实验6细菌的接种及分离培养
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
细菌的接种方法及生长现象观察实验报告
细菌的接种方法及生长现象观察实验报告实验名称：细菌的接种方法及生长现象观察实验实验目的：了解不同细菌接种方法，观察其生长现象并熟悉对不同细菌的鉴别方法。
实验原理：实验中使用的细菌主要有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，这两种细菌的形态、生理和生化特性都有所不同，因此可以通过对其生长情况和代谢产物鉴定分离。
实验步骤：1. 准备培养基和实验用具。
将脑心涂片培养基、大肠杆菌培养基和营养琼脂培养基准备好，并消毒使用的培养器具。
2. 细菌样本预处理。
将所选的样本细菌用无菌的移液管分别接种到脑心涂片培养基和大肠杆菌培养基中。
每个细菌样本接种三个孔，并标记清楚。
3. 处理营养琼脂培养基。
制作营养琼脂培养基，分装至不同的培养皿中，并在上面像钟表一样标记12个点，以备后续接种使用。
4. 接种细菌。
分别使用病原菌的直接接触法、匀涂法和滴定法，接种到不同的培养皿中。
对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种两次，每个接种方法分别接种一次，可共接种12个孔。
5. 确认培养基接种位置和标记结果。
将接种好的培养皿放入培养箱中保持适宜的培养环境，隔一段时间观察细菌生长情况，并对产生的代谢产物做出初步的鉴别。
实验结果观察：1. 直接接触法：以金黄色葡萄球菌为例，直接将其接种到营养琼脂培养基的中心，使用此方法，菌落数量较多，生长范围较窄，生长感觉较短。
2.匀涂法：以大肠杆菌为例，使用平均划线的方式涂抹菌液到琼脂平板上并再次划线，此方法效果更好，生长期较长。
3. 滴定法：以大肠杆菌为例，使用无菌的移液器抽取一定的菌液滴到琼脂平板上，此方法的生长效果也较好，但抽取的菌量要严密掌控。
实验结论：通过试验了解到使用不同接种方法得到细菌生长的结果也有所不同，每种接种方法都有其特定的优缺点，根据不同的需求可以选择最适合的方法。
细菌的生长速度和数量可以通过直接观察培养基上的菌落情况来判断，而细菌产生的代谢产物则可以用生化史实的方式作出初步鉴别，对于细胞形态和细胞结构等特征的鉴别可以通过显微镜技术进一步观察分析。
细菌的分离培养实习报告
细菌的分离培养实习报告一、实验目的通过本次实习，掌握细菌的分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理细菌的分离培养和接种技术是一种将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来并进行单独培养的方法。
该方法主要是通过对细菌的生长特性进行观察和分析，从而将不同种类的细菌分离开来。
三、实验材料与设备1. 实验材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等。
- 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基等。
- 接种工具：接种环、接种针等。
- 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、生物安全柜、显微镜、培养箱等。
2. 实验步骤1) 菌种的准备：将各种菌种分别接种在斜面培养基上，37℃培养24小时。
2) 培养基的制备：按照配方制备牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基等，高压蒸汽灭菌法灭菌。
3) 接种方法：a) 平板划线法：将菌种接种环在琼脂平板表面划线，使细菌分散生长，形成单个菌落。
b) 稀释涂布平板法：将菌种接种环在液体培养基中稀释后，涂布在琼脂平板表面。
4) 培养：将接种后的琼脂平板倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。
3. 实验结果与分析1) 菌落的观察：观察不同菌种在琼脂平板上的生长情况，记录菌落的形状、大小、颜色等特征。
2) 菌种的鉴定：根据菌落的特征和生长习性，对不同菌种进行鉴定。
四、实习心得通过本次实习，我对细菌的分离培养和接种技术有了更深入的了解。
在实验过程中，我学会了如何准备菌种、制备培养基、进行接种操作以及观察菌落等技能。
同时，我也明白了细菌分离培养的重要性，它不仅可以帮助我们研究细菌的生物学特性，还可以为临床诊断和防治疾病提供依据。
在实验过程中，我注意到了无菌操作的重要性，严格遵循无菌操作规程，避免交叉污染。
同时，我也学会了如何使用显微镜观察细菌的形态特征，从而对菌种进行初步鉴定。
总之，本次实习让我对细菌的分离培养和接种技术有了更全面的了解，也为我今后的科研和工作打下了坚实的基础。
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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实验四：细菌的接种、培养和分离技术
实验四：细菌的接种、培养和分离技术一、实验目的与要求：（1）掌握从环境土壤、水体、活性污泥等中分离培养细菌的方法;从而获得若干种细菌纯培养技能（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法..（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等..二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中;不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起;当我们希望获得某一种微生物时;就必须从混杂的微生物类群中分离它;以得到只含有这一种微生物的纯培养;这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化..为了获得某种微生物的纯培养..一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同;而供给它适宜的培养条件;或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长;而抑制其他菌生长的环境;从而淘汰其他一些不需要的微生物;再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物;直至得到纯菌株..三、实验器材1、牛肉膏蛋白胨培养基2、盛9ml无菌水的试管;盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶;1ml和5ml无菌吸管;无菌培养皿；3、接种环;土样;酒精灯等..四、操作步骤1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板;并标明培养基的名称..2、贴标签接种前在试管上贴上标签;注明菌名、接种日期、接种人姓名等..贴在距试管口径2-3厘米的位置..3、点燃酒精灯..4、接种取接种环右手拿接种环如握钢笔一样、在火焰上将环端烧红灭菌;然后将有可能伸入试管的其余部分;均用火烧过灭菌..环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管;先使环接触边壁;使其冷却..取菌种待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环;然后将接种环移出菌种管;注意不要使环的部分碰到管壁;取出后不可使环通过火焰..接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线..划线的方法很多;但无论哪种方法划线;其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释;使形成单个菌落..常用的划线方法有下列二种：⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环;先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条;再转动培养皿约70°角;并将接种环上剩余物烧掉;待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线;再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线图A..划线完毕后;盖上皿盖;倒置于温室培养..⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线图 B..划线完毕后;盖上皿盖;倒置温室培养..环灭菌将接种环烧红灭菌..5、挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上;分别置25℃和28℃温室中培养;待菌苔长出后;检查菌苔是否单纯;也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物;若有其他杂菌混杂;就要再一次进行分离、纯化;直到获得纯培养..四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作..。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
微生物的分离、接种和培养技术
微生物的分离、接种和培养技术一、实验的目的和内容目的：掌握微生物接种和分离纯化技术，掌握无菌操作技术。
内容：用平板划线法分离微生物；学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、基本原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把他们分离出来。
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌操作是微生物接种技术的关键。
接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。
由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。
斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料及器材（一）菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
易（三）仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
四、方法与步骤（一）接种。
1、试管菌种转接：试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
（1）将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
（2）置试管口于酒精火焰附近。
（3）将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
（4）取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
（5）取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
简述细菌接种与分离的方法
简述细菌接种与分离的方法细菌接种和分离听起来有点高深，但其实这玩意儿跟咱们的生活息息相关。
想想咱们平常吃的酸奶、发酵的面包，背后都有这些小家伙的功劳。
说到接种，真是个细致活儿，像是在给细菌们安排一个聚会，邀请他们到一个温暖舒适的地方发展壮大。
得准备个干净的环境，避免那些不速之客的打扰，毕竟谁也不想在派对上遇到不受欢迎的“朋友”。
所以呢，咱们需要用酒精消毒一下工具，像小刀、培养皿什么的，确保一切都是干干净净，闪闪发光的。
然后，接种的过程就像是给细菌打电话，邀请他们来参加派对。
拿出一根接种环，轻轻地在培养基上划几下，就像在画画一样。
让细菌在这片“画布”上留下他们的足迹。
这个过程得小心翼翼，不能用力过猛，细菌可不是橡皮泥，得轻轻来。
把这个培养皿放在适宜的温度下，给细菌一点时间，让他们在这儿舒舒服服地发育。
温度就像是细菌的“温泉”，他们在这里能够好好享受，慢慢壮大，啧啧，真是美滋滋。
等了一段时间，细菌们终于聚会成功，开始成群结队地出现了。
这个时候，咱们就可以进行分离了。
分离的目的嘛，就是要把那些大家伙单独挑出来，看看他们的个性。
这时候，咱们就需要用一些特殊的技术，比如稀释法。
把细菌的培养液稀释到一定的比例，就像是把浓汤加水一样，让每一滴都能呈现出不同的风味。
稀释之后，拿出一小部分，再在新的培养基上接种，哇，细菌们就像是换了个场地，继续他们的派对。
分离细菌的另一种方法叫做涂布法，听上去挺高大上的。
其实就是把细菌液滴在固体培养基上，然后用刮棒轻轻地涂抹开。
就像是在画一个漂亮的图案，越均匀越好。
细菌们在这张“画纸”上慢慢生长，形成小小的菌落。
等到时间一到，咱们就可以仔细观察这些菌落，看看每一小团细菌的长相和特点，简直像是在看一场细菌的时装秀。
不过，这整个过程中，可不能大意。
细菌可聪明了，有些可爱，有些却很调皮，容易和其他细菌混在一起。
这时候就需要一些特殊的选择培养基，像是给细菌们设定一些游戏规则，只有符合条件的细菌才能在这片土壤中成长。
细菌的培养与分离技术
细菌的培养与分离技术● 考点◇ 基本条件◇ 细菌的接种与分离技术◇ 细菌培养的方法◇ 细菌的生长现象◇ 细菌L型的检查【内容讲解】细菌培养是将细菌接种到培养基内，并在适当的环境内，使细菌生长和繁殖。
分离培养是指从标本中培养出细菌或者从混有多种细菌的标本中将各个菌种分别同时培养出来。
一、基本条件（一）细菌实验室（二）无菌实验室（三）基本设备和器具（一）细菌实验室标本接种、培养、分离、鉴定及药敏试验等工作都要在此完成。
1.细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。
且室内禁用风扇，避免细菌的播散。
2.细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开始工作前照射20min。
对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。
3.室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。
同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。
4.室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗l次。
5.对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开并放在指定位置。
同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。
6.细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。
同时室内应设置必要的消防设备。
（二）无菌实验室无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室，其内部装饰、消毒条件要求更严格。
1.无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。
2.用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
3.在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。
4.无菌室内应仅限操作人员进入，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。
5.条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。
超净工作台应选择垂直气流通风方式。
6.无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。
（三）基本设备和器具温箱、C02培养箱、厌氧培养设备；显微镜；高压蒸气灭菌器、干烤箱；冰箱和冷藏柜；接种器具，包括接种环和接种针；pH计；火焰灯或酒精灯；平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。
细菌的分离培养实验报告
分离培养实验是一种常见的微生物学实验，旨在从样品中分离出单独的细菌株并在培养基中培养它们。
这种实验通常在医学、食品安全和环境监测等领域中使用。
要进行分离培养实验，首先需要准备样品和培养基。
样品可以是液体、固体或气体，通常是从环境中收集的。
培养基是一种特殊的基质，其中添加了必要的营养物质，可以满足细菌生长的需要。
分离培养实验的步骤如下：
1 准备样品：从样品中收集尽量多的微生物，通常是通过悬浮、切
片或气液分离方法来获得。
2 分离细菌：通常使用分离培养基，其中含有一种叫做营养不全的
培养基，可以限制细菌的生长。
通过在分离培养基中制备细菌悬浮液或细菌膜，可以分离出单独的细菌株。
3 在培养基中培养细菌：将分离出的细菌接种到适当的培养基中，
然后在适当的条件下培养。
4 识别细菌：通过对细菌的形态、生长和代谢特征进行分析，可以
确定细菌的种类和特性。
常用的方法包括显微镜观察、生理生化测试、免疫学方法和分子生物学方法。
分离培养实验在微生物学中非常重要，因为它可以为进一步研究细菌的生理、生化和遗传特性提供基础。
此外，分离培养实验也可以用来鉴定病原体、检测食品中的有害微生物、监测环境中的细菌污染等。
在实验报告中，应该详细记录分离培养实验的全部过程，包括样
品的来源、分离方法、培养条件、识别方法等。
同时，还应该记录实验结果，包括分离出的细菌株数量、识别结果等。
最后，应当对实验进行总结，并在可能的情况下提出建议或改进建议。
细菌接种实验报告
一、实验目的1. 掌握无菌操作技术，建立无菌观念。
2. 掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。
3. 熟悉细菌生长现象的观察方法。
二、实验原理细菌接种是将细菌从一培养物转移到另一培养基的过程，目的是为了分离纯化菌种、扩大培养或进行细菌学研究。
无菌操作是保证实验结果准确性的关键。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：固体琼脂培养基、液体培养基。
3. 器械：接种环、接种针、酒精灯、无菌棉签、无菌试管、无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管架等。
四、实验方法1. 无菌操作技术培训：学习无菌操作的基本原则和操作步骤，包括手部消毒、试管口消毒、接种环消毒等。
2. 接种环制作：将白金丝或电热镍铬丝制成直径约2-4mm、长度约5-8cm的接种环。
3. 细菌接种：（1）斜面接种：将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其红热后，迅速蘸取少量菌液，然后在无菌斜面培养基上划线，形成菌落。
（2）液体接种：将接种环在酒精灯火焰上灼烧，待其红热后，迅速蘸取少量菌液，然后滴入无菌液体培养基中。
4. 细菌培养：（1）斜面培养：将接种好的斜面培养基放置在恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（2）液体培养：将接种好的液体培养基放入摇床中，37℃、150 r/min培养24小时。
5. 细菌生长现象观察：（1）斜面培养：观察菌落生长情况，包括菌落大小、形状、颜色等。
（2）液体培养：观察菌液浑浊程度、菌落生长情况等。
五、实验结果1. 斜面培养：菌落生长良好，呈圆形、白色，边缘整齐。
2. 液体培养：菌液浑浊，菌落生长旺盛。
六、实验分析1. 通过无菌操作技术，保证了实验结果的准确性。
2. 掌握了细菌的接种、分离培养和观察方法。
3. 了解了细菌的生长现象，为后续细菌学研究奠定了基础。
七、实验总结本次实验成功完成了细菌接种、分离培养和观察，掌握了无菌操作技术、细菌接种方法和细菌生长现象观察。
在实验过程中，要注意以下几点：1. 严格遵守无菌操作原则，防止污染。
细菌纯种分离、培养和接种技术
实验三细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
二、实验原理水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
三、实验材料1、菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。
2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
2、大肠菌群的测定：1)培养基：①乳糖胆盐蛋白胨培养基：蛋白胨20g，胆盐(或牛、羊胆盐)5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，水1000mL，pH7.4。
制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装，每瓶50mL或每管5mL，，并倒置放入一个杜氏小管，121℃灭菌15min。
②伊红美蓝琼脂培养基：制法：将伊红美蓝琼脂粉溶于水中，校正pH后分装．121℃灭菌15min备用。
平板划线法：接种是采用平板划线的方法将初发酵的大肠杆菌进行接种。
四、实验方法1、水样的采集：1)自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min，以灭菌三角瓶接取水样以备分析。
实验六 平板划线法分离菌种
实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。
平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。
具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。
由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。
鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。
伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。
在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。
实验5细菌的接种及分离培养
观察记录菌落形态和特征
01
菌落形态
观察并记录不同细菌在培养基上 形成的菌落形态，如圆形、椭圆 形、不规则形等。
菌落特征
02
03
菌落大小和颜色
记录菌落的色素、透明度、边缘 形状、表面特征（光滑或粗糙） 等。
观察并记录菌落的大小和颜色， 这些特征有助于鉴别不同种类的 细菌。
测定细菌的生长曲线
1 2
生长曲线绘制
观察与记录
定时观察细菌的生长情况，记 录菌落形态、颜色、大小等信 息，以便后续分析。
分离纯化
对于需要分离纯化的细菌，可 采用划线法、稀释涂布法等方 法进行分离纯化，获得单一菌 落。
保存菌种
将分离纯化后的菌种进行保存 ，以便后续实验使用。可以采 用甘油管藏、冷冻干燥等方法
进行保存。
04 实验结果分析
实验结果：通过实验，我们 成功地分离培养出了纯种的 细菌，并观察到了其在不同 培养条件下的生长情况。具
体数据如下表所示
| 培养条件 | 菌落数 | 生长情 况|
实验总结
| --- | --- | --- |
| 温度37℃、湿度适宜 | 120 | 良好 |
| 温度4℃、湿度适宜 | 0 | 无生 长|
结果分析
分析实验结果，比较不同细菌之间的差异，探究其原 因。
结论总结
根据分析结果，得出关于细菌接种及分离培养的结论， 并指出实验中可能存在的误差和不足之处。
05 注意事项与实验总结
注意事项
安全注意事项 实验应在无菌环境下进行，避免外界细菌污染。
使用后的器材和培养基应进行正确的消毒处理，避免交叉污染。
实验目的
本实验旨在学习细菌的接种及分离培养技术，掌握无菌操作技术和显微观察技 术，了解细菌的生长特性和培养条件。
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灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
（二）细菌的琼脂平板分离划线接种法
菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂 培养物；
培养基：固体平板培养基； 用途 ：该法主要是借助划线而将混杂的细
菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定 在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以 达到分离纯种的目的。
用接种针垂直地穿入培养 基中心至底部；然后沿着 原接种线将针拔出。 用途：检验细菌的运动性 或观察细菌的生化反应。
四、细菌培养法
一般培养（需氧培养）：
★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培 养箱
厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌 氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落： 定义：指单个细菌在平板培养基上37℃1824h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌 集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、 透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏 液型（M）
菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
琼脂斜面接种法 液体接种法 半固体接种法
1、琼脂斜面接种法
菌种：葡萄球菌、 大肠埃希菌等普通 琼脂培养物；
培养基：斜面固体 培养基；
用途：扩增细菌、 保存菌种；或用于 观察其某些生化特 性。
琼脂斜面培养基接种法
2、液体接种法
菌种：葡萄球菌或大肠埃 希菌、枯草杆菌等普通琼 脂培养物；
细菌接种的要求
无菌操作 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台
内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用
接种工具
常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种 锄、玻璃涂棒等。
图－6
三、细菌的接种法
细菌的分离—平板划线法
1.分区划线法： 2.连 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
2.连续划线法
（三）细菌的纯种接种法
当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关 的培养基中，以测试其各种生物学性状。 一般可用斜面、半固体、液体培养基来 检验细菌的培养特性，相应培养基的接 种方法有三种。
培养基：液体培养基； 接种方法：液体接种法。 从斜面菌种接入液体
培养液；从液体培养液接 入液体培养液； 用途：扩增细菌，用于观 察细菌的生长特性或测定 其生化特性。
3、半固体穿种接种法
菌种：葡萄球菌、大肠埃 希菌等普通琼脂培养物；
培养基：半固体培养基 接种方法：穿刺接种法。
实验6 细菌培养法
一、目的要求
1、掌握细菌的一般培养法； 2、掌握细菌培养的接种方法，进一步
熟悉无菌操作技术。
二、实验材料
菌种：葡萄球菌培养物、大肠杆菌培养 物、枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物；
实验器材：接种环、接种针、酒精灯； 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液
体培养基、半固体培养基；
菌落与菌苔
菌苔
菌落（R型） 菌落（S型）
菌落的形态特征有助于细菌的鉴别
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊：大多数细菌 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于需氧菌
细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在 培养基中沿穿刺 线并向外扩散生 长，穿刺线边缘 模糊。
无鞭毛细菌：只 沿穿刺线生长， 穿刺线边缘清晰。