产毒真菌的检测方法

产毒真菌的检测方法

产毒真菌大部分属于曲霉菌、青霉菌属和镰刀菌属中的一些种，这些霉菌在自然界分布广泛，对储粮、动物饲料和食品侵染的机会较多，通过检测这些霉菌和毒素反映食品的安全性。

1、材料和试剂

（1）、器材：温箱（25—28℃）、目镜测微尺、物镜测微尺、显微镜、超净工作台、放大镜、三角瓶、试管、平皿、酒精灯、载物玻片、盖玻片等。

（2）、培养基和试剂：察氏培养基、马铃薯一葡萄糖琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基、灭菌蒸馏水、乙醇。

2、方法

（1）、采样采取有代表性的样品250—500g，尽快检验。

（2）、表面除杂菌如为粮粒样品，取样品10—20，放入灭菌的150ml三角瓶中，无菌条件下加入无菌水超过样面1—2cm左右，塞好塞子充分振摇1—2min；将水倒净后，再加水振荡，反复洗涤10次，弃去水后。将粮粒倒于无菌平皿中备用；原粮样品应先用75%酒精浸泡1—2min，脱去粮粒表面蜡质，倾去酒精后，再用上法洗涤，备用。

（3）、接种与培养：用无菌镊子将已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板上（粮粒的一部分插入培养基中）、，小粒样品如大米接种10粒/皿，大粒的样品如玉米、大豆等接种5粒/皿，每份样品须接种100粒。将种有样品的平皿置25—28℃孵箱培养5—7d，培养后期应每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。（4）、计数：记录100粒粮食中长霉菌的数量，同时记录每一粒所生长的霉菌数，计算霉菌侵染的粒数和菌落生长的总数。在计数时，只计数与粮粒相连接的菌落。

（5）、镜检与初分离：用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1—2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用两支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖上盖玻片，先在低倍镜下找到培养物。再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。如为曲霉属可见典型的分生孢子头；青霉属的真菌镜下可见有鉴别意义的帚状枝；而镰刀菌属可见镰刀状的大分生孢子等。将它们分别转种于相应的鉴别培养基平板和斜面，25—28℃孵箱培养5

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。

—14d。

（6）、常见产毒霉菌鉴定：霉菌的鉴定主要依靠形态特征，包括菌落特征和镜下特征。需观察的镜下特征包括霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，并详细记录。

3、实验结果

常见真菌菌落特征如下：

（1）、菌落生长的速度：用培养一定天数的菌落直径大小来表示霉菌生长的速度，也可用局限生长表示生长速度慢，蔓延生长表示生长速度快。

（2）、菌落的颜色：霉菌菌落的颜色应包括菌落表面的颜色、菌落背面的颜色、菌落周围培养基的颜色，以及霉菌在不同生长阶段的颜色变化。

（3）、菌落的质地：根据菌丝的长短、疏密以及孢子的有无和多少，菌落的质地可为绒状、絮状、绳状和束状。

（4）、菌落的表面：疏松或致密，平坦、凹陷或隆起，有无皱褶，有无放射状或同心环状的沟纹，边缘是否整齐等。

（5）、渗出物：有的菌种常常在菌落表面出现带颜色的似液体物即为渗出物，记录其色调和分泌的量。

（6）、气味：是否出现除霉味以外的其他特殊的气味。

（7）、菌丝：由孢子在环境适合情况下长出的芽管延长而成，可长出许多分枝，形成交织成团状的菌丝体。在显微镜下为或粗或细、有隔或无隔的、具分枝的结构。有的皮肤感染的真菌会形成螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状及梳状等具鉴别意义的特殊菌丝。但粮食中真菌的菌丝一般无鉴别意义。

（8）、孢子：是真菌的繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢子，当环境条件适合时，孢子又发芽发育成菌丝。根据产生孢子的方式不同，分为有性孢子和无性孢子两类。有性孢子有接合孢子、卵孢子、担孢子和子囊孢子；无性孢子有分生孢子、孢子囊孢子、叶状孢子（包括芽生孢子、厚膜孢子和关节孢子）、。在产毒霉菌鉴定中后者更有意义。

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