中药药理学实验课教案

实验一附子炮制前后致小鼠中毒死亡的情况比较
实验目的：用小鼠死亡数观察附子炮制前后毒性的不同
实验原理：附子的有毒成份主要是乌头碱。

它的性质不稳定，经长时间用水浸泡和加热煎煮炮制，都可使乌头碱水解成毒性较小的苯甲酰乌头胺和乌头胺。

生附子中乌头碱含量高，经过炮制后乌头碱含量减少，毒性也降低，引起动物中毒死亡的剂量就比生附子大得多。

实验器材：小鼠笼（或罐）、电子天平、注射器（1ml），小鼠灌胃针头。

药品：生附子和熟附子水煎液1g/1ml、苦味酸。

材料：小白鼠。

体重18-22g，雌雄不拘。

实验方法
1，取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生附子和炮制后的附子水煎液灌胃。

30min后观察两组小鼠中毒症状和死亡数有无不同。

2，生附子灌服后约20min动物出现腹部收缩，身体摇摆，步态不稳和不安静等现象；30min 左右可能死亡。

而炮制附子水煎液灌服后则无此中毒现象。

观察结果并记录。

实验结果：
思考题：
1.中药炮制后对临床有何指导意义
2.为预防附子中毒，应如何降低其毒性
延胡索炮制前后镇痛作用的影响
实验目的：通过醋酸扭体法观察延胡索炮制前后镇痛作用的变化
实验原理：延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。

延胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。

延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱但优于复方阿司匹林，对钝痛的作用优于锐痛。

与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。

镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。

生品中游离生物碱难溶于水，煎液中有效成分低，醋制后生物碱成盐，易溶于水，镇痛作用增强。

左旋四氢巴马汀是一个多巴胺受体阻断剂，其镇痛作用机制可能与阻断脑内多巴胺D1 受体，使纹状体亮氨酸脑啡肽含量增加有关。

实验方法：
取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生延胡索和炮制后的延胡索水煎液灌胃。

45分钟后分别腹腔注射0.7％冰醋酸溶液。

15min后观察小鼠们15分钟内扭体的次数。

实验结果：
思考题：
1.炮制后延胡索镇痛作用增强的原因
实验二：生大黄制大黄对小肠运动的影响
实验目的：观察泻下药大黄、制大黄对小白鼠肠蠕动的影响以及它们的药理研究。

实验原理：大黄的主要成分为蒽醌衍生物及二蒽酮类衍生物，大黄为泻下药的代表，临床发现病人大量服用大黄后会产生继发性便秘，在中医治疗中，常以芒硝、厚朴、枳实等配伍应用，以减轻此副作用。

现代研究表明，是因为大黄同时含有泻下作用的蒽苷及止泻作用的鞣质所致，蒽苷泻下作用强而作用时间较短，鞣质止泻作用强度较弱而作用时间长，大黄不同炮制品的致泻强度亦不同，生大黄的致泻强度高于熟大黄（九蒸九晒品、热压一次品及热压三次品）和制大黄酒（或醋）炒后泻下效力降低30%左右。

有研究表明，大黄煎煮时间越长，致泻作用愈小，以热水浸50℃以下减压浓缩为好。

实验步骤：取体重20±2g相近的小白鼠8只，随机均分为2组，每组4只，用苦味酸做标记。

分别用上述3种炭末液0.2ml/10g体重灌胃。

给药30min后脱颈椎处死，切开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲肠的肠管，置于托盘上。

轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”，从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠内推进距离”，取各组小鼠平均值，用公式计算炭末推进百分率。

炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）÷小肠全长（cm）×100%
实验结果：
思考题：1.大黄泻下的主要成分及机制
2.大黄炮制前后化学成分有何变化
实验三：猪苓泽泻对家兔的利尿作用
实验目的：学校导尿法，观察猪苓泽泻的利尿作用
实验原理：猪苓味甘、淡、性平，归肾、膀胱经，具有利尿渗湿作用,且作用于黄芪、玉米须、木通、淡竹叶等。

主治小便不利、水肿、泄泻、淋浊、带下。

实验研究表明猪苓的利尿作用与抑制肾小管对水、电解质的重吸收有关,但其利尿特点及分子生物学机制尚不明确。

研究发现，其为利尿药，也有降血压的作用，可医治肾性水肿、心脏性水肿、烦热口渴、小便不利、泻痢及其他新陈代谢障碍等。

猪苓提取物对肾结石大鼠实验表明: 猪苓具有明显促进肾排泄Na+、k+、cl-,而抑制尿ca+排泄及抑制尿草酸钙结晶的生长与聚集作用，同时其肾脏骨桥蛋白(OPN) mRNA的表达也得到抑制，表现出明显的利尿和抑制尿结石形成作用，并具有明显的肾功能保护作用。

研究发现，猪苓含钾量不高(30mg) ，亦不稀释血液，其利尿作用可能是由于抑制了肾小管对电解质和水的重吸收。

泽泻性寒,味甘、淡，归肾、膀胱经。

具有利水渗湿、泄热之功效。

用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。

泽泻有明显的利尿作用,这与其含有大量的钾盐有关。

泽泻可用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高脂血症、泽泻含三萜类化合物及甾醇、生物碱、苷类、黄酮、有机酸、氨基酸、多糖、挥发油等成分。

研究发现，泽泻对人及家兔均有利尿作用，可使健康人尿量增加63%，尿中排钠、尿素量也增加，而泽泻经甲醇、苯和丙酮提取的组分T 10mg/kg给药可使猫和兔的血压下降。

实验步骤：取一只家兔称重,固定，耳缘静脉注射生理盐水10ml/kg,固定在手术台上，插导尿管，排空膀胱内尿液，收集5～10min内尿液两次，一只家兔灌胃猪苓泽泻水煎液，另一只灌胃等量的生理盐水，30min后收集30min的尿液。

实验结果：
思考题：
1.影响中药利尿的因素有哪些？
2.猪苓利尿作用机制
3.泽泻利尿作用机制
实验四三七对小鼠出血时间和凝血时间的影响
实验目的：学习玻片法测定出血时间及凝血时间的测定，观察三七缩短出血时间的作用
实验原理：三七具有良好的止血功效，能明显缩短出血和凝血时间。

研究表明，三七的止血成分主要为三七素（Dencichine）。

三七素能促使血小板聚集、变形，释放ADP、血小板因子Ⅲ和钙离子等物质而达到止血作用。

三七中含有的三七皂苷与人参皂苷均对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显抑制作用，且表现出剂量——反应模式。

在同等剂量下三七总皂苷与人参总皂苷的作用没有明显差异。

三七皂苷表现出对血浆凝血因子与血小板聚集性均有抑制作用。

且在对血小板聚集的抑制方面，三七皂苷与人参皂苷的作用相当。

人参三醇型皂苷具有溶血作用，人参二醇型皂苷的溶血活性很低。

因此，三七具有活血化瘀的功效！
实验步骤：取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的三七和等量的生理盐水灌胃。

30min后剪去小鼠尾端尾巴3mm左右，每隔30秒用滤纸轻轻吸除尾巴上的血，直至血流自然停止。

然后45min左右，眼球取血滴于再玻片上两滴。

计时，每隔30秒用针头轻佻，直至有血丝出现，马上挑另一只予以验证。

即为凝血时间。

实验结果：
思考题：
1.三七及三七伤药片对凝血时间有何影响，此作用临床意义何在？
2.测定凝血时间有何临床意义？
实验五桔梗对小鼠的祛痰作用
实验目的：学习酚红从呼吸道分泌法，观察桔梗对小鼠的祛痰作用
实验原理：指示剂酚红自小鼠腹腔注射并经腹腔吸收后，可部分地由支气管黏液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物在使支气管分泌液增加的同时，其由呼吸道粘膜排出的酚红也随之增多。

因而可从药物对气管内酚红排泌量的影响来观察其祛痰作用。

酚红在碱性溶液中呈红色，将气管放入定量的生理盐水中，加碳酸氢钠使其显色，用比色法，分光光度计，测出酚红的排泌量。

从而得到药物的祛痰作用。

实验步骤：取小鼠 4 只，随机分为对照组和桔梗水煎液组，按20ml/kg，体重，灌胃给药30min 后。

对照组给同体积生理盐水。

由腹腔注射酚红溶液0.5ml/只。

30min 后颈椎脱臼处死小鼠，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有3ml 生理盐水的试管中，再加入0.1ml 碳酸氢钠溶液。

比较生理盐水组和桔梗组的液体颜色。

实验结果：
思考题：
1.桔梗祛痰作用的机制？
实验六人参对小鼠游泳时间的影响
实验目的：了解人参对小鼠游泳时间的影响，掌握疲劳作用药物的常用筛选方法
实验原理：人参能促进人体对糖原和三磷酸腺苷等能量物质的合理利用，并使剧烈运动时产生的乳酸转化为丙酮酸进入三羧酸循环，为机体提供更多的能量，减轻体力运动时的疲劳。

本实验以小鼠游泳时间为指标观察人参的抗疲劳作用。

实验步骤：玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5℃。

取4只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。

给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min分别放入玻璃缸内游泳，立即计时并注意观察，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，停止计时，记录小鼠游泳时间。

与对照组比较并进行统计学处理。

分别算出两组的平均游泳时间实验结果：
思考题：
1.为什么人参可以抗疲劳？
2.影响小鼠游泳时间的因素有哪些？。