血清生化物质测定步骤
血糖测定方法（邻甲苯胺法）
一、原理：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性与加热情况下脱水反应生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级胺青色的席弗氏碱。
二、试剂：
1、邻甲苯胺试剂：取冰醋酸920ml，加入硫脲（Thiourea）1.5g，待其溶解，加邻甲苯胺（o-Toluidine）80ml，充分混合后，取此液960ml加入饱和硼酸溶液40ml，混匀，放置于棕色瓶中。
2、饱和硼酸溶液：称取硼酸6g，以蒸馏水溶解并稀释至100ml，放置一夜，过滤即可应用。
3、葡萄糖贮存标准液（1ml=5mg）：将少量无水葡萄糖，CP置于硫酸干燥器内一夜。精确称取此葡萄糖500mg，以饱和苯甲酸溶液溶解并转移入100ml 容量瓶内，以饱和苯甲酸溶液加至刻度。此液可长期保存。
4、葡萄糖应用标准液（1ml=0.05mg）：取葡萄糖贮存标准液1ml置于100ml 容量瓶内，加入饱和苯甲酸溶液至刻度。
5、饱和苯甲酸溶液：称取苯甲酸（Benzoicacid）2.5g，于800ml蒸馏水中，加热溶解，冷却后加蒸馏水至1000ml。
三、操作：
放沸水煮沸8min，冷水冷却，用640nm或红色滤光板光电比色，用蒸馏水作空白，记录各读数。
计算：（测定-空白）/（标准-空白）*0.1*100/0.1=葡萄糖毫克%
血清白蛋白测定（酚试剂法）
一、原理：用硫酸钠将血清中球蛋白沉淀，所分离的白蛋白加酚试剂而呈蓝色，
与含酪氨酸的标准管比色，求得白蛋白量。血清总蛋白减去白蛋白即为球蛋白量。
白蛋白与球蛋白分离：球蛋白与白蛋白不同，具有易溶于稀盐溶液而不溶于浓盐溶液的特点。故以23%硫酸钠或21%亚硫酸钠溶液沉淀球蛋白。再利用乙醚将白蛋白与球蛋白分离。
二、试剂：
1、酪氨酸标准液（1ml=0.2mg）：精确称取酪氨酸（Tyrosine）0.2g，置于1000ml
容量瓶中，用0.1当量盐酸溶液稀释至刻度。
2、0.1当量盐酸溶液：取浓度为36.5%，浓度为11.9M的市售浓HCl加水配制
成1L:
取XL的上述浓盐酸,因为盐酸是1-1价的离子组成的酸,当量浓度等于MOL浓度,据配制前后溶质的MOL数相等,则有如下计算:
(X*11.9)/0.1=1,X=0.0084L.将浓盐酸加入到1000ML的容量瓶中,再加水到1L 刻度为止即得0.1个当量的盐酸.
3、23%硫酸钠溶液：称取无水硫酸钠230g，加蒸馏水至1000ml。加热溶解，
冷却后补足蒸馏水量。
4、酚试剂：钨酸钠（NaWO4·2H2O）100g
钼酸钠（NaMO4·2H2O）25g
蒸馏水700ml
置于2000ml烧瓶内，再加入85%磷酸（H3PO4）50ml，浓盐酸（HCl）100ml。
应用回流冷凝器煮沸10小时（烧瓶内可加入小玻璃珠10数颗，以防煮沸时溶液冲入冷凝管而溢出）。除去冷凝管后，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml，溴液（或30%过氧化氢）数滴，继续煮沸15分钟，以除去多余的溴（或过氧化氢）。因溴刺激性大，应在排气柜内进行。制成的酚试剂为鲜明黄色，保存于棕色瓶内备用。
5、10%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠100g，加100ml蒸馏水至1000ml。
三、操作：
步骤如下：（1）取边缘完整的试管一支，加入血清0.2ml；
（2）加入23%硫酸钠溶液3.8ml，混匀；
（3）吸取1ml于另一试管内，作为总蛋白管；
（4）在原管内加入乙醚不少于2ml，堵住管口用力振荡10余次；
（5）放置在37℃水温箱内，不少于10min，2500转离心沉淀5min，此时试管内分成三层：上层为乙醚，中层为球蛋白，下层为澄清的白蛋白溶液；
（6）斜执试管，使中层的球蛋白能与管壁分离，用1ml吸管沿管壁通过球蛋白的空隙处插入管底，小心吸取清晰的白蛋白液至1ml；（小心，准确，且不可触及球蛋白块片）。
（7）拭去吸管外壁的液体和球蛋白，然后移于另一试管内，作为白蛋白管。
（8）取试管3支，按表操作
混匀后，静置10min，用520nm或绿色滤光板光电比色，以蒸馏水校正光密度到0点，记录读数。
计算：
总蛋白：（测定-空白）/（标准-空白）*0.2*100/0.05*16/1000=白蛋白克% 白蛋白：（测定-空白）/（标准-空白）*0.2*100/0.05*16.6/1000=白蛋白克%
乳酸测定方法
原理
在铜离子催化下，乳酸与浓硫酸在沸水中反应，乳酸转化为乙醛，乙醛与对羟基联苯反应产生紫色化合物，在波长560nm处有强烈的光吸收，故可进行定量测定。
2仪器与试剂
2.1仪器：微量吸管，恒温水浴锅，电热水箱，分光光度计。
2.2试剂：4%CuSO4，浓硫酸(AR)，1%NaF溶液
蛋白沉淀剂：按体积分别取一份10%的钨酸钠，一份1/3 mo1/L硫酸，再与28份蒸馏水混合即成；
沉淀剂－NaF混合液：按体积分别取3份沉淀剂，1份1% NaF混合即成；
1.5%对羟基联苯溶液：称取1.5g对羟基联苯（白色）定溶于100mL热的0.5% NaOH中(可保存半年)；
乳酸标准储备液(1mg/mL)：称取106.6mg乳酸锂或171mg乳酸钙，以10%的三氯乙酸定容至100mL(室温下可保存半年)；
乳酸标准应用液(0.01mg/mL)：准确吸取1.0mL乳酸标准储备液稀释定容至100mL，此液要求现用现配。
测定步骤：
于5mL试管中加入0.48mL 1%NaF溶液，准确吸取血20μ1加入试管底部。用试管上部清液清洗微量吸管数次，再加入1.5mL蛋白沉淀剂，振荡混匀，于3000r/min离心10min，取上清液，按下表操作。
上述步骤完成后，摇匀，置30℃水浴30min(每隔10min振摇一次)。取出后放入沸水浴中加热90S，取出冷却至室温，在波长560nm处用5mm光径比色皿比色，空白管调零。
3.1血乳酸含量计算
血红蛋白测定步骤
（1）用血红蛋白吸管准确吸取血液20uL，伸入预先盛有4ml 0.1mol/LNaOH的5ml试管底部，轻轻挤出，反复吸洗数次，碱化10min。
（2）于96孔酶标板上设置空白、标准品、测定孔，每孔分别加0.1mol/L NaOH 20 uL，取碱化后标准品及标本各10 uL，加入酶标板中，轻轻震荡，充分混匀，室温放置10min后用酶标板比色，波长520nm处比色。
加样步骤：
测定血红蛋白所需物品：血红蛋白吸管、5ml试管、100 uL枪头、96孔酶标板。
红细胞测定步骤
（1）用血红蛋白吸管取血液20uL，加入到盛有4ml 0.9%NaCl溶液的5ml离心管中，轻轻挤出血液并反复吸洗2～3次，然后将血液与稀释液混合均匀，但不可用力振荡，以免细胞破碎。
（2）立即用毛细吸管吸取红细胞稀释血液，滴入已准备好的洁净细胞计数室内，放置片刻，待红细胞下沉。
（3）用低倍镜计数细胞计数室中央大方格四角的四个中方格和中央的一个中方格（共5个方格）内的红细胞总数，计数原则：划线上的血细胞，数上不数下，数左不数右。
红细胞数/mm3=5个中格红细胞数*稀释倍数（200倍）/计数的5个中格容积（0.02 mm3）
白细胞测定步骤
（1）用血红蛋白吸管取血液20uL，加入到盛有0.38ml白细胞稀释液的5ml离心管中，轻轻挤出血液并反复吸洗2～3次，然后将血液与稀释液混合均匀，但不可用力振荡，以免细胞破碎。
（2）立即用毛细吸管吸取白细胞稀释血液，滴入已准备好的洁净细胞计数室内，放置片刻，待白细胞下沉。
（3）用低倍镜计数细胞计数室四角的四个大方格内的白细胞总数，计数原则：划线上的血细胞，数上不数下，数左不数右。
白细胞数/mm3=4个大方格白细胞数*稀释倍数（20倍）/计数的4个大方格容积（0.4 mm3）
血清离心步骤
取盛有血液的小试管在4℃条件下静置2h后以5000r/min离心15min，再静置待其分层后吸取上层血清于-20℃下保存待测。
准备：每尾鱼需以下物品：1ml注射器一支、抗凝剂试管1个、红细胞稀释试管1个、白细胞稀释试管1个、血红蛋白试管1个、酶标板一块
血清谷丙转氨酶（GPT）测定方法
1、原理：作用于丙氨酸及α-酮戊二酸组成的基质，产生丙氨酸和谷氨酸。丙氨
酸与2，4-二硝基苯肼相作用，形成丙氨酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。
2、试剂：1、M/15磷酸盐缓冲液（Ph7.45）：将M/15磷酸氢二钠（Na2HPO4）
溶液82ml及M/15磷酸氢二钾（KH2PO4）溶液18ml，混合，贮存冰箱内备用。
2、丙酮酸钠标准液（1毫升=2微克分子）：准确称取已在干燥器内干燥至恒
重的丙酮酸钠11mg，置于50ml容量瓶内，加磷酸盐缓冲液稀释至刻度（此液不能久置，每次制作标准曲线时，宜当日新鲜配制）。
3、谷丙转氨酶基质液配制：称取分析纯α-酮戊二酸30mg，DL-丙氨酸
（dl-Alanine）1.78g。
将上述两项基质分别置于100ml容量瓶内，加入磷酸盐缓冲液（Ph7.45）约50ml，先行溶解，加入当量氢氧化钠0.5ml使全部溶解，校正Ph至7.45，最后以磷酸盐缓冲液稀释至刻度，分装于清洁小型旋口试剂瓶内（每瓶只能装瓶容量的三分之二，以免因冰冻导致瓶破裂），保存于冰盒内，使用时置37℃水温箱内使全部溶解，混匀后方可应用。
4、2，4-二硝基苯肼溶液：称取分析纯2，4-二硝基苯肼20mg，置于100ml
容量瓶内，加入蒸馏水约50ml及浓盐酸10ml，使全部溶解，最后以蒸馏水稀释至100ml。
5、0.4当量氢氧化钠溶液。
3、操作：
混合，放置37℃水温箱60分钟，对照管则不放水温箱
混合，放置37℃水温箱20分钟
混合后，放置10分钟，用520nm绿光板进行光电比色，记录各管光密度，
测定管减去对照管查标准曲线。
标准曲线的绘制
各管混合后，放于37℃水温箱20分钟
放置室温10分钟，用520nm滤光板光电比色，记录数据，绘制成标准线。
五日生化需氧量BOD5测定综合实验
生化需氧量（BOD5）测定综合实验 生活污水与工业废水中含有大量各类有机物。当其污染水域后，这些有机物在水体中分解时要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。水体因缺氧造成鱼类及其它水生生物的死亡。 水体中含有的有机物成分复杂，难以一一测定其成分。人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧，来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。 生化需氧量的经典测定方法，是稀释接种法。 测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。在0—4℃下进行保存。一般应在6小时内进行分析。若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时间不应超过24小时。 概述 1．方法原理 生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质、特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。此生物氧化全过程进行的时间很长，如在20℃培养时，完成此过程需100多天。目前国内外普遍规定于20±1℃培养5d，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升（mg/L）表示。 对某些地面水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。稀释的程度应使培养中所消耗的溶解氧大于2mg/L，而剩余溶解氧在1 mg/L以上。 为了保证水样稀释后有足够的溶解氧，稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气），以便稀释水中溶解氧接近饱和。稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质（磷酸盐、钙、镁和铁盐等），以保证微生物生长的需要。 对于不含或少含微生物的工业废水，其中包括酸性废水、碱性废水、高温废水或经过氯化处理的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在着难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。 本方法适用于测定BOD5大于或等于2mg/L，最大不超过6000 mg/L的水样。当水样BOD5大于6000 mg/L，会因稀释带来一定的误差。 仪器 （1）恒温培养箱（20℃±1℃） （2）5—20L细口玻璃瓶 （3）1000—2000ml量筒 （4）玻璃搅棒：棒的长度应比所用量筒高度长200mm。在棒的底端固定一个直径比量筒底小、并带有几个小孔的硬橡胶板。 （5）溶解氧瓶：250ml到300ml之间，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。 （6）虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。 试剂 1．磷酸盐缓冲溶液 将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4 ·7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000ml。此溶液的pH应为7.2。 2．硫酸镁溶液 将22.5g七水合硫酸镁（MgSO4 · 7H2O）溶于水中，稀释至1000ml。
围术期炎症细胞因子的监测
围术期炎症细胞因子的监测 围手术期是围绕手术的一个全过程，从病人决定接受手术治疗开始，到手术治疗直至 基本康复，包含手术前、手术中及手术后的一段时间，具体是指从确定手术治疗时起，直 到与这次手术有关的治疗基本结束为止，时间约在术前5- 7天至术后7 - 12天。 炎症反应一方面通过致炎因子直接损伤血管内皮，另一方面主要是通过一系列炎症介 质来实现；多数炎症介质通过与靶细胞结合发挥活性，炎症介质作用于细胞后可进一步引起 靶细胞释放次级炎症介质从而放大或抵消初级炎症介质的作用。不管机体遭受何种刺激， 宿主对炎症反应的总体特征非常相似，然而不同的损伤涉及不同类型的细胞，导致不同炎 症介质的产生和释放从而引起系统性和局部性损伤。通常术中的炎症反应与细胞因子的释放有关，细胞因子的作用又进一步加强了手术以及术中缺血再灌注损伤，如此恶性循环终将导致组织损伤而增加手术后临床相关并发症，影响患者的预后。 目前，手术方式以及麻醉方法、药物对恶性肿瘤术后免疫功能的影响逐渐受到重视。细 胞因子是机体免疫及炎症反应中细胞之间交流的信息分子，它们通过效应细胞表面相应的 受体对细胞生长、成熟和修复产生调控作用。创伤、应激、感染等是影响围术期病死率的 重要因素，与机体免疫状态密切相关。本文旨在总结各种炎症因子的特点、围术期使用不同药物和麻醉方式对炎症细胞因子的影响，提高患者围术期安全，从而改善患者的预后。 1. 炎症细胞因子 多达20%的肿瘤源自于慢性炎症，大部分的实体瘤都有炎性渗出物。免疫细胞对肿瘤 的发生、生长和进展有着广泛的影响，并且很多这些效应都是由促炎症细胞因子介导。在所有细胞因子中，TNF和IL-6具有促进肿瘤发生的效应，这一点是可以确定的。TNF和IL-6 作为肿瘤相关炎症和肿瘤形成的主要调节因子，使得它们在癌症的辅助治疗中成为很受欢迎 的研究目标。因此在围术期对患者进行炎症细胞因子的检测具有重要的临床意义。
八种常用生化实验步骤
实验一基因的PCR扩增技术 一、实验目的与原理简介 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。 常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。二、复性。降低温度使DNA单链分子同引物结合。温度为55℃，时间1min。三、延深。升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。 PCR反应包含的七种基本成分： 1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg. 2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。 3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。 4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。 5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。 6）一价阳离子：标准PCR缓冲液内含有50mmol/L的KCl，它对扩增大于500bp长度的DNA是有益的。 7）模板DNA：含有靶序列的模板DNA可以以单链或双链形式加入到PCR混合液中，闭环DNA的及增效率略低于线性DNA。 学习PCR反应的基本原理和基本技术。 了解引物设计的一般要求。 二、材料和试剂 10Х扩增缓冲液 4种dNTP贮存液（20mmol/L，PH 8.0） Tap DNA 聚合酶 5端引物（20μmol/L）及3端引物（20μmol/L） 模板DNA 琼脂糖凝胶 PCR仪（Bio-Rad公司）移液枪（0.5-10μL 5-50μL）枪头微量移液管 一、实验操作 1）按照以下次序，将各成分加到微量离子管内混合： 10Х扩增缓冲液2.5μl M g2+1.5μl 5端引物1μl
水中生化需氧量(BOD5)的测定
水中生化需氧量（BOD5 ）的测定 一、实验目的 1、学会测定B OD 5 的方法； 2、掌握实验数据的处理方法。 二、实验要求 1 、了解实验的目的； 2 、学会实验方法和会处理实验数据； 3 、实验之后，懂得其中所涉及的理论知识 三、实验原理 生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物进行的生物化学过程中所消耗溶解氧的量。此生物氧化全过程目前国内外普遍规定于 20 ±1 ℃培养 5 天，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为 B OD5 值，以氧的质量浓度（ m g /L ）表示。 生活污水与工业废水中含有大量各类有机物，这些有机物在水体中分解时需要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。水体因缺氧造成鱼类及其他水声生物的死亡。 水中所含的有机物成分复杂，难以一一测定其成分，人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。 生化需氧量的经典测定方法，是稀释接种法。化学测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。在0~4℃下进行保存，一般应在6 小时内进行分析。若需要远距离转运，贮存时间不应超过24 小时。 对于某些地面水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。稀释的程度应使培养中所消耗的溶解氧为2 m g /L ，而剩余溶解氧在1 m g/L 以上。为了保证水样稀释后，有足够的溶解氧，稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气）使稀释水中溶解氧接近饱和。稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质（磷酸盐、钙、镁和铁盐）以保证微生物生长的需要。 本方法适用于测定B OD 5大于或等于2 m g /L ，最大不超过6 00 0 m g /L 的水样。当水样 B OD5 大于60 00 m g /L 时，会因稀释带来一定的误差。 四、仪器 1. 恒温培养箱 2. 细口玻璃瓶 3. 大量筒 4. 玻璃搅拌棒，棒的长度应比所用量筒高度长2 00 m m。在棒的底端固定一个直径比底 小，并带有几个小孔的硬橡胶板； 5. 溶解氧瓶为 250~350 m L 之间，带有磨口玻璃塞并且有供水封用的钟形（每组 8 个）； 6. 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用（乳胶管即可）； 7. 酸式滴定管（ 50. 00m L 一个）； 8. 三角烧瓶（ 500m L 一个）； 9. 移液管（ 1 .0 0m L， 2. 00 m L， 100m L 各一个）。 10. 870 型直读B OD 5 测定仪 五、试剂 1. 磷酸盐缓冲溶液取8 .5 g 磷酸二氢钾、 21. 75 g 磷酸氢二钾、 33 .4 g 七水合磷酸氢二钠 和1. 7 g 氯化铵溶于水中，稀释至1 000 m L。此溶液的 pH=7. 2。
生化需氧量的测定(包括DO的测定)
生化需氧量的测定 张浩200812082 环工0803 大气组 一、实验目的及要求 1、了解BOD5测定的意义及掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能； 2、掌握保证准确测定的方法； 二、实验原理 生化需氧量（BOD5）是指在好氧条件下，微生物分解存在水中的有机物质的生物化学过程中所需的溶解氧量。 有机物在微生物的作用下，好氧分解过程两个阶段：第一阶段为含碳物质氧化阶段，主要是含碳有机物氧化为二氧化碳和水；第二阶段为硝化阶段，主要是含氮有机化合物在硝化细菌的作用下分解为亚硝酸盐和硝酸盐。一般硝化反应在5~7天后反应从会明显，故一般在20℃五天培养法测定的BOD值一般不包括硝化阶段。 五天培养法也成标准稀释法或稀释接种法。测定原理为;水样经稀释后，在20℃±1℃条件下培养五天，求出培养前后水样中溶解氧含量，二者的差值为BOD5，单位以的mg/L 表示。 五天培养法实验的必备条件：水体中存在能降解有机物的好氧微生物、有微生物生长所需的营养物质、有足够的溶解氧。 三、实验仪器 1）恒温培养箱[（20+1）℃]； 2）5~20L的细口玻璃瓶； 3）1000mL量筒； 4）玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板； 5）350mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口； 6）虹吸管，供分取水样和添加稀释水用； 四、实验药品 1）磷酸盐缓冲溶液：称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、2.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠（NaHPO4·7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶液的pH应为7.2； 2）硫酸镁溶液：称取22.5g硫酸镁（MgSO4·7H2O）,溶于水中，稀释至1000mL； 3）氯化钙溶液：称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀释至1000mL； 4）三氯化铁溶液：称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O），溶于水中，稀释至1000mL；5）稀释水：在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值应小于0.2mg/L； 6）接种稀释水：接种稀释水配制后应立即使用； 四、操作步骤 1）经稀释的水样的测定：COD的测定在使用重铬酸钾法确定时，通常需要三个稀释比，由COD值分别乘以0.075、0.15、0.225即由此获得三个稀释倍数；在使用接种稀释水时，应分别乘以0.075、0.15、0.225获得三个稀释倍数分别为0、40、80、120倍。本实验使用的稀释水的COD值为500mg/L； 2）根据确定的稀释倍数，用虹吸法把准备好的稀释水（接种稀释水）引入1000mL量筒
细胞内细胞因子的检测
细胞内细胞因子的检测 细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。研究显示，细胞因子可以具有多重功能，作用于多个细胞亚群并可在不同亚群细胞表达。早期细胞因子表达与T细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如Th1(IL-2，IFN-γ)与Th2(IL-4，IL-5，IL-10)，但这些研究很难推广，因为T细胞克隆与体内T细胞功能相关性还不清楚。 活化的T细胞可分泌多种细胞因子至细胞外，而流式细胞仪仅能检测细胞内的抗原，所以应阻断细胞因子分泌至细胞外，方法为破坏高尔基体，因细胞因子（即各种蛋白）在合成后需经高尔基体的加工和转运，才能到达细胞膜，然后通过高尔基体膜与细胞膜的融合作用将细胞因子分泌至细胞外。因此破坏高尔基体即可切断细胞因子的转运途径，干扰其分泌。近来，Jung与Picker采用了Brefeldin(BFA)与monensin等药物预孵检测胞内细胞因子的表达的方法。这一方法阻断了胞内高尔基体介导的转运使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。 胞内细胞因子染色与传统的检测可溶性蛋白的方法如ELISA相比，具有显著优越性。该法从单个细胞水平检测内多个细胞因子的同时，还可标记各种细胞表面分化抗原以及活化分子、趋化因子受体和黏附分子等，从而区分表达特定细胞因子的细胞亚群及其表型特征。使用特定刺激剂研究细胞因子应答是细胞因子研究中的重大进展。早在1986年，Mosmann等应用Th细胞克隆技术和细胞因子产生的不同，发现小鼠CD4细胞是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。后来在人类的CD4细胞群中也发现了Th1和Th2细胞亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α等，介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，参与细胞免疫及迟发型超敏反应，在抗胞内病原菌感染中发挥重要作用；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10，其主要功能是刺激B细胞增殖并产生抗体，与体液免疫有关。应用该方法，在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在1型与2型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被
生化实验
1．火 （1）酒精及其它可溶于水的液体着火时，可用水灭火 （2）汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉布或砂土扑灭，绝对不能用水，否则反而会扩大燃烧面积。 （3）电起火，不能用水和二氧化碳灭火器，应切断电源或用四氯化碳灭火器。 2．烧伤 （1）强碱烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的硼酸溶液和2%的乙酸溶液冲洗。 （2）强酸烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的碳酸氢钠或5%的氢氧化铵冲洗。 氨基酸的分离鉴定纸层析法 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层 析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的： 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大 小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量 和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨 基酸。 在操作过程中，手不要摸滤纸。 点样直径不超过3mm 。 点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样线1cm。 即时取出滤纸, 以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。 蛋白质及氨基酸的呈色反应 双缩脲反应 紫红色肽键可用于蛋白质的定性或定量测定一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。 茚三酮反应 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH 条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。 黄色反应 含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
生物化学
绪论 概念 生物化学：生物化学是―生命的化学‖，是研究生物体的化学组成和生命过程中化学变化规律的一门科学。 静态生物化学：研究组成生物体的各种基本物质的化学组成、结构、理化性质、生物功能及结构与功能的关系。 动态生物化学：研究物质代谢的体内动态过程及其调节。 功能生物化学：研究代谢反应与生理功能的关系。 生物化学研究的主要内容 1、生物体的物质组成、结构与功能 2、物质代谢与调控 3、遗传信息的传递与表达 第一章 概念 糖即碳水化合物：是多羟基醛或多羟基酮及其聚合物和衍生物的总称。 糖的主要生物学作用 1、糖是人和动物的主要能源物质 2、糖类具有结构功能 3、糖具有复杂的多方面生物活性与功能 糖的分类 单糖，寡糖，多糖 重要多糖的结构单位及其连接方式 淀粉的结构单位都是α-D-葡萄糖。 连接方式：直链淀粉以α-1,4糖苷键聚合而成，呈螺旋结构。支链淀粉除了α-1,4糖苷键构成糖链以外，在支点处存在α-1,6糖苷键。 糖原结构单位是α-D-葡萄糖，有α-1,4和α-1,6糖苷键 纤维素的结构单位是β-D-葡萄糖，均以β-1,4糖苷键相连。 几丁质结构单位是N-乙酰氨基葡萄糖，以β-1,4糖苷键连接。 肽聚糖多糖部分是由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸交替组成的杂多糖。 第二章 概念 脂类：脂肪和类脂的总称 脂肪酸是一条长的烃链（R-）和一个羧基（-COOH ）组成的羧酸。 必需脂肪酸：人体必需但自身又不能合成或合成量不足，必须从食物中摄取的脂肪酸。 脂类的生理功能 1、生物体内主要的贮能和供能物质 2、维持生物膜的结构和功能 3、促进脂溶性维生素的吸收 4、维持体温、保护脏器 5、转变成体内具有重要生理功能的类固醇物质 甘油三酯的结构及组成 由一分子甘油和三分子脂肪酸脱水缩合而形成的酯 几种重要甘油磷脂组成 胆碱 + 磷脂酸 → 磷脂酰胆碱，又称卵磷脂 乙醇胺 + 磷脂酸 → 磷脂酰乙醇胺，又称脑磷脂 丝氨酸 + 磷脂酸 → 磷脂酰丝氨酸（丝氨酸磷脂） 肌醇 + 磷脂酸 → 磷脂酰肌醇（肌醇磷脂） 缩醛磷脂：与一般甘油磷脂不同，他在甘油αC 位以与长链烯醇形成的醚键（脂性醛基）代替与脂肪酸形成的酯键。 磷脂酰甘油+2分子磷脂酸→二磷脂酰甘油（心磷脂） 第三章 概念 维生素是机体维持正常生理功能所必需，但在体内不能合成或合成量很少，必须由食物供给的一组低分子量有机物质。 微量元素是指人体每日的需要量在100mg 以下的元素，主要包括铁、碘、铜、锌、锰、硒、氟、钼、钴、铬等10种。 维生素的分类 脂溶性微生素：维生素A 、D 、E 、K 水溶性维生素：维C 和B 族维生素：维B1、B2、B6、B12、维生素PP 、泛酸、生物素、硫辛酸、叶酸。 维生素B2、维生素PP 、泛酸及叶酸在体内的活性型和生化作用 维生素B2 ：活性形式：黄素单核苷酸(FMN)，黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 生化：FMN 及FAD 是体内氧化还原酶的辅基，主要起氢传递体的作用。 维生素PP ：活性形式：NAD+，NADP+ 生化作用：NAD+及NADP+是体内多种脱氢酶的辅酶，起递氢递电子的作用。 泛酸：活性形式：辅酶A(CoA)、酰基载体蛋白(ACP) 生化作用：CoA 及ACP 是酰基转移酶的辅酶，参与酰基的转移作用。 叶酸：体内活性形式：四氢叶酸(FH4) 生化作用：四氢叶酸(FH4)是一碳单位转移酶的辅酶，起一碳单位传递体的作用。 C H 2CH C H 2O H OH OH
生化大实验实验报告
生化大实验 实验报告 姓名： 学号： 专业： 班级： 实验班级： 单位： 指导老师：
实验1 多酚氧化酶（PPO）的分离提取 一、实验原理： 多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌，它是植物组织广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体，可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节，属于末端氧化酶的一种。 植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外，多酚氧化酶也可以与细胞其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。 蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同，通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出，且大分子蛋白质不能通过透析膜。 二、实验目的： 通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关的仪器设备的正确使用的方法，以及蛋白质的提取分离的系统技术。 三、材料与试剂： 1.材料：马铃薯（两小组共称200g） 2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮）配制是配x10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵； 0.03M磷酸缓冲液pH 6.0（含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2） 3.设备：试管与试管架；烧杯、玻璃棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆机；pH计和pH试纸；高速冷冻离心机； 四、操作步骤： 1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块，加入300ml缓冲液A，两者按1:1(W/V)比例匀浆1min； 2.用两层纱布将所得的浆液过滤； 3.将匀浆滤液装入200ml的离心管10000rpm离心5min； 4.上清液两组平分，每组150ml，加36.45g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心5min； 5.取上清液定容至150ml，加入30.75g硫酸铵固体搅拌均匀后10000rpm离心8min，倒掉上清液得粗酶沉淀,用并加入10ml 0.03M磷酸缓冲液B复溶沉淀3-5min； 6.将所得溶液倒入透析袋中，用0.02M的KCl溶液透析至无硫酸铵根离子。 五、结果和分析： 实验所得的初酶液颜色为浅黄色，颜色浅，主要是实验过程中特别是匀浆以前速度较快酚类被氧化的少，从而最大程度的保留了PPO的活性；经过一个夜晚的透析，得到了澄清的略带黄色的液体，这样就为进一步的柱层析提供了优良材料。 六、讨论与结论： 1. 本实验在匀浆阶段应尽量快速，防止酚类充分暴露在空气中被氧化； 2．实验材料马铃薯在削皮前一定要清洗干净；
生化实验整理
1.氨基酸的分离鉴定——纸层析法 一、实验目的 ?了解层析技术的一般原理 ?掌握纸层析的方法和原理，学会分析未知样品的氨基酸成分 二、实验原理 层析法亦称色谱法，是利用混合物中各组分的物理、化学及生物学特性的差异，使各组分以不同程度分布在两个相中，即固定相和流动相，当流动相流过加有样品的固定相时，各组分所受固定相的阻滞作用和受流动相的推动作用的影响各不相同，从而使各组分以不同速度移动而达到分离的目的 固定相：是由层析基质组成的，可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在纤维素或硅胶上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用 流动相：是在层析过程中，推动固定相上待分离的物质向一定方向移动的液体、气体或超临界体。柱层析中一般称为洗脱液，薄层层析时称为展层剂 分配系数：是指在一定的条件下，某一组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比例，常用K来表示，它是层析中分离纯化物质的重要依据 迁移率：是指在一定条件下，某一组分在相同的时间内，在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，常用R f来表示 分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件，差异越大，分离效果越理想 层析根据不同的标准可以分为多种类型：如按固定相基质的形式不同可分为纸层析、薄层层析和柱层析；按流动相的形式不同可分为液相层析、气相层析和超临界层析；按分离的原理不同可分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等 纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速度用R f值表示： 在一定条件下，某种物质的R f值是常数。R f值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关 氨基酸显色反应——茚三酮反应原理： 质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质 一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质
生化实验五大技术
生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:
可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球
《生物化学》实验指导(8个实验)
生物化学实验指导 吕杰编著 新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室
内容介绍 《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目录 实验一氨基酸纸层析 (4) 实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸 (5) 实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度 (7) 实验四酪蛋白的制备 (8) 实验五葡萄糖标准曲线的绘制 (10) 实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定 (12) 实验七酵母RNA的分离及组分鉴定 (14) 实验八维生素C的定量测定 (16)
实验一氨基酸纸层析 一、实验目的 1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。 二、实验原理 纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。缺点是展开时间较长。 分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。 在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。 三、实验材料、仪器和试剂： 1、实验材料：标准氨基酸溶液 2、仪器: 层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。 3、试剂： （1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。 （2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀； （3）0. 1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮1—5克，丙酮100毫升 四、实验步骤： 纸层析 (1) 取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm 处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm 画一个“+”作为点样位置，共5个点。 (2) 点样：用毛细管点样，其中2个点用毛细管点上氨基酸的标准溶液；中间间隔一点，另2点点上未知氨基酸的溶液。每个点样点重复点5次，每点一次用电吹风吹干后再点下次，点样点的直径应控制在2mm左右，点样完毕用大头针将滤纸做成筒形，点样面向外，注意纸的两边不要接触。 (3) 展层：向层析缸中加入层析溶剂，液层不要超过点样线（高约1.5cm，约50－60ml 溶剂），将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶剂到达标志线后取出，吹干。 (4)显色：用喷雾器将茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上，吹风机热风吹干显色。 五.结果分析： (1)用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来； (2) 测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算各种氨基酸色谱的Rf 值。 Rf=组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离 =原点至组分斑点中心的距离/原点致溶剂前沿的距离 六、思考题： 1、何谓分配层析法和分配系数？
生物化学试题及答案(5)
第五章脂类代谢 【测试题】 一、名词解释 1.脂肪动员 2.脂酸的β-氧化 3.酮体 4.必需脂肪酸 5.血脂 6.血浆脂蛋白 7.高脂蛋白血症 8.载脂蛋白 9.LDL-受体代谢途径10.酰基载体蛋白（ACP）11.脂肪肝12.脂解激素13.抗脂解激素14.磷脂15.基本脂 16.可变脂17.脂蛋白脂肪酶18.卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（LCAT）19.丙酮酸柠檬酸循环20.胆汁酸 二、填空题 21.血脂的运输形式是，电泳法可将其为、、、四种。 22.空腹血浆中含量最多的脂蛋白是，其主要作用是。 23.合成胆固醇的原料是，递氢体是，限速酶是，胆固醇在体内可转化为、、。 24.乙酰CoA的去路有、、、。 25.脂肪动员的限速酶是。此酶受多种激素控制，促进脂肪动员的激素称， 抑制脂肪动员的激素称。 26.脂肪酰CoA的β-氧化经过、、和四个连续反应步骤，每次β-氧化生成一分子和比原来少两个碳原子的脂酰CoA，脱下的氢由和携带，进入呼吸链被氧化生成水。 27.酮体包括、、。酮体主要在以为原料合成，并在被氧化利用。 28.肝脏不能利用酮体，是因为缺乏和酶。 29.脂肪酸合成的主要原料是，递氢体是，它们都主要来源于。 30.脂肪酸合成酶系主要存在于，内的乙酰CoA需经循环转运至而用 于合成脂肪酸。 31.脂肪酸合成的限速酶是，其辅助因子是。 32.在磷脂合成过程中，胆碱可由食物提供，亦可由及在体内合成，胆碱及乙醇胺由活化的及提供。 33.脂蛋白CM 、VLDL、LDL和HDL的主要功能分别是、，和。 34.载脂蛋白的主要功能是、、。 35.人体含量最多的鞘磷脂是，由、及所构成。
生物化学过程的调控
第八章 生物化学过程的调控 1、生物化学过程的调控有哪几种形式？ 答：主要有信号分子为基础的调控、基因水平的调控、蛋白质水平的调控和酶水平的调控这四种形式。 2、生物调控中的化学信号包括哪些类型？ 答：细胞间通讯的信号分子包括激素、神经递质、细胞生长因子（如神经生长因子、趋化因子）以及气体信号分子。此外，还有抗体及淋巴因子。 细胞内通讯的信号分子主要包括环腺苷酸（cAMP）、环鸟苷酸（cGMP）、Ca2+、肌醇三磷酸（IP3）、甘油二脂（DAG）、花生四烯酸、质子（H+）等。 3、激素调控有哪些特点？ 答：激素调控主要有以下特点： （1）低浓度：激素在血流中的浓度会被稀释到10-8-10-10 mol/L。 （2）高特异性：激素只有被特定的受体细胞接受才能发挥作用。 （3）长效性：激素产生后需要漫长的运输过程才能达到受体细胞而起作用。因此，血流中的激素一般能维持存在较长时间。 4、说明甲状腺素、胰岛素、肾上腺皮质激素、前列腺素的结构和功能。 答：（1）甲状腺素属于氨基酸衍生物激素，具体结构见课本370页。其生理功能：①主要是促进糖、脂及蛋白质的代谢；②促进机体的生长发育和组织分化；③对中枢神经系统、循环系统、造血过程、肌肉活动及智力和体质的发育等均有显著作用。 （2）胰岛素属于蛋白质及多肽激素，具体结构见课本81页。其生理功能：主要是促进细胞摄取葡萄糖；促进肝糖原和肌糖原的合成；抑制肝糖原的分解。胰岛素具有抑制细胞内腺苷酸环化酶活性作用，使cAMP产生显著减少，导致糖原分解速度减慢。胰岛素的生理功能与肾上腺素的作用相反。 （3）肾上腺皮质激素属于类固醇激素，具体结构见课本377页。主要分为糖皮质激素和盐皮质激素两类，其中糖皮质激素的作用是抑制糖的氧化代谢，使血糖升高，并能促进蛋白质转化为糖；盐皮质激素的作用是使体内保留钠离子及排出多余的钾离子，调节水盐代谢。 （4）前列腺素属于脂肪酸衍生物激素，具体结构见课本381页。其对生殖、心
细胞因子检测
细胞因子检测 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,?在抵抗外来病原及维持机体环境平衡中均起重要作用。某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病的发病及病理过程。 1、免疫学检测法其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。?如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。 2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)?的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。 3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。 . .
一、IL-1的检测(生物活性测定) 产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。IL-1可分为IL-1α(?也称酸性IL-1,pI=5.0)和IL-1β(中性IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,?只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IL-1?的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或125I-UdR的DNA掺入量或以活性细胞代率为指标来表示。本试验介绍L929细胞增殖MTT比色法。 （一）IL-1的诱生 体外试验可用LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用 P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备IL-1。本试验以小鼠巨噬细胞制备IL-1。 1、取6～10周龄BALB/c或C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。 2、用带9号针头的5ml注射器腹腔注入5ml冷的含5％小牛血清的Hanks液(5?％?NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(含腹腔细胞),反复抽吸几次。 . .
生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁 （一）玻璃仪器的洗涤及干燥 1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。 2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。 在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。 重铬酸钾（ｇ）100 60 100 水（ｍｌ）750 300 200 粗硫酸（ｍｌ）250 460 800 清洁性能较弱较强（常用）最强 配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。 （2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。 （3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。 （4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。 （5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。 玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。一般地说洗净后的玻璃仪器，如不急用应倒放在晾架上令其自然干燥。若有急用可放在烘烤箱中烤干，但容量玻璃仪器，如容量瓶、吸量管、滴定管以及烧结、结构复杂的玻璃仪器等，严禁烘烤。此类仪器，如急用可采用水泵抽气法干燥。 （二）常用玻璃仪器的使用 1、吸量管：吸量管是用来测量一定容积的液体，并把它从一个器皿转移至另一个器皿中的量器。常用的吸量管有以下几种： （1）刻度吸量管：刻度吸量管是多刻度吸量管，有0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0毫升等规格。吸量管刻度所标的数字有自上而下和自下而上两种，使用之前应仔细分辨。实验室所用之刻度吸管多属于刻度到尖端的吸管，所以要吹出尖端留存的液体。 （2）奥氏吸管：在量取粘度较大的液体如血液、血清等时，应当使用奥氏吸管。这种吸管也是单标的，并且在其下端有一个膨大部分。所以液体与吸管表面接触面积较小，当量取血液时，较他种吸管准确。奥氏吸管的容量包括遗留在尖端的液体，故在缓缓使液体流出后，再停留数秒钟，吹出最后一滴。在学生实验中常用的有1、2、5毫升等规格。
水五日生化需氧量(BOD5)的测定
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定 1 目的 1.1 理解BOD的含义及测定条件； 1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。 2 方法原理 生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。 对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。 某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。 一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。 3 适用范围 BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。 4 主要仪器及设备 使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。玻璃器皿干燥后方能使用。 常用实验室设备如下： 4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。 4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。 4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。