【操作】
①选取有脓血、粘液部分的粪便2～3g，
液体粪便则取絮状物，盛于灭菌的广口瓶或
蜡纸盒中，及时送检和接种
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②在无法获得粪便的情况下，可用经无菌生
理盐水（或保存液）或增菌用湿润的直肠拭
子插入肛门4～5cm深处（小儿2～3cm），
轻轻转动一圈，擦取直肠表面的粘液后取出，
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采血部位的局部皮肤应彻底消毒，通常先 用碘酒棉涂布消毒，干后消毒酒精（70%） 揩拭。操作时，应以穿刺部位为中心逐渐 向外延伸消毒。
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③血液标本的细菌学检验，一般不用抗凝剂，
因为氟化钠、EDTA，枸橼酸钠可对细菌不利。
近年来，认为在培养基中加入0.03~0.05%
聚茴香脑碘酸钠（sodium polyanethol
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2. 食品中细菌检测的样本采集
食品采集是指在食品原料或成品中抽取具 有代表性的样品，并保证这些具有代表性的 样本在检验时能完全反映原来的样本状态 （在采集与运输过程中排除外界各种干扰）， 使最终检测结果真实地反映食品本来的卫生 状况，因此在作食品细菌学检验中，采样必 须注意以下问题：
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①平均样品：粮按三层（表、中、下）五点采
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③标本采集后需立即送检，拖延送检可致
病原菌数目迅速减少或杂菌过度生长，影响病
菌的检出率，不能及时送检时，应将标本置于
保存液或运送培养基中送检。
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（三）病毒样本的采集
1. 流行性感冒病毒样本 采集和处理 采集时间应在病人发病后头3d， 越早越好，虽然有的发病后7d采集的标本还 能分离到病毒，但随时间延长分离率大大地下 降。较好的标本为鼻腔洗液，但病人不易接受， 尤其小孩不易协作，故常用咽喉和鼻拭子或咽
sulfonate，SPS）效果较好，具有抑制血清
中杀菌物质的作用，并且对氨基糖苷类及多肽 类抗生素有灭活效果，有利于细菌的检出。肝 素抗凝尚未见对细菌有所影响。
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通常无菌采集血液后立即注入装有液体培养瓶。
所用的培养基随检验目的和习惯不同。目前主张，
对病人已用过抗生素或碘胺类药物时，培养基每
100ml中加对氨基苯甲酸5mg以对抗磺胺类药的
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（二）样本的处理 1．除菌 鼠肺、病人血液(血清、血块、 血细胞)要求严格无菌手术采取，制备悬液
时加含常规量抗生素防少量杂菌生长外，
一般不需其他处理。对从外环境采集的标
本(如螨类)或在操作中无菌条件不够，污染
杂菌可能性大时，
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用含大剂量抗生素(1000～10000u或/μg/m1
样 本 的 采 集
一、样本的来源和种类
样本是供检出目的微生物或其相关物质的材
料。所谓相关物质是指构成目的微生物的核酸
脂多糖，蛋白质以及微生物的相应特异性抗体。
从预防医学微生物的角度可将微生物分为卫生
指标微生物和病原微生物二大类。
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（一）检出卫生指标微生物的样本来源和种
类
卫生指标微生物是指示外环境和食品以及 日用品洁净度的微生物可以是单位容积或重 量中所含微生物的总数或是以某种代表微生 物，它是指示受病原微生物污染情况，如大 肠埃希氏菌，粪链球菌和产气荚膜梭菌等， 样本的来源是空气、水、食品、药品、化妆 品及医院环境等。
500~1000L，（2）每次采2份样本，一份及
时检测，一份低温保存备用。（3）如为间断
污染，采水样时同时还应考虑采集水体底泥及
水生生物，特别是贝类样本，因底泥及贝类中
病毒可长期存在，并且浓度较高。
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⑧水中病毒检验样本浓缩处理原则： a. 有较高的和稳定的病毒回收率 b. 不受水质限制，特别是浊度的限制 c. 不受容量限制，可以处理大样本量 d. 操作过程尽可能快，以免损伤病毒 e. 浓集应有选择性，尽可能不浓集病毒以 外的物质 f. 操作方法尽可能简单、容易、并且价廉
3. 流行性出血热病毒的样本
(一)样本的采集
1．鼠肺 将捕到的新鲜死鼠或活鼠(颈动 脉放血致死)，置3％～5％来苏儿浸泡5～ 10min，用碘酒消毒背部(或前胸)皮毛，无 菌解剖取出肺脏，分成大小两份分别编号，
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小份制冰冻切片作间接免疫荧光染色；大份 置4℃冰箱或一20℃以下低温冰箱暂时保存。 选择特异性免疫荧光强阳性标本，可制成10 ％悬液供分离病毒用。其他动物脏器标本制 备方法与鼠肺的相同。
Βιβλιοθήκη Baidu
作用，加入青霉素酶200单位以对抗青霉素的作
用。若病人已用其他抗生素治疗，常用加入硫酸 镁的培养基，以中和链霉素、四环素、土霉素、 金霉素、新霉素及多粘菌素等抗菌药物。
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2. 粪便样本的采集 （1）粪便中可能发现的细菌 葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌、
结核分技杆菌、伤寒、副伤寒及其他沙门菌、
志贺菌、变形杆菌、绿脓杆菌、霍乱弧菌、
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1. 水样本的采集及处理
①采样的容器水样瓶采集前必须进行灭菌
并保证在运送保存过程中不受污染。
②在采集自来水样时，先用酒精灯将水龙 头烧灼消毒、然后将龙头打开，放水5~10分， 再采集水样。 ③取外环境水样时，应选择有代表性的水
源，一般应距水面10~15cm深处取样。
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④采集有余氯的水样时，应按每500ml水样
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肛拭子标本同粪便标本处理相同。
咽拭子标本的处理只需加抗生素作无菌
试验阴性，即可-20℃保存。
尸体解剖标本1g，加入5ml Hank液， 研磨成悬液，3000r/min，离心30min， 取上清加双抗（终浓度每毫升500u 青霉素 和500μg链霉素），4℃过夜，离心，取上 清-20℃保存。
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喉漱液即用灭菌的棉拭子涂擦患者的咽部，
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有时用另一根棉拭子涂擦患者的鼻腔，然后将 棉拭子浸入5ml灭菌的pH7.2的肉汤或Hank液
或生理盐水中，有时可让成人患者先咳嗽几声，
而后用10ml漱液反复含嗽咽部约1min再吐入
管中。从疑似流感死亡的病例中取样时，应取
肺，气管粘膜和血。采集的标本应马上放冰壶
样法，油抽取表层与底层油、混样检测。
②正常样品与异常样品，除采正常样品外，
如发现有异常样本时，也应采样分别进行检测。
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③采样数量：一般采集中样，即从食品的各部
分取得的混合样品以200克为准。有些样品可
达500克。如粮食可分三层五点，或分层随机 采取不同点的样品充分混合后取500克送检。 检样也称小样以25克为准。 ④避免外源性污染，各种采样器、样品容器 都需严格灭菌，尽可能从未开启的样品中采样。