结核分枝杆菌的核酸检测PPT演示幻灯片
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结核分枝杆菌的核酸检测PPT课件
DNA扩增技术检测有哪些不足
• 相比DNA检测技术，RNA检测更适合判断病原体转录活性，DNA检测技术 不能判断病原体转录活性，不能区分潜伏感染和活动性感染（活动性感染： 指示RNA转录活跃，潜伏感染：指示RNA不转录）
• 交叉污染问题 • 变温检测，对仪器要求高 • 抑制反应（Ta q酶）
第22页/共25页
Xpert MTB/RIF
一种半巢式实时荧光PCR体外 诊断技术，可以检测结核分枝杆 菌以及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平 耐药核心区间（RRDR）设计引物、 探针。5个探针结合到野生型，而 不是突变体目标。每个探针用不 同的荧光染料标记，允许同时检 测。
第7页/共25页
痰标本与处理液 1：2混合
第16页/共25页
• 3. 胃灌洗液 （1）婴幼儿、儿童和迟钝者诊断肺结核时，鉴于无法采集标本或支气管灌洗液，推 荐采集胃液标本，通过胃灌洗咽下去的痰液。 （2）标本应在采集4小时内送到实验室，否则应置于一次性内含100ml碳酸钠酸他 的无菌容器中。 （3)胃灌洗液需连续采集3天，体积5～10ml，调节pH至中性。
液、组织、脓肿物、吸出的脓液、创伤标本、大便标本 • 分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺活检标本、胃灌洗液、体 液、组织、脓肿物、吸出的脓液、创伤标本、大便标本、血液 • 结核分枝杆菌的核酸检测：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺活检标本、胃灌洗液、体 液、组织、脓肿物、吸出的脓液、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除 外）、病理切片
增加分子生物学阳性可以作为确诊标 准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学、 分子生物学）检查为主，结合流行病史、 临床表现、胸部影像、相关的辅助检查 及鉴别诊断等，进行综合分析做出诊断。 以病原学、病理学结果作为确诊依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
结核分枝杆菌ppt课件
22
浓缩集菌
先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试 验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、 腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气 管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH （痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱 的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核 分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本 先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内 静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉 淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作 培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。
24培养?罗氏培养基一般需26周阳性结果随时报告8周无菌生长报为阴性结果阳性结果按生长菌落占斜面141234和全部划分1到425快速诊断?一般涂片检查菌数需5x1034ml培养需1x102ml标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果且培养需时较长
一、 生物学性状
形态与染色 结核分枝杆 菌为细长略带弯曲的杆菌， 大小1～4X0.4m。牛分枝 杆菌则比较粗短。分枝杆 菌属的细菌细胞壁脂质含 量较高，约占干重的60%， 特别是有大量分枝菌酸包 围在肽聚糖层的外面，可 影响染料的穿入。
19
2.试验方法与意义：常规试验分别取2种PPD 5 个单位注射两前臂皮内，48～72h后: 硬结≤4mm者为阴性； 5-9mm为弱阳性； 10-19mm为阳性； ≥20mm或虽＜20mm，但局部出现水泡 和淋巴管炎，为强阳性。 若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之， BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种 所致。
17
近来研究表明结核分枝杆菌诱导机体产生 免疫和超敏反应的物质不同。超敏反应主 要由结核菌素蛋白和蜡质Ｄ共同引起，而 免疫则由结核分枝杆菌核糖体RNA引起。二 种不同抗原成分激活不同的T细胞亚群释放 出不同的淋巴因子所致。
浓缩集菌
先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试 验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、 腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气 管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH （痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱 的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核 分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本 先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内 静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉 淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作 培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。
24培养?罗氏培养基一般需26周阳性结果随时报告8周无菌生长报为阴性结果阳性结果按生长菌落占斜面141234和全部划分1到425快速诊断?一般涂片检查菌数需5x1034ml培养需1x102ml标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果且培养需时较长
一、 生物学性状
形态与染色 结核分枝杆 菌为细长略带弯曲的杆菌， 大小1～4X0.4m。牛分枝 杆菌则比较粗短。分枝杆 菌属的细菌细胞壁脂质含 量较高，约占干重的60%， 特别是有大量分枝菌酸包 围在肽聚糖层的外面，可 影响染料的穿入。
19
2.试验方法与意义：常规试验分别取2种PPD 5 个单位注射两前臂皮内，48～72h后: 硬结≤4mm者为阴性； 5-9mm为弱阳性； 10-19mm为阳性； ≥20mm或虽＜20mm，但局部出现水泡 和淋巴管炎，为强阳性。 若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之， BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种 所致。
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近来研究表明结核分枝杆菌诱导机体产生 免疫和超敏反应的物质不同。超敏反应主 要由结核菌素蛋白和蜡质Ｄ共同引起，而 免疫则由结核分枝杆菌核糖体RNA引起。二 种不同抗原成分激活不同的T细胞亚群释放 出不同的淋巴因子所致。
结核分枝杆菌PPT课件
❖ 治疗
▪ 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 ▪ 抗生素
-
第二节 其他棒状杆菌
❖ 大多不产生外毒素 ❖ 很少有异染颗粒 ❖ 大多正常寄生于人体，为条件致病菌
-
分枝杆菌属
(Mycobacterium)
27
-
❖ 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名 ❖ 主要特点
▪ 细长弯曲，分枝状生长 ▪ 细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸） ▪ 常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性 ▪ 引起疾病都呈慢性，并伴肉芽肿
胞 ❖ 多为条件致病菌 ❖ 致病菌：白喉棒状杆菌
-
第一节 白喉棒状杆菌
(Corynebacterium diphtheriae)
12
-
一、 生物学性状
形态与染色
❖ 菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状, 常排列呈V、L形
❖ Albert 染 色 ， 可 出 现 异 染 颗 粒 metachromatic granule，在鉴定时有重 要意义
-
第一节 结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
31
-
结核分枝杆菌
❖ 俗称结核杆菌，引起人类结核病 ❖ 致病菌主要为结核分枝杆菌（M. tuberculosis)、牛
分枝杆菌(M. bovis) ❖ 世界上1/3人感染，70%在亚洲 ❖ 世界防治结核病日：3月24日
声带麻痹--声音嘶哑
软颌麻痹--吞咽困难
• 心肌---心肌炎
-
白喉假膜
-
三、免疫性
抗毒素免疫
❖感染后机体可获得牢固的免疫力
❖机体还可通过其它方式获得免疫力：
▪ 六月以下婴儿---------母亲 ▪ 成人---------------------隐性感染、疫苗
▪ 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 ▪ 抗生素
-
第二节 其他棒状杆菌
❖ 大多不产生外毒素 ❖ 很少有异染颗粒 ❖ 大多正常寄生于人体，为条件致病菌
-
分枝杆菌属
(Mycobacterium)
27
-
❖ 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名 ❖ 主要特点
▪ 细长弯曲，分枝状生长 ▪ 细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸） ▪ 常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性 ▪ 引起疾病都呈慢性，并伴肉芽肿
胞 ❖ 多为条件致病菌 ❖ 致病菌：白喉棒状杆菌
-
第一节 白喉棒状杆菌
(Corynebacterium diphtheriae)
12
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一、 生物学性状
形态与染色
❖ 菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状, 常排列呈V、L形
❖ Albert 染 色 ， 可 出 现 异 染 颗 粒 metachromatic granule，在鉴定时有重 要意义
-
第一节 结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
31
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结核分枝杆菌
❖ 俗称结核杆菌，引起人类结核病 ❖ 致病菌主要为结核分枝杆菌（M. tuberculosis)、牛
分枝杆菌(M. bovis) ❖ 世界上1/3人感染，70%在亚洲 ❖ 世界防治结核病日：3月24日
声带麻痹--声音嘶哑
软颌麻痹--吞咽困难
• 心肌---心肌炎
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白喉假膜
-
三、免疫性
抗毒素免疫
❖感染后机体可获得牢固的免疫力
❖机体还可通过其它方式获得免疫力：
▪ 六月以下婴儿---------母亲 ▪ 成人---------------------隐性感染、疫苗
结核分枝杆菌PPT课件
全球总疫情 20亿人口感染了结核菌，现症结核病人2000
万，每年新发病人数800－1000万，每年 300万人死于结核病。 我国疫情 现有活动性肺结核病人600万人，传染性 肺结核病人200万人，每年因结核病死亡25 万人。我国曾感染过结核杆菌的人数超过 5亿。
2000年估算结核发病情况
结
章
核 分 枝 杆 菌
CHAPTER
节
ONE
一
结核分枝杆菌的发现
结核分枝杆菌是结核病的病原菌，俗名结核杆菌。 肺结核俗称“肺痨”，是一个古老的疾病。在几千年前的埃及、印度等文明 古国的文献里就有结核病记载，世界各国的文学经典作品中也有描述。 1882年3月24日，德国人科霍（Koch）在柏林生理学会宣布发现结核分枝 杆菌，距今已有124年，结核病这种“白色瘟疫”仍在严重地威胁人类的健 康。
国家 印度 中国 印度尼西亚 尼日利亚
病人数（百 万） (%
1.86 (21)
1.37 (16)
0.60 (7)
0.35
CHAPTER
一
章
、 生 物 学 特 性
节
ONE
二
三
章 个
方
节 面
：
三
抵培形 抗养态 力特与
性染 色
形态与染色：
细长略带弯曲 无荚膜、无鞭毛，
不形成芽胞 抗酸染色阳性
免疫性（三个“同 时”）
1
同时有迟发型超敏反 应（Ⅳ型变态反应）
5
同时有抗结核的细胞 免疫
4
2
结核病病人发病时机 体：
3
同时有结核分枝杆菌 的感染
有 毒 TB菌
CHAPTER
以前感染过或免疫豚鼠 局部红肿、浅溃疡 不扩散
结核分枝杆菌ppt课件
蛋白质
结
核
致杆
病 物
菌 细 胞
质壁
上
的
磷脂
脂质
蜡质D 索状因子
分枝菌酸
2019/9/5
硫酸脑苷30 脂
二、结核杆菌的致病性
2019/9/5
31
二、结核杆菌的致病性
2.传染源与传播途径
传染源：患者和带菌者
传播途径：
结核杆菌
呼吸道 消化道
破损皮 肤粘膜
肺结核 肺内感染 肠结核 皮肤结 肺外感染 核病
2019//5
11
一、结核杆菌的生物学特性
抗酸染色阳性，分枝状排列的细长杆菌
2019/9/5
12
一、结核杆菌的生物学特性
培养特性
培养特点：馋、懒、丑。
馋--营养要求较高，必须在含血清、卵黄、马铃 薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基（罗氏） 上才能生长良好。
懒--生长缓慢，12～24h分裂1次，在固体培养基 上2～4w才出现肉眼可见的菌落。
原发灶
淋巴管炎
原发综合症
肺门淋巴结肿大
2019/9/5
35
二、结核杆菌的致病性
当机体抗感染能力强时，可产生 有效的细胞免疫，将结核杆菌就地围 歼，阻止它们由淋巴管或血流扩散。
结局：钙化、纤维化而自愈。
2019/9/5
36
二、结核杆菌的致病性
原发灶 （渗出性炎性病灶）
淋巴管 肺门淋巴结
原发综合征 胸透为哑铃形阴影 结菌的休眠状态 结菌的播散
丑--典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不 透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。
2019/9/5
13
一、结核杆菌的生物学特性
罗氏固体培养基中生长良好，呈菜花状
结核分枝杆菌PPT课件
分枝杆菌属（Mycobacterium）
又称抗酸分枝杆菌 (acid-fast bacillus) 种类较多（100种），可分为3类
①结核分枝杆菌； ②非结核分枝杆菌； ③麻风分枝杆菌。
20近10几年年全全国国结结核核病病疫疫情情情情况况
2013年
发病 死亡
2012年
发病 死亡
2013年
发病 死亡
注射部位有针眼 大的红点或稍有 红肿，硬结直径 小于0.5cm
无结核感染，但应考虑： 原发感染的早期 细胞免疫功能如何 正患其他传染病（麻疹） 某些老年人
另外一种方法
PPD-C
BCG-PPD
分别取2种PPD 5单位注射于两前臂皮内，48
～ 72小时后观察结果，测量红肿硬结直径。
5．结果判断 红肿硬结直径＞ 5mm，阳性；≥ 15mm 或局部
（一）形态与染色： 抗酸染色阳性、细长弯 曲杆菌，无鞭毛和芽胞，有荚膜。可变异，形 成细菌L型（Much颗粒）
L型结核杆菌
细菌型
丝状型
颗粒型
（二）培养特性 培养特点：馋、懒、丑。
生物学特性
馋--营养要求较高，必须在含蛋黄、马铃 薯、甘油、无机盐和孔雀绿等物质的特殊培养 基（罗氏培养基）上才能生长良好。
懒--生长缓慢，18-20h分裂1次，在固体培 养基上2～4w才出现肉眼可见的菌落，PH 6.56.8。
丑--典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒 状、结节状或菜花样，不透明，乳白色或米黄 色。液体培养基中呈皱褶的菌膜生长。
（三）抵抗力
对理化因素抵抗力较强：三抗
1. 耐干燥：在干燥的痰中可活6～8个月；在 尘埃中活8～10天；
蜡质D: 佐剂作用，引起迟发型超敏反应。
2. 蛋白质 ： 结核菌素，与蜡质D共同引起迟发型
又称抗酸分枝杆菌 (acid-fast bacillus) 种类较多（100种），可分为3类
①结核分枝杆菌； ②非结核分枝杆菌； ③麻风分枝杆菌。
20近10几年年全全国国结结核核病病疫疫情情情情况况
2013年
发病 死亡
2012年
发病 死亡
2013年
发病 死亡
注射部位有针眼 大的红点或稍有 红肿，硬结直径 小于0.5cm
无结核感染，但应考虑： 原发感染的早期 细胞免疫功能如何 正患其他传染病（麻疹） 某些老年人
另外一种方法
PPD-C
BCG-PPD
分别取2种PPD 5单位注射于两前臂皮内，48
～ 72小时后观察结果，测量红肿硬结直径。
5．结果判断 红肿硬结直径＞ 5mm，阳性；≥ 15mm 或局部
（一）形态与染色： 抗酸染色阳性、细长弯 曲杆菌，无鞭毛和芽胞，有荚膜。可变异，形 成细菌L型（Much颗粒）
L型结核杆菌
细菌型
丝状型
颗粒型
（二）培养特性 培养特点：馋、懒、丑。
生物学特性
馋--营养要求较高，必须在含蛋黄、马铃 薯、甘油、无机盐和孔雀绿等物质的特殊培养 基（罗氏培养基）上才能生长良好。
懒--生长缓慢，18-20h分裂1次，在固体培 养基上2～4w才出现肉眼可见的菌落，PH 6.56.8。
丑--典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒 状、结节状或菜花样，不透明，乳白色或米黄 色。液体培养基中呈皱褶的菌膜生长。
（三）抵抗力
对理化因素抵抗力较强：三抗
1. 耐干燥：在干燥的痰中可活6～8个月；在 尘埃中活8～10天；
蜡质D: 佐剂作用，引起迟发型超敏反应。
2. 蛋白质 ： 结核菌素，与蜡质D共同引起迟发型
结核分枝杆菌实验室检测方法(共30张PPT)
确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感 性试验。
灵 敏：21、0 个菌分/反响枝〔TB杆〕； 菌快速液体培养技术
• BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自动 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia〔奴卡〕、Rhodococcus〔红球菌属〕、Legionella micdadei〔军团菌〕、cryptosporidium〔
呈泡沫状，称麻风细胞。 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的
近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的开展，为分枝杆菌的检测、鉴定和药敏实验提供了极大的方便，可将诊断时间从几周降低到几天。 萋尼染色法—红色—普通显微镜〔高倍〕 γ干扰素释放试验能较好地为临床效劳 发光二极管荧光显微镜〔LED〕 灵敏度：103 个菌/反响 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜〔低倍〕
检测范围：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓 肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍、耻垢。
➢ 高 效： 同时检测 17 种分枝杆菌〔包括TB〕 ➢ 快 速：＞4周〔菌种鉴定〕 6 小时 ➢ 灵 敏： 103 个菌/反响
23
结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒
基于rpoB〔利福平〕和katG/inhA〔异烟肼〕的基因突变，对耐多药结核病做 出快速诊断。
• 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌 时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
发光二极管荧光显微镜〔LED〕
• 荧光显微镜本钱高、易损坏、耗电量大、光源寿 命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内工作等， 荧光染色法一直没有在结核病痰涂片诊断中得到 广泛的应用。
• 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜就 相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光显微 镜〞结合金胺O染色在结核病痰涂片检查中 有一定的应用价值。
灵 敏：21、0 个菌分/反响枝〔TB杆〕； 菌快速液体培养技术
• BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自动 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia〔奴卡〕、Rhodococcus〔红球菌属〕、Legionella micdadei〔军团菌〕、cryptosporidium〔
呈泡沫状，称麻风细胞。 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的
近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的开展，为分枝杆菌的检测、鉴定和药敏实验提供了极大的方便，可将诊断时间从几周降低到几天。 萋尼染色法—红色—普通显微镜〔高倍〕 γ干扰素释放试验能较好地为临床效劳 发光二极管荧光显微镜〔LED〕 灵敏度：103 个菌/反响 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜〔低倍〕
检测范围：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓 肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍、耻垢。
➢ 高 效： 同时检测 17 种分枝杆菌〔包括TB〕 ➢ 快 速：＞4周〔菌种鉴定〕 6 小时 ➢ 灵 敏： 103 个菌/反响
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结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒
基于rpoB〔利福平〕和katG/inhA〔异烟肼〕的基因突变，对耐多药结核病做 出快速诊断。
• 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌 时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
发光二极管荧光显微镜〔LED〕
• 荧光显微镜本钱高、易损坏、耗电量大、光源寿 命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内工作等， 荧光染色法一直没有在结核病痰涂片诊断中得到 广泛的应用。
• 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜就 相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光显微 镜〞结合金胺O染色在结核病痰涂片检查中 有一定的应用价值。
结核分枝杆菌的核酸检测课件
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011 (49):2827-2831.
n耐药结核 ü当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
n肺外结核 ü所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
GeneXpert
Xpert MTB/RIF
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
n耐药结核 ü当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
n肺外结核 ü所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
GeneXpert
Xpert MTB/RIF
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
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结核分枝杆菌【共15张PPT】
结核分枝杆菌的致病性
1、所致疾病
肺结核：（原发感染、原发后感染） 肺外结核 2、致病物质 荚膜 脂质：索状因子、磷脂、硫酸脑苷
脂、蜡质-D 蛋白质：25KD糖蛋白
结核分枝杆菌的诊断与防治
1、微生物学诊断：
标本采集：痰液、尿、粪、脑脊液、胸腹
1、培养特性：体外人工培养未获成功
2、对乙醇敏感（70% 2min） 动物接种、结核杆菌DNA测定、
麻风分枝杆菌的致病性
1、所致疾病 麻风：（瘤型、结核型）
2、致病物质 不详
麻风分枝杆菌的诊断与防治
1、微生物学诊断： 标本采集：鼻腔黏膜、皮损处组织 检测方法：涂片镜检（抗酸染色）
2、防治： 疫苗：BCG 治疗：砜类药物
2、对乙醇敏感（70% 2min）
动物接种、结核杆菌DNA测定、
、对湿热敏感 （ C 3 结核菌素试验
1、未感染
感染
62-63。
2、对乙醇敏感（70% 2min）
标本采集：鼻腔黏膜、皮损处组织
脂质：索状因子、磷脂、硫酸脑苷
结核分枝杆菌 — 4、对紫外线敏感（几小时）
15min）
5、抗痨药物敏感 （易形成耐药）
水、关节积液
结核菌素试验
结核分枝杆菌 —
非结核分枝杆菌 + 麻风分枝杆菌的诊断与防治
检测方法：涂片镜检
检测方法：涂片镜检
麻风分枝杆菌的生物学特性 麻风分枝杆菌的生物学特性
分离培养：固体培养基
腔黏膜、皮损处组织
脂质：索状因子、磷脂、硫酸脑苷 2、对乙醇敏感（70% 2min）
麻风分枝杆菌的生物学特性
结核分枝杆菌 — 疫苗：BCG 3、细胞免疫受抑制
细胞免疫正常
1、培养特性
结核分枝杆菌的试验室诊断【检验科】 ppt课件
结核分枝杆菌的试验室诊断
ppt课件
1
结核疫情及诊断进展
ppt课件
2
黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断 咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场 哀怨凄绝的爱情故事。
ppt课件
3
我国结核病疫情
全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六 多” 。
一、感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口
酸杆菌阳性率可达50%， 荧光法的缺点：
假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月
ppt课件
15
四、培养法
一般都用改良罗氏固体培养基
接种后第3第7天观察，以后每周观察一 次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报 告为阴性。
优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可 以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种 鉴定和药敏试验.
ppt课件
30
2、核酸探针(DNA-probe)
DNA探针是一小段带标记而能识别特异 性核苷酸序列的单链分子。
3、染色体核酸指纹法：
有多种方法， 如限制性内切酶图谱(REA)和限制性酶切片段长 度多态性(RFLP)分析等， RFLP用于菌株菌种鉴定和流行病学调查研究。
ppt课件
31
4、16s～23srDNA(rRNA)序列法
缺点：无法观察菌落形态，污染率略高于L-J法， 产品依赖进口，价格较贵。
ppt课件
27
七、色谱法
分为气相色谱(GC)、气液相色谱、高效液相色谱 (HPLC)等
GC等能检测分枝杆菌代谢过程中的挥发性物质如脂肪 酸所产生的CO2含量，出现不同的色谱峰，从而可鉴 定结核杆菌和大部分NTM菌种，且可测药敏。
主要在经济不发达的中西部地 区。
六、耐药患者多——全国结核p病pt课耐件 药率高达28％。
ppt课件
1
结核疫情及诊断进展
ppt课件
2
黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断 咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场 哀怨凄绝的爱情故事。
ppt课件
3
我国结核病疫情
全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六 多” 。
一、感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口
酸杆菌阳性率可达50%， 荧光法的缺点：
假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月
ppt课件
15
四、培养法
一般都用改良罗氏固体培养基
接种后第3第7天观察，以后每周观察一 次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报 告为阴性。
优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可 以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种 鉴定和药敏试验.
ppt课件
30
2、核酸探针(DNA-probe)
DNA探针是一小段带标记而能识别特异 性核苷酸序列的单链分子。
3、染色体核酸指纹法：
有多种方法， 如限制性内切酶图谱(REA)和限制性酶切片段长 度多态性(RFLP)分析等， RFLP用于菌株菌种鉴定和流行病学调查研究。
ppt课件
31
4、16s～23srDNA(rRNA)序列法
缺点：无法观察菌落形态，污染率略高于L-J法， 产品依赖进口，价格较贵。
ppt课件
27
七、色谱法
分为气相色谱(GC)、气液相色谱、高效液相色谱 (HPLC)等
GC等能检测分枝杆菌代谢过程中的挥发性物质如脂肪 酸所产生的CO2含量，出现不同的色谱峰，从而可鉴 定结核杆菌和大部分NTM菌种，且可测药敏。
主要在经济不发达的中西部地 区。
六、耐药患者多——全国结核p病pt课耐件 药率高达28％。
实验十四分枝杆菌(共7张PPT)
实验十四分枝杆菌
第1页，共7页。
实验目的
• 掌握结核分枝杆菌的根本特征和常用鉴定方 法。
• 掌握临床标本中检查抗酸杆菌的方法。
第2页，共7页。
实验内容
••• 1耻2色 3、、、垢法示痰尿分。教标标枝：本本杆卡直漂菌介接浮在苗涂集罗〔片菌氏减检检培毒查查养结抗抗基核酸酸上分 杆 杆的枝菌菌生杆 ： 。长菌抗表〕 酸现和染。 涂掌用 结实加3结实再改2再示取用耻痰改22用2用11示加再 涂掌结痰用掌、 、 、 、 、 、 、片握接果验1果验加进加教尿吸垢标进吸吸教1加片握核标吸握mm复脱脱脱馋懒示： 临 种观 室 观 室 水 罗 水 ： 液 管 分 本 罗 管 管 ： 水： 结 分 本 管 临ll染色色色：：教汽汽标床环 察的察的至氏至卡1小枝直氏小小卡至 标核枝直小床：：0：：营初：油油本标直 ：标：标瓶培瓶介心杆接培心心介瓶 本分杆接心标-2用用用用养次卡用用经本接 淡准淡准颈养颈苗吸菌涂养吸吸苗颈 经枝菌涂吸本0美要别介333m力力适中挑 蓝报蓝报上基上〔取的片基取取〔上 适杆的片取中%%%l兰求离苗震震，当检取 的告的告，是，减瓶培检是瓶瓶减， 当菌培检瓶检盐盐盐染高需〔荡荡放处查标 背：背：静专静毒颈养查专颈颈毒静 处的养查颈查酸酸酸，减1211入理抗本 景景置门置结处特抗门处处结置 理根特抗处抗--酒酒酒分-00， ，8专 毒三分分后酸中下下用核泡性酸用泡泡核后本性酸泡酸333周精精精钟++性结000角钟钟，，直杆脓 可可于分沫：杆于沫沫分直特：杆沫杆才脱脱脱，分分分需核烧。。++接菌性 见见分枝上生菌分上上枝接征菌上菌能色色色水钟钟钟，，氧分瓶涂的或 染染枝杆层长：枝层层杆涂和：层的看，，，洗。。。++。枝中片方干 成成杆菌液速杆液液菌片常液方到直直直++，杆，，，或法酪 红红菌〕，度菌，，〕或用，法菌至至至吸菌高++厚。样 色色的和滴较的滴滴和厚鉴滴。落无无无干++〕压++膜局 的的别耻于快别于于耻膜定于，红红红，，，和灭涂部 细细离垢玻，离玻玻垢涂方玻一色色色在++耻菌++片痰 长长培分片培片片分片法片1代染染染油++垢周。。， 或或养枝中养中中枝。。中需液液液镜++分就。。制 略略的杆央的央央杆央要脱脱脱下枝能成 带带，菌，，，，菌，下下下1观杆长8弯弯主在烘主烘烘在烘2，，，察小菌0出曲曲要罗干要干干罗干水水水。M时在，M的的成氏后成后后氏后洗洗洗。罗菌X杆杆分培再分再再培再。。。2氏落菌菌为养滴为滴滴养滴5培M颜，，甘基，甘，，基，M养色有有油上重油重重上重大基更分分、的复、复复的复小上黄枝枝鸡生鸡生5555的的。----6666生生蛋长蛋长均次次次次生长长液表液表匀，，，，长趋趋、现、现薄直直直直表向向马：马：涂至至至至现，，铃铃片适适适适。此此薯薯，宜宜宜宜即即粉粉或的的的的为为、、经厚厚厚厚抗抗孔孔屡度度度度酸酸雀雀次， ， ， ，阳 阳 绿 绿薄待待待待性性。。涂干干干干杆杆片后后后后菌菌制固固固固，，成定定定定其其厚。。。。他他涂细细片菌菌。或或细细胞胞被被染染成成蓝蓝色色，，根根据据各各
第1页，共7页。
实验目的
• 掌握结核分枝杆菌的根本特征和常用鉴定方 法。
• 掌握临床标本中检查抗酸杆菌的方法。
第2页，共7页。
实验内容
••• 1耻2色 3、、、垢法示痰尿分。教标标枝：本本杆卡直漂菌介接浮在苗涂集罗〔片菌氏减检检培毒查查养结抗抗基核酸酸上分 杆 杆的枝菌菌生杆 ： 。长菌抗表〕 酸现和染。 涂掌用 结实加3结实再改2再示取用耻痰改22用2用11示加再 涂掌结痰用掌、 、 、 、 、 、 、片握接果验1果验加进加教尿吸垢标进吸吸教1加片握核标吸握mm复脱脱脱馋懒示： 临 种观 室 观 室 水 罗 水 ： 液 管 分 本 罗 管 管 ： 水： 结 分 本 管 临ll染色色色：：教汽汽标床环 察的察的至氏至卡1小枝直氏小小卡至 标核枝直小床：：0：：营初：油油本标直 ：标：标瓶培瓶介心杆接培心心介瓶 本分杆接心标-2用用用用养次卡用用经本接 淡准淡准颈养颈苗吸菌涂养吸吸苗颈 经枝菌涂吸本0美要别介333m力力适中挑 蓝报蓝报上基上〔取的片基取取〔上 适杆的片取中%%%l兰求离苗震震，当检取 的告的告，是，减瓶培检是瓶瓶减， 当菌培检瓶检盐盐盐染高需〔荡荡放处查标 背：背：静专静毒颈养查专颈颈毒静 处的养查颈查酸酸酸，减1211入理抗本 景景置门置结处特抗门处处结置 理根特抗处抗--酒酒酒分-00， ，8专 毒三分分后酸中下下用核泡性酸用泡泡核后本性酸泡酸333周精精精钟++性结000角钟钟，，直杆脓 可可于分沫：杆于沫沫分直特：杆沫杆才脱脱脱，分分分需核烧。。++接菌性 见见分枝上生菌分上上枝接征菌上菌能色色色水钟钟钟，，氧分瓶涂的或 染染枝杆层长：枝层层杆涂和：层的看，，，洗。。。++。枝中片方干 成成杆菌液速杆液液菌片常液方到直直直++，杆，，，或法酪 红红菌〕，度菌，，〕或用，法菌至至至吸菌高++厚。样 色色的和滴较的滴滴和厚鉴滴。落无无无干++〕压++膜局 的的别耻于快别于于耻膜定于，红红红，，，和灭涂部 细细离垢玻，离玻玻垢涂方玻一色色色在++耻菌++片痰 长长培分片培片片分片法片1代染染染油++垢周。。， 或或养枝中养中中枝。。中需液液液镜++分就。。制 略略的杆央的央央杆央要脱脱脱下枝能成 带带，菌，，，，菌，下下下1观杆长8弯弯主在烘主烘烘在烘2，，，察小菌0出曲曲要罗干要干干罗干水水水。M时在，M的的成氏后成后后氏后洗洗洗。罗菌X杆杆分培再分再再培再。。。2氏落菌菌为养滴为滴滴养滴5培M颜，，甘基，甘，，基，M养色有有油上重油重重上重大基更分分、的复、复复的复小上黄枝枝鸡生鸡生5555的的。----6666生生蛋长蛋长均次次次次生长长液表液表匀，，，，长趋趋、现、现薄直直直直表向向马：马：涂至至至至现，，铃铃片适适适适。此此薯薯，宜宜宜宜即即粉粉或的的的的为为、、经厚厚厚厚抗抗孔孔屡度度度度酸酸雀雀次， ， ， ，阳 阳 绿 绿薄待待待待性性。。涂干干干干杆杆片后后后后菌菌制固固固固，，成定定定定其其厚。。。。他他涂细细片菌菌。或或细细胞胞被被染染成成蓝蓝色色，，根根据据各各
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n耐药结核 ü当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
n肺外结核 ü所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
7
GeneXpert
Xpert MTB/RIF
100菌条/ml
全自动、同时检测利福 67℃恒温扩增，扩增
平耐药基因、特异性高，时间短，特异性高，生
生物安全性高
物安全性高
2.5小时
1000～10000菌条/ml
适合大批量筛查，低费 用
最多一次同时检测八个 标本用量较少，除痰标 假阳性，易污染，需专
样本
本以外的标本需进一步 业人员操作
认证
13
样本类型（一）
2
结核分枝杆菌核酸检测
增加分子生物学阳性可以作为确诊标
准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学 、分子生物学）检查为主，结合流行病 史、临床表现、胸部影像、相关的辅助 检查及鉴别诊断等，进行综合分析做出 诊断。以病原学、病理学结果作为确诊 依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进 行定量分析的办法。
12
目的基因片段 方法
时间 检测敏感度 优点
缺点
Xpert MTB/RIF
rpoB 半巢式实时荧光PCR
TB-LAMP
gryB及IS6110 环介导恒温扩增
结核杆菌DNA
IS6110 实时荧光定量PCR
2小时
1小时
131菌条/ml
痰液、支气管出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切 片
14
样本类型（二）
分枝杆菌菌种鉴定 临床分枝杆菌分离培养物
结核分枝杆菌药物敏感性试验： 临床分离结核杆菌纯培养物
结核抗体的检测： 血清
环介导等温扩增仪（TB-LAMP）
体外定性检测结核分枝杆菌复合群； 在恒温条件下进行基因扩增反应； 4种引物识别6个区域，特异性高； 扩增反应效率高，67℃，40min。 主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较 小，而且试剂成本较低。
11
传统实时荧光定量PCR检测
目的：定量检测人标本中的结核分枝杆菌核酸 原理：PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
1
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
2. Xichao Ou et al. A feasibility study of Xpert MTB/RIF test at the peripheral level laboratory in China. International Journal of Infectious Diseases. 2015 (31):41-46.
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
8
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
▪ INH单耐药的患者通常不会考虑立即改变治疗方案，与此相反，对RIF单耐药的患者，无 论INH是否耐药，都会采取与耐多药患者相同的治疗方案1。
▪ 约90%利福平耐药的结核患者同时异烟肼耐药，也就是耐多药结核患者2。
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011 (49):2827-2831.
荧光染色
5
结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
6
2014年WHO关于结核诊断的标准
n肺结核 ü所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 ü对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
3
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
4
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液
结核分枝杆菌的核酸检测：
IFN-γ释放试验（T-SPOT.TB）： 肝素锂或肝素钠抗凝血
15
标本留取标准
1.痰标本： （1）可疑肺结核患者：初诊病人应收集3份标本（当日 即时、夜间和次日晨痰），治疗中或随访病人应按期留 取2份痰标本（晨痰、夜间痰），体积3～5ml，盛于广口 和具有螺旋盖子的痰瓶中。 （2）即时痰采集后立即送检，夜间痰和晨痰采集后常温 保存不应超过12小时，对当日不能进行涂片检查的标本 ，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。 （3）对无法咳痰的患者：可使用高渗盐水（3% NaCl）诱 导痰或收集清晨胃液标本，或使用支气管镜采集支气管 灌洗液标本。
系统内自动完成
标本自动 清洗过滤
超声裂解 DNA提纯
DNA和PCR反应 试剂混合
半巢式实时荧光 定量核酸扩增检
测
打印检 测报告
将反应盒放入检测模块 （手工操作完成）
获得检测结果时间：1小时50分钟
9
MTB/RIF检测对MDR-TB的防控
“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最 为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。
n肺外结核 ü所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
7
GeneXpert
Xpert MTB/RIF
100菌条/ml
全自动、同时检测利福 67℃恒温扩增，扩增
平耐药基因、特异性高，时间短，特异性高，生
生物安全性高
物安全性高
2.5小时
1000～10000菌条/ml
适合大批量筛查，低费 用
最多一次同时检测八个 标本用量较少，除痰标 假阳性，易污染，需专
样本
本以外的标本需进一步 业人员操作
认证
13
样本类型（一）
2
结核分枝杆菌核酸检测
增加分子生物学阳性可以作为确诊标
准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学 、分子生物学）检查为主，结合流行病 史、临床表现、胸部影像、相关的辅助 检查及鉴别诊断等，进行综合分析做出 诊断。以病原学、病理学结果作为确诊 依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进 行定量分析的办法。
12
目的基因片段 方法
时间 检测敏感度 优点
缺点
Xpert MTB/RIF
rpoB 半巢式实时荧光PCR
TB-LAMP
gryB及IS6110 环介导恒温扩增
结核杆菌DNA
IS6110 实时荧光定量PCR
2小时
1小时
131菌条/ml
痰液、支气管出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切 片
14
样本类型（二）
分枝杆菌菌种鉴定 临床分枝杆菌分离培养物
结核分枝杆菌药物敏感性试验： 临床分离结核杆菌纯培养物
结核抗体的检测： 血清
环介导等温扩增仪（TB-LAMP）
体外定性检测结核分枝杆菌复合群； 在恒温条件下进行基因扩增反应； 4种引物识别6个区域，特异性高； 扩增反应效率高，67℃，40min。 主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较 小，而且试剂成本较低。
11
传统实时荧光定量PCR检测
目的：定量检测人标本中的结核分枝杆菌核酸 原理：PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
1
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
2. Xichao Ou et al. A feasibility study of Xpert MTB/RIF test at the peripheral level laboratory in China. International Journal of Infectious Diseases. 2015 (31):41-46.
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
8
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
▪ INH单耐药的患者通常不会考虑立即改变治疗方案，与此相反，对RIF单耐药的患者，无 论INH是否耐药，都会采取与耐多药患者相同的治疗方案1。
▪ 约90%利福平耐药的结核患者同时异烟肼耐药，也就是耐多药结核患者2。
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011 (49):2827-2831.
荧光染色
5
结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
6
2014年WHO关于结核诊断的标准
n肺结核 ü所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 ü对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
3
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
4
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液
结核分枝杆菌的核酸检测：
IFN-γ释放试验（T-SPOT.TB）： 肝素锂或肝素钠抗凝血
15
标本留取标准
1.痰标本： （1）可疑肺结核患者：初诊病人应收集3份标本（当日 即时、夜间和次日晨痰），治疗中或随访病人应按期留 取2份痰标本（晨痰、夜间痰），体积3～5ml，盛于广口 和具有螺旋盖子的痰瓶中。 （2）即时痰采集后立即送检，夜间痰和晨痰采集后常温 保存不应超过12小时，对当日不能进行涂片检查的标本 ，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。 （3）对无法咳痰的患者：可使用高渗盐水（3% NaCl）诱 导痰或收集清晨胃液标本，或使用支气管镜采集支气管 灌洗液标本。
系统内自动完成
标本自动 清洗过滤
超声裂解 DNA提纯
DNA和PCR反应 试剂混合
半巢式实时荧光 定量核酸扩增检
测
打印检 测报告
将反应盒放入检测模块 （手工操作完成）
获得检测结果时间：1小时50分钟
9
MTB/RIF检测对MDR-TB的防控
“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最 为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。