生物化学实验2 (动态)PPT课件
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教学目的
生物化学是专业基础实验课，其先修课程为 无机化学、分析化学和有机化学 。其目的是： 学习和掌握生物技术，培养动手观察和思维能力 。
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学习方法
1 、 预习：实验前必须进行充分的预习和准备，并写出预习报告，做到心 中 有数，这是做好实验的前提。
2 、 操作：应按拟定的实验操作计划与方案进行。做到轻（动作轻、讲话轻 ），细（细心观察、细致操作），准（试剂用量准 确 、结果及其记录准 确），洁（使用的仪器清洁，实验桌面整洁，实验结束把实验室打扫清 洁）。
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实验二 氨基酸的纸上层析
一、实验目的
通过对氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法 。
二、实验原理
纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的 －OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常 把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行 层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时 与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到 分离。
Henan University of Technology
生物化学实验
河南工业大学生物工程学院 生物技术系 2015.3
实验内容
1. 1. 淀粉含量测定 2. 2. 氨基酸的纸上层析 3. 蛋白质分子量测定 4. 淀粉酶活力测定 5. 蛋白质含量测定 1. 6. 甲醛滴定测氨基氮 2. 7. 酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定 3. 8. 赖氨酸含量测定 9. 凝胶层析法分离蛋白质 10. 蔗糖酶的提取与部分纯化 11. 蔗糖酶活力的测定 12. Bradford法测定蛋白质含量
实验一 淀粉含量测定
一、实验目的
1. 掌握旋光仪的操作使用。 2. 了解旋光法测粗淀粉的基本原理。
二、实验原理
❖ 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶 液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋 光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋 光法测定粗淀粉的含量。
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三、实验仪器和试剂
五、结果计算
Rf
斑点中心到点样点距 （离 b） 展开剂前沿移动距离 a）（
六、思考题
❖ 1．计算出各种氨基酸的Rf值，并根据Rf值鉴定出混 合氨基酸中的各组分，在层析图谱上标出各氨基酸 名称。
❖ 2．对氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。
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实验三 蛋白质分子量测定
一、实验目的
掌握电泳基本原理、分类、影响因素, SDS-聚丙烯酰胺凝 胶电泳用途,凝胶制备。
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实验室守则
生物化学实验室守则是学生实验正常进行的保证，学生进入实验室必须遵守 以下规则：
1. 进入实验室，须遵守实验室纪律和制度，听从老师指导 2. 未穿实验服、未写实验预习报告者不得进入实验室进行实验。 3. 进入实验室后，要熟悉周围环境，熟悉防火及急救设备器材的使用方法和存放位置，
遵守安全规则。 4. 实验前，清点、检查仪器、明确仪器规范操作方法及注意事项，否则不得动手操作。 5. 使用药品时，要求明确其性质及使用方法后，据实验要求规范使用。禁止使用不明确
药品或随意混合药品。 6. 实验中，保持安静，认真操作，仔细观察，积极思维，实验过程中必须有原始记录，
不得擅自离开岗位。 7. 实验室公用物品（包括器材、药品等）用完后，应归放回原指定位置。实验废液、废
物按要求放入指定收集器皿。 8. 爱护公物，注意卫生，保持整洁，节约用水、电、气及器材。 9. 实验完毕后，要求整理、清洁实验台面，检查水、电、气源，打扫实验室卫生。 10. 实验记录经教师签名认可后，方可离开实验室. 。
3 、 在实验全过程中，应集中注意力，独立思考解决问题。自己难以解释时 可请老师解答。
4 、 写实验报告：做完实验后，应解释实验现象，并作出结论，或根据实验 数据进行计算和处理。主要包括：a、目的，b、原理，c、操作步骤及实 验性质、现象，d、数据处理（含误差原因及分析），e、讨论，f、思考 题回答。
1、主要仪器： （1）旋光仪 （2）电子天平（感量0.0001g） 2、试剂：
⑴1％盐酸溶液 ⑵30％硫酸锌溶液。 ⑶15％亚铁氰化钾溶液。
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四、实验步骤
1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入
50mL 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热 15min→先加1mL 30% ZnSO4混匀→再加1mL 15%亚铁氰 化钾混匀→移至100mL容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去 最初15mL收集其余滤液。 2.旋光度测定
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三、仪器和试剂
1、主要仪器： （1）层析缸 （2）微量进样器 （3）喷雾器 2、试剂 ： （1）展开剂：乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1 （2）氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶液
及它们的混合液 （3）显色剂：0.1%水合茚三酮丙酮溶液。
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四、实验步骤
1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1）放入培养 皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（24h左右） 2、点样：取滤纸1张用铅笔在距下方2cm处划线并将所得线段 分成5等分从而得到4个标记点，用微量进样器分别取5 μ L 下列 样品①phe②lys③pro④混合Aa向4个标记点上加样（样品扩散 中Ø≤1cm） 3、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠 ， 并用棉线扎紧然后垂 直放入培养皿中进行展层2h（当展开剂沿到达滤纸长度三分之 二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（a） 4、显色：用0.1%茚三酮-丙酮溶液朝点样面喷雾（不要喷得太 多）然后将滤纸置于电炉上方20cm处加热直至斑点出现为止， 测量各斑点中心到点样点距离（b. ）
取滤液20mL置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0” 点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α
.
❖ 五 、 结果计算
淀粉含量（ ％ 2D0.L 1） 0W0＝ 100
其中：
20
D
182.7
L 2dm
W：样品质量（ g）
.
六、思考题
❖Fra Baidu bibliotek样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于15min会对测定 结果产生什么影响？
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法， 主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷 多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。 在聚丙烯酰胺凝胶 系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），使所有蛋 白质颗粒表面覆盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的 电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于 它的分子量大小。当蛋白质的分子量在15000～200000之间 时，电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。
教学目的
生物化学是专业基础实验课，其先修课程为 无机化学、分析化学和有机化学 。其目的是： 学习和掌握生物技术，培养动手观察和思维能力 。
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学习方法
1 、 预习：实验前必须进行充分的预习和准备，并写出预习报告，做到心 中 有数，这是做好实验的前提。
2 、 操作：应按拟定的实验操作计划与方案进行。做到轻（动作轻、讲话轻 ），细（细心观察、细致操作），准（试剂用量准 确 、结果及其记录准 确），洁（使用的仪器清洁，实验桌面整洁，实验结束把实验室打扫清 洁）。
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实验二 氨基酸的纸上层析
一、实验目的
通过对氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法 。
二、实验原理
纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的 －OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常 把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行 层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时 与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到 分离。
Henan University of Technology
生物化学实验
河南工业大学生物工程学院 生物技术系 2015.3
实验内容
1. 1. 淀粉含量测定 2. 2. 氨基酸的纸上层析 3. 蛋白质分子量测定 4. 淀粉酶活力测定 5. 蛋白质含量测定 1. 6. 甲醛滴定测氨基氮 2. 7. 酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定 3. 8. 赖氨酸含量测定 9. 凝胶层析法分离蛋白质 10. 蔗糖酶的提取与部分纯化 11. 蔗糖酶活力的测定 12. Bradford法测定蛋白质含量
实验一 淀粉含量测定
一、实验目的
1. 掌握旋光仪的操作使用。 2. 了解旋光法测粗淀粉的基本原理。
二、实验原理
❖ 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶 液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋 光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋 光法测定粗淀粉的含量。
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三、实验仪器和试剂
五、结果计算
Rf
斑点中心到点样点距 （离 b） 展开剂前沿移动距离 a）（
六、思考题
❖ 1．计算出各种氨基酸的Rf值，并根据Rf值鉴定出混 合氨基酸中的各组分，在层析图谱上标出各氨基酸 名称。
❖ 2．对氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。
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实验三 蛋白质分子量测定
一、实验目的
掌握电泳基本原理、分类、影响因素, SDS-聚丙烯酰胺凝 胶电泳用途,凝胶制备。
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实验室守则
生物化学实验室守则是学生实验正常进行的保证，学生进入实验室必须遵守 以下规则：
1. 进入实验室，须遵守实验室纪律和制度，听从老师指导 2. 未穿实验服、未写实验预习报告者不得进入实验室进行实验。 3. 进入实验室后，要熟悉周围环境，熟悉防火及急救设备器材的使用方法和存放位置，
遵守安全规则。 4. 实验前，清点、检查仪器、明确仪器规范操作方法及注意事项，否则不得动手操作。 5. 使用药品时，要求明确其性质及使用方法后，据实验要求规范使用。禁止使用不明确
药品或随意混合药品。 6. 实验中，保持安静，认真操作，仔细观察，积极思维，实验过程中必须有原始记录，
不得擅自离开岗位。 7. 实验室公用物品（包括器材、药品等）用完后，应归放回原指定位置。实验废液、废
物按要求放入指定收集器皿。 8. 爱护公物，注意卫生，保持整洁，节约用水、电、气及器材。 9. 实验完毕后，要求整理、清洁实验台面，检查水、电、气源，打扫实验室卫生。 10. 实验记录经教师签名认可后，方可离开实验室. 。
3 、 在实验全过程中，应集中注意力，独立思考解决问题。自己难以解释时 可请老师解答。
4 、 写实验报告：做完实验后，应解释实验现象，并作出结论，或根据实验 数据进行计算和处理。主要包括：a、目的，b、原理，c、操作步骤及实 验性质、现象，d、数据处理（含误差原因及分析），e、讨论，f、思考 题回答。
1、主要仪器： （1）旋光仪 （2）电子天平（感量0.0001g） 2、试剂：
⑴1％盐酸溶液 ⑵30％硫酸锌溶液。 ⑶15％亚铁氰化钾溶液。
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四、实验步骤
1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入
50mL 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热 15min→先加1mL 30% ZnSO4混匀→再加1mL 15%亚铁氰 化钾混匀→移至100mL容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去 最初15mL收集其余滤液。 2.旋光度测定
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三、仪器和试剂
1、主要仪器： （1）层析缸 （2）微量进样器 （3）喷雾器 2、试剂 ： （1）展开剂：乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1 （2）氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶液
及它们的混合液 （3）显色剂：0.1%水合茚三酮丙酮溶液。
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四、实验步骤
1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1）放入培养 皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（24h左右） 2、点样：取滤纸1张用铅笔在距下方2cm处划线并将所得线段 分成5等分从而得到4个标记点，用微量进样器分别取5 μ L 下列 样品①phe②lys③pro④混合Aa向4个标记点上加样（样品扩散 中Ø≤1cm） 3、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠 ， 并用棉线扎紧然后垂 直放入培养皿中进行展层2h（当展开剂沿到达滤纸长度三分之 二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（a） 4、显色：用0.1%茚三酮-丙酮溶液朝点样面喷雾（不要喷得太 多）然后将滤纸置于电炉上方20cm处加热直至斑点出现为止， 测量各斑点中心到点样点距离（b. ）
取滤液20mL置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0” 点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α
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❖ 五 、 结果计算
淀粉含量（ ％ 2D0.L 1） 0W0＝ 100
其中：
20
D
182.7
L 2dm
W：样品质量（ g）
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六、思考题
❖Fra Baidu bibliotek样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于15min会对测定 结果产生什么影响？
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法， 主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷 多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。 在聚丙烯酰胺凝胶 系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），使所有蛋 白质颗粒表面覆盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的 电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于 它的分子量大小。当蛋白质的分子量在15000～200000之间 时，电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。