组织和细胞培养技术-2012-2-21(1)PPT幻灯片

2 单糖：培养中的细胞可以进行有氧与无氧 酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是 合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞 对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。体 外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培 养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3 维生素：主要扮演辅酶、辅基的角色，必不 可少。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇 、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常 有的成分。
细胞培养基的基本要求
1.营养成分
• 氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。所有细 胞都需要12 种必须氨基酸：缬氨酸、亮、异 亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨 酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺，它在细 胞代谢过程中有重要作用，所含的氮是核酸 中嘌令和嘧啶合成的来源，同样也是合成三 、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。体外 培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。
细胞培养基的基本要求
3.渗透压
细胞必须生活在等渗环境中，大多数培 养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆 渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细 胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在 320mOsm/kg 左右。对于大多数哺乳动
细胞培养基的基本要求
4.pH值 pH 值约在7.2-7.4 5.气体 主要是O2和CO2 6.无毒、无污染
化学消毒
新洁而灭，其0.1％水溶液可对器械、皮 肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒。
抗生素消毒
• 抗生素主要用于消毒培养液 ，是培养过程中预防微生物污 染的重要手段，也是微生物污 染不严重时的“急救”方法。
• 不同Fra Baidu bibliotek生素杀灭微生物不同，
第三章 细胞培养液
细胞的生长需要一定的营养环境，用于维 持细胞生长的营养基质称为培养基，即指
所有用于各种目的的体外培养、保存细胞 用的物质，使细胞在此环境中有生长和繁 殖的能力。
细胞培养基其组成成分主要有：水、氨基 酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其 他一些入核酸降解物、激素等。
水与平衡盐溶液
1.水 体外培养的细胞对水的纯度要求较高 。配制培养用液应使用经石英玻璃蒸馏器 三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备 的超纯水。存放时间一般不应超过2 周。 2.缓冲溶液、生理盐水、平衡盐溶液。
4 无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、 钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量 元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
细胞培养基的基本要求
2.促生长因子及激素 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、 保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分 重要的作用。 胰岛素: 它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸 。氢化可的松: 可促进表皮细胞的生长； 泌乳素: 有促进乳腺上皮细胞生长作用等。 生长因子: bFGF、VEGF、EGF等。
血清质量的鉴定
• 理值含等蛋）2其质越0g、量。白、中量低化/L、蛋蛋含球球越越性)、白白量蛋蛋高好激质血电含（白白。。素：红泳量不含含血水如蛋图包低量量红平渗白谱括于（越蛋、透含、血 应低白3内压5量-清小血也蛋毒、45等总于清是白素pgH/。L • 微真生菌、物支检原测体：、包病括毒细等菌。、
NaHCO3+H2O-----Na++OH-+H2O+CO2
天然细胞培养基
天然培养基是指来自动物体液或利用组织 分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋
巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早 期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但 是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异 大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广 泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织 提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养 某些特殊细胞也是必不可少。
• 紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞 与试剂等也产生不良影响，因此，不要开着紫 外等操作。
物理消毒
2.高温湿热灭菌
• 压力蒸汽灭菌是最常用的高温湿热灭菌方法。对 生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝 固而使微生物死亡。布类、物、璃器皿、属器皿 、胶和某些培养液都可以用这方法灭菌。
• 不同压力蒸汽所达到的温度不同，不同消毒物品 所需的有效消毒压力和时间不同。从压力蒸汽消 毒器中取出消毒好的物品（不包括液体），应立 即放到60-70 ℃烤箱内烘干，再贮存备用，否则， 潮湿的包装物品表面容易为微生物污染。
消毒和灭菌
• 物理消毒 • 化学消毒 • 抗生素消毒
物理消毒
1.紫外线消毒
• 紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种 微生物。紫外线的直接作用是通过破坏微生物 的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通 过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。直接照 射培养室消毒，用法简单，效果好。
• 紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射 剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低 ，照射剂量和照射时间呈正比。
血清判断
• 好的血清应该是透明清亮，土黄色或棕黄 色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠；
血清
• 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很 复杂的混合物
• 血清种类:主要是牛血清、人血清、马血清等 。
• 牛血清分为小牛、新生牛和胎牛血清。 胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；
血清主要作用
•••提：、提长肾类长E提合重G氨供 核 供 因 上 固 因 供 蛋 要F等基基 酸 激 子 腺 醇 子 结 白 地。酸本 衍 素 ： 皮 激 如 合 作 低、胰 b营 生 和 质 素 蛋 用 分F维岛养 物 各 激 等 白 是 子GF生素物等种素。：携量、素结、质。生、生带物
细胞培养中使用血清的缺点
➢血清含一些对细胞产生毒性的物质，如补体 、抗体素等都会影响细胞生长，甚至造成细 胞死亡。
➢动物个体不同，血清产地、批号不同，每批 质量差异甚大，其成分不能保持一致。
➢取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生 潜在影响。
➢血清的使用使得实验和生产的标准化困难 ➢大规模生产中，血清来源困难，价格昂贵。
造成pH 波动主要是代谢产生的CO2，在封闭式培养 过程中CO2 与水结合产生碳酸，培养基pH 很快下降 。为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3CO2 缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的 CO2 及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2 浓 度（5％），与培养基中的NaHCO3 处于平衡状态。