实验一 含质粒的大肠杆菌的接种、培养与菌种保藏

实验一 含质粒的大肠杆菌的接种、 培养与菌种保藏
一、实验目的
1. 了解培养基的配制原理，掌握配制培养基的一般 方法和步骤； 2. 了解常见灭菌、清毒基本原理及方法，掌握高压 蒸汽灭菌的操作方法； 3. 了解菌种保藏的基本原理，掌握菌种保藏方法和 无菌操作技术。
二、实Βιβλιοθήκη Baidu原理
1. 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁 殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。 培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生 长因子和水。LB培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基。
考核方式：1）平时50% + 综合50% 2）缺席1次，总评降1等次，每次5分
四、试剂
酵母浸膏 、蛋白胨、NaCl
五、实验步骤 1. 配制LB液体培养基
称取胰蛋白胨0. 5 g，酵母提取物0.25 g，NaCl 0. 5 g于100 ml的烧杯中，加入50ml蒸馏水搅拌溶解， 然后分装到3个三角瓶中，每瓶15ml，用双层锡纸 包扎好。
2. 培养基的灭菌与消毒
高温高压灭菌配好的培养基(121 ℃，20min)，备 用。
2. 高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性 从而达到杀死微生物的效果。 3. 微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的 基本操作技能，分为斜面接种、液体接种、固体 接种和穿刺接种等。
三、实验材料
1. 大肠杆菌DH5α 2. 含pET32质粒的大肠杆菌DH5α 3. 含pET32-CaM5质粒的大肠杆菌DH5α
3.接种和培养 灭菌完成后，当培养基温度降至55-60℃时，每瓶 加入15µl氨苄青霉素母液(终浓度为100 µg/ml )，摇 匀后，分别接种三种菌种，贴上标签；置于摇床中 37 ℃振荡培养过夜。
六、实验结果的观察 第二天取出培养物，观察不同菌种生长情况，并记 录。 七、菌种的保藏（示范） 短期保藏、长期保藏 八、实验报告要求： 1、实验结果：图片需要标注自己的样品的位置， 并对结果进行分析； 2、每个实验后的思考题必须认真完成。