第三章病毒分析
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第三章病毒分析
（3）增殖 噬菌体的DNA进入细胞后，寄主细胞 产生一系列变化，细菌的合成作用受到 阻抑，噬菌体逐渐控制细胞的代谢，由 噬菌体DNA为模板，在寄主细胞一系 列酶的作用下，合成装配噬菌体所需的 DNA或RNA和蛋白质 （4）成熟（装配）
第三章病毒分析
第三章病毒分析
（5）裂解（释放）
第三章病毒分析
裂解量：是每个受染细胞所释放的子代 病毒颗粒的平均数目，其值等于潜伏期 受染细胞的数目除稳定期受染细胞所释 放的全部子代病毒数目，即等于稳定期 病毒效价与潜伏期病毒效价之比。
稳定期受染细胞所释放的全部子代病毒数目 裂解量= -------------------------------------------------------------------
4）在一定的时间内，每隔数分钟从混
合悬液中取出一份试样，并作效价测
定。
5）以感染时间为横坐标,病毒的感染效
价为纵坐标,绘制出病毒特征性的繁
殖曲线
第三章病毒分析
取培养物直接 测定病毒数量 将培养物过滤 去细胞后测定 病毒数量
将细胞裂解后测定病毒的数量. 前期可将培养物先离心去上清 以消除未吸附病毒的影响
第三章病毒分析
（2）侵入 噬菌体吸附在细菌 细胞壁的受点上以后，核酸注 入细菌细胞中，蛋白质壳体留 在外面。从吸附到侵入，时间 间隔很短，只有几秒到几分钟。
第三章病毒分析
第三章病毒分析
如果大量噬菌体在短时间内吸附于 同一细胞上，使细胞壁产生许多小 孔，也可引起细胞立即裂解，但并 未进行噬菌体的增殖，这种现象称 为自外裂解。
潜伏期受染细胞的数目
第三章病毒分析
通过一步生长曲线测定，噬菌体的裂解 量一般为几十到上百个，植物病毒和动 物病毒可达数百乃至上万个。 进行一步生长曲线的测定，能了解噬菌 体在菌体内的最短潜伏期，和平均收获 量，还可测知理化因素的变化对噬菌体 感染循环的时间和对每个被感染菌体释 放噬菌体的影响。
第三章病毒分析
4、溶源性
※某些噬菌体侵染细菌后，将自身基因组 整合到细菌细胞染色体上，随寄主细胞 分裂而同步复制，并不引起细菌裂解释 放噬菌体，因而被称作温和噬菌体。这 种噬菌体与细菌共存的特性称为溶原性， 被侵染的细胞被称作溶原性细胞或溶原 菌，整合到细菌细胞染色体上的病毒被 称作前病毒或前噬菌体。
第三章病毒分析
第三章病毒分析
（1）潜伏期：是指噬菌体侵入宿主细 胞至噬菌体粒子释放出胞外前的一段 时间。 ①隐蔽期，是指病毒的核酸侵入宿主 细胞后至第一个病毒粒子装配前的一 段时间，此时宿主细胞内不含有完整 的、有侵染力的成熟病毒粒子。
第三章病毒分析
②潜伏后期，病毒粒子装配成熟， 胞内具侵染性的成熟病毒粒子数目 渐增，但没有释放出胞外。寄主细 胞的裂解标志着潜伏期的结束。
一步生长曲线实验最早由Ellis和Delbruck （1939）所设计。其基本步骤是：
1）用噬菌体的稀悬液去感染高浓度的宿主 细胞，以保证每个细胞至多不超过一个噬 菌体吸附。
2）经数分钟吸附后，混合液中加入一定量 的该噬菌体的抗血清，借以中和尚未吸附 的噬菌体。
第三章病毒分析
3）然后用保温的培养液稀释此混合液， 同时可中止抗血清的作用。随即置于 该细菌最适生长温度下培养。
二、4类病毒及其繁殖方式
（一）原核生物的病毒—噬菌体 （二）植物病毒 （三）人类和脊椎动物病毒 （四）昆虫病毒
第三章病毒分析
第三章病毒分析
一组噬菌体
一种噬菌体感染大肠杆菌
第三章病毒分析
1、噬菌体的增殖 一般可分为吸附、侵入、增殖、 成熟装配与裂解释放五步。
第三章病毒分析
烈性噬菌体生活周期
第三章病毒分析
什么是烈性噬菌体？
噬菌体感染细菌细胞后，在细胞 内增殖，凡短时间内导致寄主细 胞裂解的叫烈性噬菌体或毒性噬 菌体。T4噬菌体是一个典型的烈 性噬菌体。
第三章病毒分析
（1）吸附 是指病毒附着于敏感细胞 的表面， 其方式一为病毒与宿主细胞 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ间通过静电引力发生的非特异性吸 附。其次是病毒与宿主细胞之间有选 择性和有特殊亲和力的特异性吸附。 它是病毒感染具有明显选择性的理论 基础。
第三章病毒分析
（2）裂解期：是指宿主细胞迅速裂解， 溶液中病毒粒子急剧上升的一段时间。 病毒没有个体生长，其宿主细胞裂解 也是突发的。 （3）平稳期：是指感染病毒的宿主细 胞全部裂解，溶液中病毒效价达到最 高点以后的时期。
第三章病毒分析
两个特征性数据 潜伏期：是病毒颗粒吸附于细胞到受染 细胞释放出子代病毒颗粒所需的最短时 间，不同病毒的潜伏期长短不同，噬菌 体以分钟计，动物病毒和植物病毒以小 时或天计。
第三章病毒分析
溶源性感染对细胞的影响： （1）溶原性转变：温和噬菌体
在菌体细胞内以前噬菌体形式存在 可导致宿主细胞的表型改变，这种 改变与其生命周期是否完成没有直 接关系，这种改变称为溶原性转变。
• 温和噬菌体的存在形式有三种： ①游离态：指成熟后被释放并有侵染性的游离
噬菌体粒子； ②整合态：指整合在宿主核染色体上处于前噬
菌体的状态（一种潜伏的形式） ③营养态：指前噬菌体经外界理化因子诱导后，
脱离宿主核基因组而处于积极复制和装配的状 态。 温和噬菌体的种类很多，常见的有E.coli的λ、 Mu-1、P1和P2噬菌体等。其中， λ噬菌体是 研究最为透彻的一种温和噬菌体。
第三章病毒分析
二、病毒感染的起始
（参见P173）
病毒吸附蛋白与细胞受体间的结合力来 源于空间结构的互补性,相互间的电荷、 氢键、疏水性相互作用及范得华力。
不同种系的细胞具有 不同病毒的细胞受体, 病毒受体的细胞种系 特异性决定了病毒的 宿主范围。 第三章病毒分析
第三章病毒分析
（参见P173）
动物宿主细胞及细菌表面病毒受体 的存在可通过生化、遗传等实验证明, 但至今仍未发现植物病毒的细胞受体 存在。
第三章病毒分析
2、噬菌体效价的测定 • 效价：表示每毫升试样中所含的具
有侵染性的噬菌体粒子数，又称噬 菌斑形成单位数或感染中心数。 • 方法：双层平板法
第三章病毒分析
第三章病毒分析
3、一步生长曲线 定量描述烈性噬菌体生长规律的 实验曲线称为一步生长曲线。 潜伏期，裂解期，平稳期。
第三章病毒分析
（3）增殖 噬菌体的DNA进入细胞后，寄主细胞 产生一系列变化，细菌的合成作用受到 阻抑，噬菌体逐渐控制细胞的代谢，由 噬菌体DNA为模板，在寄主细胞一系 列酶的作用下，合成装配噬菌体所需的 DNA或RNA和蛋白质 （4）成熟（装配）
第三章病毒分析
第三章病毒分析
（5）裂解（释放）
第三章病毒分析
裂解量：是每个受染细胞所释放的子代 病毒颗粒的平均数目，其值等于潜伏期 受染细胞的数目除稳定期受染细胞所释 放的全部子代病毒数目，即等于稳定期 病毒效价与潜伏期病毒效价之比。
稳定期受染细胞所释放的全部子代病毒数目 裂解量= -------------------------------------------------------------------
4）在一定的时间内，每隔数分钟从混
合悬液中取出一份试样，并作效价测
定。
5）以感染时间为横坐标,病毒的感染效
价为纵坐标,绘制出病毒特征性的繁
殖曲线
第三章病毒分析
取培养物直接 测定病毒数量 将培养物过滤 去细胞后测定 病毒数量
将细胞裂解后测定病毒的数量. 前期可将培养物先离心去上清 以消除未吸附病毒的影响
第三章病毒分析
（2）侵入 噬菌体吸附在细菌 细胞壁的受点上以后，核酸注 入细菌细胞中，蛋白质壳体留 在外面。从吸附到侵入，时间 间隔很短，只有几秒到几分钟。
第三章病毒分析
第三章病毒分析
如果大量噬菌体在短时间内吸附于 同一细胞上，使细胞壁产生许多小 孔，也可引起细胞立即裂解，但并 未进行噬菌体的增殖，这种现象称 为自外裂解。
潜伏期受染细胞的数目
第三章病毒分析
通过一步生长曲线测定，噬菌体的裂解 量一般为几十到上百个，植物病毒和动 物病毒可达数百乃至上万个。 进行一步生长曲线的测定，能了解噬菌 体在菌体内的最短潜伏期，和平均收获 量，还可测知理化因素的变化对噬菌体 感染循环的时间和对每个被感染菌体释 放噬菌体的影响。
第三章病毒分析
4、溶源性
※某些噬菌体侵染细菌后，将自身基因组 整合到细菌细胞染色体上，随寄主细胞 分裂而同步复制，并不引起细菌裂解释 放噬菌体，因而被称作温和噬菌体。这 种噬菌体与细菌共存的特性称为溶原性， 被侵染的细胞被称作溶原性细胞或溶原 菌，整合到细菌细胞染色体上的病毒被 称作前病毒或前噬菌体。
第三章病毒分析
第三章病毒分析
（1）潜伏期：是指噬菌体侵入宿主细 胞至噬菌体粒子释放出胞外前的一段 时间。 ①隐蔽期，是指病毒的核酸侵入宿主 细胞后至第一个病毒粒子装配前的一 段时间，此时宿主细胞内不含有完整 的、有侵染力的成熟病毒粒子。
第三章病毒分析
②潜伏后期，病毒粒子装配成熟， 胞内具侵染性的成熟病毒粒子数目 渐增，但没有释放出胞外。寄主细 胞的裂解标志着潜伏期的结束。
一步生长曲线实验最早由Ellis和Delbruck （1939）所设计。其基本步骤是：
1）用噬菌体的稀悬液去感染高浓度的宿主 细胞，以保证每个细胞至多不超过一个噬 菌体吸附。
2）经数分钟吸附后，混合液中加入一定量 的该噬菌体的抗血清，借以中和尚未吸附 的噬菌体。
第三章病毒分析
3）然后用保温的培养液稀释此混合液， 同时可中止抗血清的作用。随即置于 该细菌最适生长温度下培养。
二、4类病毒及其繁殖方式
（一）原核生物的病毒—噬菌体 （二）植物病毒 （三）人类和脊椎动物病毒 （四）昆虫病毒
第三章病毒分析
第三章病毒分析
一组噬菌体
一种噬菌体感染大肠杆菌
第三章病毒分析
1、噬菌体的增殖 一般可分为吸附、侵入、增殖、 成熟装配与裂解释放五步。
第三章病毒分析
烈性噬菌体生活周期
第三章病毒分析
什么是烈性噬菌体？
噬菌体感染细菌细胞后，在细胞 内增殖，凡短时间内导致寄主细 胞裂解的叫烈性噬菌体或毒性噬 菌体。T4噬菌体是一个典型的烈 性噬菌体。
第三章病毒分析
（1）吸附 是指病毒附着于敏感细胞 的表面， 其方式一为病毒与宿主细胞 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ间通过静电引力发生的非特异性吸 附。其次是病毒与宿主细胞之间有选 择性和有特殊亲和力的特异性吸附。 它是病毒感染具有明显选择性的理论 基础。
第三章病毒分析
（2）裂解期：是指宿主细胞迅速裂解， 溶液中病毒粒子急剧上升的一段时间。 病毒没有个体生长，其宿主细胞裂解 也是突发的。 （3）平稳期：是指感染病毒的宿主细 胞全部裂解，溶液中病毒效价达到最 高点以后的时期。
第三章病毒分析
两个特征性数据 潜伏期：是病毒颗粒吸附于细胞到受染 细胞释放出子代病毒颗粒所需的最短时 间，不同病毒的潜伏期长短不同，噬菌 体以分钟计，动物病毒和植物病毒以小 时或天计。
第三章病毒分析
溶源性感染对细胞的影响： （1）溶原性转变：温和噬菌体
在菌体细胞内以前噬菌体形式存在 可导致宿主细胞的表型改变，这种 改变与其生命周期是否完成没有直 接关系，这种改变称为溶原性转变。
• 温和噬菌体的存在形式有三种： ①游离态：指成熟后被释放并有侵染性的游离
噬菌体粒子； ②整合态：指整合在宿主核染色体上处于前噬
菌体的状态（一种潜伏的形式） ③营养态：指前噬菌体经外界理化因子诱导后，
脱离宿主核基因组而处于积极复制和装配的状 态。 温和噬菌体的种类很多，常见的有E.coli的λ、 Mu-1、P1和P2噬菌体等。其中， λ噬菌体是 研究最为透彻的一种温和噬菌体。
第三章病毒分析
二、病毒感染的起始
（参见P173）
病毒吸附蛋白与细胞受体间的结合力来 源于空间结构的互补性,相互间的电荷、 氢键、疏水性相互作用及范得华力。
不同种系的细胞具有 不同病毒的细胞受体, 病毒受体的细胞种系 特异性决定了病毒的 宿主范围。 第三章病毒分析
第三章病毒分析
（参见P173）
动物宿主细胞及细菌表面病毒受体 的存在可通过生化、遗传等实验证明, 但至今仍未发现植物病毒的细胞受体 存在。
第三章病毒分析
2、噬菌体效价的测定 • 效价：表示每毫升试样中所含的具
有侵染性的噬菌体粒子数，又称噬 菌斑形成单位数或感染中心数。 • 方法：双层平板法
第三章病毒分析
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3、一步生长曲线 定量描述烈性噬菌体生长规律的 实验曲线称为一步生长曲线。 潜伏期，裂解期，平稳期。
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