蛋白酶活力测定方法

酸性蛋白酶产品概述:

蛋白质由氨基酸组成，是自然界中发现的最复杂的有机化合物之一。由盐酸和蛋白酶分解成易被高等动物的肠道和微生物有机体的细胞膜吸收的氨基酸。包括人类在内的每种动物，必须要有足够的蛋白质来维持自身生长，来生成每个细胞所必需的氨基酸，一些特种蛋白质还是某些特殊细胞、腺体分泌物、酶和激素的功能性组成元素。蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用，在食品和乳品加工业也有着广泛应用。工作机理

蛋白水解酶制剂本产品能在酸性条件下水解蛋白质食品中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽。在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒、黄油和酱油生产中，添加酸性蛋白酶可澄清发酵液中的雾气。酵母在发酵阶段的生长可以通过悬浮蛋白质转化的氨基酸来加以促进，从而加速发酵并提高产量。本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌深层发酵而成。它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。

酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有较低的最适pH，而不是指酸性基团存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最适PH从2左右（胃蛋白酶）到4左右。从酶的活力-PH曲线分析，在酶的活性部位中含有一个或更多的羟基。这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。（酸性蛋白酶537容易失活）

简介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。

1、产品规格：，规格有5万u/g～10万u/g

液体型为黑褐色液体，规格有50000u/ml～10000u/ml.

2、酶活力定义：一个酶活力单位是1g酶粉或1ml酶液在40℃，PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位（u/g或u/ml）

特性1、温度范围为：最适温度范围为40℃-50℃2、PH为：最适PH范围为2.5～3.5

使用方法

1、白酒工业：

本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。

2、食品工业：

食品上用以淀粉改良，提高食品风味、改良品质，因能提高氨基酸含量

3、啤酒生产：

能有效阻断双乙酰生成，缩短啤酒成熟期。

4 饲料添加剂：提高饲料利用率。

5、毛皮软化：

提高上色率，手感丰满，增加毛皮光泽。

推荐实验的初始添加量从醪液的百万分之一开始。推荐使用：先将酸性蛋白酶按1：20溶于35-40

℃温水中，浸泡活化1小时，期间每15分钟搅拌一次。

注意事项

1、此产品可完全溶于水，使用安全可靠。操作时请勿直接与酶制剂接触，若有接触需及时用清水冲洗。

2、原包装打开后尽快使用，剩余部分需扎口保存。

3、本品在贮运中要避免雨淋和曝晒，禁止与有毒有害物质混运、混存。

枯草杆菌蛋白酶是碱性蛋白酶。a淀粉酶中性蛋白酶.胃蛋白酶才是酸性蛋白酶.

酸性蛋白酶活力测定方法

蛋白酶活力测定: 参照中华人民共和国专业标准SB/ T10317-1999蛋白酶活力测定方法2007

纤维素酶DNS酶活力测定方法

DNS, 活力, 纤维素酶, 测定

1 定义

1g固体酶粉在40℃和pH值4.2条件下，每分钟水解纤维素生成1微克葡萄糖的量为1个酶活力单位，以u/g表示。

2 原理

纤维素酶分解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将3，5二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量，表示酶的活力。

3.试剂和溶液

3.1 1％葡萄糖标准溶液（同β－葡聚糖酶酶活测定）

3.2 羧甲基纤维素钠(CMC)溶液

取1g羧甲基纤维素钠（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液(甲液414ml和乙液586ml并用pH计校正至pH 为4.2)混合均匀,水浴加热至溶,冷却后用2M盐酸或氢氧化钠调节pH 到4.2,定溶至100ml,再用二层纱布过滤，此溶液在4

℃冰箱贮存，有效期3天。取滤液100ml，20ml，蒸馏水40ml，混匀，贮冰箱备用。

3.3 DNS 试剂（同β－葡聚糖酶酶活测定）4仪器和设备

4.1恒温水浴锅(40℃±0.2℃)

4.2分光光度计

含10mm比色皿，可在550nm处测量吸光度。

5测定步骤

5.1 标准曲线绘制

分别吸取1%葡萄糖标准溶液0、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml 于50ml容量瓶中，用蒸馏水制成每ml分别含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀标准液。各取不同浓度的稀标准液0.5ml 于试管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS试剂3.0ml，于沸水浴中沸腾7min，取出后立即加入蒸馏水10ml混匀。冷却后，用10mm比色皿，在波长550nm处用分光光度计分别测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，相对应的葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。

5.2待测酶液的制备（同β－葡聚糖酶酶活测定）

5.3 比色测定

精确吸取经待测稀释酶液0.5ml，40

℃预热5min，加入经40℃预热的CMC液1.5ml（每个样品同时作3支平行试管），于40℃水浴精确反应10min，立即加入DNS试剂3.0ml 终止反应，以后按标准曲线制作步骤测定样品吸光度。

同时进行空白对照测定，取稀释酶液0.5ml，先加入DNS试剂3.0ml，再加入CMC液1.5ml，其余步骤同于样品测定。

6.计算

酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用

酸性蛋白酶能在酸性环境中水解蛋白质，广泛用于制革工业、医药业、酿造业和饲料工业。酸性蛋白酶作为一种新型的饲料添加剂，可以明显促进幼龄动物的生长发育，降低断奶带来的应激效应，饲用效果非常显著，是一类应用前景非常广阔的酶制剂。本文对酸性蛋白酶的酶学特性及其在畜牧业中的应用研究进展进行了综述。

酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用酸性蛋白酶包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶，适宜在酸性条件下水解蛋白质。酸性蛋白酶用作动物饲料添加剂，可提高动物&特别是幼龄动物)对饲料中蛋白成分的消化吸收率，促进其生长。此外，它还用于制革工业中皮革的脱毛和软化，食品工业中蛋白质的水解生产高档食品，医药工业中消化剂和消炎剂的制造等。近年来，随着集约化畜禽生产的发展，加剧了环境污染。其中，氮是污染环境的主要物质，因而提高饲料中蛋白类营养物质的利用效率，降低其排放就显得尤为重要。此外，由于我国蛋白质饲料资源严重缺乏，需要寻求非常规蛋白资源，而动物对非常规蛋白饲料的利用效率很低。研究表明在饲料中添加酸性蛋白酶