CA50凝血四项操作规程

Sysmex-CA50凝血四项操作规程

1.目的

规范凝血四项（PT、APTT、TT、FIB）的测定。

2.实验原理

凝固法原理：在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂后，采用波长为660nm 的光照射样本。凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，求得血液凝固时间。3.标本要求

3.1.标本准备：采用塑料采血管或硅化玻璃注射器静脉采血，针头必须为21号以上，儿童可用23号。采血技术熟练，采血时止血带不可束缚过紧，并且以1分钟完成为宜，最多不宜超过3分钟以免某些凝血因子及纤溶因子活化。

3.2.抗凝剂选择：以109mmol/L枸椽酸钠溶液为佳，血与抗凝剂按9：1混合。建议用已加有抗凝剂的硅化真空采血管。也可用带盖塑料管或硅化玻璃管，但应保证血与抗凝剂的比例正确。

3.3.收到血标本后应尽快离心分离血浆，并尽快测量，全血储存在4-8℃不应超过2小时，室温下富含血小板血浆可存放3小时，去血小板血浆可存放2小时；4小时内不能测定的血浆应冷藏；不要把血浆置于37℃条件下超过10分钟。应了解不同存放温度和时间对各种凝血因子活性检测的影响。

4.材料

4.1.试剂的选择一方面要根据所用检测仪器，例如：光电检测法的凝血仪不宜用透光度差的试剂；另一方面要根据实验试剂对疾病的敏感性，例如APTT试剂中所用活化剂不同（可用白陶土、硅藻土和鞣花酸），该试剂对肝素、凝血因子Ⅷ和因子Ⅸ缺乏及狼疮样抗凝物敏感性不同，所以需根据检测项目来选择不同活化剂。(例如常用的APTT试剂的活化剂，以白陶土对凝血因子敏感，硅土对因子及肝素均敏感，鞣花酸对狼疮样抗凝物敏感性较强.PT试剂的选择也一样,例如对口服抗凝药物(华法令)检测应选择ISI与1.0接近的PT试剂。)血栓与止血检验应尽可能选用仪器生产厂家推荐的配套试剂，并选择使用与仪器原理相匹配的试剂。

4.2.正常对照血浆：正常对照血浆有商品供应，多为冻干品，也可自制，要求采集20份以上男女各半，年龄在18-25岁之间的健康个体，删除服药者，须在平静状态下采血，血液经抗凝离心后分离血浆。取等量的各份个体血浆进行混匀，然后分装小瓶，冻存于-80℃或冷冻干燥备用。

4.3.参比血浆或称标准血浆（质控血浆）：为了使检测结果在同一实验室的不同时期或不实验室间具有可比性，就要使用标准品。

5.仪器与试剂

5.1仪器：sysmex CA-50半自动化血凝分析仪。

5.2试剂：上海太阳生物技术有限公司。

5.3仪器安装后应对其主要性能参数进行评价，内容包括精密度、线性范围、可比性、抗干扰试验试验等。评价结果应在仪器说明书标示范围之内。

5.4 仪器在测定常规标本前应使用配套的校正物建立标准曲线，在更换新批号的试剂或仪器维修后，要重新建立标准曲线。无校正物的测定项目，可伤使用配套的定值质控物进行测定，测定结果应在定值质控物标示的允许范围内。

5.5 每台仪器上使用的凝血活酶试剂应有特定的ISI（国际敏感指数）值，这样才能使患者INR（国际标准化凝血酶原时间）比值的结果有可比性。

自动终点测定目前得到广泛应用，仪器有半自动和全自动两种类型。仪器应用的检测系统有化学的、机械的或电子等，形成凝块所需时间也有差异。对每种方法都应建立自己正常参考范围，一些光学系统进行测定的仪器对血脂高、溶血、黄疸血浆不易得出精确的检测结果。

6.操作步骤

6.1 PT 检测步骤

6.1.1 打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，等待机器预温完成，显示测试界面。6.1.2 设置测试项目：按”select“键进入主菜单，在主菜单上按“1”显示通道选择画面。输入选择测试项目的通道号“1-4”选择“1”，再按“ENTER”键，按”select“键返回测试界面。

6.1.3 将PT应用试剂根据测试样本多少取适量于试剂预温位预热至37摄氏度10分钟。

6.1.4 加血浆50ul于空比色杯内（样本应加入杯子底部，不能有气泡），置于测试通道。6.1.5当检测部LED绿灯亮时，按“ch1/start”键，屏幕以倒计时的方法显示试剂加入时间，检测部LED红灯闪亮；试剂添加时间一到，报时鸣声响起，检测部的LED绿灯闪亮，此时加样时间有10秒钟，用加样枪吸取100ulPT工作试剂加入比色杯中，当加样器按到底后迅速盖上吸液管架，仪器自动开始检测，最后显示和打印测量结果。

6.1.6质控品、正常对照血浆：操作方法同样品。

6.1.7关机：取出比色杯，盖上吸液管架即可直接关机。

6.2 APTT检测步骤

6.2.1打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，等待机器预温完成，显示测试界面。

6.2.2 设置测试项目：方法同6.1.2

6.2.3将APTT应用试剂根据测试样本多少取适量于试剂预温位预热至37摄氏度10分钟；加血浆50ul于空比色杯内，置于测试通道或预温位预温3分钟。

6.1.4当检测部LED绿灯亮时，按“ch2/start”键，屏幕以倒计时的方法显示试剂加入时间，检测部LED红灯闪亮；试剂添加时间一到，报时鸣声响起，检测部的LED绿灯闪亮，此时加样时间有10秒钟，用加样枪吸取50ulAPPT工作试剂加入比色杯中，当加样器按到底后迅速盖上吸液管架，仪器继续倒计时显示试剂加入时间，报时鸣声响起，用加样枪加入50ul0.02 5mol/l的cacl2,盖上吸液管架，仪器自动开始检测，最后显示和打印测量结果。

6.1.6质控品、正常对照血浆：操作方法同样品。

6.1.6 关机：取出比色杯，盖上吸液管架即可直接关机。

6.3 TT检测步骤

6.3.1打开电源开关，仪器自检后进入主菜单页面，等待机器预温完成，显示测试界面。

6.3.2 设置测试项目：方法同6.1.2

6.3.3将TT应用试剂根据测试样本多少取适量于试剂预温位预热至37摄氏度10分钟；加血浆50ul于空比色杯内，置于测试通道。

6.1.4当检测部LED绿灯亮时，按“ch4/start”键，屏幕以倒计时的方法显示试剂加入时间，