生物技术制药实验大纲

《生物技术制药实验》教学大纲

一、前言

生物技术制药课是一门实践性很强的学科，包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术以及发酵工程技术等。通过本实验课程的教学，旨在为学生提供基本的生物技术制药操作实验，同时，注重对反映当前生物技术制药技术发展方向的新技术、新方法的介绍，激发学生的学习热情，使学生全面掌握生物技术制药实验基本原理和技术，为培养基础扎实、适应性强的生物技术制药人才奠定基础。

二、基因工程实验

实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化（4学时）

[基本内容]

培养基的配制，培养大肠杆菌DH5α，CaCl2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞、pUC118等质粒大肠杆菌DH5α感受态细胞，转化子挑选。

[基本要求]

掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法，DNA转化的最基本操作以及提高转化效率的思路。

实验二质粒DNA的提取及其定性定量分析（4学时）

[基本内容]

碱裂解法提取载体质粒pUC118并对其进行定性定量分析

[基本要求]

掌握碱裂解法提取质粒的原理方法和各项基本技术；了解碱裂解法质粒提取过程中各种纯化步骤的设计思想和保证质粒的序列、产率和纯度，去除Dnase、机械、物理、化学因素的影响。.

实验三琼脂糖凝胶电泳检测DNA （4学时）

[基本内容]

配制电泳缓冲液，制备琼脂糖凝胶，点样，电泳。电泳检测提取得质粒pUC118的纯度和构型，pUC118酶切后DNA分

子量。

[基本要求]

掌握水平式琼脂糖凝胶电泳技术，检测DNA的纯度、DNA的构型、含量以及分子量的大小的方法。

实验四 PCR基因扩增及扩增产物的回收（4学时）

[基本内容]

学习引物的设计；利用PCR技术扩增一已知的基因片段；电泳检测PCR产物；回收扩增的PCR产物。

[基本要求]

掌握PCR基因扩增及扩增产物的回收的基本原理和实验技术方法。

实验五外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测、蛋白质印迹（4学时）

[基本内容]

外源基因在大肠杆菌中的诱导表达，活性分析检测表达蛋白，SDS-PAGE检测表达蛋白，电转移和印迹分析。

[基本要求]

了解IPTG诱导的外源基因在大肠杆菌中的表达的原理，掌握外源基因在大肠杆菌中的表达及其检测技术，掌握蛋白质印迹分析技术的基本操作过程。

三、酶工程实验

实验六溶菌酶的提取实验（4学时）

[基本内容]

蛋清样品的准备;阳离子交换层析( D152树脂处理,装柱,上柱吸附,洗脱和聚乙二醇浓缩);硫酸铵沉淀。

[基本要求]

了解酶的基本提取过程,掌握溶菌酶提取和性质测定中的实验方法,熟悉有关生化技术的基本原理和基本操作.

实验七溶菌酶活力、蛋白浓度测定（4学时）

[基本内容]

试剂配置，蛋白浓度的测定，酶活力的测定

[基本要求]

掌握溶菌酶活力、蛋白浓度测定方法。

四、发酵工程实验

实验八基因工程菌发酵及其蛋白药物的表达检测（4学时）

[基本内容]

发酵过程参数变化的检测，发酵过程中质粒稳定性变化的监测，检测诱导前后蛋白药物表达量的变化及其存在形式。[基本要求]

了解搅拌发酵罐的结构与工作原理，熟悉发酵培养过程。掌握发酵过程的实验方法。

五、细胞工程实验

实验九动物细胞的原代培养（4学时）

[基本内容]

从健康动物体内无菌条件下取出适量组织，用胰蛋白酶进行消化使细胞分散。洗涤纯化后进行原代培养。

[基本要求]

学习掌握哺乳动物细胞的原代培养方法，同时进一步练习细胞培养过程中的操作技术。