产毒真菌的检测方法
黄曲霉毒素国标检测方法
黄曲霉毒素国标检测方法
黄曲霉毒素（AF）是一种由黄曲霉属真菌产生的有毒代谢产物。
它们被广泛分布在食品、饲料和环境中，可能对人类和动物健康造成危害。
因此，对黄曲霉毒素的快速、准确检测成为了保障公众健康的关键。
国家标准委员会制定了黄曲霉毒素国标检测方法，以保证各个检验机构的检测质量和结果一致性。
1. 检测样品的制备
样品制备过程是检测过程的关键步骤。
样品必须被精确称量和混合，以确保最终检测结果的准确性和可重复性。
样品预处理的方法通常包括研磨、切碎、混合和抽样等步骤，具体方法取决于样品的特性，如水分含量、粘度和粒度分布等。
2. 样品提取
样品提取过程中，黄曲霉毒素从样品中被提取到适当的溶剂中。
提取的选择取决于样品的特性和黄曲霉毒素的特性。
一些常见的提取方法包括回收萃取、固相萃取和羧甲基纤维素柱萃取等。
3. 分离和净化
为了获得最终准确的结果，必须分离并净化提取的样品。
对于黄曲霉毒素的分离和纯化方法主要有和阳离子交换树脂和固相萃取等方法。
检测黄曲霉毒素的方法主要包括色谱检测法、酶联免疫检测法、毛细管电泳等方法。
其中酶联免疫检测法已成为广泛使用的检测方法之一。
该方法以特异性抗体为基础，利用抗原抗体相互作用，快速、敏感地检测黄曲霉毒素。
总的来说，黄曲霉毒素国标检测方法是一系列高效准确的方法，可以帮助检验机构检测食品或饲料中的黄曲霉毒素，保证公众健康。
2025版药典真菌毒素测定通用方法
2025版药典真菌毒素测定通用方法
根据2025版药典，以下是真菌毒素测定的通用方法：
1. 制备样品：将待测样品(例如食品、农产品或药品)制成合适体积的溶液。
根据所分析的真菌毒素的可溶性，选择合适的溶剂。
2. 固相萃取：将样品溶液经过固相萃取柱进行富集和纯化。
根据所要测定的真菌毒素的特性，选择适当的固相材料。
3. 色谱条件优化：在色谱条件下，包括色谱柱选择、流动相组成等方面进行优化，以达到最佳分离和分析效果。
常用的色谱方法有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)等。
4. 检测仪器：使用合适的检测仪器进行真菌毒素的检测。
常用的仪器有质谱仪、紫外-可见光谱仪、荧光光谱仪等。
5. 标准曲线建立：根据已知浓度的真菌毒素标准品，建立标准曲线。
通过检测待测样品的峰面积或峰高，然后回归到标准曲线，计算真菌毒素的浓度。
6. 数据处理和结果分析：根据测定结果进行数据处理，计算出真菌毒素的含量，并进行结果的分析和解释。
最后，需要根据实际情况进行方法的优化和验证，以确保分析结果的准确性和可靠性。
粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法
DOI：10.16675/14-1065/f.2019.06.075粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法□王镱睿摘要：真菌毒素是真菌的有毒代谢产物，为确保国家粮食安全，不能忽视真菌毒素对人类健康、经济作物等造成的不利影响。
系统梳理了粮食中常见的真菌毒素种类及其限量标准、现行有效的检测标准，为相关检测机构提供科学依据。
关键词：真菌毒素；粮食；限量标准；检测方法文章编号：1004-7026（2019）06-0119-03中国图书分类号：TS210文献标志码：A（太原市粮食质量监督检测站山西太原030000）1真菌毒素真菌毒素（Mycotoxin）是指产毒真菌在适宜的环境条件下代谢产生的有毒物质[1]。
真菌毒素能够污染粮食谷物、水果蔬菜等植源性农产品，从而通过食物链的富集作用，对人类和其他经济动物产生致癌、致畸等不良后果，对人类健康和禽畜养殖的生产安全产生了严重威胁。
真菌毒素被世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)视为食源性疾病的祸首。
据FAO调查显示，全球每年约有25％的粮食会受到真菌毒素的污染，约2％的农作物受到严重污染而失去食用和使用价值，造成经济损失。
我国是真菌毒素污染最严重的国家之一[2-3]。
为了避免因为不了解真菌毒素的危害，而忽视粮食中的真菌毒素，本文系统梳理粮食中常见的真菌毒素种类，了解真菌毒素的限量标准和我国现行有效的定量检测方法，为相关检验检测机构掌握检测方法提供帮助。
2粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法我国重点关注毒性强、高频污染的真菌毒素，在粮食领域主要包括黄曲霉毒素（主要是AFB1）、玉米赤酶烯酮（ZEN）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）等。
2.1黄曲霉毒素黄曲霉毒素(Aflatoxins)可以由曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和伪溜曲霉4种产生，其基本结构是二呋喃环和香豆素，可分为黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2等。
黄曲霉毒素毒性极强，会导致人和动物出现肝中毒、肠胃肾等脏器出血，甚至使人类和动物罹患肝癌，引起死亡。
微生物毒素的分析和检测技术
微生物毒素的分析和检测技术微生物毒素是由细菌、真菌或其他微生物产生的一种具有毒性的化学物质。
它们具有广泛的应用，可以用于制药、食品和化工等领域。
但是，微生物毒素也可能对人们的健康带来危害。
因此，正确的微生物毒素的分析和检测技术对于保障公共卫生至关重要。
微生物毒素分析的主要方法包括生物测试法、化学检测法和物理检测法。
生物测试法是一种常见的微生物毒素检测方法，它基于向动物饲料中添加微生物毒素并观察是否发生毒性反应来进行检测。
这种方法的优点在于检测结果准确，能够检测出微量的微生物毒素，但是缺点是需要大量的时间和金钱，而且动物也需要一定的处理和监控，因此，在现代化的工业化检测中，生物测试法并不是默认的首选。
化学检测法是另一种常见的微生物毒素检测方法，这种方法涉及到对微生物毒素的特征化学组成的分析。
这种方法常见的应用包括高效液相色谱法、质谱法和光谱法等。
在这些方法中，样品通常需要在一定时间内进行样品制备。
化学检测法的优点在于样品的制备和处理相对快速，而且能够实现较大规模的检测，不需要动物等生物实验。
物理检测法也是一种微生物毒素分析和检测的方法。
这种方法的主要缺点在于它需要对样品进行物理加工，以便检测出特定的微生物毒素。
因此，如果样品未得到适当的处理，该方法的准确度和可靠性都可能大打折扣。
在实际应用中，选择针对特定微生物毒素的特定检测方法，通常会通过分析样品中的化学组成来寻找可能存在的毒素。
一些公认权威的方法可用于检测目标微生物毒素的存在，这可能是基于与已知化学结构（例如四环素类合成物），或者特定细菌具有的毒素。
例如，拉曼光谱法是一种通过使用光学技术来检测微生物毒素的方法。
这种方法是非侵入性和非破坏性的，因此在检测环节对样品的影响非常小。
对于样品的处理准备也非常简单。
芗草羧琥珀酸酯盐酸盐（PAT）和四环素（TET）中毒株产生的毒素可以通过拉曼光谱检测 arotene环的特定振动模式而得到鉴定。
在实际应用中，选择适当的检测技术对于检测微生物毒素的存在非常关键。
腐霉利国标检测方法
腐霉利国标检测方法腐霉利是一种严重影响粮食质量和食品安全的真菌产毒物，对人体健康有潜在危害。
因此，发展快速、准确、灵敏的腐霉利国标检测方法对于粮食和食品的质量控制尤为重要。
下面将介绍几种常用的腐霉利国标检测方法。
1.高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前最常用的腐霉利检测方法之一、该方法基于萃取-净化-测定腐霉利的原理，通过高效液相色谱仪的检测，可以实现对样品中腐霉利含量的测定。
该方法具有灵敏度高、准确性好、适用范围广等优点，能够检测多种不同类型的腐霉利。
2.气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的腐霉利检测方法。
该方法利用样品中腐霉利的特性，通过气相色谱仪的检测，可以对腐霉利进行定性和定量分析。
该方法具有分离度高、灵敏度好、分析速度快等优点，能够检测到非常低浓度的腐霉利。
3.酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法是一种常用的腐霉利检测方法。
该方法是在试剂盒的指导下进行的，先将目标物免疫原固定在试剂盒中，再加入待测样品，样品中的腐霉利会与免疫原发生特异性结合反应，然后通过酶标记进行检测。
该方法具有快速、简便、灵敏度高等优点，适用于快速筛查和定量分析。
4.质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的腐霉利检测方法。
该方法是先将样品分离，然后通过质谱仪的测定，可以准确测定样品中腐霉利的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率、可定量等优点，但同时也需要专业的操作和设备，并且需要对样品进行复杂的前处理。
以上是一些常用的腐霉利国标检测方法，每种方法都有自身的优势和适用范围。
在实际应用中，可以根据需求和实际情况选择合适的检测方法，以确保粮食和食品的质量和安全。
同时，还需要注意合理采样和样品处理，严格按照相应的操作规范进行，以确保检测结果的准确性和可靠性。
毒蘑菇鉴别方法
毒蘑菇鉴别方法引言蘑菇是一种广泛分布的真菌，具有丰富的营养价值和独特的风味，因此深受人们喜爱。
然而，有些蘑菇含有毒素，如果误食可能会导致中毒甚至危及生命。
了解和掌握毒蘑菇的鉴别方法对于人们的健康至关重要。
本文将介绍一些常用的毒蘑菇鉴别方法。
1. 外观特征鉴别外观特征是最常用也是最直观的鉴别方法之一。
以下是一些常见的外观特征：•菌盖形状：不同种类的蘑菇具有不同形状的菌盖，如伞状、球状、杯状等。
•菌盖颜色：毒蘑菇通常具有鲜艳而不寻常的颜色，如红色、紫色、橙色等。
•菌柄形态：毒蘑菇的菌柄可能会呈现扭曲、粗壮或被环带包围等异常形态。
•菌肉颜色：毒蘑菇的菌肉通常会呈现不寻常的颜色，如蓝色、绿色等。
根据外观特征进行初步鉴别时，需要参考专业图鉴和文献，并与已知的安全蘑菇进行比较。
2. 毒性试验毒性试验是一种常用的鉴别方法，可以通过观察实验结果来判断蘑菇是否具有毒性。
然而，这种方法存在一定的风险，因为直接接触或食用有毒蘑菇可能会导致中毒。
在进行毒性试验时必须采取严格的安全措施，并在专业人士的指导下进行。
常见的毒性试验包括：•动物试验：将有毒蘑菇喂养给小白鼠等实验动物，观察其反应和生理指标变化。
•细胞培养试验：将有毒蘑菇提取物加入细胞培养基中，观察细胞生长情况和细胞死亡率等。
•化学试剂测试：使用化学试剂对有毒蘑菇进行检测，以检测是否存在特定的毒素。
3. 化学成分分析化学成分分析是一种准确鉴别蘑菇毒性的方法，可以通过检测和分析蘑菇中的化学成分来确定其是否具有毒性。
常用的化学成分分析方法包括质谱法、核磁共振法等。
化学成分分析需要专业的实验设备和技术，并且对样本的处理和提取也要非常谨慎。
这种方法通常由专业机构或实验室进行。
4. DNA鉴定DNA鉴定是一种高度准确的鉴别方法，通过比较蘑菇样本中的DNA序列与已知蘑菇种类的DNA序列进行匹配，可以确定其种类和是否具有毒性。
DNA鉴定需要采集并提取蘑菇样本中的DNA，并通过PCR扩增和测序等技术进行分析。
常见产毒霉菌的形态学鉴定
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
• 1.3 杂色曲霉 呈辐射形,直径(25~)75~125μm;分生孢梗茎直接生自基质 者(45~)150~300(~500)μm×4~8μm,生自气生菌丝者大都 很短,无色或稍带黄色,壁较厚,光滑;顶囊半球形、稍长形或 稍呈椭圆形,直径9~20μm,约3/4的表面可育,小顶囊仅分生 孢梗茎顶部稍加膨大而不明显;产孢结构双层:梗基一般 5~8μm×2~3μm,瓶梗6~8μm×1.5~2.5μm;分生孢子球形 或近球形,绿色,直径(2~)2.5~3.5(~4)μm,壁粗糙,具小刺;壳 细胞球形或近球形,直径11μm~20μm,大量形成时聚成淡黄 色的团块,见图4。杂色曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素。常见产毒霉菌的ຫໍສະໝຸດ 态学鉴定2017年6月2日
一、常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序 检验程序
图1 常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程 序
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
1、曲霉属 本属的产毒真菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构 巢曲霉、赭曲霉、黑曲霉、炭黑曲霉和棒曲霉等。这些真菌可 能产生黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等次生 代谢产物。曲霉属的菌丝体无色透明或呈明亮的颜色 ,但不呈 暗污色 ;可育的分生孢梗茎以大体垂直的方向从特化的厚壁的 足细胞生出 ,光滑或粗糙 ,通常无横隔 ;顶端膨大形成顶囊 ,具不 同形状 ,从其表面形成瓶梗,或先产生梗基 ,再从梗基上形成瓶 梗 ,最后由瓶梗产生分生孢子。分生孢子单胞 ,具不同形状和各 种颜色 ,光滑或具纹饰 ,连接成不分枝的链。由顶囊到分生孢子 链构成不同形状的分生孢子头 ,显现不同颜色。有的种可形成 厚壁的壳细胞 ,形状因种而异 ;有的种则可形成菌核或类菌核结 构 ;还有的种产生有性阶段 ,形成闭囊壳 ,内含子囊和子囊孢子 , 子囊孢子大多透明或具不同颜色、形状和纹饰。
食品中真菌毒素的检测与分析方法研究
食品中真菌毒素的检测与分析方法研究随着人们对食品安全的关注不断增加，食品中的真菌毒素成为了一个备受关注的问题。
真菌毒素是由霉菌等真菌生产的有毒化合物，存在于许多食品中，如谷物、坚果、蔬菜和肉类等。
这些毒素对人体健康造成严重威胁，可以引发食物中毒，损害肝脏、肾脏和神经系统等。
因此，研究食品中真菌毒素的检测与分析方法十分重要。
食品中真菌毒素的检测与分析方法有许多种，其中最常用的包括基于色谱质谱联用技术的方法、免疫分析法和生物传感器等。
基于色谱质谱联用技术的方法是一种常见且有效的真菌毒素检测方法。
该方法利用气相色谱仪和质谱仪联用，通过分离和检测食品中真菌毒素的含量。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，能够同时检测多种真菌毒素。
但是，这种方法需要昂贵的设备和高技术水平的操作人员，成本较高，不适用于大规模的食品检测。
免疫分析法是另一种常用的真菌毒素检测方法。
该方法利用抗体与检测物之间的特异性结合，通过测定结合物的含量来判断食品中真菌毒素的存在。
免疫分析法具有操作简便、成本较低的特点，适用于大规模的食品检测。
目前，已经开发出许多基于免疫分析法的商业试剂盒，可以在实验室和现场进行真菌毒素的快速检测。
然而，免疫分析法也存在一些局限性，如特异性较低、可能出现假阳性或假阴性结果等。
生物传感器是一种新兴的真菌毒素检测方法。
生物传感器利用生物分子与检测物之间的特异性结合，通过测定检测物与传感器之间的信号变化来检测真菌毒素的存在。
这种方法具有快速、便携、实时监测的优点，并且可以在食品生产现场进行检测。
目前，已经研发出许多基于生物传感器的真菌毒素检测方法，如基于DNA、RNA、抗体和酶等的生物传感器。
这些生物传感器在真菌毒素的检测方面取得了一定的研究进展，但还需要进一步的优化和应用。
除了上述方法外，还有一些新的技术正在被研究用于食品中真菌毒素的检测与分析，如纳米材料和微流控技术等。
这些新技术具有高灵敏度、高特异性和低成本的优点，有望成为未来真菌毒素检测的重要方法。
粮食中三种主要真菌毒素常用定量检测技术概述
真菌 毒 素是 真 菌产 生 的次 生代 谢 肾、肝、肺 和神 经 系统 有一 定 的毒害 要 求不 一 ，疫 学方 法特 异性 高 ，对 样 产物 ， 是粮食产 品的主要污染源之～ ， 作 用 ，可 以使 神 经系 统亢奋 ，造 成很 品净化 程度 要求 相对较 低 ，一 般不 需 （ Ｔ Ｌ Ｃ）以及 高效液相 色谱法 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ） 对样 品净化 程度 要求较 高 ，所 得提 取
至关 重 要。黄 曲 霉毒素 Ｂ （ Ａ Ｆ Ｂ Ｉ）、 是污 染最 为普 遍 的三种 毒 素 ，在 国家
刺激 、 拒食 、 神经紊乱、 流 产和 死 胎 等 ， 玉米赤霉烯酮 （ Ｚ Ｅ Ｎ） 、 呕 吐毒 素 （ Ｄ Ｏ Ｎ） 欧盟分类标准为三级致癌物。
２ 三 种 真 菌 毒 素 的 定 量 检 测 液 分离 、 固相 萃取 和免 疫亲 合柱 等。 般 玉米赤霉烯 酮 （ Ｚ Ｅ Ｎ） 和 呕 吐 毒 素 标准 Ｇ Ｂ ２ ７ ６ １ — ２ ０ １ ７中对各类 粮食 中的 方法
样 品经提 取、 浓缩和 薄 层分离 后 ，在 涡旋 和 离心 （ 或 过滤 ）等 前处 理 后 ， 紫外光 （ 波长 ３ ６ ５ ｎ ｍ） 下 产生蓝 紫色 试 样上 清液 或标 准 品中 的真 菌 毒素 与
验 方法会越 来越 多 。 越来越简便 。
参考 文献
【 １ ］ 吕波 ， 孙 国君 ， 王兵兵 ， 等 ． 呕
检 出 限为 ３ ０ ０ ｇ ／ ｋ ｇ 。因 Ｔ Ｌ Ｃ法 优 点 范 围 内呈 反 比。酶 联免 疫法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 是 适 合 于 没 有 经 过 专 门培 训Ｉ 的 人 员 操 具 有 灵敏、操 作 简便 、样 品前处 理 无 【 ２ ］ 林 怡 ， 黎 乐 群 ，彭 涛 ． 黄 曲
粮食及其制品中真菌毒素的检测方法
真菌毒 素的检测方法有很 多种 比 测多种毒素 而同种粮油或其制品常易被 较 经典且已经形成 国家标准或行业标 准 多种毒素同时污染， 因此发展出了可同时
予 以 实 施 的 检 测 方 法 主要 包括 高 效 液相 测定多种真菌毒素的液质联用法 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ —
３ ４食 品 安 全 导 刊２ ０ １ ５ 年 １ ｏ 月
ｗＨ Ｏ ） 的癌症研 究机构划 同毒素同时存在时 真菌毒效 液相 色谱法是 目前粮油食品中
类致癌物， 也 是 世 界 各地 农 产 品及 真菌毒素定量检测的主要方法， 其检测过 加效应 （ 如黄曲霉毒素和赭 曲霉毒素、 呕 定 为 １
在我国新近颁布的真 量、 持续摄入 时间， 环境 因素 （ 包括环境 过被污染的谷物、 饲料和由这些饲料喂养 检测中的关键步骤。 卫生 、 空气 质量 温度、 湿度 ） 等。 目前， 的动物所提供的动物性食 品进入人们 的 菌毒素检测标 准方法中 主要采用免疫亲 食物链 ， 从而对人畜表现 出致癌性 、 遗传 和柱净化一 高效液相色谱法 ， 该方法已经 毒Ｉ ｌ 生 和致畸性。目 前， 全世界已有１ ∞ 个国 成为国家标准的主流方法。
危害较大的主要有黄曲霉毒素， 玉米 荧光 光度法 、 酶 联免疫 法、 胶体金 检测 对人类和动物有害。 ～种真菌可能产生多 种， 种毒素， 多种真菌可能产生同一种毒素。
赤霉烯酮、 呕吐毒素 、 赭 曲霉 毒素Ａ 、 伏 条法等。
Ｈ Ｔ ２ ／ Ｈ Ｔ ２ 毒素等。 其中 黄曲霉毒 通常粮食或饲料 中的真菌毒素并非单独 马毒素￣ 被世 存在 可能以一种或数种毒 素为主． 当不 素是天然 物中致 癌性最强的毒素 ，
家规定了 粮食中主要真菌毒素的限量， 我
由于真菌毒素的种类较多 ， 其化学性
中毒性病原真菌检验技术
中毒性病原真菌检验技术♦凡能产生毒素、导致人和动物发生急性或慢性中毒症的真菌，称为中毒性病原真菌。
♦即使是同一种真菌，例如串珠镰刀菌，也不是所有菌株均能产生毒素，只有产毒素的菌株才有病原性。
真菌毒素的种类肝脏毒:主要致肝细胞变性、坏死，或引起肝硬化、肝癌，如黄曲霉毒素等。
肾脏毒:主要引致急性或慢性肾脏病变，可使肾功能完全丧失，如橘青霉素等。
神经毒 : 主要造成大脑和中枢神经系统的损害，引起严重的出血和神经组织变性，如黄绿霉素。
造血组织毒 :主要损害造血系统，发生造血组织坏死或造血机能障碍、白血球减少症等，如某些镰刀菌毒素。
毒素的产生♦首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质、温度和湿度。
♦基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。
一般而言，真菌产毒菌株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物源基质上产毒能力较低。
♦霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为25~30℃，低于l0℃或高于40℃生长减弱，产毒素能力也会受到影响。
♦基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切相关，基质含水量在17%~18%时为真菌产毒素的最适条件。
毒素的检验检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法等。
生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。
ELISA法操作简便，并具有安全快速高效、费用低，适用于大批量标本的筛选。
中毒性1青霉菌属:本属的基本形态：营养菌丝从无色到有鲜明颜色，菌丝有隔，分生孢子梗有隔，光滑或粗糙，顶端有呈扫帚状的轮生分支，称帚状支；分生孢子星球形、椭圆形或圆柱形，光滑或粗糙大，部分呈黄绿、绿或灰绿色。
①黄绿青霉♦又称毒青霉。
分布广泛，可从霉变米或土壤中分离。
本菌分生孢子梗从贴于基质表面的菌丝中生出，壁光滑。
帚状支多为单轮，分支较少，小梗密集。
分生孢子呈球形或近似球形，直径2.2~2.8um，壁薄而光滑，呈串状，可达50um以上。
食品中真菌毒素的检测方法研究
食品中真菌毒素的检测方法研究近年来，食品中的真菌毒素问题备受关注。
真菌毒素是由一些常见的真菌产生的有害物质，存在于谷物、坚果、蔬菜和水果等食品中。
长期摄入含有真菌毒素的食品会对人体健康造成潜在威胁，因此研究食品中真菌毒素的检测方法显得尤为重要。
一种常用的检测方法是高效液相色谱-质谱联用技术，简称HPLC-MS。
这种方法通过将食品样品制备成液态，利用色谱分离和质谱检测技术精确测定食品中的真菌毒素含量。
这种方法具有灵敏度高、准确度高的特点，能够有效检测出食品中微量的真菌毒素。
然而，HPLC-MS方法需要昂贵的设备和专业的技术人员操作，限制了它在实际检测中的应用范围。
近年来，研究者们也开始探索使用基于免疫学原理的检测方法，如酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
ELISA方法是一种基于抗原-抗体反应的颜色测定法，通过将真菌毒素和特异性抗体相互作用，再添加标记的酶抗体来定量测定真菌毒素的含量。
相对于HPLC-MS方法，ELISA方法具有操作简便、成本低廉等优点，适用于大规模食品检测。
然而，ELISA方法的选择性和灵敏度相对较低，容易受到其他物质的干扰，不能提供准确的检测结果。
在研究中，一些学者提出了结合HPLC-MS和ELISA的方法，称为两步法。
首先，利用ELISA方法进行初筛，快速而粗略地确定食品样品中真菌毒素的存在与否。
然后，再利用HPLC-MS方法对初筛出阳性的样品进行精确检测。
通过两步法，既保证了检测速度，又提高了检测准确度。
这种方法已被广泛应用于食品中真菌毒素的检测，取得了良好的效果。
除了HPLC-MS和ELISA方法外，还有一些新兴的检测方法也值得关注。
例如，纳米技术在真菌毒素检测中的应用。
纳米技术利用纳米材料的特殊性质，如表面增强拉曼光谱和金磁纳米粒子等，能够提高检测的灵敏度和选择性。
研究者们开发了一种基于纳米技术的真菌毒素快速检测装置，通过与食品样品结合，利用纳米材料的放大效应进行测定。
这种方法不仅具有高灵敏度和高选择性，还可以在短时间内完成检测，有望在食品安全监测中得到广泛应用。
75种真菌毒素检测方法
75种真菌毒素检测方法
真菌毒素是一类对人体健康有害的化合物，因此检测真菌毒素
的方法至关重要。
目前有多种方法可用于检测真菌毒素，以下是其
中一些常见的方法：
1. 高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS），这是一种常用的检测
真菌毒素的方法，通过分离和鉴定样品中的真菌毒素。
2. 气相色谱-质谱联用（GC-MS），这种方法也常用于检测真菌
毒素，特别是挥发性真菌毒素。
3. 酶联免疫吸附测定法（ELISA），ELISA是一种常规的生化
实验技术，也可以用于检测真菌毒素，具有高灵敏度和高特异性。
4. 荧光免疫分析（FIA），这是一种基于荧光信号的检测方法，可以用于真菌毒素的快速检测。
5. 生物传感器技术，生物传感器结合生物识别元件和传感器技术，可以实现对真菌毒素的高灵敏度检测。
6. 核磁共振（NMR），核磁共振技术可以用于对真菌毒素进行结构鉴定和定量分析。
7. 毒素生物学检测法，利用细胞培养、动物实验等方法，观察真菌毒素对生物体的毒性作用，从而进行检测和评估。
8. 基因检测法，利用PCR等分子生物学技术，可以检测真菌毒素产生真菌的基因或者真菌毒素的基因序列。
此外，还有许多其他检测真菌毒素的方法，每种方法都有其适用的场合和优缺点。
在实际应用中，常常需要综合考虑多种因素，选择合适的方法进行真菌毒素的检测。
希望以上信息能够对你有所帮助。
常见产毒霉菌的鉴定.
显微镜下的黄曲霉毒素
在低倍显微镜 下观察可见分生 孢子头疏松放射 状、继变为疏松 柱状。分生孢子 梗多从基质生出， 长度一般小于 1mm
菌丝体
有些菌丝产生带褐色的菌核
※下面以黄曲霉为例、介绍有 毒霉菌的鉴定
黄曲霉形态特征：
属于黄曲霉群，在察式琼脂培养基上 菌落生长较快，10-14天直径3-4cm或47cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老 后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面 无色或带褐色
中国农业大学教授何计国说，容易受黄曲霉
毒素污染的食品包括玉米、花生、大米、其次是 大麦小麦等。
黄曲霉毒素危害性有多大呢？据专家介绍， 黄曲霉毒素的毒性是氰化钾的１０倍，砒霜的６ ８倍。误食了黄曲霉毒素污染的食品的患者，轻 则可能出现发热、腹痛、呕吐、食欲减退等症状， 重则可能出现肝区疼痛、下肢浮肿及肝功能异常 等中毒性肝病症状。广州市奶业协会会长王丁棉 说，在自然条件下，即使用１００℃的温度进行 ２０个小时的灭菌，也不一定能将其彻底杀灭或 去除
培养物，置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开
成小块，切记涂抹，以免破坏霉菌结构。然后加盖玻片，
如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接种
罩内操作，以防孢子飞扬。
4.镜检
观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的摆列等，并
做详细记录。
二、鉴别方法
预先将检验中的霉菌或检验中分离出的霉菌孢子培养
后的霉菌进行纯培养。
1.平板菌落观察
﹙1﹚制备平板 准备两个灭菌的察氏琼脂平板。
﹙2﹚接种
用点植法将纯培养基物接种于察氏琼脂
平板，霉菌接种两个平板。
﹙3﹚培养 将接种的平板于25-28摄氏度温箱中培养5-14
天。
食品中真菌毒素的检测与防治措施
食品中真菌毒素的检测与防治措施食品安全一直是人们关注的焦点之一，而其中真菌毒素的检测和防治成为了保障食品安全的重要环节。
本文将就食品中真菌毒素的检测与防治措施进行探讨，以期提高公众对食品安全的认识和意识。
一、真菌毒素的检测方法1.1 环境学检测方法环境学方法是通过分析食品生产过程中存在的真菌菌落数和真菌毒素浓度以及食品样品中的真菌种类来进行检测。
这种方法在食品生产过程中能够及早发现真菌的滋生情况，但并不能准确测定食品中真菌毒素的含量。
1.2 化学检测方法化学检测方法是目前比较常用的真菌毒素检测方法，通过分析食品样品中的真菌毒素含量，并运用仪器设备对其进行测定。
这种方法具有高度的准确性和灵敏度，能够为监管部门提供有力的数据支持。
1.3 生物学检测方法生物学检测方法主要通过酶联免疫吸附检测技术（ELISA）和生物传感器技术来进行检测。
这种方法能够快速、准确地测定食品中真菌毒素的含量，并且不需要复杂的仪器设备，成本较低，适用于大规模检测。
二、真菌毒素的防治措施2.1 生产环境管理食品生产过程中，保持生产环境清洁卫生是防治真菌毒素的基础。
对于农产品来说，科学合理地施肥、浇水和防除病虫害是重要的保障。
同时，对于加工场所，要进行定期的清洁消毒，避免真菌滋生。
2.2 合理的贮存和运输在食品贮存和运输过程中，应注意温湿度的控制，避免食品受潮发霉。
此外，要防止食品与真菌污染源接触，保持食品的干燥和通风，减少真菌的生长。
2.3 合理的加工工艺在食品加工过程中，应采用适当的杀菌、热处理和干燥等技术，以杀灭和抑制真菌的生长。
同时，要严格控制原料的质量，并加强对加工设备和场所的卫生管理，确保食品的安全。
2.4 严格的监管和检测政府和监管部门应加强对食品生产过程的监督管理，建立健全的食品安全监测体系，及时发现和处理食品中真菌毒素的问题。
同时，要加强对食品生产企业的抽检，提高食品安全合规性，保障公众的健康。
结语食品中真菌毒素的检测与防治是确保食品安全的重要环节，需要政府、食品生产企业和公众的共同努力。
真菌毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法
就 会产 生霉 菌 毒 素 ， 由于 真 菌 生 长 有 一 主 要 表 现 为 雌 性 激 素 亢 进 ， 能 引 起 猪 免 疫 功 能 ） 、消 化 系统 （ 引 起 消 化 道 出 定 的地 域 性 ， 因此 ，不 同 区域 占优 势 的 和 牛 的不 孕 或流 产。猪 对 霉菌 毒 素敏 血 坏 死 ） 、 神 经 系统 及 生 殖 系统 等 。 真菌毒素种类也不同。
Ｔ Ｓ 一 ２（ Ｔ 一 ２毒 素 ）
３ ０ ０种 ，其 中包 括 黄 曲霉 毒 素 、 赭 曲霉 曲霉毒素 Ｂ １ 含量由高到低依次为棉粕、 毒 素 、玉 米 赤 霉 烯 酮 以及 其 衍 生 物 类 毒 家 禽 配 合 饲 料 、莱 粕 、 玉 米 、 仔 猪 配 合 素 、Ａ 型 单 端 孢 霉 烯 族 、Ｂ型 单 端 孢 霉 饲 料 、 麦 麸 、 豆 粕 、 鱼 粉 和 小 麦 。 我 国
禽 类对 Ｄ ＯＮ耐 受性 较 强 ，而猪 较 敏 感 ，
仔 猪 尤 为如 此。
动物食用被其污染的原料生产的饲料 ，
可 引 起 中 毒 。 ＯＴ Ａ对 食 品 污 染 的 范 围 些 毒 素 甚 至 可 以诱 导 基 因突 变 和 产 生 致
较 广 ，包 括 谷 物 、 咖 啡 豆 、 豆 类 、 可 可 癌 性 作 用 ，有 些 则 显 示 出 对 某 些 特 定 器
４ ６ ％ ， 肉 大鸡 配 合 饲 料 未 见 超 标 ，并且 菌 、 曲 霉 、 青 霉 、镰 刀 菌 和 链 格 孢 的次
养 麦 、大 米 、棉 籽 以及 某 些 青 干饲 草 中 ，
生 代谢 产 物 （ Ｄ ‘ Ｍｅ ｌ ｌ ｏ，２ ０ ０ ３ ） 。 产 毒 真 菌 类 污 染 食 品 后 ，可 使 食 用 者 中毒 ，有
真菌毒素的检验
待测抗原
洗
洗
涤
涤
酶联免疫竞争法工作原理
（1）酶联免疫吸附法-竞争抑制法测AFB1
• 试剂：TMB，30%H2O2，牛血清白蛋白，吐温-20 • 抗体：抗AFB1的特异性单克隆抗体 • 包被抗原：AFB1与载体蛋白的结合物 • 酶标二抗： • 缓冲液：磷酸盐缓冲液、终止液1mol/L的硫酸 • AFB1标准溶液：
• 步骤：
• 1.提取：10g样品+50ml乙腈-水 滤纸过滤 BSA洗液稀释
• 2.测定：包被抗原包被酶标微孔板
洗液洗去多余抗原
加AFB1标准溶液
度1.5h)
洗液洗3次后，加酶标二抗（ 37度培养2h） 反复洗后加底物溶液
加稀释抗体（37 加终止液
• （包被—加样---加酶标抗原和待测抗原---加底物显色—终止反应
原反应，形成有色物质，其颜色的深浅与标本中的抗原或抗体 的量直接相关。
ELISA方法的基本类型
（一） 双抗体夹心法 （二） 间接法 （三） 竞争法
（一）双抗体夹心法 待测抗原
酶标抗体和底物
特异性抗体吸
附于固相载体
洗
涤
洗 涤
洗 涤
（二）间接法 待测抗体
酶标抗抗体
洗
洗
洗
涤
涤
涤
（三）竞争法 酶标抗原
• （显色原理对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测 抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，
使固相上结合的酶标抗原量减少。
固定OD值
微孔板
AFB1包被抗体
微孔表面情况
• （2）赭曲霉毒素
真菌毒素怎检测方法了解一下
真菌毒素怎检测方法了解一下真菌毒素(mycotoxins) 是由真菌寄生于谷物或水果等农作物上，在适宜条件下产生的具有生物活性的一类物质。
真菌和真菌毒素的广泛存在，严重影响农作物的产量，降低农产品和饲料品质，造成巨大经济损失。
据悉，全/世界每年由于霉变污染真菌毒素引起的农产品和工业原料的损失达数百亿美元。
我国谷物霉变主要发生在北纬31°线即长江以南地区，每年使粮食减产3～7％。
据调查，除粮食、饲料以外，在油料作物、种子、水果、干果、蔬菜、调味品、烟草、麻类、乳和乳制品、鱼虾、肉类、发酵产品等都发现了不同程度的真菌毒素污染。
所以在某种程度上比其他毒素如细菌毒素更危险。
粮食及饲料中真菌毒素的检测方法可以分为三类：一类是生物学检测法，包括种子发芽试验、呕吐试验等，很不利于快速检测，已很少采用；一类是理化检测法，薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)。
TLC虽然简便，但灵敏度差；HPLC虽然灵敏度高，但样品处理烦琐，操作复杂，仪器昂贵，标准品耗用大。
另一类是免疫化学检测法，如ELISA方法和胶体金免疫层析方法。
ELISA法特别适宜大批样品集中检测，胶体金免疫层析方法适合现场单个或少数样品即时检测。
真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理，利用纳米胶体金层析技术，在真菌毒素的现场检测时具有以下优势：1) 单个样品即可检测，无需仪器设备，特别适合现场检测；2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级，ELISA法最/低检出量可达pg级，并可定量测定。
3) 特异性强：抗体抗原的免疫反应特异性很强，结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小，可检测样本本身颜色深的产品，如玉米。
4) 操作简便，反应迅速:由于特异性强，简化了样品的预处理和提取纯化过程，同时操作步骤也非常简便，5~10分钟即可判读结果。
5) 结果判读简单，通过判读胶体金出线情况即可肉眼识别结果，重复性高，不易产生人为误差。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
产毒真菌的检测方法
产毒真菌大部分属于曲霉菌、青霉菌属和镰刀菌属中的一些种，这些霉菌在自然界分布广泛，对储粮、动物饲料和食品侵染的机会较多，通过检测这些霉菌和毒素反映食品的安全性。
1、材料和试剂
（1）、器材：温箱（25—28℃）、目镜测微尺、物镜测微尺、显微镜、超净工作台、放大镜、三角瓶、试管、平皿、酒精灯、载物玻片、盖玻片等。
（2）、培养基和试剂：察氏培养基、马铃薯一葡萄糖琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基、灭菌蒸馏水、乙醇。
2、方法
（1）、采样采取有代表性的样品250—500g，尽快检验。
（2）、表面除杂菌如为粮粒样品，取样品10—20，放入灭菌的150ml三角瓶中，无菌条件下加入无菌水超过样面1—2cm左右，塞好塞子充分振摇1—2min；将水倒净后，再加水振荡，反复洗涤10次，弃去水后。
将粮粒倒于无菌平皿中备用；原粮样品应先用75%酒精浸泡1—2min，脱去粮粒表面蜡质，倾去酒精后，再用上法洗涤，备用。
（3）、接种与培养：用无菌镊子将已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板上（粮粒的一部分插入培养基中）、，小粒样品如大米接种10粒/皿，大粒的样品如玉米、大豆等接种5粒/皿，每份样品须接种100粒。
将种有样品的平皿置25—28℃孵箱培养5—7d，培养后期应每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。
（4）、计数：记录100粒粮食中长霉菌的数量，同时记录每一粒所生长的霉菌数，计算霉菌侵染的粒数和菌落生长的总数。
在计数时，只计数与粮粒相连接的菌落。
（5）、镜检与初分离：用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1—2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用两支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖上盖玻片，先在低倍镜下找到培养物。
再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。
如为曲霉属可见典型的分生孢子头；青霉属的真菌镜下可见有鉴别意义的帚状枝；而镰刀菌属可见镰刀状的大分生孢子等。
将它们分别转种于相应的鉴别培养基平板和斜面，25—28℃孵箱培养5
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
—14d。
（6）、常见产毒霉菌鉴定：霉菌的鉴定主要依靠形态特征，包括菌落特征和镜下特征。
需观察的镜下特征包括霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，并详细记录。
3、实验结果
常见真菌菌落特征如下：
（1）、菌落生长的速度：用培养一定天数的菌落直径大小来表示霉菌生长的速度，也可用局限生长表示生长速度慢，蔓延生长表示生长速度快。
（2）、菌落的颜色：霉菌菌落的颜色应包括菌落表面的颜色、菌落背面的颜色、菌落周围培养基的颜色，以及霉菌在不同生长阶段的颜色变化。
（3）、菌落的质地：根据菌丝的长短、疏密以及孢子的有无和多少，菌落的质地可为绒状、絮状、绳状和束状。
（4）、菌落的表面：疏松或致密，平坦、凹陷或隆起，有无皱褶，有无放射状或同心环状的沟纹，边缘是否整齐等。
（5）、渗出物：有的菌种常常在菌落表面出现带颜色的似液体物即为渗出物，记录其色调和分泌的量。
（6）、气味：是否出现除霉味以外的其他特殊的气味。
（7）、菌丝：由孢子在环境适合情况下长出的芽管延长而成，可长出许多分枝，形成交织成团状的菌丝体。
在显微镜下为或粗或细、有隔或无隔的、具分枝的结构。
有的皮肤感染的真菌会形成螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状及梳状等具鉴别意义的特殊菌丝。
但粮食中真菌的菌丝一般无鉴别意义。
（8）、孢子：是真菌的繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢子，当环境条件适合时，孢子又发芽发育成菌丝。
根据产生孢子的方式不同，分为有性孢子和无性孢子两类。
有性孢子有接合孢子、卵孢子、担孢子和子囊孢子；无性孢子有分生孢子、孢子囊孢子、叶状孢子（包括芽生孢子、厚膜孢子和关节孢子）、。
在产毒霉菌鉴定中后者更有意义。
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。