吴茱萸炮制前后挥发油成分及毒性的比较研究
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º Inst itute o fM edic inal P lan t Developm en,t Ch inese A cadem y of M ed ica l Sciences, Be ijing 100193, Ch ina
[ Ab strac t] Ob jective T o analyze the com position and tox icity changes of the essential o il o fE vodia rutaecarpa ( Juss. ) Benth. to help mi prove the principle o f the processing m ethod. M ethodsT he essentia l oil was extracted by w ater-steam distillation and identified by GC-MS. T he acute tox icity of essential o il of crude and processed Evod ia w as compared on m ice in accordance w ith classical test methods for acute tox icity, and expermi ental data w ere calculated w ith B liss m ethod. ResultsT he content of oil in crude and processed Evod ia was 0. 75% and 0. 65% , respectively. 57 peaks w ere detected in both samples. T he m ain components w ere myrcene, B-phe llandrene, ocmi ene, B-elem ene, B- caryophy llene, The relative content of three ma jor com ponents disappeared while another three com ponents emerged after processing. The LD50 of essential oil in crude Evod ia was 2. 82 m l /kg. T he 95% confidence interval w as 2. 48-3. 21 m l/kg. The LD50 of essential o il in processed productsw as 2. 91m l/ kg and 95% confidence intervalw as 2. 49-3. 41 m l /kg. Conclusion T he content of essent ia l o il in processed Evodia decreased by 13. 33% w hile LD50 value increased by 19. 15% . The lower tox icity is related to the changes in the components and content o f essential oi.l
2 挥发油 GC-M S成分分析
2. 1 挥发油的制备 分别取生吴茱萸和制吴茱萸, 按 2010年版 5中国药典 6一部附录 XD方法提取挥 发油, 用无水硫酸钠干燥后得淡黄色挥发油, 挥发油 收率见表 1。
表 1 生吴茱萸 和制吴茱萸中挥发油收率的比较 ( n = 6)
品种 生吴茱萸 制吴茱萸
挥发油收率 (% ) 0. 75 0. 65
解放军药学学报 2011 年 6 月 20日 第 27 卷 第 3期 Pharm J C hin PLA, Vol. 27, N o. 3, Jun 20, 2011
# 229#
吴茱萸炮制前后挥发油成分及毒性的比较研究
张晓凤¹ , 高南南º , 刘红玉¹ , 杜 红 ¹ , 杨 蕾¹ , 李 飞¹
[ 摘 要 ] 目的 分析吴茱萸炮制前后挥发油含 量、组分及毒性的变化, 为阐明吴茱萸炮制减毒 机理提供 科学依据。方
生、制品挥发油中的主要成分相对含量有变化。吴茱萸生品挥发油
LD
为
50
2.
82 m
l/ kg,
95% 可信限
2.
48 ~
3.
21 m l/kg; 制品挥
发油 LD50为 2. 91 m l/kg, 95% 可信限 2. 49~ 3. 41 m l/kg。结 论 吴 茱萸 炮 制后 Fra Baidu bibliotek 发油 含量 降 低了 13. 33% , LD50 值升 高了
挥发油是吴茱 萸中的有效成分 , [ 2-4] 亦具有 一定毒 性 [ 5] 。以往对吴茱萸挥发油 成分研究结果 不尽相 同, 张韬等 [ 6] 研究显示甘草制吴茱萸挥发油与生品 相比, 新产生了 13个化合物, 减少 3个化合物, 炮制 后吴茱萸挥发油 组分变化明显。雷培海等 [ 7] 认为 吴茱萸生、制品中挥发油的相对含量有差异, 但是化 学组成没有差异, 没有出现新的化合物, 炮制后不会 产生质的变化。本研究通过测定吴茱萸炮制前后挥 发油的含量和成分组成, 并结合急性毒性实验, 分析 炮制对吴茱萸挥发油含量、组分和毒性的影响, 为阐 明吴茱萸炮制降毒机理提供科学依据。
基金项目: 国家 973 计划中医基 础理论专 项, 确有疗 效的有毒 中药 科学应用关键问题的基础研究, N o. 2009CB522800; 有毒中药炮 制减 毒原理和方法学研究, N o. 2009CB522805 作者简介: 张晓凤, 硕士。研究方向: 中药炮制降毒机理 研究。 Te:l ( 010 ) 84739400 作者单位: ¹ 100102 北京, 北京中医药大学; º 100193 北京, 中 国医学科学院药用植物研究所 通讯作者: 李 飞, Te:l ( 010) 84738660; E-m ai:l lf668@ sin a. com
19. 15% , 毒性的降低与挥发油组分及含量的变化具有一定的关系。
[ 关键词 ] 吴茱萸; 炮制; 挥发油; GC-M S; 急性毒性
[ 中图分类号 ] R 927. 2; R965. 3
[文献标志码 ] A
[文章编号 ] 1008-9926( 2011) 03-0229-04
[ DO I] 10. 3969 / .j issn. 1008-9926. 2011. 03. 014
A Study on the Com position and Tox icity Changes of E ssential O il of
E vod ia ru taecarpa ( Juss. ) B enth. B efore and A fter P rocessing
ZHANG X iao- feng¹ , GAO N an-nanº , L IU H ong-yu¹ , DU H ong¹ , YANG L ei¹ , L I Fe i¹ ¹ B eijing Un iversity of Ch inese M edic ine, Be ijing 100102, Ch ina;
法 采用水蒸气蒸馏 法提取吴茱萸生品和 制品挥发 油, 用 GC-M S法 鉴定化 学成分。采 用经典 小鼠急 性毒性 试验, 对 吴茱萸
生、制品挥发油毒性进行比较, 并用 B liss法计算 LD50值 。结果 吴茱萸生、制品挥 发油收率 分别为 0. 75% 和 0. 65% ; 两者用 GC-M S均检出 57个峰, 其主要成分是月桂烯、B-水芹烯、罗勒烯、B-榄香烯、B-石竹烯; 炮制后减少 3个组分, 新增 3个组分;
# 230#
解放军药学学报 2011 年 6 月 20日 第 27 卷 第 3期 Pharm J C hin PLA, Vol. 27, N o. 3, Jun 20, 2011
1 材料
1. 1 试药与仪器 吴茱萸 1产地: 江西, 购自安徽 毫州药材批发公司, 批号: 20100131, 经北京中医药 大学生药系张贵君教授鉴定为芸香 科植物吴茱萸 Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) B enth. 的 干燥近 成熟果 实 2, 除去枝梗等杂质得吴茱萸生品; 采用 2010年版 5中国药典 6中吴茱萸的炮制方法制备甘草制吴茱 萸 ( 以下称制吴茱萸 ) ; 甘草 1产地: 内蒙古, 购自安 国神禾中药饮片有限责任公司, 批号: 20070307, 经 北京中医药大学生药系陈玉婷教授鉴定为豆科植物 乌拉尔甘草 G ly cy rrhiza uralen sis F isch. 的干燥根和 根茎 2。试剂均为分析纯。 TRACE M S气相色谱-质 谱联用仪 (美国 F innigan公司 ) 。 1. 2 动物 清洁级 ICR 品系小鼠, 体质量 18 ~ 22 g, a ` 各半 1北京维通利华实验动物技术有限公 司, 动物合格证号: SCXK ( 京 ) 2006-0009, 动物固体 饲料由中国 医学 科学院 实验动 物提供 2。饲养环 境: 受试小鼠采用标准小鼠饲料喂养, 自由摄食与饮 水, 室温调节在 18~ 25e 。
R SD (% ) 3. 3 3. 5
2. 2 样品制备 分别量取 2. 1制备的生吴茱萸和 制吴茱萸挥发油适量, 用乙醚稀释后过 0. 22 Lm 滤 膜, 备用。 2. 3 色谱条 件 TRACE M S 气 相色谱-质 谱联用
仪。色谱 柱为 DB-5 石英 毛 细管 色谱 柱 ( 30 m @ 0. 25 mm @ 0. 25 Lm ); 进样口温度: 240e , 传输线温 度: 250e , 程 序升温: 40~ 220e ( 3e /m in ); 载 气: 高纯氦气, 流量: 1. 0 L l/m in; 进样量: 1 L;l 分流比: 40B1; E I离子源: 70 eV; 离子源温度: 200e ; 加速电 压: 200 eV; 扫描范围: 40~ 500 amu。 2. 4 挥发油化学成分分析 经毛细管色谱分析, 吴 茱萸挥发油的总离子流图见图 1。各峰经质谱扫描 后得质谱图, 通过 N IST 标准谱库检索, 确认化合物, 按面积归一化法计算各化合物在挥发油中的百分含 量, 结果见表 2。 2. 5 GC-M S分析结果 气相色谱保留时间 0. 00 ~ 60. 00 m in吴茱萸生、制品挥发油均检出 56个峰, 生 品和制品均鉴定出 53个化合物, 分别占挥发油总量 的 99. 97% 和 99. 96% ; 对比生制 品挥发油信 息发 现, 生品挥发油中有 3个组分在制品中未检出, 制品 中新检出 3个成分, 两者主要成分相对含量也发生 变化, 月桂烯 ( 30. 26% y 34. 94% ) 、反式- B-罗勒烯 ( 5. 06% y 5. 18% ) 含量升高; B-水芹烯 ( 26. 75% y 25. 25% ) 、顺 式- B-罗 勒烯 ( 14. 47% y 13. 77% )、 B-榄香烯 ( 2. 54% y 2. 11% ) 、B-石竹烯 ( 2. 22% y 1. 88% )含量略有降低。
3 挥发油急性毒性对比研究
3. 1 样品的制备 分别取生吴茱萸和制吴茱萸的 挥发 油, 用吐温-80 助 溶后, 蒸馏 水稀释 至所需 浓 度, 备用。 3. 2 方法 ( 1) 生吴茱萸挥发油急性毒性实验 取小鼠, 随机分为 5组, 每组 10只, a ` 各半。各组 动物受试 药剂 量 依次 为 3. 61、3. 07、2. 61、2. 22、 1. 89 m l/ kg。 ( 2) 制吴茱萸挥发油急性毒性实验 取小鼠, 随机分为 5组, 每组 10只, a ` 各半。各组 动物受试 药剂 量 依次 为 5. 36、4. 45、3. 69、2. 54、 2. 11 m l/ kg。 ( 3) 给药方法 两个样品均为灌胃给
[ Key w ord s] Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) Benth. ; process; essent ial o i;l GC-M S; acute tox ic ity
吴 茱 萸 为 芸 香 科 植 物 吴 茱 萸 1 Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) Ben th. 2的干 燥近 成熟果 实, 有 小毒, 具有散寒止痛, 降逆止呕, 助阳止泻的功效 [ 1 ] 。
[ Ab strac t] Ob jective T o analyze the com position and tox icity changes of the essential o il o fE vodia rutaecarpa ( Juss. ) Benth. to help mi prove the principle o f the processing m ethod. M ethodsT he essentia l oil was extracted by w ater-steam distillation and identified by GC-MS. T he acute tox icity of essential o il of crude and processed Evod ia w as compared on m ice in accordance w ith classical test methods for acute tox icity, and expermi ental data w ere calculated w ith B liss m ethod. ResultsT he content of oil in crude and processed Evod ia was 0. 75% and 0. 65% , respectively. 57 peaks w ere detected in both samples. T he m ain components w ere myrcene, B-phe llandrene, ocmi ene, B-elem ene, B- caryophy llene, The relative content of three ma jor com ponents disappeared while another three com ponents emerged after processing. The LD50 of essential oil in crude Evod ia was 2. 82 m l /kg. T he 95% confidence interval w as 2. 48-3. 21 m l/kg. The LD50 of essential o il in processed productsw as 2. 91m l/ kg and 95% confidence intervalw as 2. 49-3. 41 m l /kg. Conclusion T he content of essent ia l o il in processed Evodia decreased by 13. 33% w hile LD50 value increased by 19. 15% . The lower tox icity is related to the changes in the components and content o f essential oi.l
2 挥发油 GC-M S成分分析
2. 1 挥发油的制备 分别取生吴茱萸和制吴茱萸, 按 2010年版 5中国药典 6一部附录 XD方法提取挥 发油, 用无水硫酸钠干燥后得淡黄色挥发油, 挥发油 收率见表 1。
表 1 生吴茱萸 和制吴茱萸中挥发油收率的比较 ( n = 6)
品种 生吴茱萸 制吴茱萸
挥发油收率 (% ) 0. 75 0. 65
解放军药学学报 2011 年 6 月 20日 第 27 卷 第 3期 Pharm J C hin PLA, Vol. 27, N o. 3, Jun 20, 2011
# 229#
吴茱萸炮制前后挥发油成分及毒性的比较研究
张晓凤¹ , 高南南º , 刘红玉¹ , 杜 红 ¹ , 杨 蕾¹ , 李 飞¹
[ 摘 要 ] 目的 分析吴茱萸炮制前后挥发油含 量、组分及毒性的变化, 为阐明吴茱萸炮制减毒 机理提供 科学依据。方
生、制品挥发油中的主要成分相对含量有变化。吴茱萸生品挥发油
LD
为
50
2.
82 m
l/ kg,
95% 可信限
2.
48 ~
3.
21 m l/kg; 制品挥
发油 LD50为 2. 91 m l/kg, 95% 可信限 2. 49~ 3. 41 m l/kg。结 论 吴 茱萸 炮 制后 Fra Baidu bibliotek 发油 含量 降 低了 13. 33% , LD50 值升 高了
挥发油是吴茱 萸中的有效成分 , [ 2-4] 亦具有 一定毒 性 [ 5] 。以往对吴茱萸挥发油 成分研究结果 不尽相 同, 张韬等 [ 6] 研究显示甘草制吴茱萸挥发油与生品 相比, 新产生了 13个化合物, 减少 3个化合物, 炮制 后吴茱萸挥发油 组分变化明显。雷培海等 [ 7] 认为 吴茱萸生、制品中挥发油的相对含量有差异, 但是化 学组成没有差异, 没有出现新的化合物, 炮制后不会 产生质的变化。本研究通过测定吴茱萸炮制前后挥 发油的含量和成分组成, 并结合急性毒性实验, 分析 炮制对吴茱萸挥发油含量、组分和毒性的影响, 为阐 明吴茱萸炮制降毒机理提供科学依据。
基金项目: 国家 973 计划中医基 础理论专 项, 确有疗 效的有毒 中药 科学应用关键问题的基础研究, N o. 2009CB522800; 有毒中药炮 制减 毒原理和方法学研究, N o. 2009CB522805 作者简介: 张晓凤, 硕士。研究方向: 中药炮制降毒机理 研究。 Te:l ( 010 ) 84739400 作者单位: ¹ 100102 北京, 北京中医药大学; º 100193 北京, 中 国医学科学院药用植物研究所 通讯作者: 李 飞, Te:l ( 010) 84738660; E-m ai:l lf668@ sin a. com
19. 15% , 毒性的降低与挥发油组分及含量的变化具有一定的关系。
[ 关键词 ] 吴茱萸; 炮制; 挥发油; GC-M S; 急性毒性
[ 中图分类号 ] R 927. 2; R965. 3
[文献标志码 ] A
[文章编号 ] 1008-9926( 2011) 03-0229-04
[ DO I] 10. 3969 / .j issn. 1008-9926. 2011. 03. 014
A Study on the Com position and Tox icity Changes of E ssential O il of
E vod ia ru taecarpa ( Juss. ) B enth. B efore and A fter P rocessing
ZHANG X iao- feng¹ , GAO N an-nanº , L IU H ong-yu¹ , DU H ong¹ , YANG L ei¹ , L I Fe i¹ ¹ B eijing Un iversity of Ch inese M edic ine, Be ijing 100102, Ch ina;
法 采用水蒸气蒸馏 法提取吴茱萸生品和 制品挥发 油, 用 GC-M S法 鉴定化 学成分。采 用经典 小鼠急 性毒性 试验, 对 吴茱萸
生、制品挥发油毒性进行比较, 并用 B liss法计算 LD50值 。结果 吴茱萸生、制品挥 发油收率 分别为 0. 75% 和 0. 65% ; 两者用 GC-M S均检出 57个峰, 其主要成分是月桂烯、B-水芹烯、罗勒烯、B-榄香烯、B-石竹烯; 炮制后减少 3个组分, 新增 3个组分;
# 230#
解放军药学学报 2011 年 6 月 20日 第 27 卷 第 3期 Pharm J C hin PLA, Vol. 27, N o. 3, Jun 20, 2011
1 材料
1. 1 试药与仪器 吴茱萸 1产地: 江西, 购自安徽 毫州药材批发公司, 批号: 20100131, 经北京中医药 大学生药系张贵君教授鉴定为芸香 科植物吴茱萸 Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) B enth. 的 干燥近 成熟果 实 2, 除去枝梗等杂质得吴茱萸生品; 采用 2010年版 5中国药典 6中吴茱萸的炮制方法制备甘草制吴茱 萸 ( 以下称制吴茱萸 ) ; 甘草 1产地: 内蒙古, 购自安 国神禾中药饮片有限责任公司, 批号: 20070307, 经 北京中医药大学生药系陈玉婷教授鉴定为豆科植物 乌拉尔甘草 G ly cy rrhiza uralen sis F isch. 的干燥根和 根茎 2。试剂均为分析纯。 TRACE M S气相色谱-质 谱联用仪 (美国 F innigan公司 ) 。 1. 2 动物 清洁级 ICR 品系小鼠, 体质量 18 ~ 22 g, a ` 各半 1北京维通利华实验动物技术有限公 司, 动物合格证号: SCXK ( 京 ) 2006-0009, 动物固体 饲料由中国 医学 科学院 实验动 物提供 2。饲养环 境: 受试小鼠采用标准小鼠饲料喂养, 自由摄食与饮 水, 室温调节在 18~ 25e 。
R SD (% ) 3. 3 3. 5
2. 2 样品制备 分别量取 2. 1制备的生吴茱萸和 制吴茱萸挥发油适量, 用乙醚稀释后过 0. 22 Lm 滤 膜, 备用。 2. 3 色谱条 件 TRACE M S 气 相色谱-质 谱联用
仪。色谱 柱为 DB-5 石英 毛 细管 色谱 柱 ( 30 m @ 0. 25 mm @ 0. 25 Lm ); 进样口温度: 240e , 传输线温 度: 250e , 程 序升温: 40~ 220e ( 3e /m in ); 载 气: 高纯氦气, 流量: 1. 0 L l/m in; 进样量: 1 L;l 分流比: 40B1; E I离子源: 70 eV; 离子源温度: 200e ; 加速电 压: 200 eV; 扫描范围: 40~ 500 amu。 2. 4 挥发油化学成分分析 经毛细管色谱分析, 吴 茱萸挥发油的总离子流图见图 1。各峰经质谱扫描 后得质谱图, 通过 N IST 标准谱库检索, 确认化合物, 按面积归一化法计算各化合物在挥发油中的百分含 量, 结果见表 2。 2. 5 GC-M S分析结果 气相色谱保留时间 0. 00 ~ 60. 00 m in吴茱萸生、制品挥发油均检出 56个峰, 生 品和制品均鉴定出 53个化合物, 分别占挥发油总量 的 99. 97% 和 99. 96% ; 对比生制 品挥发油信 息发 现, 生品挥发油中有 3个组分在制品中未检出, 制品 中新检出 3个成分, 两者主要成分相对含量也发生 变化, 月桂烯 ( 30. 26% y 34. 94% ) 、反式- B-罗勒烯 ( 5. 06% y 5. 18% ) 含量升高; B-水芹烯 ( 26. 75% y 25. 25% ) 、顺 式- B-罗 勒烯 ( 14. 47% y 13. 77% )、 B-榄香烯 ( 2. 54% y 2. 11% ) 、B-石竹烯 ( 2. 22% y 1. 88% )含量略有降低。
3 挥发油急性毒性对比研究
3. 1 样品的制备 分别取生吴茱萸和制吴茱萸的 挥发 油, 用吐温-80 助 溶后, 蒸馏 水稀释 至所需 浓 度, 备用。 3. 2 方法 ( 1) 生吴茱萸挥发油急性毒性实验 取小鼠, 随机分为 5组, 每组 10只, a ` 各半。各组 动物受试 药剂 量 依次 为 3. 61、3. 07、2. 61、2. 22、 1. 89 m l/ kg。 ( 2) 制吴茱萸挥发油急性毒性实验 取小鼠, 随机分为 5组, 每组 10只, a ` 各半。各组 动物受试 药剂 量 依次 为 5. 36、4. 45、3. 69、2. 54、 2. 11 m l/ kg。 ( 3) 给药方法 两个样品均为灌胃给
[ Key w ord s] Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) Benth. ; process; essent ial o i;l GC-M S; acute tox ic ity
吴 茱 萸 为 芸 香 科 植 物 吴 茱 萸 1 Evod ia ru taecarp a ( Juss. ) Ben th. 2的干 燥近 成熟果 实, 有 小毒, 具有散寒止痛, 降逆止呕, 助阳止泻的功效 [ 1 ] 。