细胞组分的分离与鉴定
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义细胞是构成生命体的基本单位，由多种不同的细胞组分组成，包括细胞膜、细胞核、线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等等。
有时需要对这些组分进行分级分离，以便对它们进行更加准确的研究。
本文将简要介绍细胞组分的分级分离原理及其意义。
一、细胞组分的分级分离原理1.离心分离离心分离是指通过离心机对样品进行高速离心，从而分离出不同密度的细胞组分。
在离心分离过程中，样品中的组分会随着转速增加而沉淀到不同的位置。
例如，通过离心可以将细胞核和线粒体分离出来。
2.凝胶电泳分离凝胶电泳是指将样品注入到聚丙烯酰胺凝胶中，然后通过电泳将不同大小的分子分离出来。
较大的分子会被凝胶阻滞，不能通过凝胶移动，而较小的分子则会迅速通过凝胶。
这种方法可以将蛋白质、DNA和RNA等分离出来。
3.峰值分离峰值分离是指将样品通过柱层析分离出来。
柱层析是一种利用不同分子的大小、形状、电荷和亲和性的差异分离化合物的方法。
例如，通过柱层析可以将核糖体不同组分分离出来。
二、细胞组分的分级分离意义1.提高细胞学研究的精度通过分级分离细胞组分，可以更加准确地研究细胞生物学。
例如，分离出核糖体的不同组分可以研究它们在蛋白质合成过程中的作用，从而更好地了解细胞代谢的机制。
2.提高疾病诊断的准确性某些疾病的诊断需要分离出细胞组分，例如，癌症诊断需要分离出癌细胞。
分级分离细胞组分可以提高疾病诊断的准确性，从而更好地治疗和预防疾病。
3.推动药物研发许多药物是从天然产物中提取出来的，例如植物中的药物。
通过分离出植物中不同的化合物，可以研究它们的结构和功能，从而更好地开发出新的药物。
总之，分级分离细胞组分可以提高细胞学研究的精度，提高疾病诊断的准确性，推动药物研发。
这种方法对相关领域的研究和发展非常重要。
细胞组分的分级分离
离心机机型 低速离心机 高速离心机 超速离心机
转速 8 000转/分 8 000~25 000转/分 25 000 ~ 80 000转/分
分离方法
❖ 差速离心分离法：利用不同离心速度产生的不同离 心力，将各种亚细胞组分和各种颗粒分开。
❖ 密度梯度离心分离法：将要分离的细胞组分铺放在密 度逐渐增加的介质表面，在超速离心力的作用下， 不同的组分以不同的沉降速率沉降，形成不同的 沉降带。
线粒体含量较多；长度适合观察，约5μm；肝脏较软，易 于破碎，并且适于快速提取，因而利于保持线粒体活性。
细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒体、溶酶体和其 他微体、核糖体和大分子。
詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线 粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使詹纳斯绿B染料始终保持 氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中詹 纳斯绿B被还原成无色的化合物。
一半肝组织，0.25M蔗糖洗3次，加3ml 0.25M蔗糖，剪碎
匀浆（5-8次），6层纱布过滤至10ml离心管 取出1ml至dorf管（A），3000rpm，10min
沉淀加入1ml 1M蔗糖，悬
上清入dorf管(B)
涂片1 涂片2
3800rpm,10min
12000rpm,20min
弃上清，沉淀加少量 0.25M蔗糖，悬
❖ 离心技术：
1. 是分离细胞器（如细胞核、线粒体、高尔基体）及各种大分子基 本手段。
2. 转速为10-25kr/min的离心机称为高速离心机。
3. 转速>25kr/min，离心力>89Kｇ者称为超速离心机。
4. 目前超速离心机的最高转速可达100000r/min，离心力超过500Kg。
颗粒直径 103nm 102~104nm 102nm
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(886)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（45分，每题5分）1. 细胞坏死往往会引起炎症，而程序性细胞死亡不会引起炎症，根本原因是细胞是否破裂。
（）答案：正确解析：程序性细胞死亡不会导致细胞破裂，因而不会有伤口，也就不会引起感染。
2. 受体都分布于质膜表面，在信息传递和细胞识别过程中起信号接收器的作用。
（）答案：错误解析：受体分为胞内受体和胞外受体两种类型。
3. 体外细胞培养很容易被微生物所污染，因此细胞工程所有的实验都必须在无菌条件下进行，所有的实验器械和试剂都是以相同的方式消毒灭菌。
（）答案：错误解析：细胞工程实验用到的灭菌方式有高压蒸汽灭菌，高温灭菌，以及过滤等方法。
不同的试验器械和试剂所需要的灭菌方式不尽相同，例如：玻璃品类的器皿可以通过高压蒸汽灭菌，金属类则可以通过灼烧的方法进行高温灭菌。
4. Na＋K＋泵只存在真核生物的细胞质膜而不存在于囊泡膜。
（）答案：错误解析：只存在动物的细胞质膜，而不存在于其他生物膜。
5. 常染色质的所有基因都具有转录活性。
（）答案：错误解析：处于常染色质状态只是基因转录的必要条件，而不是充分条件，常染色质并非所有基因都具有转录活性。
6. 胆固醇在动物细胞膜中含量较高，但不存在于植物和原核生物细胞膜中。
（）答案：错误解析：胆固醇存在于动物细胞和极少数的原核细胞中，在哺乳动物的细胞质膜中，尤为丰富。
多数细菌质膜中不含有胆固醇成分，但支原体细胞膜中胆固醇含量较多，约占36，这对保持细胞膜的完整性是必需的，因其细胞膜含甾醇，故比其他原核生物的膜更坚韧。
植物细胞膜一般无胆固醇。
7. 自主复制DNA序列具有一段11～14bp的同源性很高的富含GC的共有序列。
（）答案：错误解析：ARS含有一段同源性很高的富含AT的共有序列。
植物体内的亚细胞组分分离
植物体内的亚细胞组分分离步骤:准确称取植株鲜样0.5000 g,加入20 mL提取液(0.25 mmol/L蔗糖+50 m mol/L Tris HCl缓冲液(pH 7.5)),研磨匀浆,用尼龙纱布过滤,滤渣为细胞壁部分;滤液在600 r/min下离心10min,沉淀为细胞核部分;上清液在2000 r/min下离心15 min,沉淀为叶绿体部分;上清液在10000 r/min下离心20 min,沉淀为线粒体部分;上清液为含核糖体的可溶部分,每组两次离心,全部操作在4下进行。
植物亚细胞组分的分离步骤:准确称取鲜样0.5000 g,加入20 mL提取液[0.25mol·L-1蔗糖+50 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液(pH7.5)+1mmol·L-1二硫赤鲜糖醇,研磨匀浆,匀浆液在冷冻离心机300×g下离心30 s,沉淀为细胞壁组分;上清液在2000×g下离心15 min,沉淀为细胞核和叶绿体组分;上清液在10000×g下离心20 min,沉淀为线粒体组分;上清液为含核糖体的可溶组分。
全部操作在4℃下进行。
Fractionation of Leaves and Roots.Leaves and roots were homogenized using a mortar and pestle in a medium containing0.25 M sucrose,50 mM Tris-HCl(pH 7.5),and 1 mmdithioerythritol.All steps were performed at 4 C.The resulting brei was strained through eight layers of cheesecloth,and liquid was expressed from the residue.The residue was washed twice with the grinding medium.The pooled washes,together with the first filtrate,were centrifuged at 300g for 30 s.The resulting pellet combined with the residue of the cheesecloth filtration contained mainly cell walls and cell wall debris and was designated as cell wall fraction(I).The supernatant of the first centrifugation step was then centrifuged at 20,000g for 45 min to sediment cell organelles.The pellet was taken as organelle fraction(II).The resultant supernatant solution referred to as soluble fraction(III)was employed in subsequent characterization studies as described.Fractions I and II were analyzed for their Cd content.The supernatant,fraction III,was further fractionated by gel filtration ，using Sephadex G-100,G-25,and G-10(Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala,Sweden).An aliquot of fraction III was applied to a column(100 x 2.6 cm)of G-100 using 50 mm Tris-HCl(pH 7.5) and 0.1 mM dithioerythritol as eluting buffer.Fractions containing Cd were pooled and chromatographed on calibrated G-25(roots) or G-10(leaves)columns(70 x 2.3cm).Fractions were collected on an LKB Ultrarac fraction collector.The effluents were monitored at 280 nm with a Gilford spectrophotometer 2400 S.The activities of the glutamate dehydrogenase and malate dehydrogenase were determined according to references 9 and 23.。
细胞分离方法与原理
细胞分离方法与原理细胞是构成生命的基本单位，其分离对于生物学研究、医学诊断和治疗等领域具有重要意义。
细胞分离技术是指将混合的细胞种群分离出特定类型的细胞或富含某种细胞的组织。
本文将围绕细胞分离的方法和原理展开讨论。
一、细胞分离的方法1. 机械法机械法是最早被使用的细胞分离方法之一，其原理是利用细胞的大小、形状、密度、粘附性等特性，通过物理力学的方法将不同种类的细胞分离出来。
机械法包括过滤、沉淀、离心、切碎、切割等方法。
其中，过滤法是最常用的方法，通过不同孔径的滤网筛选出目标细胞，常用的滤网孔径为0.22μm、0.45μm和0.8μm等。
2. 化学法化学法是利用化学试剂对细胞进行分离的方法。
化学试剂可以改变细胞的表面电荷、粘附性、抗体性等特性，使其与其他细胞或细胞外物质分离。
化学法包括胶体金法、磁珠法、离子交换法、免疫磁珠法等。
其中，免疫磁珠法是一种广泛应用的方法，可以利用特异性抗体对细胞进行分离，具有高效、高选择性和易操作等优点。
3. 生物学方法生物学方法是利用生物学特性对细胞进行分离的方法。
生物学方法包括细胞培养、细胞染色、细胞分选等。
其中，细胞培养是最常用的生物学方法之一，可以将细胞在培养基中生长和繁殖，使其数量达到分离的要求。
细胞染色是利用染色剂对细胞进行染色，从而得到不同形态和结构的细胞，有助于细胞的鉴定和分离。
细胞分选是利用细胞的生物学特性，如大小、形状、表面特性等，对细胞进行分离，常用的方法包括流式细胞术、激光捕获微操作等。
二、细胞分离的原理1. 物理原理细胞分离的物理原理主要包括大小、形状、密度、粘附性等特性。
不同种类的细胞具有不同的大小和形状，通过物理力学的方法可以将其分离出来。
例如，利用过滤法可以分离出大小不同的细胞；利用沉淀法可以分离出具有不同密度的细胞；利用粘附性可以分离出具有不同粘附能力的细胞。
2. 化学原理细胞分离的化学原理主要包括化学试剂对细胞表面电荷、粘附性、抗体性等特性的改变。
第一篇组成人体的细胞第三章 亚细胞结构的分离与鉴定
第一篇组成人体的细胞第三章亚细胞结构的分离与鉴定细胞由各种亚细胞结构组成。
其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。
离心技术是实现这一目标的基本手段。
一般认为，转速为10～25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。
目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。
第一节亚细胞结构分离的技术分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。
匀浆（Homogenization）是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液）研磨，使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。
分离亚细胞组分的第一步是分级分离。
它通过由低速到高速离心技术，使非均一混合体中的颗粒按其大小轻重分批沉降到离心管的不同部位，再分部收集，即可得到各种亚细胞组分。
由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时是均匀分布于整个离心管中，故每级分离得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。
分离亚细胞组分主要离心技术是差速离心和密度梯度离心。
差速离心（differential centrifugation）是在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核糖体。
由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，一般重复2～3次效果会好一些。
通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
密度梯度离心（density gradient centrifugation）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降两种。
细胞组分的分级分离方法
细胞组分的分级分离方法
细胞组分的分级分离方法包括密度梯度离心法、贴壁培养法、超速离心法、层析法和电泳法。
密度梯度离心法是根据细胞密度的不同，在高速离心机中经过长时间离心，使细胞分层沉淀，形成密度梯度。
根据密度梯度的不同，可以将不同密度的细胞分开。
这种方法分离效果好，可以获得较为纯的细胞，适用于大多数细胞类型的分离。
但这种方法需要使用大型设备，操作也比较复杂，需要专业人员操作。
贴壁培养法是根据细胞贴壁生长速度的不同，将不同种类的细胞分离。
这种方法需要在培养皿中加入适量的培养液，然后将待分离的细胞悬液加入培养皿中，让其在培养液中贴壁生长。
由于不同种类的细胞贴壁生长速度不同，因此经过一定时间的培养，可以观察到不同种类的细胞在培养皿中形成的“岛屿”状分布。
根据不同种类的细胞形成的“岛屿”状分布的不同，可以将它们分离出来。
此外还有超速离心法、层析法和电泳法等方法。
这些方法各有特点，可以根据实验需求选择合适的方法进行细胞组分的分级分离。
某理工大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(1412)
某理工大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（15分，每题5分）1. SDS是离子型去垢剂，可以用于膜蛋白的纯化。
（）答案：错误解析：SDS对蛋白质的作用较为间歇性，可以引起蛋白质变性，因此在纯化膜蛋白之时，常采用但非离子型去垢剂。
2. 核糖体存在于一切细胞内。
（）答案：错误解析：极个别高度分化的细胞内没有核糖体，如哺乳动物成熟的完备红细胞等。
3. 细胞外基质中的分泌蛋白主要是从高尔基体分泌小泡中分泌到细胞外的。
（）答案：正确解析：分泌蛋白主要在粗面内质网上合成，在进入胞质加工修饰，通过膜泡运输的方式分泌到细胞外基质中会。
2、名词解释（20分，每题5分）1. 简单扩散答案：简单扩散又称自由扩散，属被动运转的一种，是指脂溶性物质或分子质量小且不带电荷的物质在膜内外存在浓度差的条件下沿着浓度梯度通过细胞质膜的现象。
分子或离子的这种自由扩散这种方式的跨膜运转，不需要细胞量身定制能量，也不须要膜蛋白的协助。
解析：空2. 接触抑制（contact inhibition）答案：接触抑制是指细胞培养过程中出现明显的一种体外现象。
在培养开始后，分散的细胞悬液在培养瓶中不久就会贴附在瓶壁上，原来呈圆形的细胞一经贴壁便会迅速铺展而变成多种形态，随即细胞开始分裂，贴壁土壤形成致密的单层细胞。
当细胞分裂、生长到表面相互接触时，就会停止增殖，维持相互接触的持续保持单层细胞状态直至衰老，这就是接触抑制。
解析：空3. isodensity centrifugation答案：isodensity centrifugation的中文名称是等密度离心，是指根据被分离所称样品的密度差异来分离样品的方法。
在这种离心分离方法中，要用电磁辐射密度梯度产生一种密度梯度，这种密度梯度覆盖了待分离物质的密度，这样，通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。
细胞生物学课后习题
第三章细胞生物学研究方法1.细胞形态结构的观察方法：光学显微镜技术、电子显微镜技术、扫描隧道显微镜2.细胞组分的分析方法：○1离心分离技术○2细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法○3特异蛋白抗原的定位与定性○4细胞内特异核酸的定位于定性○5反射自显影技术○6定量细胞化学分析技术第四章细胞质膜（重点：1、3题，2题可不看）1、膜脂有哪几种基本类型？它们各自的功能？（1）基本类型：甘油磷脂、糖脂、胆固醇（2）功能：甘油磷脂不仅是生物膜的基本成分，其中的某些成分如PI等在细胞信号转导中起重要作用鞘脂：其分子结构与甘油磷脂非常相似，可以与甘油磷脂共同组成生物膜。
胆固醇：除了作为生物膜的主要结构成分外，还是很多重要的生物活性分子的前体化合物，它还可以与发育调控的重要信号分子Hedgehog共价结合。
3、细胞表面有哪几种常见的特化结构？细胞红细胞膜骨架的基本结构与功能是什么？细胞表面特化结构主要包括：膜骨架、鞭毛、纤毛、变形足和微绒毛，都是细胞膜与膜内的细胞骨架纤维形成的复合结构，分别于维持细胞的形态、细胞的运动、细胞与环境的物质交换等功能有关。
第五章物质的跨膜运输1、比较载体蛋白与通道蛋白的特点。
载体蛋白相当于结合在细胞质膜上的酶，有特异性结合位点，可同特异性底物结合，一种特异性载体只转运一种类型的分子或离子；转运过程类似于酶酶与底物作用的饱和动力学特征；既可被底物类似物竞争性地抑制，又可被某种抑制剂非竞争性抑制以及对pH有依赖性等，因此有人将载体蛋白称为通透酶。
与酶不同的是，载体蛋白对转运的溶质不进行任何共价修饰。
通道蛋白所介导的被动运输不需与溶质分子结合，允许大小和带电荷适宜的离子通过。
绝大多数的通道蛋白形成有离子选择性的、门控的跨膜通道。
因为这些通道蛋白几乎都与离子的转运有关，所以又称离子通道。
与载体蛋白相比，三个显著特征：具有极高的转运速率，离子通道没有饱和值，离子通道是门控的。
2、试述胞吞作用的类型和功能。
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义细胞是生命的基本单位，由许多不同的组分构成。
为了研究细胞的结构和功能，需要对细胞组分进行分离和分析。
细胞组分的分级分离是一种常用的方法，它可以将细胞组分按照大小、密度、电荷等性质进行分离，从而得到纯净的组分，进一步研究其结构和功能。
细胞组分的分级分离原理主要是利用离心力将细胞组分分离。
离心是一种利用离心机产生的离心力将混合物中的不同组分分离的方法。
离心力的大小取决于离心机的转速和离心管的半径。
当混合物被置于离心管中，离心机开始旋转时，离心力会使得组分向离心管底部沉淀。
不同组分的沉淀速度不同，从而实现了分级分离。
细胞组分的分级分离可以分为多个步骤，每个步骤都可以得到不同的组分。
首先，通过低速离心将细胞碎片和细胞核分离。
然后，通过高速离心将线粒体、内质网和溶酶体等细胞器分离。
最后，通过超高速离心将核糖体和蛋白质分离。
这样，就可以得到纯净的细胞组分，进一步研究其结构和功能。
细胞组分的分级分离在生物学研究中具有重要的意义。
首先，它可以帮助我们了解细胞的结构和功能。
通过分离不同的细胞组分，可以研究它们的结构和功能，进一步了解细胞的生理和生化过程。
其次，它可以帮助我们研究疾病的发生和治疗。
许多疾病都与细胞组分的异常有关，通过分离和分析这些组分，可以更好地了解疾病的发生机制，为疾病的治疗提供依据。
最后，它可以帮助我们开发新的药物和治疗方法。
许多药物和治疗方法都是基于细胞组分的研究开发的，通过分离和分析细胞组分，可以发现新的药物和治疗方法，为人类健康做出贡献。
细胞组分的分级分离是一种重要的生物学研究方法，它可以帮助我们了解细胞的结构和功能，研究疾病的发生和治疗，以及开发新的药物和治疗方法。
细胞核的分离与鉴定
细胞分化与发育
细胞核内的基因表达在不同细 胞类型和发育阶段中具有特异 性，对细胞的分化与发育起着 关键作用。
疾病发生与发展
许多疾病的发生和发展与细胞 核内的基因变异和异常表达密 切相关，因此对细胞核的研究 有助于疾病的诊断和治疗。
02
细胞核的分离
细胞核分离的方法
差速离心法
利用不同转速离心，将细胞内不同组分进行分离。
100%
核膜和核孔
细胞核具有核膜和核孔，核膜是 细胞核的边界，核孔则是核内外 物质交换的通道。
80%
染色质和核仁
染色质是DNA和蛋白质的复合物， 呈细丝状，而核仁则是染色质较为 密集的区域，与某种RNA（rRNA） 的合成有关。
细胞核的染色和观察
染色原理
染色是通过化学反应将细胞核 中的DNA或蛋白质着色，以便 在显微镜下观察。
方差分析
通过方差分析方法，比较不同处理组之间的差异， 以确定实验因素对细胞核分离效果的影响。
3
相关性和回归分析
通过相关性和回归分析方法，探讨细胞核形态特 征与染色质状态之间的关系，以及其对细胞分裂 的影响。
05
结论
研究成果总结
成功分离出细胞核
01
通过优化实验条件，我们成功地从不同类型的细胞中分离出了
细胞核的分离与鉴定
目
CONTENCT
录
• 引言 • 细胞核的分离 • 细胞核的鉴定 • 实验结果和数据分析 • 结论
01
引言
目的和背景
目的
细胞核是细胞内最重要的细胞器之一，负责储存遗传物质、转录 和翻译等重要功能。对细胞核的分离与鉴定有助于深入了解细胞 核的结构和功能，为研究细胞生物学、遗传学和疾病机制提供重 要基础。
细胞组分的分析方法
细胞组分的分析方法一、超速离心技术（P64）离心技术原理：不同的细胞器具有不同的密度和体积，因此，可以利用离心方法加以分离和纯化。
1、差速离心（differential centrifugation）利用不同的离心速度产生的不同的离心力，将各种亚细胞组分和各种颗粒分离开来。
适合分离沉降速率差别较大的亚微结构颗粒。
多次离心达到纯化的目的。
2、密度梯度离心（P65）①速度沉降——分离密度接近大小不一的组分②等密度沉降——分离不同密度的组分将介质形成一涵盖所有组分密度的密度梯度，不同的样品由于其密度差异，在离心过程中进入到等密度介质区域即不再移动，从而实现分离的目的。
速度沉降和等密度沉降的比较二、组织化学和细胞化学（P65）利用一些显色剂与被测物质中的某些基团特异性结合，来判断核酸、蛋白质（酶）、糖类、脂类在细胞中的分布和含量。
福尔根（Feulgen）反应——显示DNA格莫瑞（Gomori）反应——显示碱性磷酸酶三、特异蛋白抗原的定位与定性P66原理：抗体能够自行识别并结合对应的抗原目的：检测特定蛋白质在细胞内的分布状况和含量。
（一）免疫荧光技术（二）免疫电镜技术人成纤维细胞中肌动蛋白束（800×）BHK细胞中的微管蛋白（500×）四、细胞内特异核酸序列的定位和定性研究对象：细胞内特异核酸（DNA或RNA）目的：定位、定量分析方法：原位杂交（in situ hybridization，ISH）以目标核酸的互补序列为探针，对细胞或者组织标本进行杂交处理，使目标核酸可视呈现的技术。
是细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学相互交融的研究手段。
构建DNA分子物理图谱光谱核型分析（spectral karyotype，SKY）SKY of Human五、放射自显影研究生物大分子（略）六、定量细胞化学分析技术P69细胞分选（cell sorting）：是细胞生物学中较新技术，是利用流式细胞仪（flow cytometery，FCM）对细胞或者其他生物微粒（如染色体）进行分选，并对其进行定量分析（大小、形状、核酸含量和蛋白质含量等）的技术。
细胞组分分级分离实验报告
细胞组分分级分离实验目的分级分离细胞核和线粒体实验原理1.相关概念细胞组分分级分离：依据细胞内各种结构的比重和大小不同，在同一离心场内的沉降速度也不同的原理，采用差速离心法或密度梯度离心法，将细胞各种组分分离出来。
常用分离方法：差速离⼼法——不同转速；密度梯度离⼼法——不同浓度的介质2.分离方法（1）差速离⼼法特点：介质密度均⼀；离⼼⼒由低向⾼；逐级离⼼（差速）。
⽤途：初步分离；分离⼤⼩相差悬殊的细胞组分。
细胞器沉降顺序：细胞核→线粒体→溶酶体、过氧化物酶体→内质网、⾼尔基体→核糖体（2）密度梯度离⼼法特点：介质密度不均⼀；呈现密度梯度；离心力相同（等速，超速）⽤途：纯化分离细胞器等颗粒组分待分离颗粒沉降顺序：各待分离颗粒的沉降与其密度相等或相近的梯度柱范围常⽤介质及要求：蔗糖、⽢油、氯化銫；能产⽣密度梯度，且密度⾼时，粘度不⾼；PH中性或易调为中性；浓度⼤时渗透压不⼤；对细胞⽆毒3.染色方法甲基绿-哌罗宁染色：核酸呈酸性，与碱性染料甲基绿-哌罗宁染液具有亲和力，这两种碱性染料有选择的特异性染色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染成红色。
詹纳斯绿B染色：詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染（体外活染），这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使詹纳斯绿B染料始终保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中詹纳斯绿B则被还原成无色的化合物。
实验设计思路实验结果分散相的线粒体被染成浅蓝色，呈圆形或椭圆形颗粒。
如果线粒体聚集成堆则被染成深蓝色，难以辨认。
注意事项1.过滤前要先将纱布湿润2.匀浆缓冲液预冷(0℃—4℃)3.冰浴上研磨，匀浆搗杆垂直插入匀浆管中，上下转动研磨3-5次，尽可能充分破碎细胞(适度研磨)，缩短匀浆时间。
4.离心机温度应设为4℃5.整个分离过程不宜过长,要尽快。
6.得到的沉淀物须加预冷蔗糖缓冲液将其悬浮后再涂片，制线粒体滴片时，悬浮液只需一小滴，量太多线粒体易聚集成堆，不便观察。
细胞生物学填空题
第一章绪论1、细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，是在显微水平、亚显微水平、和分子水平三个不同层次上，以研究细胞的细胞结构与功能、细胞增殖分化、衰老与凋亡，细胞信号传递，真核细胞基因表达与调控，细胞起源与进化等为主要内容的一门科学。
2、 1665 年英国学者胡克第一次观察到细胞并命名为cell；后来第一次真正观察到活细胞有机体的科学家是列文虎克。
3、1838—1839年，施莱登和施旺共同提出：一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位。
4、19世纪自然科学的三大发现是细胞学说，能量转化与守恒定律，达尔文的进化论。
5、1858年德国病理学家魏尔肖提出细胞来自细胞的观点，通常被认为是对细胞学说的一个重要补充。
6、人们通常将1838—1839年施莱登和施旺确立的细胞学说；1859年达尔文确立的进化论1866年孟德尔确立的遗传学，称为现代生物学的三大基石。
7、细胞生物学的发展历史大致可分为细胞的发现，细胞学说的建立，细胞学经典时期，实验细胞学时期和分子细胞生物学几个时期。
第二章细胞基本知识概要1、所有细胞的表面均有由脂类和蛋白质构成的细胞膜；所有的细胞都含有两种核酸；所有细胞都以二分分裂方式增殖；所有细胞内均存在蛋白质生物合成的机器核糖体。
2、病毒是迄今发现的最小的、最简单的专性活细胞内寄生的非细胞生物。
3、病毒核酸是病毒的遗传信息唯一的贮存场所，是病毒的感染单位；病毒蛋白质构成病毒的外壳（壳体），具有保护作用。
***4、病毒的增殖一般可分为病毒侵入细胞、病毒核酸的侵染；病毒核酸的复制、转录与蛋白质的合成；病毒的装配、成熟与释放三个阶段。
5、原核细胞的遗传信息量小遗传信息载体仅由一个环状的DNA构成，细胞内没有专门的细胞器和核膜，其细胞膜具有多功能性性。
6、一个细胞生存与增殖必须具备的结构为细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA、进行蛋白质生物合成的一定数量的核糖体和催化酶促反应所需要的酶。
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义。
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义。
细胞组分的分级分离原理及其意义：
一、分级分离原理
1、离心分离
把细胞组分，如核糖体、细胞质等，悬浮在生化介质中，用中央偏心
的方法将悬浮体快速分级，分为悬浮层和沉淀层，从而脱除低分子的
悬浮物，获得纯的细胞组分。
2、逆流洗涤法
介质会具有不同的物质等离子强度、温度等，将原悬浮液放置在此种
不同介质下，形成微孔隙，有效运载溶液，将微粒通过微孔小于亚细
胞级分子得到分离。
3、冷凝分离
冷凝作用可有效地将微粒形态，质量，大小不同而可悬液的细胞组分，按分子量和形状进行有效分离。
二、分级分离的意义
1、节约成本
由于分级分离的方法节省了消耗的流体，可以有效的节约经济成本。
2、提高效率
分级分离能以高速度进行解离，可以大大减少操作时间，从而提高效率。
3、保护过滤目标物
使用分级分离可以减少操作时间和免疫试剂，可以有效地预防细胞组分的损伤，从而保护需要分离的目标物质。
4、增强产品的纯度
使用分级分离技术可以使分离的细胞组分具有更高的纯度，并可以便捷的获得细胞质、线粒体、核糖体等细胞组分的复合物。
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义
简要说明细胞组分的分级分离原理及其意义细胞组分的分级分离原理是基于分离细胞内的细胞质和细胞器，以及其中彼此紧密相连的大量二级结构（如膜蛋白结构）。
也就是说，分级分离的原则是根据不同类型的大分子结构和功能来进行的，而不是细胞的整体解剖结构，以此来获得最佳的细胞组分结构。
分级分离的方法可以分成两类：非物理分离和物理分离。
非物理分离是基于化学性质的，比如pH值、电导率和小分子大分子之间的亲和力。
物理分离主要是基于细胞大小、材料结构、细胞性质等。
分级分离的意义在于可以获得高纯度的细胞组分，而且可以探究细胞内细胞组分之间的关系及其影响细胞的生理和功能。
如利用高通量测序技术以及细胞分离技术，可以获得不同细胞组分之间的蛋白质和基因组的组成结构。
而进一步通过细胞功能的分离方法，可以解析细胞内细胞组分之间的一对一关系及其相互作用是如何影响细胞表
型的。
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实验九--细胞组分的分级分离
谢 谢大家
以上有不当之处，请大家给与批评指正， 谢谢大家！
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Hale Waihona Puke 取沉淀物上清液和悬液分别滴一滴于干净的载玻片上分别标记为涂片各滴一滴取沉淀物上清液和悬液分别滴一滴于干净的载玻片上分别标记为涂片各滴一滴002詹纳斯绿b染液盖上盖片染染液盖上盖片染20分钟
实验九
细胞组分的分级分离
实验目的
• 通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞 的组分，了解其原理、过程及作用。
实验原理
2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，取8ml预冷 的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，先加入 少量该溶液于平皿中，尽量剪碎组织后，再全部 加入。
3.将剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸 入盛有冰块的器皿中，研磨3～5次，用8层湿纱布 过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片①，做 好标记，自然干燥。
• 6.将①、②、③涂片用1％甲苯胺兰染色后盖上盖 片即可观察。
高速离心分离提取线粒体步骤：
1.•将上述装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取 出，配平后，以17000r/min离心20分钟，弃上清，留取沉 淀物。
2.加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L•氯化钙液 1ml•， 用吸管吹打 成悬液， 以17000r/min离心20分钟。将上清吸入另一试管。 留取沉淀物，加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙 溶液混匀成悬液。
3.取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于干净的载玻片上（分 别标记为④、⑤），涂片，各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液， 盖上盖片染20分钟。
4.油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。
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1.差速离心（differenFra bibliotekial centrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心， 用于分离不同大小的细胞和细胞器。
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、 线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基 体、最后为核蛋白体。
速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀
2.密度梯度离心(density gradient centrifugation)
3.差速离心法分离细胞器
低速离心分离细胞核
每组取10ml滤液，3000r/min离心10min，制备 一张上清液涂片，做好标记，自然干燥。
吸去上清，用10ml 0.25 mol/L 蔗糖液悬浮沉 淀物，用吸管混匀，配平后以3000r/min离心10 min。吸去上清液，加入0.5ml蔗糖溶液，用吸管吹 打成悬液，制备一张涂片，做好标记，自然干燥。
一、实验目的
了解用细胞匀浆和差速离心的方法分级分离 细胞组分的原理及过程。
熟悉离心机、匀浆器的使用方法。
二、实验内容
㈠实验原理 细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在 同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原 理，常用不同介质和不同转速的离心法，将细胞 内各种组分分级分离出来。 此法是通过组织细胞匀浆、分级分离（密度 梯度离心或差速离心）和分析三个步骤完成的。
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的 密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部， 通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。常 用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。
㈡实验方法
1. 处死家兔：耳缘静脉空气栓塞法
2. 制备肝细胞匀浆: 家兔处死后，立即剖腹取肝，迅速浸入预 冷的 生理盐水中洗去血污，用滤纸吸干。 按每克肝重加9ml冷的0.25mol/L蔗糖溶液 匀浆 化。（20g×9ml/g=180ml） 用八层纱布（先用少量蔗糖液湿润），过 滤匀 浆液于烧杯中。制备一张滤液涂片，做好 标