月季组织培养技术研究

月季组织培养技术研究

摘要：以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA）和生长素(NAA)，

以及用不同外植体部位筛选出最适合月季腋芽萌发的培养基和最佳外植体部位。

实验结果表明：诱导侧芽萌发以MS+6-BA2.0mg/L培养基效果最好，外植体部位

以中部枝条发芽率最佳,为80%。

关键词：月季；组织培养；快速繁殖

Abstract: Use MS as basic medium ,with different concentration of cytokinin and auxin,a

nd use different part of the stem as explant for tissue culture to select the suitable medium

and best explants site for the induction of Rosa chinensis. The results showed that MS +6B

A2.0mg / L is the suitable medium for bud germination, and the middle part of the stem ist

he best explant.

Keywords: Rosa chinensis, tissue culture, rapid propagation

月季（Rosa chinensis）是蔷薇科落叶或半长绿灌木，其花色艳丽、香味浓郁，是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。由于其分布极广、适应性良好、栽培容易等优点，加之月季四季常青、花期长、花色多等特点，使得在园林和路带绿化以及庭院居室的盆栽美化和切花等方面都得到广泛的应用。月季在观赏植物中具有很高的地位。月季花型大、美丽、幽雅、高贵，深爱各国人民喜爱，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。被誉为“花中皇后”之美称，深受人们喜爱。

月季通常采用扦插和嫁接繁殖，一些名贵品种扦插不易生根，主要是靠芽接繁殖[1]。而芽接速度慢，因而造成优良品种苗木供不应求。应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期，达到快速繁殖优良品种的目的。近年来随着生物技术的不断发展与更新，用植物组织培养的方法快速繁殖各种花木技术得到了普遍重视和广泛应用，关于月季的离体培养、根诱导及移栽问题，以有了不少报道[1、2、8、9、10]。由于受基因影响，不同品种之间的组织培养特性表现出一定的差异[2]。因此讨论不同品种组培快繁的培养条件，特别是培养基中适宜的不同激素配比仍具有重要价值，另外选择适合接种的外植体不同部位也会影响其发芽率。本实验以月月红月季品种为材料进行了侧芽的诱导和筛选出适合月季组织培养最佳外植体部位的组织培养特性研究，试图找出适合月季品种的组培快繁的最佳激素配比的培养基和最适合培养的外植体部位。

1 材料与方法

1.1 实验材料及采样地生境条件

1.1.1 实验材料

供试材料取自都江堰市中国科学院华西亚高山植物园月月红月季当年生无花蕾嫩茎。

1.1.2 采样地生境条件

采样地位于成都平原与川西北山地之间，地理坐标：东经103°，北纬31°，海拔700 m左右，为浅切割低山地貌类型。土壤为黄壤，质地为重壤质，PH值4.5～5.5，由于多雨，在沉积层与母质层之间有明显潜育现象，土壤肥力中等，保肥保水性好。采样地属于亚热带气候类型，年平均气温15.2 ℃，极端最高、最底温度分别为38 ℃和～-10 ℃，年平均相对湿度81%，年平均降雨量1243 mm，无霜期269 d。

1.2 技术路线

培养基的配制→培养基灭菌→外植体采集→外植体预处理→外植体表面灭菌→外植体接种→培养→试验结果统计与分析

1.3 实验仪器与试剂

仪器用品：高压灭菌锅、超净工作台、试管、电子天平、烧杯、微波炉、酒精灯、镊子

试剂：75%酒精、琼脂、蔗糖、蒸馏水、6-BA、MS储备液、NAA

1.4 培养基配方

表1 培养基中6-BA和NAA的组成及配比

处理号 6-BA NAA

(mg/L) (mg/L)

A1 2.0 ---

A2 2.5 ---

A3 2.0 0.1

A4 2.0 0.5

1.5 培养基的配置

称琼脂7.5 g→蒸溜水400～500mL →微波加热5 min →蔗糖30 g →微波加热5 min →大量元素母液→微量元素母液→有机物母液→铁盐母液→定容至1L →调pH至5.8～6.0 →分装→高温灭菌

1.6 外植体采集与灭菌

1.6.1 外植体采集

在晴朗的清晨采集生长健壮，无病虫害母株上的当年生枝条。

1.6.2 外植体灭菌与接种

采集回的外植体剪去顶部和基部并去叶，用洗衣粉水溶液轻轻洗涤30 min，自来水冲洗30 min后，用滤纸吸干，剪成约2 cm长带侧芽茎段。在超净工作台上用70％的酒精消毒30 s，无菌水洗3次，再用0．1%升汞溶液消毒10 min，然后用无菌水冲洗5次，在无菌滤纸吸干后，将灭菌好的外植体接种于培养基上。

1.7 培养

培养条件：培养温度25±1℃；光照强度1 800～2 000 1x；光照时间12 h／d。

1.8 数据统计

培养30 d后统计外植体的污染率、发芽率。

污染率（%）=污染的外植体数/接种外植体总数×100

发芽率（%）=发生芽的外植体数/无菌外植体总数×100

2 结果与分析

培养30 d后对6-BA、NAA浓度组合外植体的发芽率、污染率以及不同外植体部位的发芽率、污染率进行统计。结果见表2、表3：

表2 不同6-BA、NAA浓度组合外植体的发芽率、污染率

处理号接种数(瓶) 培养基发芽率(%) 污染率(%)

B1 20 MS+6-BA2.0mg/L 85 40

B2 20 MS+6-BA2.5mg/L 30 20

B3 20 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 65 40