药品的微生物学检查 SS
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1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。 2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。 3）双糖含铁培养基--- 动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。 4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验 1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。 2）抗生素---青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。
细菌基本形态 球菌
螺形菌
杆菌
葡萄球菌
链球菌
大肠埃希菌
枯草杆菌
霍乱弧菌
细菌特殊结构 鞭毛
荚膜
芽孢
spore 破伤风梭菌
实验三 药品的微生物限度检查（三） 微生物的形态学检查及药物的敏感性试验
一、目的要求: 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（三） 2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
2.细菌培养
外用药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
37℃,24小时
口服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37℃,24小时
3.细菌总数测定
将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释)
取四个中试管 各加9ml生理盐水
药物的微生物限度检查（三）
1）从伊红美兰琼脂平板培养基上----挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜
面培养基上面，进行细菌的纯培养。 2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生 长状况。
记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠 度等。
革兰氏染色镜下观察其菌落形态。 根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该 被检菌的名称。 3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌 落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。
分区划线法
菌落
斜面移种技术
菌苔
液体移种技术
穿刺技术
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 -----接种在伊红美兰琼脂平板培养基
上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：
选择30-300个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数
9ml生理盐水
从剩余10ml悬液中取1ml 1ml 加入上述四个稀释管中
1ml
10-1 10-2 10-3 10-4
从上述四个稀释管中各取1ml混入溶化的琼脂培养基中， 混匀，冷却后置37℃恒温培养箱培养24小时 。
实验二 药品的微生物限度检查（二） 细菌的形态学检查及培养接种技术
一、目的要求: 1、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培
养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有 2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲 基溴化胺琼脂斜面培养基上面。 方法：斜面化线接种； （2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高 盐琼脂平板培养基上面。 方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。
2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
菌膜 菌沉淀
对照 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ浊生长
均匀浑浊
菌膜生长
3.中草药、抗生素抑菌试验
药品的微生物限度检查实验目的
通过实验了解药品微生物限定检查法的 意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术 和程序，结果分析方法。
药品的微生物限度检查实验程序
一、药品的预处理 二、药品的增菌培养、结果分析 三、细菌分离鉴定、结果分析
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
• 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比 所需的pH高。
• 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然 后观察。
二、细菌的接种技术
材料
• 普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基 大肠埃希菌培养物（１套／台）
※方 法
1.平板划线接种法
（1）平行划线法 （2）分区划线法
2.琼脂斜面的接种方法 3.液体培养基接种法 4.半固体接种法
培养基分类
根据物理性状分类： 液体培养基
半固体培养基
固体培养基
根据用途分类：
基础培养基
营养培养基
选择培养基
鉴别培养基
厌氧培养基
主要用于增菌 用于检测动力及保存菌种 用于分离鉴定细菌 普通琼脂培养基 血液琼脂培养基 SS培养基 双糖铁培养基 庖肉培养基
※培养基的制备程序
※ 调配→矫正pH（7.0-7.6）→分装→ 灭菌（121.3℃， 20-30分钟）→放入冰箱冷藏备用。
药品的微生物学检查 ppt 课件
实验一 药品的微生物限度检查（一） 实验室常用消毒灭菌设备 空气和皮肤细菌检查方法（综合实验+基础实验）
一、目的要求 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药品的微生物限度检查（一）
1）口服药物的检查: ①药品的预处理： ②大肠杆菌的检查： ③细菌总数的检查：
2）外用药物的检查: ①药品的预处理： ②绿脓杆菌的检查： ③金黄色葡萄球菌的检查：
2.空气、皮肤细菌检查方法(验证) 3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：
高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、 移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。
特殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。 6.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基
※一、空气、皮肤细菌培养现象观察
（一）记录空气微生物培养结果 • 菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）
（二）记录皮肤微生物培养结果 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。
※培养基的制备
细菌基本形态 球菌
螺形菌
杆菌
葡萄球菌
链球菌
大肠埃希菌
枯草杆菌
霍乱弧菌
细菌特殊结构 鞭毛
荚膜
芽孢
spore 破伤风梭菌
实验三 药品的微生物限度检查（三） 微生物的形态学检查及药物的敏感性试验
一、目的要求: 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（三） 2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
2.细菌培养
外用药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
37℃,24小时
口服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37℃,24小时
3.细菌总数测定
将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释)
取四个中试管 各加9ml生理盐水
药物的微生物限度检查（三）
1）从伊红美兰琼脂平板培养基上----挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜
面培养基上面，进行细菌的纯培养。 2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生 长状况。
记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠 度等。
革兰氏染色镜下观察其菌落形态。 根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该 被检菌的名称。 3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌 落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。
分区划线法
菌落
斜面移种技术
菌苔
液体移种技术
穿刺技术
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 -----接种在伊红美兰琼脂平板培养基
上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：
选择30-300个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数
9ml生理盐水
从剩余10ml悬液中取1ml 1ml 加入上述四个稀释管中
1ml
10-1 10-2 10-3 10-4
从上述四个稀释管中各取1ml混入溶化的琼脂培养基中， 混匀，冷却后置37℃恒温培养箱培养24小时 。
实验二 药品的微生物限度检查（二） 细菌的形态学检查及培养接种技术
一、目的要求: 1、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培
养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有 2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲 基溴化胺琼脂斜面培养基上面。 方法：斜面化线接种； （2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高 盐琼脂平板培养基上面。 方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。
2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
菌膜 菌沉淀
对照 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ浊生长
均匀浑浊
菌膜生长
3.中草药、抗生素抑菌试验
药品的微生物限度检查实验目的
通过实验了解药品微生物限定检查法的 意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术 和程序，结果分析方法。
药品的微生物限度检查实验程序
一、药品的预处理 二、药品的增菌培养、结果分析 三、细菌分离鉴定、结果分析
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
• 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比 所需的pH高。
• 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然 后观察。
二、细菌的接种技术
材料
• 普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基 大肠埃希菌培养物（１套／台）
※方 法
1.平板划线接种法
（1）平行划线法 （2）分区划线法
2.琼脂斜面的接种方法 3.液体培养基接种法 4.半固体接种法
培养基分类
根据物理性状分类： 液体培养基
半固体培养基
固体培养基
根据用途分类：
基础培养基
营养培养基
选择培养基
鉴别培养基
厌氧培养基
主要用于增菌 用于检测动力及保存菌种 用于分离鉴定细菌 普通琼脂培养基 血液琼脂培养基 SS培养基 双糖铁培养基 庖肉培养基
※培养基的制备程序
※ 调配→矫正pH（7.0-7.6）→分装→ 灭菌（121.3℃， 20-30分钟）→放入冰箱冷藏备用。
药品的微生物学检查 ppt 课件
实验一 药品的微生物限度检查（一） 实验室常用消毒灭菌设备 空气和皮肤细菌检查方法（综合实验+基础实验）
一、目的要求 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药品的微生物限度检查（一）
1）口服药物的检查: ①药品的预处理： ②大肠杆菌的检查： ③细菌总数的检查：
2）外用药物的检查: ①药品的预处理： ②绿脓杆菌的检查： ③金黄色葡萄球菌的检查：
2.空气、皮肤细菌检查方法(验证) 3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：
高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、 移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。
特殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。 6.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基
※一、空气、皮肤细菌培养现象观察
（一）记录空气微生物培养结果 • 菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）
（二）记录皮肤微生物培养结果 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。
※培养基的制备