实验一植物基因组DNA提取
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植物基因组DNA的提取
一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
3. 12000rpm 离心1Leabharlann Baiduin。 4. 吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加入600ul
的氯仿：异戊醇：乙醇（80： 4 ：16）溶液，颠倒混匀 室温下静置1 min，使水相和有机相分层。 5. 室温下12000rpm离心5 min。
6.吸取700ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加 入等体积氯仿溶液，颠倒混匀室温下静置1 min， 使水相和有机相分层。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
3mol/L NaAc（pH5.2）。
六、操作步骤
1. 在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液，60℃水浴预热。 2. 取玉米幼叶0.1g，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入
预热的离心管中，摇动混匀，60℃水浴保温3min，每隔 一分钟摇动一次。
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），
一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
3. 12000rpm 离心1Leabharlann Baiduin。 4. 吸取900ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加入600ul
的氯仿：异戊醇：乙醇（80： 4 ：16）溶液，颠倒混匀 室温下静置1 min，使水相和有机相分层。 5. 室温下12000rpm离心5 min。
6.吸取700ul上清液到一个新的1.5ml离心管中，加 入等体积氯仿溶液，颠倒混匀室温下静置1 min， 使水相和有机相分层。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
3mol/L NaAc（pH5.2）。
六、操作步骤
1. 在1.5ml离心管中加入1ml提取缓冲液，60℃水浴预热。 2. 取玉米幼叶0.1g，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入
预热的离心管中，摇动混匀，60℃水浴保温3min，每隔 一分钟摇动一次。
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），