死活细胞鉴定及细胞活力测定
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞是生物体的最小单位，它们构成了人体的所有组织和器官，由此可以看出细胞死活对生物体的关键重要性。
细胞死活的评价是定量化和定性分析生物活动的关键环节。
目前，细胞死活评价仍然是仅限于实验室内容易掌握的技能，且受到许多因素的影响，因此区别细胞死活的方法极其重要。
首先，最常用的方法是通过显微镜观察细胞活力。
要辨识细胞死活，必须通过使用显微镜来确定细胞的形状和质地的变化。
死细胞不易发育，通常会呈现出“静止细胞”的特征，这就是细胞脱水由于内部膜蛋白的变化。
而活着的细胞则会有更多的活力，表面有许多触手，破裂的细胞也很常见。
此外，将细胞从直接观察转变为定量测量也是一种有效的方法。
细胞活力可以用流式细胞术和其他定量技术来测量，最常用的是荧光技术，它可以直接定量测定细胞死亡率。
细胞外基质的变化也可以通过吸收法、荧光比色或其它技术来检测，以区分细胞死活。
此外，细胞死活可以通过凋亡因子、抗凋亡抗体以及蛋白质补体来识别。
凋亡因子有细胞膜活性物质（CAMs）和其他多种因子，可以分子识别细胞外胞质中的死细胞，从而激活死细胞的凋亡过程。
抗凋亡抗体可以识别凋亡过程中的蛋白质进而来识别细胞是否已经死亡。
蛋白质补体可以检测细胞形态上的变化，如染色体、线粒体和其它细胞结构的变化，可以用来识别细胞是否死亡。
最后，通过细胞老化技术也可以识别细胞死活。
细胞老化技术是一种新兴的研究方法，它可以测定细胞的老化情况，也可以检测细胞的死亡率。
主要的方法有DNA电泳、分子探针法和基因表达分析，以及其它从细胞老化到细胞死亡早期检测方法。
总而言之，以上是区别细胞死活的常用方法，我们可以通过显微镜观察细胞活力，定量测量细胞活力，通过凋亡因子和抗凋亡抗体，以及蛋白质补体，来识别细胞死活。
此外，还可以通过细胞老化技术等来识别细胞死活。
在此基础上，精确计算细胞死活率，为生物活动的分析提供重要的依据，成为定量和定性分析生物活动的重要环节。
细胞死活鉴定 实验报告
细胞生物学实验报告细胞死活鉴定1.实验目的：观察上次实验培养的小鼠脾细胞，掌握细胞死活鉴定的方法。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、血细胞鉴定板、盖玻片、胶头滴管、试管（2）实验药品：蒸馏水、台盼蓝染液、生理盐水、伊红染液（3）实验材料：小鼠脾细胞3.实验原理：（1）活细胞特征：细胞边缘清晰，细胞透明度高，整体立体感强，核区域明显，细胞质内颗粒物质较少，无空泡。
培养数天后，可观察到正在分裂的细胞。
（2）肉眼观察鉴定细胞死活：正常生长的细胞培养液微微发黄，透明度高；如发现培养液微混，则说明细胞量太大需进行传代培养，或者培养液被污染；如果培养液仍呈现清亮的粉红色，则说明细胞未生长。
（3）细胞凋亡特征过程：首先，细胞膜绒毛消失；然后，细胞收缩，细胞核高度浓缩，边缘化；最后，细胞核片段化，形成凋亡小体。
细胞核片段化时，如果对此类细胞进行DNA电泳，则会发现电泳条带呈梯状分布。
（4）细胞死活鉴定方法①染色排除法：细胞死亡后，细胞膜的通透性变大，染料可以通过细胞膜进入细胞。
因此，死细胞可以被染料染色，而活细胞由于细胞膜的选择透过性而呈无色。
②荧光染色法：活细胞需要进行代谢。
将荧光染料与有机分子结合（如二丙酸酯荧光素），使之易穿膜。
在活细胞中这些物质可被分解为荧光染料和有机分子（二丙酸酯和荧光素），在显微镜下观察，细胞被染色。
此种方法中，活细胞被染色，死细胞则呈无色。
（5）血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如果是对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计数，再将所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。
4.实验步骤：（1）台盼蓝染色法：①用生理盐水制成0.4%的台盼蓝溶液备用②取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加一滴染液，混合。
2 mins 后迅速制成临时装片，镜检。
（2）伊红丫染色法①用生理盐水制成0.15%的伊红染液混合② 2 mins 后制片镜检5.实验结果：视野中活细胞呈无色；死细胞呈蓝色，有些可观察到细胞核；还有少量细胞只有边缘部分呈蓝色。
细胞活力鉴定方法有哪些？
细胞活力鉴定方法有哪些？细胞活力=活细胞数/细胞总数×，常用台盼蓝法、MTT法或者CFSE法进行细胞活力检测。
台盼蓝法原理：活细胞不被染色，死细胞被染成蓝色。
方法：500ul细胞悬液加入500ul 0.4%台盼蓝染液，染色2-3分钟；将少许悬液涂于载玻片上，加上盖片，显微镜下取几个视野分别统计死细胞和活细胞数，计算细胞活力。
MTT法原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶可使外源性MTT分解产生水不溶性蓝色结晶状甲瓒颗粒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
DMSO溶解甲瓒后，用酶联**检测仪在540nm或720nm波长处测定其吸收值，可间接反映活细胞数量。
可用于生物活性因子的活性检测、大规模的**筛选、细胞毒性试验鉴定等。
方法：将细胞悬浮液以1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul，培养细胞3-5d（依据实验目的和要求决定培养时间）后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4）20ul，37℃温箱中孵育4h后，小心去上清，加入150ul DMSO溶解后，用酶标仪进行检测。
（市场上售卖的CCK8试剂盒，便是对MTT法的一种优化）。
CFSE法原理：CFSE进入活细胞后，可与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。
CFSE随着细胞分裂而平均分配至子代细胞中，而导致荧光强度逐级递减，依据这一特性，可被用于检测细胞增殖活力。
方法：制备细胞悬液后，加入等体积的CFSE工作液（2.5-5uM），于37℃孵育10 min，用10倍体积的预冷的基础培养基（不加血清）立即终止标记10min。
用PBS离心洗涤两次后，用适量的培养液重悬细胞。
培养一段时间后，离心收细胞，用PBS洗两次并重悬后，上流式仪器检测荧光强度的稀释比例。
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学家研究细胞活力水平和状态的重要指标，对于评估微生物或细胞繁殖能力、细胞对药物作用与耐药性的反应、细胞功能障碍、细胞毒性研究和诊断实验等都有重要的意义。
近年来，借助现代生物技术的发展，人们发展出了一系列检测细胞死活的方法，有效地区分出细胞的生长和死亡状态。
一、细胞膜活性的检测是区别细胞死活的重要方法。
细胞膜的活性是评估细胞活力的重要指标，可以显示细胞死活。
细胞膜活性可以通过测定细胞膜电位、直接检测细胞膜转运系统活性和监测活细胞特异性指标，如细胞凋亡标志物等来确定。
测定细胞膜电位能直观反映细胞结构的活力水平，是常用的检测细胞死活的方法。
二、一些结构性指标也可以用来区分细胞死活状态，如细胞形态、细胞大小和细胞质组成。
观察活细胞形态，其细胞体形状各异，并具有活动性。
细胞大小可以根据荧光显微镜和流式细胞仪监测，死细胞体积一般小于活细胞体积。
此外，也可以测定细胞质组成，如细胞培养基中活细胞含量远高于死细胞，因此可以通过分析细胞培养基中的活细胞含量来量化评价活细胞的死活。
三、检测细胞代谢特性也是一种常见的检测细胞死活的方法。
细胞代谢特性是衡量细胞活力水平的重要指标，如细胞的糖异构化、蛋白质组合、酶的活性、细胞的ATP水平等均可以用来衡量活细胞的状态。
此外，细胞细胞因子，如细胞因子及表观遗传物质，如mRNA、miRNA等也可以作为调节和检测细胞死活的指标。
四、测定细胞核和其他细胞指标。
细胞死活状态的检测也可以利用细胞核指标来估算，活细胞的细胞核含有较多的染色质和活性核酸，而死细胞核中染色质明显变性，而其他细胞指标如非细胞物质的含量、活性氧的变化、离子通量的变化和细胞内ATP水平的变化也可以用来检测细胞死活。
总之，细胞死活是决定细胞繁殖及功能性状态的关键因素，细胞死活的检测对研究和诊断生物学研究有重要意义。
现代生物技术为探究细胞死活提供了有效的工具，如细胞膜电位检测、细胞结构检测、细胞代谢特性检测和细胞核等技术可以有效地检测细胞死活。
细胞死活鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞死活鉴定的原理和方法。
2. 学会使用显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞的死活。
3. 了解细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
二、实验原理细胞是生物体的基本结构和功能单位，细胞的死活状态对其生物学功能具有重要意义。
细胞膜是细胞的重要结构，具有选择性通透性，能够控制物质进出细胞。
活细胞的细胞膜对物质的选择性通透性较强，而死细胞的细胞膜通透性增加，物质更容易进出细胞。
本实验通过观察细胞对染料的摄取情况，判断细胞的死活。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：活细胞悬液、死细胞悬液、台盼蓝染液、生理盐水、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管等。
2. 实验仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、生理盐水、台盼蓝染液等。
四、实验步骤1. 准备载玻片和盖玻片，将载玻片用生理盐水清洗干净，晾干。
2. 分别取活细胞悬液和死细胞悬液各1滴，滴在载玻片上。
3. 分别将活细胞悬液和死细胞悬液各1滴，滴在盖玻片上，使细胞均匀分布。
4. 将载玻片放在显微镜下观察，调整显微镜的焦距，使细胞清晰可见。
5. 将台盼蓝染液滴在盖玻片边缘，用滴管轻轻吸取染液，使染液均匀覆盖在细胞上。
6. 观察细胞对染料的摄取情况，记录活细胞和死细胞的数量。
7. 重复实验，取不同浓度的台盼蓝染液进行实验，观察细胞对染料的摄取情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果显示，活细胞对台盼蓝染液的摄取较少，死细胞对染液的摄取较多。
2. 随着台盼蓝染液浓度的增加，细胞对染液的摄取逐渐增多。
3. 分析原因：活细胞的细胞膜具有选择性通透性，对台盼蓝染液的摄取较少；而死细胞的细胞膜通透性增加，对染液的摄取较多。
六、实验结论通过本实验，我们掌握了细胞死活鉴定的原理和方法，了解了细胞膜通透性在细胞死活鉴定中的作用。
实验结果表明，活细胞对台盼蓝染液的摄取较少，而死细胞对染液的摄取较多，这与细胞膜通透性的差异有关。
七、实验讨论1. 实验过程中，需要注意载玻片和盖玻片的清洁，避免杂质对实验结果的影响。
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下：
1.显微观察：使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法：使用各种染色剂（如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等）对细胞进行染色，观察染色结果来判断细胞的颜色和形态，从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测：使用荧光染色剂（如PI、DAPI等）通过细胞膜进入细胞内，观察细胞是否发生荧光变化，判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测：使用特定的酶底物和荧光染料（如细胞色素c、卡尔比蓝等）对细胞内酶活性进行检测，观察是否发生荧光变化，判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术：使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析，通过测量细胞形态、大小、颜色等参数，来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测：通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标，来判断细胞生长和增殖的状态，进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是，不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
鉴定细胞活性的实验方法
能发生质壁分 离的 ， 表示这些细胞
是活的 ； 不能发 生质壁分离 的， 表示这些 细胞是死 的。
有的碎屑的一端 ， 在染液 中涂抹几 下 ， 上盖玻 片。 放 盖
②观察 线粒体 ： 在高 倍显微镜 下观察经过 染色 的的人
染色 １ ２ ｒ ｎ ０～ ０ ｉ 后倾 出溶液 ， 自来水 反复冲洗种子 ， ａ 用
３ １ 原理 健 那绿染液 是专一性染线 粒体 的活 细胞 ．
染料 ， 它可穿过 活细胞 膜进入 细胞 内。线粒 体 中细胞 色素氧化酶能 够使 染料 保持 氧化状 态 （ 即有 色状 态 ）
则部分活细胞也会着色 ， 会干扰计 数。
３ 健 那 绿 染 色 法
４ ３ 实验 步骤 ．
①先将待测 种子用水浸泡 ３— ｈ 待 ４，
充分 吸胀后取 出一部 分种子 ， 水 中煮 沸 ３～ ｍｉ， 在沸 ５ ｎ
作为死种子。②取 浸好 的新种 子、 陈种子 和死 种子各
５ ， ０粒 如为小 麦和 玉米 ， 则用 单面 刀 片沿胚 部 中线纵 切成两半 ， 中一半 用于测 定。③ 将备好 的种子 分别 其 放在培养皿 内 ， 加入红墨水溶液 ， 以浸没种子 为度。④
２３ 实验步骤 ①制备酵母菌细胞悬液 。②染 色 ： ． 取
９ Ｌ酵母菌细胞 悬液 移入 试管 中 ， １ Ｌ０ ４ 台盼 ｍ 加 ｍ ． ％
蓝溶液 ， 混匀 ， 然后用吸管滴 加到血球计数板上 的盖玻
４ ２ 仪 器药品及材料 ① 红墨水溶 液的配制 ： ． 取市售
红墨水稀释 ２ 倍 （ 份红墨水加 ｌ ０ １ ９份 自来 水 ） 作为染
０ ３／ Ｌ 糖 溶 液 。 ．ｇ ｍ 蔗
死活细胞鉴定及细胞活力测定
死活细胞测定及细胞活力测定【实验原理】（一）染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要体现在：（1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
（2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。
常见的细胞染料有：中性红（细胞器的专有染料）、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸酯（FDA）等。
①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。
利用细胞膜的通透性差异，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
中性红无毒，常做活体染色的染料。
②台盼蓝染色：当细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。
而活细胞能阻止染料进入细胞内。
故可以鉴别死细胞与活细胞。
严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。
通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。
③美蓝染色法：美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞.④甲基蓝染色法：甲基蓝染色与台盼蓝类似的染色机理。
（二）植物细胞质壁分离法及活体染色测定细胞死活（1）质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。
细胞死活的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握细胞死活的检测方法；2. 了解细胞死活的生理意义；3. 分析实验数据，得出实验结论。
二、实验原理细胞死活检测是细胞生物学实验中的一个重要环节，通过对细胞死活的检测，可以了解细胞的生理状态、细胞功能以及细胞培养过程中可能存在的问题。
细胞死活的检测方法主要有化学染色法、荧光染色法和流式细胞术等。
本实验采用台盼蓝染色法检测细胞死活，台盼蓝是一种细胞膜穿透性染料，活细胞由于细胞膜的选择透过性，台盼蓝不能进入细胞内；而死细胞由于细胞膜损伤，台盼蓝可以进入细胞内，使细胞着色。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞培养液；- 台盼蓝染液；- 吸管、移液器；- 离心管；- 计数板；- 显微镜。
2. 实验仪器：- 培养箱；- 离心机；- 吸水纸；- 烧杯。
四、实验步骤1. 将待检测的细胞悬液用吸管吸取到离心管中，加入适量的台盼蓝染液，充分混匀；2. 将离心管置于室温下静置5分钟；3. 将离心管置于离心机中，以1000r/min的速度离心5分钟；4. 取出离心管，弃去上清液；5. 向离心管中加入适量的生理盐水，轻轻吹打细胞，使其重新悬浮；6. 将细胞悬液均匀涂布于计数板上，置于显微镜下观察；7. 计算细胞死活比例。
五、实验结果与分析1. 观察细胞染色情况，活细胞不着色，死细胞呈蓝色；2. 计算细胞死活比例，以活细胞数除以总细胞数，得出细胞存活率；3. 分析实验数据，得出实验结论。
六、实验结论通过台盼蓝染色法检测细胞死活，得出细胞存活率为90%。
说明细胞培养过程中，细胞生长状况良好，细胞活力较高。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染；2. 台盼蓝染色法检测细胞死活，操作简便，结果直观，但存在一定的误差；3. 细胞死活检测对细胞生物学研究具有重要意义，有助于了解细胞生理状态、细胞功能以及细胞培养过程中可能存在的问题。
八、实验拓展1. 探讨其他细胞死活检测方法，如荧光染色法、流式细胞术等；2. 研究细胞死活与细胞功能之间的关系；3. 探讨细胞死活检测在细胞生物学研究中的应用。
细胞活性鉴定
1、细胞活性的鉴定：死细胞对许多抗体均有很强的非特异性染色，这就使样本细胞活性检测变得非常重要，尤其是经过长时间运输和储存的样本。
检测的方法通常有两种：（1）实时的流式检测：利用荧光染料PI、7-AAD或EMA 进行死细胞染色，而活细胞拒染这些染料。
此方法的优势是细胞表面标志和活性分析可同时进行。
尤其适用于高度坏死的样本。
7-AAD最常用，因为在488nm激发下，其最大发射光在670nm左右，适合与FITC或PE进行多色标记。
但随着时间延长，7-AAD会在固定的细胞群体重新分配，死活细胞的区分变得困难。
因此，对于染色并在固定后12小时以上分析的标本，最好用EMA。
EMA与死细胞DNA稳定的共价结合保证了长时间固定后仍能很好的区分固定前的死活状态。
（2）手工检测：使用Trypanblue或其他细胞活性染料。
（3）使用专门的仪器进行检测。
如Vi-cell。
2、7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，在流式细胞术中用于鉴定死细胞，这种作用与PI相似。
它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD 强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。
7-AAD同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，PI检测时同时占据FL-2和FL-3通道，而7-AAD只占FL-3通道，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。
3、Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE（Phycoerythrin）标记的AnnexinV作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学与医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力就是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法与仪器分析法。
染色法就是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。
但就是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以,在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都就是利用了死活细胞在生理机能与性质上的差异。
常用的方法包括染色法与仪器分析法。
1 染色法染色法分化学染色法与荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能与性质上的差异主要包括:死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜就是一种选择性膜,对细胞起保护与屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就就是利用了这一性质。
台盼蓝,又称锥蓝,就是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异:就是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝就是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯(FDA)就是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料,其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:FDA本身不产生荧光,也无极性,能自由渗透出入完整的细胞膜。
细胞活力检测
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。
利用细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。
二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan（甲月替）量成正比。
再用酶标仪测定OD值，从而可测定细胞相对数和相对活力。
服务优势：简单、快速、准确。
应用举例
（1）新药筛选；
（2）细胞毒性试验；
（3）肿瘤放射敏感性实验。
服务流程
（1）细胞处理；
（2）细胞计数；
（3）盼兰染色法测细胞活力；
（4）MTT法测细胞相对数和相对活力。
客户提供
实验细胞。
我们提供
实验结果与实验方法报告单。
质量保证
三次重复实验在统计学意义上差异不显著。
细胞死活的检测方法举隅
细胞死活的检测方法举隅作者：曹建平来源：《中学生理科应试》2021年第10期农业上，播种之前需要检测种子的活力;医学上，为了检测某一男子的生育能力，需要测定精子的活力;为了检验药物对肿瘤细胞的杀伤力，需要测定肿瘤细胞的存活率等等.由此可见，细胞死活的鉴定在生产生活和医学研究方面具有重要意义.本文简单介绍几种检测细胞死活的方法，并结合部分试题进行分析.一、检测方法举隅1.台盼蓝染色法台盼蓝是一种阴离子型染料，它只能透过受损细胞或死亡细胞的细胞膜（质膜），而正常的活细胞能加以排除，即死细胞着色，活细胞不着色.2.荧光染色法荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的动植物细胞的生活力鉴定染料.FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由出入细胞.当FDA进入活细胞，被细胞内的脂酶分解，产生有极性的、能发出荧光的荧光素，荧光素不能自由透过活细胞膜，积累在细胞内，使细胞产生绿色荧光.3.美蓝染色法美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色，主要用于检测酵母细胞死活.由于活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞，被染成蓝色或淡蓝色.4.TTC染色法氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于检测种子的生活力以及哺乳动物组织的缺血梗塞.TTC 溶于水中形成無色溶液，细胞中的脱氢酶可将TTC作为受氢体，使之还原成不溶于水的红色稳定的三苯基甲臢（TTF）. 如果脑组织细胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅.5.质壁分离法质壁分离法主要是检测成熟的植物细胞有无活性的方法.因为活细胞的原生质层具有选择透过性，所以活的成熟的植物细胞才可发生质壁分离.6.细胞质流动法细胞质流动需要消耗细胞代谢产生的能量，活细胞才进行细胞代谢，所以活细胞具有胞质环流现象.二、经典试题赏析例1 TTC法和红墨水染色法是检测种子活力常用方法，下列说法错误的是（）.A.在TTC法中，胚被染成红色的是具有活力的种子B.红墨水染色法中，胚不着色或着色很浅的是具有活力的种子C.这两种方法在原理上相似，均应用了活细胞的膜具有选择透透过性D.在TTC染色法中，被染成红色较深的种子细胞呼吸可能较强解析由于TTC能被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成红色不溶于水的物质，胚是种子的主要结构，故胚被染成红色的是具有活力的种子，A选项正确;红墨水中的色素不是活细胞需要的物质，如果胚被染色较深，说明胚细胞死亡;如果胚不着色或着色很浅，说明胚具有活力，B 选项正确;两种染色方法的原理不同，红墨水利用了细胞膜的选择透过性，根据“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成不溶于水的红色，利用的是细胞的代谢产物，C选项错误;细胞呼吸越强，产生的＼[H＼]越多，TTC被还原产生的红色不溶于水的物质越多，D选项正确.参考答案：C例2 在进行植物体细胞杂交前，必须先获得有活力的原生质体.测定原生质体活力的常用方法之一是荧光素双醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身无荧光，可自由通过细胞膜，经细胞内酯酶分解产生积累在细胞内并能发出绿色荧光的荧光素.相关叙述正确的是（）.A.FDA是一种大分子物质，通过胞吞进入细胞B.荧光素分子能以自由扩散的方式通过细胞膜C.实验中配制的FDA溶液是一种低渗溶液D.绿色荧光的强度与原生质体的活力呈正相关解析根据FDA可自由通过细胞膜，确定其不是大分子物质，A选项错误;根据荧光素积累在细胞内，确定其不能自由通过细胞膜，B选项错误;因为原生质体没有细胞壁，若为低渗溶液，则原生质体会吸水涨破，不能完成实验，C选项错误;原生质体的活力越强，酯酶活性越强，产生的荧光素越多，D选项正确.参考答案：D例3 下列有关不同实验中细胞死活的推测，正确的是（）.A.在高倍镜下观察黑藻细胞，发现细胞质缓慢流动，表明此时细胞是死细胞B.用台盼蓝染液处理酵母菌，细胞被染成蓝色，表明酵母细胞是活细胞C.健那绿染液染色后的口腔上皮细胞，线粒体为蓝绿色，表明细胞是活细胞D.将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中未发生质壁分离，则确定此细胞是死细胞解析活细胞的细胞质不停地流动，黑藻的细胞质流动，表明细胞是活细胞，流动缓慢可能是温度太低造成，A选项错误;活细胞的细胞膜能控制物质进出，使台盼蓝不能透过细胞膜，酵母细胞被染成蓝色，说明细胞死亡，B选项错误;健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以将线粒体染成蓝绿色，C选项正确;将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中，细胞不能发生质壁分离，原因可能是该蔗糖溶液浓度低于细胞液浓度或细胞是死细胞，D选项错误.参考答案：C（收稿日期：2021-07-28）。
动物细胞的死活鉴定和存活率的测定
（二）、动物细胞的死活鉴定和存活率的测定一、实验目的及原理1、掌握染料排除法鉴定细胞死活的原理。
2、学习用血球计数板进行细胞计数，以测定动物细胞存活率的方法。
原理：在显微镜下，从形态上很难区分死、活细胞。
但是，死细胞可被某些染料如台盼蓝、伊红和苯胺黑等染上相应的颜色，而活细胞则不会被染色。
因此，可根据细胞是否被染料着色来区分细胞的死活。
二、实验材料试剂血球计数板、滴管、试管、倒置显微镜、超净工作台、电吹风、0.25%胰蛋白酶液、PE液、MEM+小牛血清培养液、0.4%台盼蓝三、主要操作步骤（一）细胞悬液的准备1、75%酒精棉球消毒双手、工作台面、培养瓶和试管等。
2、将前一实验传代培养的细胞培养液倒入一个小试管中，暂存。
3、向培养瓶内加入5ml PE液，平放轻摇，放置2～5分钟后倒掉。
4、向培养瓶内加入0.5～o.8ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置2～４分钟后倒掉。
拍打悬浮后，再将暂存的细胞培养液倒入，制备成单细胞悬液, （内含活细胞和死细胞）。
（二）细胞死活鉴定及计数1、用95%酒精冲洗血球计数板及盖玻片，用电吹风吹干。
把盖玻片覆在计数板上面，露出计数板台面少许，以便滴加细胞悬液。
2、取吸管一支，伸入培养瓶中，吸取细胞悬液向一小试管中滴入6滴，再滴入0.4%台盼蓝3滴，混匀，染色2-3分钟。
如果细胞悬液含细胞过多，可先用MEM培养液稀释，稀释倍数视情况而定，然后再进行染色。
3、向计数板边缘处轻轻滴加1-2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片间的空隙。
4、显微镜下观察和计数。
活细胞不着色，死细胞被染上蓝色。
分别统计角上的4个大方格内的活细胞和死细胞数，两个平台共8个大方格。
（三）数据的统计活（死）细胞数（个/ml）=8个大方格中的活（或死）细胞总数/8 ⨯104⨯稀释倍数细胞存活率%=（活细胞数/细胞总数）⨯%四、实验结果第一个平台，四个角的活细胞数分别为9,10,7,12；死细胞数分别为2,2,3,1.第二个平台，四个角的活细胞数分别为11,7,9，10；死细胞数分别为3,2,2,2.五、思考题解答与讨论计算培养瓶中活（死）细胞数（个/ml），计算细胞存活率%。
细胞活性检测方法有哪些？
细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。
目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。
本文总结了一些常用的细胞活性检测方法的原理、特点，并对比了各自的优缺点。
一、染色计数法1. 化学染色法染色计数法是细胞培养中检查细胞死活最常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。
可分为两类：死细胞着色法和活细胞着色法。
使死细胞着色的常用染料有台盼蓝、苯胺黑、伊红Y。
能使活细胞着色的常用染料有结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝等。
其中最常用的是台盼蓝染色法。
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，故可以鉴别死细胞与活细胞。
通过细胞计数可得出细胞的存活率。
本染色法方便实用，价格低廉，操作简单。
但是台盼蓝染色时，时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。
而且，细胞没有经过固定，形态不清晰。
2. 荧光染色法一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。
如碘化丙啶（PI），被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料上色，只有死细胞或凋亡细胞才能被染上红色。
吖啶橙（AO）能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭（EB）仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
也可应用AO-EB双染法鉴定细胞死活。
这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。
在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。
缺点在于，要求特殊的仪器进行检测，如荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪。
而且通过荧光染料具有毒性，操作时需要带手套。
鉴定活细胞的方法
鉴定活细胞的方法
鉴定活细胞的方法有很多种，以下列举几种常用的方法：
1. 细胞形态观察：通过显微镜观察细胞的形态和结构，可以初步判断细胞的活性。
活细胞通常具有完整的形态和结构，而死细胞则可能出现膨胀、变形或碎裂等改变。
2. 细胞染色：利用染色剂或标记物染色细胞，然后观察染色结果。
例如，活细胞可用荧光染料如卡尔宾黄、FDA（Acridine orange）染色，活细胞会发出荧光信号。
而死细胞则可能无法有效染色或有不同的染色结果。
3. 细胞膜完整性检测：活细胞的膜通常是完整的，可以使用细胞膜荧光染料如荧光魔方染色（Calcein AM）或二己基四氟化锗（DiOC6(3)）染色来检测细胞膜的完整性。
活细胞膜完整时，染料可进入细胞内呈现荧光信号。
4. 细胞代谢活性检测：通过检测细胞的代谢活动如蛋白质合成、ATP生成、细胞内酶活性等来判断细胞的活性。
常用的方法有MTT（3-(4,5-二甲硫氧噻唑-2-亚硝基)-2,5-二苯基四唑）还原法和荧光素酶检测。
5. 细胞增殖检测：通过检测细胞的增殖能力来判断细胞的活性。
常用的方法有细胞计数法、显微镜下观察细胞形态的变化、MTT还原法等。
需要注意的是，不同的鉴定方法可以相互结合使用，以提高鉴定的准确性。
证明细胞死活的方法
证明细胞死活的方法细胞死活是生命科学领域中一个重要的研究方向，其中有多种不同的方法可用于检测细胞的死活。
下面是一些经典的方法及其原理和应用。
一、胞内酶活性检测法这种方式通过检测酶的活性来判断细胞的死活。
常见的酶包括：1. 胞内的酶：例如肝细胞中的丙氨酸转移酶（ALT）、天门冬氨酸转移酶（AST）等，这些酶在细胞死亡时会大量释放到细胞外。
2. 细胞膜酶：例如乳酸脱氢酶（LDH）、大肠杆菌毒素（ET）等，这些酶在细胞死亡时会破坏细胞膜而释放到细胞外。
这种方法的优势是可靠性高、操作简便，但其缺点是无法准确区分细胞的凋亡和坏死。
二、细胞形态学观察法细胞形态学观察法是使用光学显微镜或电子显微镜来直接观察细胞的形态变化。
常见的方法包括：1. 肌动蛋白染色法：通过染色显微镜观察肌动蛋白在细胞内的位置，从而判断细胞形态是否正常。
2. 同化染色法：使用荧光染料染色，观察细胞内各种细胞器是否正常分布，从而判断细胞死亡方式和死亡程度。
这种方法的优点是可以直观地观察到细胞形态及其内部结构的变化，但其缺点是操作复杂，对设备要求高。
三、细胞代谢检测法这种方式通常以ATP的含量和代谢酶的活性作为指标，通过检测这些指标来判断细胞的死活。
常见的方法包括：1. MTT法：MTT在氧化还原酶的作用下可以转换为紫色产物，从而通过分光光度计来判断细胞代谢活性。
2. 荧光染色法：使用荧光标记的ATP探针来观察ATP的含量从而判断细胞代谢活性。
这种方法的优势是可以更全面地反映细胞的代谢状态，但其缺点是操作复杂，对高灵敏度仪器的要求较高。
总结：以上就是细胞死活检测的一些经典方法，不同的方法有着各自的优缺点，并且一种方法的适用范围也会受到具体的实验条件、细胞类型、死亡方式等因素的影响。
鉴别细胞死活实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞培养的无菌操作技术。
2. 了解并掌握动物细胞原代培养和传代培养的实验方法。
3. 学习并掌握细胞生死状态鉴别的方法。
4. 了解细胞生死状态鉴别的原理。
5. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
6. 掌握细胞技术方法，计算细胞存活率。
二、实验原理细胞培养是一种在无菌条件下，将动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞生死状态的鉴别方法主要包括化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理功能和性质上存在以下差异：1. 细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜具有选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
2. 代谢上的差异：活细胞可以进行正常的代谢活动，而死亡细胞则失去代谢功能。
根据上述差异，我们可以利用台盼蓝染色、伊红染色等方法来鉴别细胞生死状态。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物细胞原代培养物、细胞传代培养物。
2. 实验试剂：台盼蓝染色液、伊红染色液、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、无菌生理盐水等。
四、实验方法1. 取适量的细胞悬液，加入离心管中，离心去除上清液。
2. 加入适量的PBS溶液，重悬细胞。
3. 取适量的细胞悬液，加入台盼蓝染色液中，混匀，室温放置5分钟。
4. 镜检观察，活细胞不着色，死亡细胞被染成蓝色。
5. 另取适量的细胞悬液，加入伊红染色液中，混匀，室温放置5分钟。
6. 镜检观察，活细胞不着色，死亡细胞被染成红色。
五、实验结果与分析通过台盼蓝染色和伊红染色，我们可以观察到活细胞不着色，而死亡细胞被染成蓝色或红色。
这说明细胞膜的选择透过性在维持细胞正常生理功能方面具有重要意义。
六、实验结论本实验成功地利用台盼蓝染色和伊红染色方法鉴别了细胞生死状态，为细胞培养和细胞生物学研究提供了重要的技术手段。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
细胞建议实验一死活细胞的鉴定（参考）
建议实验一、死活细胞的鉴定一、实验原理死活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
精子存活率以“活”精子比率表示，若不活动的精子较多，应体外活体染色检查，以鉴别其死活。
活精子的细胞膜能阻止伊红Y、台盼蓝等染色剂进入细胞内，故不被染色；死精子细胞膜完整性受损。
失去屏障功能，可被染色成橘红或蓝色，有生育力男性伊红染色法的活精子率≥75%。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择透性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
死活细胞的鉴定方法
死活细胞的鉴定方法鉴定死活细胞有多种方法，以下是几种常见的死活细胞鉴定方法：1.染色法染色法是一种常用的死活细胞鉴定方法。
它通过染色剂对细胞膜通透性的不同来区分活细胞和死细胞。
常用的染色剂有台盼蓝、中性红、碘化丙啶等。
台盼蓝可以透过死亡细胞的细胞膜，使死细胞着色，而活细胞则不能。
中性红和碘化丙啶则只能透过活细胞膜，使活细胞着色。
通过这种方法，可以清楚地看到细胞中的死活细胞分布情况。
2.荧光染色法荧光染色法是一种灵敏度更高的死活细胞鉴定方法。
它利用荧光染料对细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞的荧光情况。
活细胞能够吸收荧光染料，发出荧光，而死细胞则不能。
这种方法可以更准确地检测出细胞中的死活细胞比例。
3.呼吸测试法呼吸测试法是一种直接检测细胞活性的方法。
它通过测量细胞在氧气消耗和二氧化碳释放方面的变化来评估细胞的活性。
活细胞在代谢过程中需要消耗氧气并释放二氧化碳，而死细胞则不具备这种代谢活性。
通过测量氧气和二氧化碳的浓度变化，可以判断细胞的死活情况。
4.膜电位法膜电位法是一种通过检测细胞膜电位变化来区分活细胞和死细胞的方法。
活细胞的细胞膜内外的电位差通常为负值，而死细胞的电位差则为正值。
利用这种电位差的变化，可以判断细胞的死活情况。
5.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测法G6PD活性检测法是一种通过检测G6PD酶的活性来区分活细胞和死细胞的方法。
G6PD是红细胞中的一种酶，当红细胞死亡时，该酶的活性会迅速下降。
通过检测G6PD的活性，可以判断细胞的死活情况。
6.线粒体膜电位检测法线粒体膜电位检测法是一种通过检测线粒体膜电位的变化来区分活细胞和死细胞的方法。
线粒体是细胞中负责能量代谢的重要细胞器，活细胞的线粒体膜电位通常为负值，而死细胞的线粒体膜电位则为正值。
通过检测线粒体膜电位的变化，可以判断细胞的死活情况。
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死活细胞测定及细胞活力测定
【实验原理】
（一）染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要体现在：
（1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
（2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原
能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。
常见的细胞染料有：中性红（细胞器的专有染料）、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸
酯（FDA等。
①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。
利用细胞膜的通透性差异，用来染
原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。
中性红无毒，常做活体染色的染料。
②台盼蓝染色：当细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，
使其着色。
而活细胞能阻止染料进入细胞内。
故可以鉴别死细胞与活细胞。
严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。
通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。
③美蓝染色法：美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对活细
胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞.
④甲基蓝染色法：甲基蓝染色与台盼蓝类似的染色机理。
（二）植物细胞质壁分离法及活体染色测定细胞死活
（1 ）质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。
液泡中的胞液具有一定的溶质势（或称渗透势），而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。
所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。
若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。
（2 ）活体染色法：活体染色是利用某种对植物无害的染料稀溶液对活细胞进行染色技术。
中性红是常用的染料之一，它是一种弱碱性pH6.4〜8.0之间（由红变黄），在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现桃红色。
在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色。
死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
【实验步
1、试剂的配置：
①台盼蓝：4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸
过滤，4度保存。
使用时。
用PBS稀释至0.4%。
②中性红：先配成1%中性红水溶液（1克中性红溶于100毫升蒸馏水中）。
取这种溶液1毫升，用
0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗
处。
③美蓝：取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酉精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶
内。
此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。
④甲基蓝：取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1辦基蓝染液。
2、染色操作步骤：略
3、细胞活力测定：染色过的细胞材料，放在显微镜下观察。
凡未染或染色及浅的细胞
是有活力的，而染色深的细胞是无活力的死细胞。
4、按公式计算出细胞活力。
细胞活力（% =未染色的细胞数/观察的细胞总数X 100%
【注意事项】
1.台盼蓝对人体有毒
2.对细胞进行染色时，时间不宜过长。
否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。