血清中葡萄糖浓度
血清葡萄糖GLU测定
血清葡萄糖GLU测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂基于在精密度和准确性方面具有很高可靠性的Trinder’S方法，在防止已知化合物（如尿酸、谷胱甘肽和肌酐等）的干扰进行了进一步的改良。
GOD葡萄糖+ H2O+ O2 H2O2+葡萄糖酸 PODH2O+AAP + HBA 醌亚胺（红色）H2O 式中：AAP 为4-氨基安替比林；HBA 为4-羟基苯甲酸上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在波长500nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。
3 标本：3.1 病人准备：12小时禁食。
3.2 类型：血清，标本最好不要溶血。
迅速分离血清或，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3.3 标本存放：血清应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5标本拒收标集：细菌污染、超时送检的的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司GLU试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：过氧化物酶 375U/L 4-羟基苯甲酸15mmol/L4-氨基安替比林0.75mmol/L磷酸盐缓冲液110mmol/L试剂2（R2）：葡萄糖氧化酶6000U/L 磷酸盐缓冲液110mmol/L4.1.2 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月4.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
7种血清葡萄糖常规检测系统测量结果的正确度评价
7种血清葡萄糖常规检测系统测量结果的正确度评价孙慧颖;邵燕;胡滨;李月玲;张天骄;张传宝;陈宝荣【摘要】目的评价血清葡萄糖(Glu)常规检测系统测量结果的正确度.方法用参考方法和7种常规系统(A～G)测量5种不同浓度的血清Glu标准物质和30份Glu浓度为1.88～20.72 mmol/L的冰冻人血清样本(分光光度法),按分析标准物质法、方法学比对法分别评价7种常规系统测量结果的正确度.结果依据计量学溯源标准,按分析标准物质法评价,A常规系统Glu测量结果正确度可接受,B～G常规系统Glu测量结果正确度不可接受；按方法学比对法评价,A～C常规系统Glu测量结果正确度可接受,D～G常规系统Glu测量结果正确度不可接受.结论用不同方法评价Glu测量结果的正确度时,同一常规系统的评价结论可能不一致,实验室应选择合适的正确度评价方法并使用符合ISO 15189正确度要求的血清Glu常规检测系统.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2013(031)007【总页数】3页(P542-544)【关键词】葡萄糖;正确度;标准物质;参考方法【作者】孙慧颖;邵燕;胡滨;李月玲;张天骄;张传宝;陈宝荣【作者单位】北京航天总医院检验科,北京100076;北京航天总医院检验科,北京100076;北京航天总医院检验科,北京100076;北京航天总医院检验科,北京100076;卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部临床检验中心,北京100730;北京航天总医院检验科,北京100076【正文语种】中文【中图分类】R446.1血清葡萄糖(Glu)是诊断、监测糖尿病的重要实验室指标，可溯源至SI单位。
ISO 15189[1]要求“应设计并实施测量系统校准和正确度验证计划，以确保结果可溯源至SI单位，或可参比至自然常数或其他规定的参考值”，因此，实验室应对常规系统检测Glu结果进行正确度评价。
本研究在复现血清Glu测量参考方法[2]及研制与临床标本有良好互通性Glu国家二级标准物质的基础上，参考文献[3]中分析标准物质法、方法学比对法分别评定7种常规系统测量结果的正确度。
血清葡萄糖浓度的测定
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿
病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据
有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
人体对糖的耐受现象 OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血
糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简
单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因 此不推荐临床常规应用。
方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活 动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75
实验步骤
B S T
工作液 dH2O
葡萄糖标准液 血清
1.00 mL 10 uL
-
1.0 mL 10 uL -
1.0 mL 10 uL
混匀， 37C， 15 mins dH2O 0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL 混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度. 计算:
血清葡萄糖测定实验报告
血清葡萄糖测定实验报告引言：血清葡萄糖测定是临床化验中常用的一项检测指标，用于评估机体对葡萄糖的代谢情况。
本实验旨在通过比色法测定血清中葡萄糖的浓度，进一步了解机体的糖代谢功能，并探讨该实验方法的可行性和准确性。
实验方法：1. 样本的准备：收集一定量的血清样本，可采用静脉采血的方式，将血液置于无菌离心管中，离心5-10分钟，收集上清液作为样本。
2. 样本的预处理：取约1ml的血清样本，用离心机离心10分钟，去除悬浮物和红细胞沉淀。
3. 样本的保存：将处理后的血清样本分装于离心管中，封闭保存于-20°C的冰箱中，避免阳光直射和温度变化。
实验步骤：1. 样本稀释：取适量的血清样本，按1:10的比例加入生理盐水，充分混匀，得到稀释后的样本。
2. 反应液的制备：按照试剂盒说明书中的比例，配制好反应液。
3. 反应液的加入：将稀释后的样本加入反应管中，再加入适量的反应液，充分混匀。
4. 反应时间：将反应管置于恒温水浴中，保持温度在37°C，反应20分钟。
5. 比色测定：将反应后的溶液置于分光光度计中，设定波长为505nm，记录吸光度值。
6. 建立标准曲线：取一系列浓度已知的葡萄糖标准品，按照上述步骤进行测定，得到各个浓度下的吸光度值。
7. 计算血清葡萄糖浓度：根据标准曲线的吸光度-浓度关系，计算出样本中的葡萄糖浓度。
实验结果：根据标准曲线所得到的吸光度-浓度关系，可以通过比色法计算出血清样本中葡萄糖的浓度。
实验结果显示，血清样本中的葡萄糖浓度为X mmol/L。
讨论与分析：血清葡萄糖测定是评估机体糖代谢功能的重要指标，本实验通过比色法测定血清中葡萄糖的浓度，为临床提供了一种简便可行的检测方法。
与其他测定方法相比，比色法具有操作简单、结果稳定可靠的优点。
然而，在实验过程中也存在一些潜在的问题和限制。
首先，样本的处理和保存过程中要严格控制温度和时间，避免葡萄糖的降解和氧化。
其次，在样本的稀释过程中，需要准确计量，避免稀释倍数的误差对结果造成影响。
[生活]血液中葡萄糖含量的测定
![[生活]血液中葡萄糖含量的测定](https://img.taocdn.com/s3/m/c0c0675bf6ec4afe04a1b0717fd5360cba1a8d4d.png)
血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。
邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。
此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。
由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。
三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。
2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。
4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。
5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。
邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。
置棕色瓶中至少可用两个月。
此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。
12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。
葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。
葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。
血液标本放置时间对葡萄糖测定结果的影响
血液标本放置时间对葡萄糖测定结果的影响目的：探讨抽血后标本放置时间长短对葡萄糖测定结果的影响。
方法：以50例解放军第四十二医院体检病人为研究对象，每位患者抽取1份血液分置于1根氟化钠抗凝管4根普通干燥管，分别置于25℃室温环境0、30、60、90、120min，测定葡萄糖浓度。
结果：0、30、60、90、120分钟结果分别为5.58±0.94mmol/L、5.45±0.87mmol/L、5.02±0.84mmol/L、4.75±0.80mmol/L、4.39±0.78mmol/L。
结论：血液标本放置时间越长血液葡萄糖浓度降低越明显。
标签：血清葡萄糖；浓度；时间血液葡萄糖测定标本以氟化钠抗凝立即分离血浆进行检测为最佳方法，单抗凝后血浆对个别生化检测项目有一定影响。
因此，我院采用血清标本进行葡萄糖的测定。
但临床住院病人常规为6点半抽血，8点送至检验科再进行分离检测，标本放置时间较久，血糖检测结果偏低。
现就血液标本25℃室温环境放置时间对葡萄糖测定结果的影响进行探讨。
资料与方法氟化钠抗凝管和普通干燥采血管。
仪器和试剂：日本产BECMAN AU680全自动生化分析仪及北京九强生物技术股份有限公司生产葡萄糖试剂（葡萄糖氧化酶法，批号：13-0708P），用试剂盒配备标准品进行校准，质控品为英国朗道复合生化质控品（批号：HN1530）方法：①标本：采集门诊体检标本50份，立即分置于1支氟化钠抗凝管及4支普通干燥管中，氟化钠抗凝管立即离心检测，其余4支普通干燥管分别在室温中（25℃）放置30、60、90、120min后立即分离血清检测。
②葡萄糖测定：用BECMAN AU680全自动生化分析仪，北京九强葡萄糖试剂（葡萄糖氧化酶法）用配套标准品校准后测定标本葡萄糖。
每人标本从采集到检测2.5h内完成。
质控：标本测定前进行质控品测定，结果在控时再进行标本测定，在测定中及测定后再进行两次质控均在控时标本测定结果有效，反之无效。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性，
受血中非糖还 原物 质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展【摘要】血清葡萄糖含量是临床生化检验中重要的指标，其的准确测定对糖尿病等疾病的诊断、治疗都有重大意义。
本文介绍了近几年血清中葡萄糖含量检测的主要方法以及这些方法的一些研究结果。
【关键词】血清；葡萄糖；检测方法血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。
人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。
正常人在空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。
空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖而血糖浓度低于3.9mmol/L 称为低血糖。
血清中葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。
因此，对其进行准确的测定具有极其重要的意义。
1血清中葡萄糖的主要检测方法目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、己糖激酶法（HK法）、葡萄糖脱氢酶法（GDH法）、气相色谱-同位素稀释质谱法（GC-IDMS法）以及无创血糖测量法等。
下面就对以上方法进行简要的介绍。
1.1葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
通过测定吸光度就能计算出血液中葡萄糖的含量。
该法的优点有：操作简便，用血量少，成本低，多见于便携式血糖仪，是我国卫生部推荐的血糖测定的常规方法。
但缺点是：过氧化酶的特异性较差，尿酸、维生素C、胆红素等可与色原性物质竞争过氧化氢而抑制反应，引起结果偏低。
且该法线性范围较窄（0.1~20.0mmol/L）。
同时，葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度敏感，而新配制的葡萄糖标准溶液主要为α-D-葡萄糖，为使检测结果准确，需静置溶液2h以上（最好过夜）待其完全转化为β-D-葡萄糖再使用。
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
活动不可缺少的物质 ， 其含量 会 因病 态 的不 同而有所 变动 。
在 临床 上 ， 由于 血 糖 浓 度 是许 多疾 病 的 病 症 诊 断 、 别 诊 断 、 鉴 病情观察 、 疗监控 和疾病 预防等必 不可少 的首选 指标 ， 治 因
此 ， 其 准 确 测 定 具 有 重要 意 义 。 对 １ 血清 葡 萄 糖 的 检 测 方 法
摘要
关键词
阐述 了血清 中葡萄糖 的检测在 临床诊 断研 究方面的重要 意 义， 较全 面地 综述 了血清 葡萄糖 常用 的检 测
血清 葡 萄糖 检 测 方 法
２ ． ｏ Ｌ Ｊ 葡 萄 糖 氧 化 酶 对 ＪＤ 葡 萄 糖 高 度 敏 感 。 ０ ０ｍｍ ｌ ） 。 ／ Ｂ 一 —
方 法及 研 究进 展 。
氧 速 率 法 又 称 氧 电极 法 ， 原 理 是 测 定 溶 液 中 氧 的 消 其 耗 ， 据 从 酶 反 应 开 始 至 结 束 的 氧 浓 度 差 ， 得 标 本 中 葡 萄 根 求
糖浓度 。 葡 萄 糖 ＋Ｏ ＋Ｈ Ｏ—一 葡 萄 糖 酸 ＋ Ｏ ２ ２ Ｈ２ ２
血 清 葡 萄糖 是 临床 生 化 检 验 中 的重 要 指 标 ， 维 持 生 命 是
目前 ， 清 葡 萄 糖 常 用 的 检测 方 法 主 要 有 氧 化 酶 一 联 血 偶 比色 法 、 电流 法 、 速 率 法 、 微 氧 已糖 激 酶 法 、 甲苯 胺 法 、 萄 邻 葡 糖 脱 氢 酶 法 、 相 色 谱／ 气 同位 素 稀 释 质 谱织 吸 收和 利 用 。 血清 葡 萄 糖 （ ｌｏｇ ｃｓ ， 称 Ｇ Ｕ） 血 Ｂｏｄｌ ｏｅ 简 ｕ Ｌ 即 清 中所 溶解 的 葡 萄糖 ， 体 中血 清 葡 萄 糖 的 正 常 值 为 ７５× 人 ． １ ～１０×１ ｍ ／ ， 其 值 高 于 １３× ０ ｇＬ时 可诊 断 为 ０ ． ０ ｇＬ 当 ． １ ｍ ／ 高血 糖 ， 于 ５０×１ ｇＬ 低 ． ０ｍ／ ￣ ｎ 断 为 低 血 糖 。
血清葡萄糖测定
血清葡萄糖测定1.实验原理在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G6P）与ADP。
前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），同时使NADP还原成NADPH。
NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。
NADPH在波长340nm有吸收峰，可监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。
迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。
6. 试验材料：6.1 欧泰克血糖测定试剂盒，罗氏复合定标液，罗氏质控品I、II。
6.1.1 试剂组成：磷酸缓冲液，PH7.6 100 mmol/L三磷酸腺苷（ATP） 4 mmol/L醋酸镁10 mmol/LNAD+ 3 mmol/L己糖激酶（HK）≥25 KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）≥75 KU/L6.1.2试剂准备：6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：日立7060全自动生化分析仪8. 操作步骤：8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血糖浓度测定
血糖浓度测定【实验目的】学会用分光光度计测定血清中GLU（葡萄糖）的含量。
【检验原理】肉眼可见彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm。
当可见光通过有色溶液介质，一部分光能被吸收，一部分被透过。
这种光能的吸收和透过，可用于某些物质的定性、定量分析。
用葡萄糖试剂同样处理已知浓度的葡萄糖标准液和待测血清样品，标准管和样品管内的葡萄糖与试剂发生显色反应（形成红色醌型化合物），在510nm波长测定其吸光度值，计算样品的血糖浓度。
【检验用品】葡萄糖测定试剂、葡萄糖标准液，大、小微量移液计、配套吸管，722-P可见分光光度计，试管、试管架、玻璃笔，手控电热水浴槽。
【检验方法】1．准备试管试液：取三支试管，用玻璃笔在试管上划记1、2、3编号，1试剂空白管、2标准管、3样品管。
用大移液计（配大吸管）分别吸取试剂1ml（1000μl）入三支试管内，换用小移液计（配小吸管）吸取葡萄糖标准液10μl入标准管内，换小吸管后吸取待测血清样品10μl入样品管内。
2．水浴：各管混合均匀，置于试管架上并放入水浴槽内，37℃水浴15分钟后取出。
3.上机测定（1）接通光度计电源、开机，打开光度计比色皿，按编号依次将三支试管液倒入比色皿中，使其磨砂面相邻隔光，透光面对准光路。
（2）把可见光波长调至510nm。
当试剂空白管透光时，按MODE （功能）键设置T(透光度)为100%。
再按功能键设置为A（吸光度），滑动比色皿拉杆，依次让标准管、样品管透光并测出其吸光度值。
1试剂空白管2标准管3样品管试剂（ml） 1.0 1.0 1.0标准液（μl）—10 —样品（μl）——10【检验结果】C样：样品浓度？C标：标准液浓度（5.55mmol/L）A样：样品吸光度值（）A标：标准液吸光度值（）C样=A样/ A标×C标。
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
化学分析计量
2008年 , 第 17 卷 , 第 3 期
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
戴新华 齐韬 杨梦瑞 徐蓓 方向
100013) ( 中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所 , 北京
*
摘要 关键词
阐述 了血清中葡萄糖的检测在临床诊 断研究方 面的重 要意义 , 较 全面地 综述了血 清葡萄 糖常用 的检测 血清 葡萄糖 检测方法 20. 0 mm ol/L ) [ 5] 。葡 萄糖 氧 化酶 对 葡萄糖溶液中有 需要 型到 型及 D 葡萄 糖 高度 敏 感。
* 国家 科 技基 础 条 件平 台 项 目标 准 物 质资 源 共享 平 台 建设 ( 2005DKA 21501 )与 十一五 国家科技支撑计划 重点项目 科研用高 纯有 机 试 剂 核 心 单 元 物 质 及 共 性 关 键 技 术 的 研 制 与 开 发 ( 2006BA F07B03) 收稿日期 : 2008 03 05
型两种葡萄糖 , 葡萄糖的 完全氧化
型 的转 化。新配 制的 葡萄糖 标准 液主 要是
型葡萄糖 , 必须放置 2 h 以上 ( 最好过夜 ) 待其变旋 平衡后方 可应用 [ 6] 。 1. 2 微电流法 微电流法的检测原 理是在电极表面固化 GOD, 当血液滴 到电极上时 , 葡萄糖氧化酶可氧化血液 中的葡萄糖 产生葡萄 糖内酯和 H 2 O2, 同时 释放 出电 子。所产 生的 电子 被导 电介 质转移给电极 , 在一 定电压 作用 下 , 流过电 极的 电流 将发生 变化 , 通过检测电流变化与葡萄糖浓度 的线性关系 达到检测 血糖浓度的目 的 [ 7] 。 1. 3 氧速率法 氧速率 法又 称 氧电 极 法 , 其原 理是 测 定溶 液 中氧 的消 耗 , 根据从酶反应开 始至结 束的 氧浓度 差 , 求得 标本 中葡萄 糖浓度。 葡萄糖 + O2 + H 2 O 葡萄糖酸 + H 2 O2 氧电极置 于含有适量葡萄糖氧化酶的 溶液中 , 当加入样 品后 , 样品中的葡萄糖被氧化而消耗 氧。由于氧消 耗量与血 清中的葡萄糖 浓度成 正比 , 而 电极 的极 限扩 散电 流 ( I M )又 与溶液中氧含量成正比 , 因此 , 氧 电极 I M 值即可反 映样品中 血清葡萄糖的浓 度 [ 8] 。氧速 率法 的精密 度好、 准 确性高 , 且 具有极高的抗 特异性。 该法中 氧电 极只监 测高 度特 异的葡 萄糖氧化酶催 化反应 , 且电极检测到的 是样本的最 大氧消耗 速率 , 因而它不受大气中氧的干扰 , 也不受溶 血黄疸、 乳糜和 其它代谢物的 干扰 , 其 测定结 果与 参考 方法最 接近 [ 9] ; 由于 氧速率法的使 用 , 血糖的 结果可 以在加 入样本 20 s 后获 得 , 大大地提高了 检测速 度。该法 的不 足之处 是需 要特 殊仪器 反应槽和电极 , 只能测定葡萄糖含量 , 不能测 定其它项 目 ; 由 于氧电极膜具 有一定寿 命 , 使用 一段时 间后 , 膜 的老 化使其 对氧通透性降 低 , 灵 敏度下 降 , 检测 结果的 准确 度也 随之下 降 [ 10] 。
血清中葡萄糖浓度的测定
实验器材与试剂
（一）器材 5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E 型分光光度计，1比色皿，37度恒温水 浴锅。 （二）试剂 （1）0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0称取无水磷酸 二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0, 定容至1L （2）酶试剂：取过氧化物酶1200U，4-氨基安 替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸盐缓冲 液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定 容至100ml，置于4度保存，可稳定存在3个月。
（3）生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动时。 （4） 病理性低血糖特发性功能性低血糖最 多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤 等。
注意事项 （1）葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄 糖约36%α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到 β型的变旋反应。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须 放置2h以上，待变旋平衡后方可应用。 （2）葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量， 但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰 性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏低。 （3）因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品 以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。取草酸钾6g， 氟化钠4g，加水溶解至100ml，吸取0.1ml到试管内，在 80℃以下烤干使用，可使2到3ml血液在3到4天内不凝固 并抑制糖分解。 （4）严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液， 然后在进行测定。
思考题 （1）标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯 甲酸钠，苯甲酸钠起什么作用？ （2）查文献，列举几种血清葡萄糖测定的方 法与原理。 （3）本实验原理为酶促化学反应，为何未加 终止剂终止酶的反应？ （4）本实验涉及显色反应，该反应在设计上 存在缺陷，指出存在的缺陷与改进方案。
葡萄糖测试标准
葡萄糖测试标准一、葡萄糖检测方法葡萄糖的检测通常采用血液样本进行。
常见的检测方法有以下几种：1. 氧化酶法：通过葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，产生过氧化氢，再经过氧化氢酶催化生成水和氧气，最后检测氧气或过氧化氢的量来计算葡萄糖浓度。
2. 己糖激酶法：利用己糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸，再通过特异性化学反应检测葡萄糖浓度。
3. 葡萄糖脱氢酶法：利用葡萄糖脱氢酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸内酯，再检测还原型辅酶II的生成量来计算葡萄糖浓度。
二、葡萄糖正常值范围葡萄糖的正常值范围根据不同年龄和性别略有差异，一般如下：1. 空腹全血血糖：3.9-6.1mmol/L（70-110mg/dL）。
2. 空腹血清或血浆血糖：3.9-6.9mmol/L（70-125mg/dL）。
3. 餐后2小时全血血糖：≤7.8mmol/L（≤140mg/dL）。
4. 餐后2小时血清或血浆血糖：≤8.9mmol/L（≤160mg/dL）。
三、葡萄糖异常值诊断葡萄糖异常值的诊断主要依据血糖浓度的高低和持续时间的不同进行判断：1. 空腹血糖≥7.0mmol/L（126mg/dL）或餐后2小时血糖≥11.1mmol/L （200mg/dL），可诊断为糖尿病。
2. 空腹血糖在6.1-7.0mmol/L（110-126mg/dL）之间为空腹血糖受损，餐后2小时血糖在7.8-11.1mmol/L（140-200mg/dL）之间为糖耐量异常。
3. 糖尿病患者经过治疗后，血糖控制达标，可视为正常；若血糖控制不达标或持续升高，可诊断为糖尿病。
4. 低血糖的诊断标准为血糖低于2.8mmol/L（50mg/dL），可导致头晕、心悸、出汗等症状。
四、葡萄糖检测准确性葡萄糖检测的准确性受到多种因素的影响，如检测方法、仪器准确度、试剂质量、操作规范性、样本保存等。
为确保准确性，应采用可靠的检测方法和仪器，定期进行校准和维护；试剂应选用符合国家标准的合格产品；操作时应严格遵守操作规程，按照规定的保存条件和时间采集和处理样本。
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项目
血清（ml）
空白管 ——
标准管 ——
葡萄糖标准液 （ml）
——
0.020
蒸馏水（ml）
0.020
——
酶-酚混合试剂
3.00
3.00
（ml）
测定管 0.020 ——
—— 3.00
混匀，置于37度水浴中，保温25min,在波长510nm处 比色，以空白管调零，读取标准管及测定管的吸光度
计算公式：
问题：
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血清中葡萄糖浓度测定的方法有很多，在 实验设计上，这些方法分别利用了葡萄糖 的那些性质？
如何排除血清内其他物质的干扰，使所测 血清葡萄糖浓度更准确？
葡萄糖氧化酶法测血糖的原理是什么？本 实验为何需要用到两种酶？与其他方法相 比，本实验有哪些优缺点？
知识窗
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A测定
血清葡萄糖浓度=
×5mmol／L
A标准
参考值：
空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L
注意事项：
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① 葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度特异，葡萄糖 的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。
② 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能 直接用于测定尿液葡萄糖含量。
终止酶的反应？ d) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸
酶活力测定中的显色反应有何异同？ e) 本实验在设计上存在缺陷，请指出。
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Thank you！
物反应底物或产物噢物理化学手段无法区 分时，还可以借助另一种酶作为指示酶， 通过欧联反应进行定量分析。
实验目的：
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① 掌酶法测定血清葡萄糖浓度的原理。
② 掌握血糖变化的临床生理意义
实验原理：
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血清葡萄糖是用以过氧化物酶作指示酶的偶联酶反应定 量法测定的。
葡萄糖氧化酶利用氧将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释 放出过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化色素原， 并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。
葡萄糖+O2+H2O GOD葡萄糖酸+2H2O2
2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
操作步骤：
取三只试管按表操作
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2. 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 3. 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源
性，肝源性和胰岛素瘤等。
思考题：
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a) 标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯甲酸钠， 苯甲酸钠起什么作用？
b) 列举几种血清葡萄糖定量测定的方法和原理。 c) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂
③ 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测 定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂抑制葡萄糖酵 解。
④ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先之辈无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
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1. 生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 2. 病理性高血糖：
①糖尿病 ②内分泌腺功能障碍 ③颅内压增高 1. ④脱水引起高血糖
酶法分析是指用酶作为工具定量测定某
种物质含量的分析方法。定量分析的目标
可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激 活剂或抑制剂。
酶法分析的主要方法： 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
单酶反应定量法和偶联酶反应定量法
单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定
量测定某种物质的方法。
偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产