实验二 经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验

一、实验目得

1、掌握实验动物分组方法

2、测定LＤ５０得试验设计原则

3、小鼠得经口灌胃技术

二、试剂与材料

1、实验动物:

(1)动物品种:健康成年IＣR小鼠,体重18g～22g

(2)样品来源:首都医科大学实验动物部

2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。

3、试剂:敌敌畏(1400mg/ｍｌ)、苦味酸染液(标记用)。

三、实验内容

1、健康实验动物得选择与性别鉴定

选择健康得雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。)

肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性

2、实验动物称重、编号与随机分组

选择体重在1８-22 g得小鼠,采用随机分组得方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色得苦味酸饱与液标号１

~9,10号小鼠不标记、

3、受试化学物溶液得配制

(1)确定灌胃量:0、１mｌ/10ｇ

(2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积

(3)药品称量及稀释

4、小鼠灌胃技术

左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突得距离。

5、毒性体征得观察与LＤ５０计算

(１)毒性体征得观察:

染毒后注意观察小鼠中毒得发生、发展过程及死亡数与死亡时间

按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为３0 min （2）ＬD５０得计算:

ａ、实验各组剂量得确定:设5组,每组雌雄动物各10只。

剂量组距 d 为:

ｄ为相邻两个剂量组剂量对数之差

利用lgLD０依次加d,取反对数,即可得出各组剂量。

b、LD5０得计算(见附件):

C、求半数致死量得9５%可信区间

四、实验过程

1、人员分工:本次实习同学分两个大组(A组与B组),分别在不同实验室。每大组分5个小组,分别处理雌雄动物,每小组10只动物。

集体活动:１、2、3、4、5 组各1人,进行受试物配制、

各小组活动:

每小组1人(共4人),进行动物标记。(１—1０号)

每小组1人(共４人),进行体重记录、(1—１0号)

每小组１人(共4人),进行灌胃。(1－10号)

每小组１人(共4人),根据体重吸取受试物(０。1ml/10g)

五、剂量设计及受试物配制表

见附件

六、实验结果

１、急性经口毒性试验原始记录(见附件)

2、LD50计算表(见附件)

3、结果计算(按照ppt中所给得剂量设计及受试物配制表计算)

＝(lｇ500—lg100)÷4=(０.6990－2)÷4＝０、1747

=0.１７47×=0.031６

＝２、1747-1/２×((0+0.35)+(0、3５+0、2)+(０.2+0。65)+(0。65+１))

=1。８777

即:65、4３35～87。0162ｍg/Kg

七、实验结论与分析

1、毒性物质敌敌畏为中等毒性,体重在18～２2ｇ之间得雄性健康成年IＣR小鼠(来源于首都医科大学实验动物部)经口急性染毒得为6５、43３5～８7。0162ｍg/Ｋｇ、

2、毒性特征:小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐,躁动不安,麻痹,肌张力松弛,反应减弱,同时伴有呼吸加快,口吐白沫,鼻孔溢液,尿失禁,腹泻等症状,然后在１0分钟左右死亡。

3、本组小鼠为径口染毒得最低剂量,没有出现死亡小鼠,观察过程中,6号小鼠出现亢奋,8号小鼠出现腹泻症状、

4、经过上述症状,可以瞧出敌敌畏急性毒性包括中枢神经系统与躯体感觉与运动系统毒性,呼吸系统毒性,消化系统毒性,泌尿毒性、