临床微生物在细菌耐药控制中的重要作用
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• 标本采集过程或步骤不正确 • 有些病原菌生长营养要求高，或生长周期长 • 不是所有细菌都能做药敏试验 • 不是所有药物都能做体外药敏实验 • 不是所有细菌或所有药物都有判断标准 • 临床医生不主动联系实验室人
临床医生
不沟通引发的抱怨 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
临床微生物人员
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 采血时间：尽可能在使用抗生素前，寒颤和发热初期。 • 采血量：采一次或采一瓶是错误的
– 至少应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少于16-20ml，先将 10ml注入需氧瓶，再将剩余血采血注入厌氧瓶。
• 采血方法：不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静 脉留置口采血。
影响血培养病原菌生长的因素 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
标本运送原则
• 所有标本最好在2小时内送往实验室 • 一般而言，保存标本不超过24小时 • 环境敏感菌不能冷藏
– 淋病奈瑟菌 – 脑膜炎奈瑟菌 – 流感嗜血杆菌
痰标本的采集和运送 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 采集时间：使用抗生素前 • 采集方法：
– 自然咳痰：必须用清水彻底漱口，用力咳痰， 于灭菌容器中或输送培养基中。
96%
感染性 心内膜炎 90%
21
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
分泌物采集规范
• 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外 耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道 分泌物等均属于开放性病灶。
– 先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭 子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
临床医生的要求
• 有明显感染症状但细菌培养结果呈阴性 • 培养并报告的细菌不是目标病原菌 • 药敏试验报告的抗菌药太少，或本院已不用 • 需要用的药物却没有做药敏试验 • 药敏结果显示敏感，但临床疗效差 • 细菌室不能提供相关指导
微生物室人员的要求 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
血培养的常见问题 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
污染：
• 这些菌（阳性杆菌、棒状杆菌、 丙酸杆菌、气球菌、凝固酶－葡 萄球菌、微球菌）也引起全身感 染
• 污染瓶只见于一套瓶中的1-2瓶 • 只有第二套来鉴别 • 不作药敏 • 保留此瓶几天，等待第2套结果
假菌血症 (Pseudobacteraemia)： • 病原菌来源于病人血流
麦康凯平板
巧克力平板
痰标本细菌学检查 资料仅供参考,不当之处Baidu Nhomakorabea请联系改正。
肺炎链球菌
流感嗜血杆菌
卡他莫拉菌
优势生长的细菌就是致病菌吗？ 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
优质的实验室操作 血液培养的原则- 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 疑似感染患者首次血培养至少一套，包括一瓶需氧瓶及一 瓶厌氧瓶。采集后标本如不能及时送检，应置常温保存， 不能放冰箱或35-37℃培养箱。
• 当白细胞大于25个每视野，上皮细胞小于10个每 视野时为合格的痰标本。
• 实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色，当在低 倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25 个每视野时应视为不合格痰标本；
• 当白细胞小于10个每视野，上皮细胞小于25个每 视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断
至少检查10个低倍镜视野
• 血量：1:5-1:10 或按厂家规定 • 培养基中的抗生素吸附剂
– 树脂 – 活性炭
• 液面的气体
– 需氧瓶：CO2 – 厌氧瓶：CO2，N2
血培养存在的主要问题 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 如果皮肤定植的细菌没有被杀死，细菌将通过针 头进入血培养瓶并生长
• 如果不能将真正引起感染的凝固酶阴性葡萄球菌 和皮肤定植菌“污染”菌区分开，可能会导致万 古霉素的应用
• 及时准确的细菌耐药监测报告
巧妇难为无米之炊 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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标本采集的原则
• 容器必须无毒性 • 避免正常菌群的污染 • 选择正确的标本采集部位 • 采用正确的操作方法 • 厌氧培养的标本不能冷藏 • 标本量要足够
– 假阴性
• 信息记录
不可接受的痰标本 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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可接受的痰标本
培养基 血平板 麦康凯平板 巧克力平板
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痰标本培养
条件 5% CO2，35℃×48 h 5% CO2，35℃×48 h 5% CO2，35℃×48 h
血平板
恶性循环的后果
• 临床医生
– 不愿意做病原学检查 – 抗菌药物滥用 – 催生细菌耐药性的上升
• 临床微生物
– 进一步不了解临床 – 不能更好的为临床提供有力的支持
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
主要内容
• 正确的标本采集
• 规范的药敏试验
– 常规检测 – 特殊耐药菌株检测 – 少见耐药表型结果解读
注意：表浅标本中的细菌大多已死亡
• 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、 盆腔脓肿等。
– 采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集。 – 注意脓液的气味、性状、颜色，注意厌氧菌存在的可能。 – 不能及时送检应用输送培养基。
无菌体液的采集运送规范 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
之外
– 不正确采血 – 实验室操作 – 可产生暴发性，消毒液
被菌污染
• 仪器问题
– 白细胞过多 – 过量的血量 – 其它
标本的收集和运送：瓶数及血量 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• Cockrill 2004年报告：163位病人，血培养仪
病特点
阳性率 1套 1+2套 1＋2＋3套
一般菌血症 65% 80%
– 支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接 种入输送培养基
• 痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管穿刺法获 得痰液，从口腔吐出的痰标本不能作厌氧培养。
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• 无菌容器 • >1 mL • 最好在2小时内送至实验室 • 于4℃保存不能超过24小时
注意事项
痰培养标本培养前革兰染色 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 无菌采集是培养成功的首要因素 • 为提高阳性率，可将无菌体液注入血培养瓶。 • 采集的标本应立即送至临床细菌室，脑膜炎球菌
临床医生
不沟通引发的抱怨 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
临床微生物人员
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 采血时间：尽可能在使用抗生素前，寒颤和发热初期。 • 采血量：采一次或采一瓶是错误的
– 至少应采一套2瓶，分需氧和厌氧。2瓶血量不少于16-20ml，先将 10ml注入需氧瓶，再将剩余血采血注入厌氧瓶。
• 采血方法：不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静 脉留置口采血。
影响血培养病原菌生长的因素 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
标本运送原则
• 所有标本最好在2小时内送往实验室 • 一般而言，保存标本不超过24小时 • 环境敏感菌不能冷藏
– 淋病奈瑟菌 – 脑膜炎奈瑟菌 – 流感嗜血杆菌
痰标本的采集和运送 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 采集时间：使用抗生素前 • 采集方法：
– 自然咳痰：必须用清水彻底漱口，用力咳痰， 于灭菌容器中或输送培养基中。
96%
感染性 心内膜炎 90%
21
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分泌物采集规范
• 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外 耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道 分泌物等均属于开放性病灶。
– 先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭 子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
临床医生的要求
• 有明显感染症状但细菌培养结果呈阴性 • 培养并报告的细菌不是目标病原菌 • 药敏试验报告的抗菌药太少，或本院已不用 • 需要用的药物却没有做药敏试验 • 药敏结果显示敏感，但临床疗效差 • 细菌室不能提供相关指导
微生物室人员的要求 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
血培养的常见问题 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
污染：
• 这些菌（阳性杆菌、棒状杆菌、 丙酸杆菌、气球菌、凝固酶－葡 萄球菌、微球菌）也引起全身感 染
• 污染瓶只见于一套瓶中的1-2瓶 • 只有第二套来鉴别 • 不作药敏 • 保留此瓶几天，等待第2套结果
假菌血症 (Pseudobacteraemia)： • 病原菌来源于病人血流
麦康凯平板
巧克力平板
痰标本细菌学检查 资料仅供参考,不当之处Baidu Nhomakorabea请联系改正。
肺炎链球菌
流感嗜血杆菌
卡他莫拉菌
优势生长的细菌就是致病菌吗？ 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
优质的实验室操作 血液培养的原则- 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 疑似感染患者首次血培养至少一套，包括一瓶需氧瓶及一 瓶厌氧瓶。采集后标本如不能及时送检，应置常温保存， 不能放冰箱或35-37℃培养箱。
• 当白细胞大于25个每视野，上皮细胞小于10个每 视野时为合格的痰标本。
• 实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色，当在低 倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25 个每视野时应视为不合格痰标本；
• 当白细胞小于10个每视野，上皮细胞小于25个每 视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断
至少检查10个低倍镜视野
• 血量：1:5-1:10 或按厂家规定 • 培养基中的抗生素吸附剂
– 树脂 – 活性炭
• 液面的气体
– 需氧瓶：CO2 – 厌氧瓶：CO2，N2
血培养存在的主要问题 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 如果皮肤定植的细菌没有被杀死，细菌将通过针 头进入血培养瓶并生长
• 如果不能将真正引起感染的凝固酶阴性葡萄球菌 和皮肤定植菌“污染”菌区分开，可能会导致万 古霉素的应用
• 及时准确的细菌耐药监测报告
巧妇难为无米之炊 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
标本采集的原则
• 容器必须无毒性 • 避免正常菌群的污染 • 选择正确的标本采集部位 • 采用正确的操作方法 • 厌氧培养的标本不能冷藏 • 标本量要足够
– 假阴性
• 信息记录
不可接受的痰标本 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可接受的痰标本
培养基 血平板 麦康凯平板 巧克力平板
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
痰标本培养
条件 5% CO2，35℃×48 h 5% CO2，35℃×48 h 5% CO2，35℃×48 h
血平板
恶性循环的后果
• 临床医生
– 不愿意做病原学检查 – 抗菌药物滥用 – 催生细菌耐药性的上升
• 临床微生物
– 进一步不了解临床 – 不能更好的为临床提供有力的支持
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
主要内容
• 正确的标本采集
• 规范的药敏试验
– 常规检测 – 特殊耐药菌株检测 – 少见耐药表型结果解读
注意：表浅标本中的细菌大多已死亡
• 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、 盆腔脓肿等。
– 采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集。 – 注意脓液的气味、性状、颜色，注意厌氧菌存在的可能。 – 不能及时送检应用输送培养基。
无菌体液的采集运送规范 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
之外
– 不正确采血 – 实验室操作 – 可产生暴发性，消毒液
被菌污染
• 仪器问题
– 白细胞过多 – 过量的血量 – 其它
标本的收集和运送：瓶数及血量 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• Cockrill 2004年报告：163位病人，血培养仪
病特点
阳性率 1套 1+2套 1＋2＋3套
一般菌血症 65% 80%
– 支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接 种入输送培养基
• 痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管穿刺法获 得痰液，从口腔吐出的痰标本不能作厌氧培养。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 无菌容器 • >1 mL • 最好在2小时内送至实验室 • 于4℃保存不能超过24小时
注意事项
痰培养标本培养前革兰染色 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
• 无菌采集是培养成功的首要因素 • 为提高阳性率，可将无菌体液注入血培养瓶。 • 采集的标本应立即送至临床细菌室，脑膜炎球菌