Rh(D)血型鉴定SOP
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO及RH(D)血型鉴定SOP
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH（D）血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D）血型鉴定三、所需材料和设备：1、材料：抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞，生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜。
四、操作规程1、试管法：（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B 及IgM抗D单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴，轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴，轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型，类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5％红细胞悬液1滴，混匀。
(2) 标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴，再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
编制人王渊审核人钟剑版本号第二版颁布日期2018年1月1日编制人 王渊 审核人 钟剑版本号 第二版颁布日期 2018年1月1日 (3) 轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀，连续15分钟以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果。
(4) Rh （D ）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断：单克隆血清＋受检者红细胞受检者血型受检者血浆＋试剂红细胞抗A 抗B 抗D A 细胞 B 细胞 O 细胞 ＋ — ＋/－ A 型 Rh （D ）＋/－－ ＋ － － ＋ ＋/－ B 型 Rh （D ）＋/－ ＋ － － － － ＋/－O 型Rh （D ）＋/－ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋/－ AB 型 Rh （D ）＋/－ － － －4、凝集强度判断：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+- 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞； 混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；- 阴性 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
SOP018Rh血型鉴定
Rh血型测定一、检验目的：鉴定红细胞膜上Rh血型系统D抗原，为输血及输注血液成份、骨髓移植及器官移植配型作准备。
二、原理：根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知类型特异性抗血清(抗D)与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原(D抗原)，从而判断和鉴定被检者的Rh血型。
三、标本的采集：1.标本类型：静脉血或末梢血2.标本采集：见标本采集手册3.标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4.标本拒收状态：细菌污染，严重溶血标本不能作测定。
四、试剂1.试剂名称：RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）。
2.试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司，批准文号：国药准字S2*******3.包装规格：10支/盒；10ml/支4.试剂盒组成：抗D标准血清1支5．效价：≥1：64（ccDeeO型）6．贮存：2-8℃保存，不可反复冻融。
五、仪器设备普通光学显微镜。
六、操作步骤1．标记试管：取小试管1支，标记为抗D。
2．加标准抗D血清：分加入抗D标准血清1滴于相应标记试管中。
3．加入红细胞悬液：加入被检者5%红细胞生理盐水悬液2滴于试管中混匀，以1000r/min离心1min。
4．观察结果：先观察上层液体有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，如轻微凝集应将反应物倒于玻片上再以显微镜低倍镜下观察。
5．判断结果：（1）凝集判断标准●凝集：上清液体清亮，底部有红细胞凝块，轻弹试管凝块不散开。
●不凝集：上清液清亮，血细胞均匀沉于管底，边缘整齐，手轻弹试管，红细胞象一缕烟似的上长升，随即成为均匀的悬液。
（2）血型结果判断标准6．阴性结果需在37孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，若仍呈阴性需进一步确认是否是弱D。
七、质量控制1、阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性。
RhD血型鉴定的标准操作程序
RhD （ IgM）血型鉴定的标准操作程序【目的】用于指导RhD血型的鉴定。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。
【方法原理】Rh血型系统形成的天然抗体极少，主要是通过输血或妊娠产生免疫性抗体，已知有抗D、抗E、抗C、抗c和抗e等5种，抗D抗体是Rh血型系统中最常见的抗体，Rh抗体有完全抗体和不完全抗体两种，完全抗体在机体受抗原刺激初期出现，一般属IgM型。
机体再次受抗原刺激，则产生不完全抗体，属IgG型。
Rh抗体主要是不完全抗体，在临床上因D抗原的抗原性最强，出现频率高，临床意义较大，故一般只作D抗原的血型鉴定。
如仅用抗D血清进行晓行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
【试剂】RhD（ IgM）血型试剂（单克隆抗体），上海血液生物医药有限责任公司生产【样本要求】毛细血管血或血常规真空负压管抗凝血（内有EDTA-K2抗凝剂）；婴幼儿可采用颈外静脉，用抽完后立即混匀，防止标本凝固。
【操作程序】1、试管法1.1取洁净小试管1支，加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴。
1.2再用滴管加1滴抗D试剂，混匀。
1.3立即以10r/min离心1min，或者是34r/min离心15秒。
1.4将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集，并记录结果，必要时借助显微镜。
1.5若是阴性结果，需在37C孵育15-30分钟，然后再离心观察，记录结果。
2、玻片法2.1取清洁玻片1张，加1滴抗D血清，再加1滴受检者红细胞，混匀。
2.2将玻片不断轻轻转动，使血清和红细胞充分混匀，连续1-3分钟，肉眼观察有无凝集或溶血反应，也可用低倍镜观察结果并记录。
2.3如是阴性结果，需用试管法重做一遍。
【结果判断】阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性。
阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性。
【质量控制】1、抗血清试剂应注意保存，防止试剂变质。
Rh(D)血型鉴定标准操作程序
SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。
ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。
其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。
其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。
用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。
1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。
由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。
一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。
1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。
绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。
2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。
不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。
2.Rh(D)血型鉴定操作规程
4.1RhD血型定型试剂、0.9%生理盐水
4.2血型血清学离心机、显微镜、恒温水浴箱
5.样本的采集与处理:
5.1标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。
5.2标本要求：
5.2.1抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。
5.2.2手指血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。
10.3RH新生儿溶血病（HDN）患儿输血或换血的原则：பைடு நூலகம்BO血型同患儿血型相同，RH血型同母亲血型相同。
10.5RH弱D型妇女与RH阳性丈夫生育的婴儿可能产生新生儿溶血病。
10.6RHD抗原阴性患者血小板输注原则:尽管血小板表面无RH抗原但制品中含有一定量的红细胞,可使患者致敏,故RHD抗原阴性生育期的女患者(包括女童)应输RHD阴性血小板。
8.2.3某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。
8.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
8.2.5遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。
8.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
9.质量控制;
9.1抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
9.2由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
9.3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
9.4对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
6.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。
弱D抗原鉴定标准操作规程(sop)
弱D抗原鉴定标准操作规程
一、目的
为规范弱D抗原鉴定技术操作，保证血型鉴定结果无误，从而确保临床输血安全和有效。
二、适用范围
输血科负责鉴定RhD血型出现阴性反应时进行弱D抗原筛选鉴定的技术人员。
三、原理
采用3种不同来源的单克隆抗-D试剂（类型有IgM、IgG、及IgM /IgG混合型），用凝聚胺法检测红细胞表面的RhD。
四、步骤和方法
1，将用IgM型单克隆抗-D试剂初步鉴定为阴性的受检者血标本，配成3%—5%红细胞悬液备用。
2，盐水介质法复检：
2.1 用IgM、IgG、及IgM /IgG混合型3种单克隆抗-D试剂先以盐水介质法检测细胞表面的RhD抗原，若IgM和IgM /IgG混合型试剂与受检者红细胞出现“3+—4+”凝集反应，则受检者为RhD阳性；若三种试剂至少1管镜检有弱凝集时，则受检者为弱D型。
2.2 若三者都不与受检者红细胞凝集时，可继续采用凝聚胺法使IgG、IgM /IgG混合型2种试剂和红细胞反应，具体操作执行《凝聚胺法操作规程》：若IgG、IgM /IgG混合型单克隆抗-D试剂均与受检者红细胞成阴性反应，可确认为RhD阴性。
如果至少1种镜检可见凝集，则为弱D型。
五、质量控制
IgM、IgG、IgM /IgG混合型3种单克隆抗-D试剂有效期内使用。
六、注意事项
1，弱D型鉴定采用的试剂至少要有一种含有IgG型单克隆抗-D。
2，鉴定为弱D型的受检者如果是献血应视为阳性对待，若为受血者应视为阴性对待。
3，弱D型妇女与RhD阳性丈夫生育的新生儿有可能发生RhD新生儿溶血病。
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记。
2. 将待检者红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50ul。
3. 将待检者血清分别加入第5和第6管中，每管50ul。
4. 将已知的A型和B型红细胞0.8%浓度悬液或0.8%浓度ABO血型反定型红细胞试剂，每管50ul分别加入第5和第6管。
5. 即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
Rh血型鉴定操作规程
抗D血型鉴定操作规程1.目的：定性鉴定患者Rh（D）血型2.适用范围：适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。
3.方法及原理;该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。
在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。
其鉴定方法，由抗血清的性质而定。
如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。
4.试剂及设备:4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱5.样本的采集与处理:5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。
5.2标本储存：2℃-8℃保存。
5.3标本运输：室温运输5.4.标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定。
6.操作步骤：6.1试管法6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。
6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。
6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。
6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。
6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。
6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。
6.2玻片法6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。
6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。
6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。
6.2.4记录结果6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。
8.干扰因素:8.1假阳性因素8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。
RhD血型鉴定操作规程
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
【试剂】适合用于玻片法的低蛋白抗D试剂
【操作】
（1）加1滴抗D到一洁净的玻璃片或白瓷板凹孔中，并做好标记
（2）加1滴适合的对照试剂到另一洁净的玻璃片或白瓷板凹孔中，并做好标记
（3）向以上玻片或白瓷板凹孔中的每一种试剂中分别加1滴混匀的40%～50%待检红细胞悬液
（4）充分混合抗体试剂和细胞，用搅拌棒将混合物均匀分散
Rh(D)血型鉴定操作规程完整
医疗药事制度
文件名称：Rh（D）血型鉴定
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
Rh（D）血型鉴定
【原理】Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统。Rh血型系统常见的抗原有D和C、c、E、e五种，分别由RHD基因和RHCE基因编码，RhD和RhCE蛋白均是反复穿膜的蛋白质。使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E、抗e五种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，一般只做D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】已加入抗D试剂的柱凝集血型卡
【操作】
（1）配制好的检测样本的红细胞悬液和试剂红细胞悬液.通常配制为0.8%～1.0%浓度。
（2）在专用微柱凝集卡的RhD检测管中加入样本红细胞悬液50ul
（3）在专用血型血清学用离心机内离心
（4）判读并记录凝集反应结果
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血为阳性，不凝集为阴性
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）抗D试剂与红细胞反应表现凝集，而对照为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阳性
（2）抗D试剂与对照均为阴性反应，表明待检红细胞为RhD阴性
（3）对照管凝集则试验无效
【注意事项】玻片法可能存在感染性标本暴露的风险，需要注意防范；玻片法不适用于检测弱D表型
ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程（盐水法）
ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程（盐水法）ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程（盐水法）一．目的规范ABO/Rh (D) 血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。
二．职责血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型鉴定。
三．适用范围适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。
四．所需材料和设备1.材料抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。
2.设备普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。
五．操作步骤1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。
2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。
3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
页脚内容14.以1000r/分钟离心1分钟。
5.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。
6. ABO血型结果判定（见下表）：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型）受检者血清+试剂红细胞（反定型）抗-A 抗-B A细胞B细胞O细胞血型注：“＋”凝集；“－”不凝集7.Rh（D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性无凝集为Rh阴性。
8.凝集强度判断标准：页脚内容2。
Rh(抗D)血型鉴定标准操作程序文件
Rh（抗D）血型鉴定标准操作程序文件1.【原理】Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇有相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。
若误诊误治，可导致患者残废或死亡。
有条件者应作此检查。
目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。
临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。
2、【使用的标本种类和收集方法】2.1、受检者2-3％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水32滴（1.6ml）配成2-3％的红细胞悬液。
2.2、标本接收2.2.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。
2.2.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。
2.3、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3. 【仪器和试剂】3.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机3.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司3.3、许可证号：苏药管械（试）字2001第2030436号3.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序3.5、Rh抗血清本科使用珠海贝索生物技术有限公司生产的Rh抗血清试剂产品注册号:国食药监械(准)字2004第3400398号4. 【操作】4.1 取小试管2支,用蜡笔标记，分别加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受检者红细胞盐水悬液2滴,混匀。
离心：3200-3400转/min,15--30秒4.2结果判断:轻摇试管，观察结果：如受检管凝集,即表示阳性；受检管不凝集,即表示阴性。
5、【注意事项】5.1、Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。
如出现混浊或变色则不能使用。
5.2、。
试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
5.3、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
5.4、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
Rh(D)血型鉴定标准操作程序
SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。
ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。
其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。
其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。
用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。
1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。
由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。
一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。
1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。
绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。
2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。
不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。
ABORHD血型质控品使用SOP
标准操作程序（SOP）一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任公司生产的ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体）（12人份/盒）、ABO血型反定型试剂盒（人血红细胞）（0.8%）的室内质量控制。
二、准备工作将质控品和反定细胞从冰箱取出后平衡至室温。
三、操作步骤1.取4张待检微柱凝胶卡做好标记；2.将样本1分别加入第1张卡的1-4孔中，各1滴（50μl）；3.将样本3加入第1张微柱凝胶卡的Ac、Bc孔内各1滴（50μl），分别在标记孔内加入0.8%A1、B标准红细胞各1滴（50μl）。
4.将样本2分别加入第2张卡的1-4孔中，各1滴（50μl）；5.将样本4加入第2张微柱凝胶卡的Ac、Bc孔内各1滴（50μl），分别在标记孔内加入0.8%A1、B标准红细胞各1滴（50μl）；6.将样本5加入第3张卡的1~4孔内，将样本6加入第4张卡的3~4孔内。
7.用该试剂卡的专用离心机离心，判定结果。
结果判定：1．本产品为非定值质控品，反应格局表中所提供的结果仅为定性结果，因此建议各实验室对每批号的产品自行建立相应的参考值。
2．质控品检测结束后，用户应将检测结果与参考值进行比较，阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。
失控后要分析查找原因，必要时重复实验，确认失控原因消除后开展正常检测工作。
样本1 + 0 +样本2 0 + +样本3 0 +样本4 + 0样本5 0 0 +样本6 / / 0“0”代表阴性，“/”代表不确定, “+”代表阳性。
四、注意事项1.本产品作为室内质控品，仅供临床实验室进行质量控制，不用于临床检测结果的判断。
2.使用时应轻拿轻放，避免剧烈振荡。
3.室内质控品严禁在室温长期存放，室内质控完毕后立即将剩余试剂放在2~8℃储存。
4.如红细胞质控品发生凝集，出现菌落或严重溶血，请不要使用；若红细胞质控品出现轻微溶血，可使用生理盐水对其进行洗涤，重新悬浮后使用。
医院Rh(D)血型定型标准操作程序
Rh(D)血型定型标准操作程序【项目名称】Rh(D)血型【实验用途】Rh(D)血型常规检测【实验原理】根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性【样本种类】红细胞抗凝或不抗凝样本，被检者无需特殊准备【仪器和材料】仪器：无特殊专用仪器材料：Rh(D)(IgM)血型定型试剂试剂主要组成成份：抗D（IgM）单克隆细胞株培养上清液，NaCl，磷酸盐缓冲液等试剂稳定性：原装试剂在2~8℃避光保存，有效期24个月。
如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性试剂性能指标：抗D（IgM）效价≥1:64（ccDee O型）注意事项：①、本试剂含有0.1％W/V叠氮钠，如果摄入会中毒；②、本品如出现浑浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知Rh(D)阴性、Rh(D)阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。
【试验方法】1 平板法（玻片法）①、加1滴抗D试剂于玻片上；②、再加1滴35-45％的被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞；③、在圆形地玻片区域中混匀，（直径均为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判断结果。
不要将试剂的干燥与凝集相混淆；④、如果呈阴性，需用试管法重做一遍试验。
2 试管法①、加1滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中（75×12mm或75×10mm）；②、再加一滴约3-5％的被检红细胞悬液于试管中。
混匀；③、离心，速度和时间可选择以下二种之一：a）转速1000rpm，时间1分钟；b）转速3400rpm，时间15秒；④、检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来；⑤、观察凝集状况，并立即记录结果。
必要时可借助显微镜；⑥、若是阴性结果，需在37℃孵有15-30分钟，然后再离心观察结果。
结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。
3 微量板法（U型板）①、加一滴抗D试剂U型底的微孔中；②、再在微孔中加一滴约3-5％的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中；③、用机械的方法将U型板混匀；④、用板式离心机离心：2000rpm，时间为30秒。
输血科RhD血型鉴定标准操作程序
输血科RhD血型鉴定标准操作程序RhD血型鉴定标准操作程序RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。
若误诊误治，可导致患者残废或死亡。
临床输血时，一般需作助血型鉴定。
一、RhD血型鉴定标准操作程序【原理】应用血凝试验检测红细胞抗原。
RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。
D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。
【试剂】RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）【操作】1．盐水法取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。
2．对照管用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。
3．结果判定如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。
【附注】1．单克隆IgM Rh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。
抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7℃水浴1h，观察凝集反应。
2．如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D 血清进行鉴别。
如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。
3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。
4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。
阴性对照不易得到，一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5% D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。
5．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
【假阳性反应原因分析】1．试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员意识到有进一步试验的必要。
Rh(D)血型鉴定(试管法)操作程序
Rh （D)血型鉴定（试管法）操作程序1、目的建立Rh(D)血型操作规程，确保血型鉴定准确性和规范性。
2、适用范围适用于试管法进行Rh(D)血型鉴定试验操作程序3、试剂3.1厂家： 上海血液生物医药有限公司3.2产品有限期：24个月3.3试剂规格： 10ml 支3.4试剂稳定性：试剂未开启：2-8℃避光保存，稳定至包装盒上的效期。
3.5试剂开启后请注明日期并签名，效期按厂家说明书要求。
4、质控操作按照《输血相容性检测室内质控操作程序》执行，质控通过后填写《血库IQC 检测反应记单》5、检测原理目前发现的人类红细胞上Rh 抗原有C 、c 、D 、E 、e5种，Rh 血型形成的天然性抗体极少，主要是免疫性抗体，已知有抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c 抗体等五种。
抗D 抗体是Rh 血型系统中最常见的抗体。
Rh 抗体有完全抗体和不完全抗体两种完全抗体在机体受到抗原刺激初期出现，一般属IgM 型，机体再次受抗原的刺激则产生不完全抗体，如果五种不完全抗体血清(抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c)做鉴定，可将Rh 血型系统分为18个型别，在临床上因D 抗原的抗原性最强，专业领域：血库 文件编号： Rh （D)血型鉴定（试管法） 操作规程 版本及修订后：启用日期： 编写者： 审批者：出现的频率高，临床意义较大，故一般只做D抗原的血型鉴定，如仅用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
6、标本处理6.1核对信息，将检查申请单信息与样本条码信息进行核对，信息一致方可进行下述操作。
6.2标本收集EDTA-K2抗凝血2ml6.2.2标本出现溶血、乳糜血，为不合格样品，不能用于检测。
6.3标本制备6.3.1EDTA抗凝血2ml,离心1000g/3min,分理出血球与血浆待用。
6.3.2制备5％红细胞悬液，取50ml血球+1000ul0.9％生理盐水。
7、操作步骤7.1取洁净试管一支，表明抗D用滴管滴加Rh(D)IgMh试剂50ul,并向管中滴加待检着5％红细胞悬液50ul,混匀：7.2摇匀后用血库专用离心机500g,离心60秒，观察结果：7.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如果肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜观察结果。
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二、Rh（D）血型鉴定操作规程
[目的]
保证Rh（D）血型鉴定准确，确保临床输血安全。
[适用范围]
XXX医院输血科
[职责]
输血科具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的Rh（D）血型鉴定（只对该单份标本负责）。
[相关文件]
试剂采购、保存和使用管理程序
设备采购、使用管理程序
消毒与清洁管理程序
标本采集、运输、保存和报废管理程序
紧急用血管理程序
[相关记录]
仪器设备的采购、使用和维护记录
仪器的温度记录
恒温水温箱的换水和消毒记录
消毒液的配置记录
清洁消毒记录
试剂采购、使用记录
标本交接和报废记录
紧急用血记录
[实验原理]
Rh（D）血型是由红细胞表面是否存在或缺失D抗原来确定的。
D抗原与细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。
红细胞与抗-D抗体发生特异性凝集反应表明该细胞有D抗原，称为Rh（D）阳性；反之，无特异性凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原，称为Rh（D）阴性。
[仪器器械]
玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[试剂]
抗-D试剂
[标本收集与处理]
无菌操作采集血液标本,采集后的标本尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将标本储存于2-8C冰箱内。
收集在ACD、CPD、CPD－2A液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。
[实验方法与步骤]
1、盐水试管法
①、正常D抗原表型检测
Ⅰ、制备受检者2~5%红细胞悬液。
Ⅱ、取一只干净玻璃试管，加1滴抗D试剂。
Ⅲ、加入1滴受检者2~5%红细胞悬液。
Ⅳ、混匀后，1000rpm离心1分钟或3400rpm离心20秒。
Ⅴ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则判定为Rh（D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应混匀后用低倍镜进行观察。
Ⅵ、若镜下观察有凝集反应，则仍判定为Rh（D）阳性；若镜下观察无凝集反应，则应继续进行下列操作：
Ⅶ、混匀后进行37℃水浴15分钟。
Ⅷ、1000rpm离心1分钟或3400rpm离心20秒。
Ⅸ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则仍判定为Rh（D）阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应再混匀后用低倍镜进行观察。
若镜下观察有凝集反应，则仍判定为Rh（D）阳性；若镜下观察仍无凝集反应，则判定为Rh（D）阴性，需要时还应进行弱D表型检测实验。
②、弱D表型抗原检测
Ⅰ、操作步骤与上述盐水试管法检测正常D抗原表型相同。
如果先前已进行了盐水试管法实验，同一试管可直接用弱D表型检测实验。
Ⅱ、混匀后，37℃水浴15分钟。
Ⅲ、用干净的等渗盐水洗涤细胞至少4次，洗涤后充分将盐水弃掉。
Ⅳ、加2体积广谱抗人球蛋白于细胞试管中。
Ⅴ、轻轻混匀，500Xg低速离心15秒。
Ⅵ、轻轻振荡，悬浮沉积细胞，肉眼观察有无凝集反应，若肉眼观察有凝集反应，则判定为Rh血型弱D抗原阳性；若肉眼观察无法判断有无凝集反应，则应混匀后用低倍镜进行观察。
若镜下观察有凝集反应，则仍判定为Rh血型弱D抗原阳性；若镜下观察无凝集反应，则判定为Rh（D）阴性。
2 、玻片法：
①、干净玻片上加1滴抗D试剂。
②、再加入1滴35-45%的受检者红细胞悬液。
③、用干净涂棒，将试剂和血液充分混匀。
④、在一个照亮的观察箱上方轻轻前后倾斜玻片，观察凝集反应。
并在显微镜下镜检证实。
⑤结果判断：有凝集时，表明所测的红细胞带有D抗原，判定为Rh（D）阳性；无凝集时，表明所测的红细胞缺少正常强度的D抗原，判定为Rh（D）阴性，但对于献血员应经过间接抗人球蛋白试验确定是否存在弱D表型。
[质量控制和注意事项]
1、抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
2、由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
3、Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
4、对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
5、2~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。
6
是IgM类免疫球蛋白人源单克隆抗体，因此不能用于间接抗球蛋白试验。
7、应该使用新鲜的、非溶血的血标本，可以是未加抗凝剂的血标本，或是加入抗凝剂EDTA或枸橼酸的血标本。
必要时应使用经过加入等渗盐水离心（1000g，2分钟）洗涤后的标本所制备的红细胞悬液。
推荐在制备红细胞悬液前，洗涤红细胞两遍，或洗涤上清至清澈。
高脂肪性、黄疸性或微生物污染的标本可能会导致检测结果错误，因此应尽量避免使用。
8、应用试管法鉴定时，应同时平行进行阳性和阴性对照试验。
9、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
10、其它附注参见ABO血型鉴定和Rh（D）血型试剂说明书。
[假阳性反应原因分析]
1、试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。
因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。
2、多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。
3、当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
4、试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。
[假阴性反应原因分析]
1、看错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶上的标签。
2、试管中漏加抗血清，在加入红细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
3、某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。
4、如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
5、遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。
6、抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
[临床应用]
用于常规检测人的Rh（D）血型归属。