外泌体研究概述Exosome

案例3
Circular RNA expression alteration in exosomes from the brain extracellular space after traumatic brain injury in mice, Journal of Neurotrauma(2018)
外泌体研究概述
exosome
| 1. 外泌体概述 | 2. 外泌体分离方法 | 3. 外泌体检测方法 | 4. 外泌体常用数据库
外泌体是细胞向胞外分泌的囊泡类小体，具有脂质双层膜结构， 可存在于细胞培养上清液、血浆、血清、唾液、尿液、羊水和恶 性腹水以及其它生物体液中。
外泌体携带特异性的蛋白质、脂质以及功能性的 mRNA、 ncRNA等生物活性物质，在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促 血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程，与多种疾病的发生和进程密 切相关。由于外泌体的特殊结构和功能， 使得它具有潜在的应用 价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可 以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。
（3）分子筛层析：
Sepharose 2B or CL-4B，外加超速离心
Specific Isolation of Placenta‐Derived Exosomes from the Circulation of Pregnant Women and Their Immunoregulatory Consequences. American Journal of Reproductive Immunology (2006).
密度梯度超速离心：
蔗糖、碘克沙醇 1.15-1.19 g / mL
案例1
Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity, Cell (2017)
细胞实验一般方案
1. 外泌体概述
2. 外泌体分离方法
（1）超速离心：
2000 g for 20 min to eliminate dead cells; 10,000 g for 30 min to remove debris; filtrated though 0.22 μm filter; 100,000 g for 70 min.
HTTP://WWW.EXORBASE.ORG/
EXOCARTA
HTTP://WWW.EXOCARTA.ORG/
VESICLEPEDIA
HTTP://WWW.MICROVESICLES.ORG/
EVPEDIA
HTTP://STUDENT4.POSTECH.AC.KR/EVPEDIA2_XE/XE/
（4）共沉淀
(美国ExoQuick )
（5）免疫沉淀
外泌体不同分离方法比较
2. 外泌体检测方法
• 电镜
• 颗粒跟踪分析（particle tracking analysis）
• Western Blot
• ELISA
乙酰胆碱酯酶(AchE)
• 流式细胞仪
外泌体RNA分析
4. 外泌体常用数据库
Biblioteka Baidu
（2）超滤：
Vivaspin 20，100 kDa MWCO （GE Life sciences）
Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers. Kidney international(2012).
案例2
Exosome-Mediated miR-155 Transfer from Smooth Muscle Cells to Endothelial Cells Induces Endothelial Injury and Promotes Atherosclerosis, Molecular Therapy (2017)