微生物菌体密度的测定

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七、思考题
测定细菌菌体密度时应注意哪些问题？
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物的菌体密度ρm 。
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二、实验原理
确定单位体积溶液中的细胞量的方法有：细胞计数法， 或测定沉降速度或黏度的间接测量法等。本实验采用带刻 度离心管离心法确定悬浮液中的细胞的体积分数ψ，采用 密度瓶法确定微生物细胞悬浮液ρ和溶剂密度ρw。
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三、实验材料
1.菌种：酵母菌。 2.培养基：牛肉膏蛋白胨（牛肉膏3g/L ；蛋白胨 10g/L ；氯化钠5g/L ；pH7.0-7.2）。 3.缓冲液：0.05mol/L，pH5.0的KH2PO4缓冲液。
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四、实验步骤
（五）测定密度瓶的容积V ➢ 称取密度瓶空瓶的质量m空，加入水后称量m水，利 用密度公式计算其容积V。 （六）测定缓冲液、菌悬液的密度ρ和ρw ➢ 取已知质量的干净密度瓶，加满缓冲液，盖上盖， 置于恒温箱中。此时，通过毛细管可能会注出部分溶液， 应擦去。将密度瓶外部仔细擦干净后称重（准确至 0.0001g）。同理加入菌悬液后称重。
式中瓶的m质1为量密，度g；瓶V质为量密，度g瓶；的m2容为积缓，冲L液。和密度 同理测定菌悬液的密度ρw 。
3、计算酵母细胞的菌体密度。
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六、注意事项
1.密度瓶使用前应恒重；应检查瓶盖与瓶是否配套； 2. 装满液体时不能留有气泡； 3. 恒浴时要注意及时用小滤纸条吸去溢出的液体， 不能让液体溢出到瓶壁上。 4. 要小心从水浴中取出，不能用手握瓶体，以免人 体温度使液体溢出。 5. 擦干时小心吸干，不能用力擦，以免温度上升。
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四、实验步骤
（五）测定悬浮液中的细胞的体积分数ψ ➢ 取3支7ml刻度离心管，将制好的菌悬液倒入离心 管，1000r/min离心10min后，读数，取3次平均值ψ。
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五、实验结果
1、计算密度瓶的容积V。
m水-m空 V=
ρ水
ρ水为所测温度下水的密度。 2、计算缓冲液、菌悬液的密度ρ和ρw 。
ρ = m2-m1 V
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二、实验原理Leabharlann Baidu
设微生物细胞的密度为ρm ，则 ρm = m/v
式中 m为细胞的质量；v为细胞的体积。 设微生物细胞悬浮液的密度为ρ，则
ρ =ψρm+（1-ψ ）ρw ρm= ρ-（1- ψ ）ρw
ψ
式中ψ为细胞悬浮液的体积分数，ρw为溶剂密度。 测定出细胞悬浮液的体积分数ψ以及ρ和ρw ，就可以求出微生
微生物发酵工程实验
中南民族大学工商学院 环境与生物工程实验教学中心
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实验二、微生物菌体密度的测定
一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验步骤 五、实验结果 六、注意事项 七、思考题
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一、实验目的
菌体密度是微生物重要的物理性质之一，它 是细胞分离，悬浮液输送等物理操作及装置设计 上不可缺少的参数。本实验让学生了解测定菌体 密度的原理，掌握测定菌体密度的实验技术及其 密度瓶和刻度离心管的使用方法。
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四、实验步骤
（一）培养基灭菌 ➢ 取250ml三角瓶1只，加入配好的液体培养基， 121℃、0.103MP、15min灭菌冷却。 （二）种子活化和接种 ➢ 将酵母菌接入培养基，25℃培养活化。取活化 后的酵母菌接入已灭菌冷却的三角瓶培养瓶中，振荡 混匀。
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四、实验步骤
（三）培养 ➢ 将已接种的三角瓶培养液置于振荡培养箱， 200r/min，28℃培养48h后取出。 （四）制备菌悬浮液 ➢ 将三角瓶内发酵液，4000rpm离心分离10min。去 上清液，收集菌体。用配好的缓冲液反复洗净2-3次， 并用此缓冲液制成菌悬液。