BCA法微量蛋白质浓度测定试剂盒MicroBCAProtein-生工生物工程
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存
BCA试剂A70ml室温保存
BCA试剂
B1.4ml室温保存
蛋白标准
C0.5ml-20C保存(5mg/1ml BSA)
本试剂盒自订购xx一年内有效。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂
SDS TritonX-100,Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA EGTA）还原剂
（DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA，EGTA、）还原剂 （DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
使用说明
1.配制工作液:
根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B
(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：
取10微升标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释)，使 终浓度为
0.5mg/ml。将标准品按0, 1,2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准 品孔中，力口PBS补足到20微升。
BCA蛋白浓度测定说明书
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒102ml包装清单：产品编号产品名称包装CHEM001A BCA试剂A 100mlCHEM001B BCA试剂B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml—说明书1份产品简介：增强型BCA蛋白浓度测定试剂(Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。
Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。
增强型BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。
增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。
检测灵敏度达到10μg/ml。
按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。
比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。
使用说明：A.比色杯法测定1、根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积（每个测定需0.7ml工作液），按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。
BCA工作液在室温可稳定24小时。
2、试管编号，按以下操作。
管号S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品xH2O （µl）20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（µl） 4 4 4 4 4 4 4 －蛋白标准液（µl）0 0.5 1 2.5 5 10 20 －样品体积－－－－－－－ 4反应体积24 24 24 24 24 24 24 24 BCA工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（µg/µl）0 1 2 5 10 20 40 待定注：1）标准曲线一般做4个点加一个空白。
BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明
BCA微量蛋白浓度测定试剂盒货号：PC0050规格：500微孔(500T)/1000微孔(1000T)/2000微孔（2000T）保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
产品内容：包装500微孔1000微孔2000微孔保存BCA试剂100ml2×100ml4×100ml室温Cu试剂3ml6ml12ml室温PBS稀释液30ml60ml120ml室温BSA蛋白标准0.3ml0.5ml1ml-20℃(5mg/ml BSA)产品简介：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：一.微孔酶标仪法1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：先用PBS将BSA标准品稀释至终浓度为0.8mg/ml备用。
再依次稀释至80、40、20、10、5、2.5ug/ml.。
3.高浓度蛋白可将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4.各孔加入200微升BCA工作液和40ul稀释后的蛋白或标准品溶液，对照孔加入PBS稀释液。
37℃放置4小时。
用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二.分光光度计法如没有酶标仪，在离心管中混匀样品后加入比色皿，用分光光度计比色。
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南概要：BCA蛋白定量试剂盒是一种广泛应用于生物化学和分子生物学实验室中的试剂盒。
本文将提供BCA蛋白定量试剂盒的使用指南，以帮助研究人员准确、方便地进行蛋白质定量实验。
引言：蛋白质定量是生物化学和分子生物学研究中的关键步骤之一。
BCA 蛋白定量试剂盒是一种经典的蛋白质定量方法，利用铜离子在碱性条件下与蛋白质中的蛋白质氨基酸反应生成紫色络合物，这个络合物的吸光度与蛋白质的浓度呈线性关系，从而可以通过光谱测定吸收值来计算蛋白质的浓度。
材料与试剂：1. BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)2. 蛋白质标准品3. 去离子水4. 96孔板5. 震荡器/离心机6. 吸光度计步骤：1. 首先使用去离子水清洗96孔板，并将其放置在震荡器或离心机中以除去潜在的污染物。
2. 根据需要，准备一系列不同浓度的蛋白质标准品，并分别添加到96孔板中的不同孔位中。
注意，至少应包括一个空白孔位作为背景对照。
推荐使用浓度范围为0-2000 μg/mL的标准品。
3. 使用BCA蛋白定量试剂盒中的试剂，按照提供的说明书中的配方将试剂稀释到适当的浓度。
4. 将BCA蛋白定量试剂加入到96孔板的所有孔位中，每孔100 μL。
确保试剂均匀覆盖样品。
5. 轻轻摇晃或轻轻震动96孔板，以确保试剂与样品充分混合。
6. 将96孔板放置在室温下孵育30分钟，使试剂与蛋白质反应。
7. 使用吸光度计在562 nm波长下测量各孔位的吸光度。
确保仪器进行基线校准，并将空白孔位的吸光度值设为零点。
8. 使用标准曲线法，根据吸光度测量值计算样品中的蛋白质浓度。
注意事项：1. 请遵循BCA蛋白定量试剂盒的说明书中的操作指南，确保准确性和可靠性的结果。
2. 避免使用异柠檬酸盐缓冲液，因为它会干扰试剂的反应。
3. 在使用吸光度计前，请确保对仪器进行基线校准。
4. 为了提高准确性，建议每个样品至少重复三次测量，然后取平均值。
普利莱基因技术微量蛋白质定量试剂盒 (BCA 法) 使用说明说明书
微量蛋白质定量试剂盒(BCA法)使用说明P1513描述：Bicinchoninic acid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。
与Bradford 法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：(1)BCA Reagent100ml，室温保存；(2)Cu Reagent2.5ml，室温保存；(3)BSA standard4mg/ml1ml，−20ºC冻存。
1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1ml比色杯测定。
所需设备：比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562nm，可在540-590nm之间。
工作溶液(Working Reagent,WR)配制：将50体积BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色，立即使用或者4℃保存不超过一天。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释,得到BSA标准溶液80、40、20、10、5、2.5、1.25µg/ml。
蛋白测定微量蛋白质浓度线性检测范围为1-100µg/ml。
标准测定用1cm光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积1.2ml，用比色计测定。
微板测定用96孔板，反应终体积240µl，用酶标仪、微板比色仪测定。
1.标准测定：将0.2ml标准品或待测样本与1ml WR工作溶液混合。
微板测定：将40µl标准品或待测样本与200µl WR工作溶液混合。
BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号：SK1070保存条件：室温保存。
蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
包装清单：组分编号产品组成SK1070-250T SK1070-500T SK1070-5000T SK1070-1A液50ml100ml8*125mlSK1070-2B液 1.5ml3ml30mlSK1070-3蛋白标准(5mg/ml BSA)0.5ml1ml10*1ml —说明书1份产品简介：BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据最常用的BCA蛋白浓度检测法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单化，稳定性高，灵敏度高和兼容性好。
最小检测浓度达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。
在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20,Tween60,Tween80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
每个试剂盒可以检测500个样品。
使用说明：1.取适量5mg/ml蛋白标准，用0.9%NaCl或PBS稀释至终浓度为0.5mg/ml。
稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
2.根据样品数量，按50体积A液加1体积B液配制适量BCA工作液，充分混匀。
例如5ml A液加100µl B液，混匀，配制成5.1ml工作液。
工作液室温24小时内稳定。
3.将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液，补足到20µl。
4.加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20µl。
BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书
BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定测定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540595nm有吸收峰，562nm处吸收峰Z强。
自备仪器和用品：台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂A：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂B：液体0.5mL×1支，4℃保存。
标准品：液体2mL×1支，4℃保存。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取：1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作： 1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。
空白管标准管测定管蒸馏水（μL）4标准品（μL）4待测液（μL）4工作液（μL）200200200混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
微量BCA蛋白定量试剂盒
保存：BSA 标准品：2-8℃ 其它组分：室温 组分说明
产品简介:
BCA 蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于 BCA（BicinchoninicAcid） 法 研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽 链结构能与 Cu2+络合生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+。BCA 试剂可敏感特异地与 Cu+结合，形 成稳定的有颜色的复合物。在 562nm 处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收 值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒专为低蛋白浓度样品的蛋白定量而设计，可精确测定浓度为 2.5-200 μg/ml 的蛋白溶液，试剂盒的灵敏性高，平行性好，不同种蛋白之间的测量差异极低。本试剂 同多种非离子型去污剂有较好的相容性。
注意事项
1. BSA 标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理盐水进行稀释） 。 2. 操作中请佩戴手套。 3. 本产品仅限科研使用。
操作步骤
1. 稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。
ห้องสมุดไป่ตู้
400-818-1148
010-5956 4618
2. 配制 MicroBCA 测试工作液：根据标准品和样品的数量配制测试液。 试剂 MD 配制：4volumeMC+100volumeMB 测试工作液 WR 配制： 1volumeMA+1volumeMD 充分混匀后待用 3. 试管及微板检测（蛋白浓度检测范围：2.5-200 μg/ml） 1）按上表准备好标准品及待测样品。 2）将蛋白样品和测试工作液 WR 按照 1:1（体积比）比例加入，充分混匀。在 60 度孵育 60 分钟。 3）孵育完成后冷却到室温，在 562nm 处读取吸光度值。 4）标准品与待测样品的吸光度值要扣除空白对照的吸光度值，然后进行浓度的计算。 5）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为500试管或5000微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或2500微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA 试剂A，1000 mL (No. 23225产品中) 或500mL ( No. 23227产品中)，碳酸钠，碳酸氢钠，二喹啉甲酸，酒石酸钠溶于0.1 M氢氧化钠中。
BCA 试剂B , 25 mL, 包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白, 2mg/ mL, 10 × 1 mL 安瓿, 包含2 mg/ mL牛血清白蛋白(BSA) 存在于0.9% 盐和0.05%叠氮化钠中。
储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A 或试剂B 在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。
当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。
目录介绍 (1)准备标准试剂和工作试剂 (2)准备试管 (3)准备微型版 (3)故障检修 (4)有关美国热电其他产品 (5)附加信息 (5)参考文献 (6)介绍美国热电（Thermo）公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒是基于二喹啉甲酸(BCA)通过比色检测和定量测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。
该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了Cu2使其显著减少转变为Cu1 （缩二脲反应）。
用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cu1. 这种测定方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。
这种水溶性复合物在562nm 处有强吸收峰。
在大的活性范围内(20-2000µg / mL）几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。
BCA 法不是真正的终点的方法；也就是说，最终颜色继续发展。
孵化之后, 继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测定大量样本。
大分子结构的蛋白质,肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸，色氨酸和酪氨酸)据说是与BCA形成颜色产物的原因。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。
货号：BC1720规格：100T/96S产品内容：试剂A：液体×1瓶，4℃保存。
试剂B：液体×1支，4℃保存。
标准品：液体×1支，4℃保存。
产品说明：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm 处吸收峰最强。
自备仪器和用品：台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。
操作步骤：一、样品中可溶性蛋白质提取：1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定操作：1.可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562nm，蒸馏水调零。
2.工作液置于60℃水浴预热30min。
空白管标准管测定管蒸馏水（μL）4标准品（μL）4待测液（μL）4工作液（μL）200200200混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
bca蛋白浓度测定试剂盒原理
bca蛋白浓度测定试剂盒原理BCA蛋白浓度测定试剂盒是用于测定蛋白质溶液浓度的一种常用试剂盒。
BCA（Bicinchoninic Acid）法是一种基于铜离子对蛋白质的氮原子的络合反应的方法，通过测定产生的蓝色化合物的吸光度来间接测定蛋白质的浓度。
BCA蛋白浓度测定试剂盒通常包含有BCA试剂、标准蛋白、含蛋白样品和试剂盐溶液等，下面将对BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理进行详细描述。
首先，BCA法的原理基于铜离子（Cu2+）和蛋白质之间的络合反应。
BCA试剂中含有两个主要成分：bicinchoninic酸（BCA）和柠檬酸盐缓冲溶液。
此外，还添加有氢氧化钠溶液等试剂以调节反应条件。
当BCA试剂与蛋白质样品中的铜离子相结合时，形成紫红色螯合络合物。
螯合反应是在碱性条件下进行的，此时蛋白质中的四个以上的肽键和氨基酸残基中的部分功能团（特别是还原型氨基酸，如半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸等）能参与到络合反应中。
然后，络合物吸收O.D. 562nm处的特定波长下，形成深浅不同的紫红色。
络合物的深度与蛋白质的浓度成正相关。
在进行测定前，需要校准光学密度计（尤其对于多样本测量或与先前的试验结果相比）。
然后，我们使用标准曲线法测定未知样品中的蛋白质浓度。
标准曲线由已知浓度的标准蛋白构建，通常是牛血清蛋白（BSA）。
首先，标准蛋白被稀释成一系列已知浓度的标准溶液。
然后，将标准溶液与BCA试剂反应，并记录吸光度。
这将为后续绘制标准曲线提供基础。
对于待测样品，我们需要将其稀释到适当的浓度范围内，并与BCA试剂反应。
然后，通过比较待测样品的吸光度与标准曲线上相应吸光度对照点，可以计算出待测样品中的蛋白质浓度。
总体来说，BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是基于蛋白质与BCA试剂中的铜离子的络合反应，并通过测定产生的紫红色络合物的吸光度来间接测定蛋白质的浓度。
测定前需要校准光学密度计，利用构建的标准曲线，可以计算待测样品中的蛋白质浓度。
BCA蛋白质定量试剂盒说明书
适用范围：
本检测方法可耐受的干扰物质浓度表：
干扰物质 盐/缓冲液 HEPES (pH7.9) PIPES(pH6.8) NaCl HCl NaOH Sodium citrate TRICINE(pH8.0) Sodium Acetate Guanidine.HCl Tris
BCA Protein Assay Kit
BCA 蛋白质定量试剂盒
目录号：PA115 试剂盒内容：
试剂盒组成
BCA 试剂 A BCA 试剂 B BSA 标准品(2mg/ml)
说明书
PA115-01*
100 ml 3 ml
2× 1 ml 1份
PA115-02**
500 ml 15 ml 10 × 1 ml 1份
产品简介：
BCA 蛋白质定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用 的两种蛋白浓度检测方法中的 BCA（bicinchoninic acid）法研制而成，实现了 对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。本试剂盒的原理是蛋白质分子中 的肽键结构在碱性环境下能与 Cu2+生成络合物，并将 Cu2+还原成 Cu+，而 BCA 试剂可敏感特异地与 Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在 562nm 处 有最大光吸收值，该复合物颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大 小来测定蛋白质的含量。
1 小时内即可完成蛋白质定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA） 溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为 20～2000 ug/ml。
操作步骤：
1. 标准品的稀释：用与样品相同缓冲体系的稀释剂按下表对 BSA 标准品进
行稀释：
BSA 标准浓度配制表
BCA蛋白浓度测定
0.593667
0.3
16
0.736
0.738
0.732
0.735333
0.4
20
0.957
0.966
0.952
0.958333
0.5
用 Excel 或 orgin 作出吸光度对 BSA 浓度的关系曲线。
六、实验结果分析 得到的吸光度对 BSA 浓度的关系曲线 R2 值大于 0.99 的时数据较好。如果
BCA 蛋白浓度测定
一、实验原理：
BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混
合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，
蛋白质将 Cu2+还原为 Cu+，一个 Cu+螯合二个 BCA 分子，工作试剂由原来的苹
果绿形成紫色复合物，该水溶性的复合物在 562nm 处显示最大吸光性，吸光度
孔中，加标准品稀释液补足到20μL。 6. 加适量体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释补充到20μL。
注：测量浓度请需要对样品进行稀释，使其的浓度范围在0.5-5 mg/mL 之间，保证样品浓度在线性范围内，一般样品需要稀释5-10倍即可，根据 实际蛋白浓度适当调整。
微量bca法 操作方法
微量bca法操作方法
微量bca法是一种常用于测定蛋白质浓度的方法。
下面是操作步骤：
1. 准备样品：将待测样品稀释到合适的浓度范围内，一般建议在0.1-1.0 mg/mL 之间。
2. 制备标准曲线：准备一系列已知浓度的蛋白质标准溶液，通常为0、2、4、6、8和10 μg/mL。
标准蛋白溶液可以使用靶蛋白，如牛血清白蛋白（BSA）。
将标准蛋白溶液分别加入96孔板的不同孔中。
3. 加入试剂：对于每个孔，加入200 μL试剂（BCA试剂），注意避免泡沫的产生。
4. 混匀孔板：将孔板轻轻摇匀，确保样品均匀混合。
5. 孔板孵育：将孔板放入恒温恒湿箱中，在37下孵育30分钟，使试剂能与蛋白质反应。
6. 吸光度测量：使用分光光度计设置波长为562 nm，测量各个孔的吸光度。
并记录吸光度值。
7. 绘制标准曲线：将各标准溶液的吸光度值绘制在y轴上，对应的蛋白质浓度
绘制在x轴上，然后通过曲线拟合找到蛋白质样品的浓度。
8. 测定待测样品：将待测样品加入96孔板的一个或多个孔中。
9. 加入试剂和混匀孔板：按照步骤3和4的方法将试剂加入孔中并混合均匀。
10. 孔板孵育和吸光度测量：按照步骤5和6的方法将孔板孵育和测量吸光度。
11. 计算蛋白质浓度：使用步骤7中得到的标准曲线，根据待测样品的吸光度值，通过曲线拟合计算出待测样品的蛋白质浓度。
以上就是微量bca法的操作方法。
需要注意的是，除了标准曲线外，还应该加入空白对照以进行背景校正。
此外，操作过程中应注意洁净实验室操作，避免污染和误差的产生。
BCA法微量蛋白质浓度测定试剂盒MicroBCAProtein-生工生物工程
BCA法微量蛋白质浓度测定试剂盒MicroBCAProtein-生工生物工程BCA 法微量蛋白质浓度测定试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit 产品编号：C503061包装规格：250 Assays/1250 Assays 产品简介BCA 法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu 2+络合并将Cu 2+还原成Cu 1+。
BCA 特异地与Cu 1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM 处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。
该测定方法灵敏度高，操作简单，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。
若采用分光光度法，标准曲线的线性范围为0.5-20 μg/mL 。
若采用酶标板法，标准曲线的线性范围为2-40 μg/mL 。
产品特点 1. 适用于浓度比较稀的蛋白质样品的定量。
2. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
3.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝，线性关系良好。
运输和保存条件在常温下运输，收到后将溶液A 、溶液B 和溶液C 于4°C 保存，BSA 蛋白标准液-20°C ，保质期两年。
试剂盒组成组分 C503061 试剂 A 60 mL 试剂 B 60 mL试剂 C3 mL BSA 标准溶液 5mg/mL 2 mL 操作步骤A 试剂准备 1. 按照以下公式计算所需的BCA 工作液总体积。
ü BCA 工作液总体积=（标准曲线测定点数+样品数）×重复次数×每个样品所需的BCA 工作液体积 2. 根据所需的BCA 工作液总体积，定量取溶液A ：溶液B ：溶液C=25：24：1，混匀，制成BCA 工作液。
3. 取一定量的BSA 标准溶液，用1XPBS 溶液稀释为40 μg/mL 。
S a ng onB i o te chB. 分光光度法 1.取22支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。
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BCA 法微量蛋白质浓度测定试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit
产品编号：C503061
包装规格：250 Assays/1250 Assays 产品简介
BCA 法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu 2+
络合并将Cu 2+
还原成Cu 1+。
BCA 特异地与Cu 1+
结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM 处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。
该测定方法灵敏度高，操作简单，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
本试剂盒适用于
微量蛋白质浓度的测定。
若采用分光光度法，标准曲线的线性范围为0.5-20 μg/mL 。
若采用酶标板法，标准曲线的线性范围为2-40 μg/mL 。
产品特点 1. 适用于浓度比较稀的蛋白质样品的定量。
2. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
3.
检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝，线性关系良好。
运输和保存条件
在常温下运输，收到后将溶液A 、溶液B 和溶液C 于4°C 保存，BSA 蛋白标准液-20°C ，保质期两年。
试剂盒组成 组分 C503061 试剂 A 60 mL 试剂 B 60 mL
试剂 C
3 mL BSA 标准溶液 5mg/mL 2 mL 操作步骤
A 试剂准备 1. 按照以下公式计算所需的BCA 工作液总体积。
ü BCA 工作液总体积=（标准曲线测定点数+样品数）×重复次数×每个样品所需的BCA 工作液体积 2. 根据所需的BCA 工作液总体积，定量取溶液A ：溶液B ：溶液C=25：24：1，混匀，制成BCA 工作液。
3. 取一定量的BSA 标准溶液，用1XPBS 溶液稀释为40 μg/mL 。
S a n
g o
n
B i o t
e c
h
B. 分光光度法 1.
取22支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。
其中18支1.5 mL 离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入500 μL 相应浓度的标准蛋白质溶液；剩余4支1.5mL 离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。
其中编号不同的两管加入浓度不同的500 μL 样品稀释液。
2. 各管加入0.5 mL BCA 工作液，迅速混匀。
3. 在37°C 水浴中保温60 min 。
4. 冷却至室温后，在分光光度计上测各管的A562值，扣除空白对照。
5. 以标准组各管A562平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel 软件中绘制标准曲线。
6.
根据两个相同样品稀释液A562值的平均值，在标准曲线上计算出该样品经过稀释后的蛋白质浓度。
选择合适稀释度的样品计算最终的样品蛋白浓度，再由稀释倍数计算原样品蛋白质浓度。
C. 酶标板法
1. 选取酶标板上22个孔，分为标准组和样品组。
其中18个孔，每个标准品设置1个重复，各孔分别加入100 μL 相应浓度的
标准蛋白质溶液；剩余4孔，分为2个重复组，重复孔编号相同。
其中编号不同的两孔加入浓度不同的100 μL 样品稀释液。
2. 各酶标孔加入100 μL BCA 工作液，迅速混匀。
3. 在37°C 保温30 min 。
4. 冷却至室温后，在酶标仪上测各孔的A562值。
5. 以标准组各孔A562平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel 软件中绘制标准曲线。
6.
根据两个相同样品稀释液A562值的平均值，在标准曲线上计算出该样品经过稀释后的蛋白质浓度。
选择合适稀释度的样品计算最终的样品蛋白浓度，再由稀释倍数计算原样品蛋白质浓度。
注意事项 1. 试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37°C 温育使其溶解，如发现细菌污染则应丢弃。
2. 当试剂A 、B 和C 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，BCA 工作液建议现配现用。
3. 样品检测后的A562值应在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释或浓缩。
4. 反应液冷却至室温后，须在10 min 内完成吸光度的测定，减少实验误差。
5.
BCA 法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保蛋白中残留的EDTA 低于1 mM ，无EGTA ，二硫苏糖醇低于1 mM ，β-巯基乙醇低于0.01%。
不适用常规BCA 法时建议使用上海生工生产的改良型BCA 法蛋白浓度测定试剂盒或改良型Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒。
6. 当样品中含有儿茶酚氨类等生物氨或者脂，脂蛋白或自由巯基等还原试剂时时，也会使得光吸收值升高，在含铜离子螯
合试剂时，可以使的吸光度降低，这时可以用DOC-TCA 法沉淀祛除。
7.
本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。
S a n
g o
n
B i o t
e c
h。