三聚氰胺检测方法

MARS-HPLC测定不同基质中的三聚氰胺

摘要：MARS(Multi-adsorption Reverse SPE) 样品前处理方法是一种快速、简便、安全、成本低廉的样品前处理分析方法，将该方法用于奶制品、鸡蛋和鱼肉等不同样本中的三聚氰胺的提取，主要步骤是使用0.1M的盐酸、6%的磺基水杨酸和混合型阴离子交换树脂（Cleanert PAX）在离心管中同时进行蛋白沉淀和基质分散固相萃取，取离心上清液过滤后用于HPLC测定。本文对MARS方法用于不同样品前处理的稳定性和可靠性进行了分析和评价，结果表明MARS-HPLC方法用于不同样品中三聚氰胺的检测具有简便、快捷、准确的优点，适合大批量样品的测定。

关键词：三聚氰胺；MARS；混合型阴离子交换树脂；强阳离子交换色谱柱

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：L6-1 系列高效液相色谱仪（北京普析通用公司），三聚氰胺检测样品前处理方法包：（包括盐酸0.1 mol/L，6% 磺基水杨酸，混合型阴离子交换填料Cleanert PAX，（北京艾杰尔科技有限公司）；Venusil SCX-M，5μm,4.6×250mm 强阳离子交换色谱柱（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）及保护柱；针式过滤器（Agela Clarify，0.22/0.45µm，尼龙）；三聚氰胺标准品（>99%），均质器（T25 Basic，IKA）。

试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱，4.6×250mm,5μm,300 Å；（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5mL/min；柱温：室温；波长：240 nm；实验中若非特别注明，进样量均为20μL。

1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制

1.3.1 三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×103 mg/L。

称取100 mg 三聚氰胺标准物质（准确至0.1 mg），用水完全溶解后，用水定容至100 mL，混匀。

1.3.2 标准工作溶液

1.3.

2.1 标准溶液A：2.00 ×102 mg/L。

准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（1.3.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

1.3.

2.2 标准溶液B：0.50 mg/L。

准确移取0.25 mL 标准溶液A（1.3.2.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

1.3.

2.3 标准工作液的配制

按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（1.3.2.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。按表2分别移取不同体积的标准溶液B（1.3.2.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。

表1 标准工作液配制（高浓度）

标准溶液A体积(mL) 0.1 0.25 1.00 1.25 5.00 12.5

定容体积(mL) 100 100 100 50 50 50

标准工作液浓度(mg/

L) 0.20 0.50 2.00 5.00 20.0 50.0

表2 标准工作液配制（低浓度）

标准溶液B体积(mL) 1.00 2.00 4.00 20.0 40.0

定容体积(mL) 100 100 100 100 100

标准工作液浓度(mg/L) 0.005 0.01 0.02 0.10 0.20

1.4 试样的制备

1.4.1 牛奶样品

取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm 的滤膜后进液相分析。

1.4.3 鸡蛋样品

取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。

1.4.4 鱼肉样品

取5.0g剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL 容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。

2、结果与讨论

2.1 线性范围

低浓度曲线取0.005mg/L, 0.01mg/L, 0.02mg/L, 0.1mg/L, 0.2mg/L 5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：

图1 低浓度标样线性

高浓度曲线取0.2mg/L, 0.5mg/L, 2mg/L, 5mg/L, 20mg/L, 50mg/L 6个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：

图2 高浓度标样线性

结果表明：本方法在0.005mg/L~ 50.0mg/L和范围内，三聚氰胺峰面积和

浓度有良好的线性关系

2.2 重复性

取浓度为5mg/L的标准品溶液，分别进样20μL，进样6次，计算保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差）。结果列于表3中

表3 保留时间和峰面积的重现性（精密度）