病原生物学跟免疫学实验资料
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病原生物学与免疫学实验
病原生物学与免 疫学教研室
2004年2月
病原生物学与免疫学实验室规则
微生物学实验室是进行微生物培养鉴 定及试验的场所，是一个微生物高度 集中的区域，为了防止微生物感染人 体及扩散，保证安全及每次实验结果 的准确性，要求同学遵守下列规则：
一般注意事项
进实验室穿上实习衣，离室时脱下，要反 折，并经常进清洗。
第一周
实验内容
普通光学显微镜的使用 细菌基本形态和特殊结构的观察 细菌标本染色检查法
（革兰氏染色法） 细菌动力检查法 （悬滴法、压滴法）
目的要求
了解细菌的基本形态及其特殊结构。 基本掌握显微镜的使用和保养。 掌握接种环的使用及菌液的采取法。 掌握细菌涂片的制备及革兰氏染色方
1.细菌的三种基本形态（示教）
球菌：链球菌、葡萄球菌。 杆菌：大肠杆菌。 螺形菌：霍乱弧菌。 上述示教镜各一台/每室
细菌的三种基本形态示意图 ⊕
葡萄球菌：
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
链球菌 链球菌（显微镜下示意图）
离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组 分结合。
细菌染色法:
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
负染色
简单染色
制备涂片标本→染色
镜检
水洗、吸干 染色1min
（一）细菌涂片的制备
一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。பைடு நூலகம்
涂片
干燥
固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
多种标本涂片标记示意图
如多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格， 并于玻片的背面，标明标本的编号。
正面
反面
㈡革兰氏染色法（Gram Stain）
初染：滴加结晶紫染液于涂片上，染1分钟，水 洗，甩干。
芽孢 菌体 （营养细胞）
鞭毛
荚膜的观察：
特殊染色
负染色
三、细菌标本染色检查法
常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不 同可分为以下类型：
碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳
离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组 分结合。
酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴
杆菌(bacillus)
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌
弧菌
2.细菌的特殊结构观察（示教）
芽胞示教片：破伤风杆菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。 上述示教镜各一台/每室
产芽芽孢胞细菌的种类
【革兰氏染色法的原理 】
有三种学说。
1.等电点学说：革兰氏阳性细菌的等电 点（pH 2～3）比阴性菌（pH4～5） 为低，—般染色时溶液的酸碱度约在 pH 7左右，电离后阳性菌带有的阴电 荷比阴性菌多。因此，摄取的碱性染 料亦较多，不易脱色。
2.通透性学说：
革兰氏阳性菌细胞膜的通透性比阴 性菌低，进入细胞的染料和碘液结 合生成沉淀，脱色剂较易通过革兰 氏阴性菌的细胞膜，将碘和染料的 复合物溶解洗出，故易脱色；阳性 菌细胞膜透通性低，故不易脱色。
法。 熟悉细菌动力检查法。
一、普通光学显微镜的使用
显微镜的构造图 显微镜的使用方法 油镜头的辨认 显微镜的维护
油镜加香柏油的原理
玻璃折射率：
n=1.52
香柏油折射率：
n=1.515
二、细菌基本形态和特殊结构的观察
使用显微镜的油镜观察各示教片，比 较各菌的形态、大小、排列等；注意 芽胞在菌体上的位置、大小；鞭毛形 态、数最及其位置；荚膜的大小及其 与菌体的关系，将观察结果画在实验 报告上。
媒染：加卢戈氏碘液，1分钟后水洗，甩干。 脱色：加95％酒精数滴于涂片上，频频摇3～5秒
后，斜持玻片，使酒精流去，再加酒精。如此重 复2～3次，直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时 为止（约30秒钟）。水洗，甩干。 复染：以稀释石炭酸复红染液复染1分钟后，水 洗，待干或用吸水纸印干，油镜镜检。
离开实验室前，应在消毒液中将手浸泡 5～10分钟，再用清水洗净。
发生意外事故的处理
皮肤破伤：用生理盐水洗净后，涂以2％红 汞或2％碘酒。
烧伤：涂以凡士林油，5％鞣酸或2％苦味 酸。
化学药品腐蚀伤：若为强酸，先用大量清 水冲洗，再以5％碳酸氢钠或5％氢氧化铵 溶液中和之；强碱腐蚀则先以大量清水冲 洗后，再以5％醋酸或5％硼酸洗涤中和。
革兰氏染色法
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
【操作步骤】
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
复红复染
【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰氏阴性菌；
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
【意义】
鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。 了解致病性 指导选择用药
吸入病原菌菌液：应立即吐人容器内消毒， 并用1∶1000高锰酸钾溶液或3％双氧水漱 口。
菌液流洒桌面，倾倒适量消毒液于污染面 浸泡半小时后抹去，再以清水擦洗干净。
严防火灾：试验完毕立即关闭电闸，煤气 阀门，如系酒精，乙醚、汽油等火种，切忌用
水，可撒泼大量沙土等扑灭火苗。
实验一 细菌的形态学
书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、 实验指导，笔记等带入后，也要远离操作 部位。
实验室内要保持安静，有秩序，不得高声 谈笑，或随便走动以免影响他人实验。
实验室内禁止饮食、吸烟和用嘴湿润铅笔 或标签等，也不要以手抚摸头部等部位。
做练习要保持无菌操作操作。以防止临床 标本及纯培养物的污染，
吸过菌液的吸管、毛细吸管，要投入含有 2～3％来苏儿或0.1％新洁而灭液的玻璃 筒中，其它带菌材料放在指定地点，以防 止微生物污染环境。
若发生吸入菌液，割破手指等事故，应立 即报告老师，进行预防处理。
爱护公物，节约使用实验材料、器材，如 损坏公物，应立即向指导教师报告，登记 处理。
实验完毕，应及时清理实验室，做好卫生， 关好门、窗、水笼头、电灯。
病原生物学与免 疫学教研室
2004年2月
病原生物学与免疫学实验室规则
微生物学实验室是进行微生物培养鉴 定及试验的场所，是一个微生物高度 集中的区域，为了防止微生物感染人 体及扩散，保证安全及每次实验结果 的准确性，要求同学遵守下列规则：
一般注意事项
进实验室穿上实习衣，离室时脱下，要反 折，并经常进清洗。
第一周
实验内容
普通光学显微镜的使用 细菌基本形态和特殊结构的观察 细菌标本染色检查法
（革兰氏染色法） 细菌动力检查法 （悬滴法、压滴法）
目的要求
了解细菌的基本形态及其特殊结构。 基本掌握显微镜的使用和保养。 掌握接种环的使用及菌液的采取法。 掌握细菌涂片的制备及革兰氏染色方
1.细菌的三种基本形态（示教）
球菌：链球菌、葡萄球菌。 杆菌：大肠杆菌。 螺形菌：霍乱弧菌。 上述示教镜各一台/每室
细菌的三种基本形态示意图 ⊕
葡萄球菌：
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
链球菌 链球菌（显微镜下示意图）
离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组 分结合。
细菌染色法:
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
负染色
简单染色
制备涂片标本→染色
镜检
水洗、吸干 染色1min
（一）细菌涂片的制备
一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。பைடு நூலகம்
涂片
干燥
固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
多种标本涂片标记示意图
如多种标本，可用蜡笔在玻片上划为数格， 并于玻片的背面，标明标本的编号。
正面
反面
㈡革兰氏染色法（Gram Stain）
初染：滴加结晶紫染液于涂片上，染1分钟，水 洗，甩干。
芽孢 菌体 （营养细胞）
鞭毛
荚膜的观察：
特殊染色
负染色
三、细菌标本染色检查法
常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不 同可分为以下类型：
碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳
离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组 分结合。
酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴
杆菌(bacillus)
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌
弧菌
2.细菌的特殊结构观察（示教）
芽胞示教片：破伤风杆菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。 上述示教镜各一台/每室
产芽芽孢胞细菌的种类
【革兰氏染色法的原理 】
有三种学说。
1.等电点学说：革兰氏阳性细菌的等电 点（pH 2～3）比阴性菌（pH4～5） 为低，—般染色时溶液的酸碱度约在 pH 7左右，电离后阳性菌带有的阴电 荷比阴性菌多。因此，摄取的碱性染 料亦较多，不易脱色。
2.通透性学说：
革兰氏阳性菌细胞膜的通透性比阴 性菌低，进入细胞的染料和碘液结 合生成沉淀，脱色剂较易通过革兰 氏阴性菌的细胞膜，将碘和染料的 复合物溶解洗出，故易脱色；阳性 菌细胞膜透通性低，故不易脱色。
法。 熟悉细菌动力检查法。
一、普通光学显微镜的使用
显微镜的构造图 显微镜的使用方法 油镜头的辨认 显微镜的维护
油镜加香柏油的原理
玻璃折射率：
n=1.52
香柏油折射率：
n=1.515
二、细菌基本形态和特殊结构的观察
使用显微镜的油镜观察各示教片，比 较各菌的形态、大小、排列等；注意 芽胞在菌体上的位置、大小；鞭毛形 态、数最及其位置；荚膜的大小及其 与菌体的关系，将观察结果画在实验 报告上。
媒染：加卢戈氏碘液，1分钟后水洗，甩干。 脱色：加95％酒精数滴于涂片上，频频摇3～5秒
后，斜持玻片，使酒精流去，再加酒精。如此重 复2～3次，直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时 为止（约30秒钟）。水洗，甩干。 复染：以稀释石炭酸复红染液复染1分钟后，水 洗，待干或用吸水纸印干，油镜镜检。
离开实验室前，应在消毒液中将手浸泡 5～10分钟，再用清水洗净。
发生意外事故的处理
皮肤破伤：用生理盐水洗净后，涂以2％红 汞或2％碘酒。
烧伤：涂以凡士林油，5％鞣酸或2％苦味 酸。
化学药品腐蚀伤：若为强酸，先用大量清 水冲洗，再以5％碳酸氢钠或5％氢氧化铵 溶液中和之；强碱腐蚀则先以大量清水冲 洗后，再以5％醋酸或5％硼酸洗涤中和。
革兰氏染色法
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
【操作步骤】
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
复红复染
【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰氏阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰氏阴性菌；
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
【意义】
鉴别细菌，用本法染色可将细菌分成两大类。 了解致病性 指导选择用药
吸入病原菌菌液：应立即吐人容器内消毒， 并用1∶1000高锰酸钾溶液或3％双氧水漱 口。
菌液流洒桌面，倾倒适量消毒液于污染面 浸泡半小时后抹去，再以清水擦洗干净。
严防火灾：试验完毕立即关闭电闸，煤气 阀门，如系酒精，乙醚、汽油等火种，切忌用
水，可撒泼大量沙土等扑灭火苗。
实验一 细菌的形态学
书包、衣物等勿带入实验室，必要的文具、 实验指导，笔记等带入后，也要远离操作 部位。
实验室内要保持安静，有秩序，不得高声 谈笑，或随便走动以免影响他人实验。
实验室内禁止饮食、吸烟和用嘴湿润铅笔 或标签等，也不要以手抚摸头部等部位。
做练习要保持无菌操作操作。以防止临床 标本及纯培养物的污染，
吸过菌液的吸管、毛细吸管，要投入含有 2～3％来苏儿或0.1％新洁而灭液的玻璃 筒中，其它带菌材料放在指定地点，以防 止微生物污染环境。
若发生吸入菌液，割破手指等事故，应立 即报告老师，进行预防处理。
爱护公物，节约使用实验材料、器材，如 损坏公物，应立即向指导教师报告，登记 处理。
实验完毕，应及时清理实验室，做好卫生， 关好门、窗、水笼头、电灯。