《HIV检测技术》PPT课件

感染 1周 2周 3周 4周………………….1年 2年 3年…………….10年………..
窗口期
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HIV抗体检测的目的和要点
HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、 监测等。
以诊断为目的的检测是为了确定个体 HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨 询检测、根据特殊需要进行的体检等。
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Closing the window
HIV antigen
IgM ab
4th gen 3rd gen
IgG ab 1st-2nd gen
Detection limit
<= window =>
=>
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第一/二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测IgG 、IgM抗体,
第四代试剂同时检测IgG、 IgM抗精体选课和件ppPt 24抗原使窗口期缩短。
➢ 优点：重组抗原可消除HLA（人类白细 胞抗原）所致的抗体假阳性，生产成本 低，不使用HIV病毒颗粒，较为安全， 敏感性特异性较高
➢ 缺点：仍有一定的假阳性
➢ 1990年，FDA批准第一个重组抗原筛
选试剂
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第三代ELISA试剂
➢ 包被抗原：重组抗原加合成多肽
➢ 合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工 合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇， 纯度高，特异性也高
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➢ 优点:
1. 样品稳定,各种温度下稳定性大于三 周
2. 敏感性和特异性与标准的血清学实验 相当
➢ 缺点:
1. 预处理复杂，重复性较差
2. 会出现不同于血清抗体的种类和滴度
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尿液检测试剂
➢ 适用对象：静脉吸毒人群，其他高危人群的 大 面积流调、监测
➢ 优点： 1. 采集、处理费用低，较血液标本安全 2. HIV抗体在尿中十分稳定，尿液中IgG与
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酶联酶联免疫吸附－－ELISA方法
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第一代ELISA试剂
➢ 包被抗原：全病毒裂解抗原 ➢ 窗口期：6-8星期 ➢ 优点：灵敏度高，可检出各种抗体 ➢ 缺点：制备麻烦，成本高，假阳性
➢ 1985年，FDA批准第一个HIV抗体筛 选试剂
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第二代ELISA试剂
➢ 包被抗原：重组抗原、合成多肽
➢ 窗口期：4-5星期
HIV检测技术
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艾滋病实验诊断技术
HIV抗体测定
抗原测定
核酸测定
病毒分离
CD4淋巴细胞计数
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HIV感染以后的血清学动态
急性期 HIV RNA
Anti-Ag
潜伏期 Anti-Ab
艾滋病期
Anti-gp41/120 (anti-gp36)
Anti-P24 浓 度
消毒和污染处理设施
安全防护设施
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艾滋病检测方法的意义
HIV抗体筛查检测
HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将 该标本送确证实验室进行确证。
HIV抗体确认检测（免疫印迹试验）
--- HIV/AIDS诊断的唯一依据 ---艾滋病确认实验室负责
HIV核酸检测
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筛查样品
HIV抗体筛查可采用血清、血浆、 滤纸干血斑、唾液和尿液样品。
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唾液检测试剂
➢ 在硝酸纤维膜上包被人工合成的 HIVgp41/gp36蛋白抗原，可以同时 检测HIV－1/HIV－2抗体，原理为酶 免间接法。
➢ ELISA、免疫印迹法（WB）已经美国 FDA批准
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➢ 窗口期：3星期左右
➢ 优点：可检测所有不同种类的抗体，增加了试 剂的敏感性和特异性
➢ 1994年发展了双抗原夹心法，酶标物由抗人 IgG改变为特异性HIV抗原
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第四代ELISA试剂
➢ 包被物：重组或多肽抗原+重组抗体 ➢ 窗口期：2星期左右 ➢ 优点：同时检测HIV抗原抗体，缩短窗
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酶联免疫试验 ( ELISA )
➢ 最早用于检测血清中HIV抗体的有效筛 检方法
➢ 很高的敏感性和特异性
➢ 根据检测方法，可分成4类间接法、双 抗原夹心法、竞争法和捕获法
➢ HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和 检测方式可分为四代
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筛查试验
筛查试剂
经国家食品药品监督管理局注册批准 在试剂有效期内 酶联免疫试剂应批批检合格 临床质量评估敏感性和特异性高
口期 ➢ 注意：抗原检测敏感性低于单独抗原试
剂 (50~70pg/ml,5~10pg/ml)
➢ 1998年第四代试精剂选课件首ppt 次上市
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HIV抗体试剂盒进展
代次
抗原
1
全病毒
2
重组或多肽
3
重组+多肽
4
抗原+抗体
方法 间接 间接 夹心
夹心
检测时间 > 2个月 3-4 周 2-3 周
2周左右
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血液相当 ➢ 缺点：
1. 检测时间长 2. 精确性低于血、唾液，阳性者需作血清学 检测
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筛查方法
酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验 快速检测（RT）
明胶颗粒凝集试验（PA） 免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免 疫胶体金（或胶体硒）快速试验 免疫层析试验
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• 辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是 不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。
• 感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时 RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪 检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。
• 病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。
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以血液筛查为目的的检测是为了防止输 血传播HIV，包括献血员筛查和原料血 浆筛查。
以监测为目的的检测是为了解不同人群 HIV感染率及其变化趋势，包括各类高 危人群、重点人群和一般人群。
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初筛实验室设备条件
独立实验室用房，建筑设备和仪器
要符合要求II级生物安全实验室
酶标仪，洗板机，精确移夜管， 专用冰箱，离心机，水浴箱， 温箱等
• 指导治疗方案及疗效测定。
• 预测疾病进程 。
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抗体检测
➢ 根据检测HIV感染后产生的HIV抗体的间接指标而 发展起来的血清学诊断技术，分为初筛试验和确认
试 验。
➢ 初筛试验 用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能
会有假阳性，不能发抗体阳性报告
➢ 确认试验 确定检测对象是否有HIV抗体，可发抗体阳性报告