用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶

用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶

【摘要】目的应用VRA-GlcNAc为底物建立检测NAG活力的方法，用于尿液NAG活性测定。方法对离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。用该法在日立7180全自动生化分析仪上进行性能分析并测定多种肾病尿样NAG活性，结果该法最低检出限 1.5 U/L，线性范围可达200U/L(r=0.9979)，批内CV为＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。结论本法灵敏度高，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作。

【关键词】VRA-GlcNAc；N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶；动力学法

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，尿中NAG主要来源于肾近曲小管上皮细胞，当近曲小管上皮细胞受损时，尿NAG活性将显著升高且早于其他尿酶，对肾小管损害的早期诊断有较大价值［1］，且NAG上升程度与肾小管损伤程度成正比。［2］可作为早期诊断肾损害的尿标志性蛋白［3］。本文基于NAG催化VRA-GLCNAC生成红色VRA产物，经反复试验确定最佳实验条件，建立检测尿NAG活力的动力学分析法，该法用于尿NAG活力测定，均获得满意结果。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器(1)试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液150mmol/L、VRA-GlcNAc1.0g/L、稳定剂适量。(2)试剂2(R2)：pH碳酸钠缓冲液3 讨论近年来，随着对NAG的研究不断深入，其检测方法也在不断发展。主要

有荧光分光光度法和可见分光光度法。前者因所需仪器价格昂贵，且对底物溶液配制的要求较高而不宜用作一般医院常规检验；后者试剂稳定性欠佳，难以满足临床检验要求,目前都采用PNP-NAG和CNP-NAG、MNP-NAG作底物建立的方法[4-5],这些方法由于在液体状态下不稳定，造成试剂浪费严重，临床难于推广。本文以VRA-GLCNAC底物建立的NAG测定试剂优点在于试剂在液体状态稳定性好，该方法最低检出限为1.5 U/L，线性范围可达200U/L，批内CV＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。通过测定64例各种肾病患者和40例正常人尿NAG活性，结果肾病患者组尿NAG活性均明显高于正常对照组，两组有显著差异（P＜0.05），

综上所述，本文用VRA-GLCNAC建立的测定尿NAG活性的方法，灵敏度高，线性范围宽、精密度好，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作，有利于临床对肾脏疾病的早发现、早治疗。

参考文献

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[2]朱立华.肾脏疾病的生化、免疫检测技术进展[M].中华检验医学杂志.2002,25(2)：307．

[3] 李晓红，盛光耀.尿p2一MG和尿NAG在儿童过敏性紫癜肾损害早期诊断中的意义.山东医药，2010,50（13）:87-88.

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[5]徐朝阳,王峰,宋克征.尿酶NAG改良速率法测定及其临床应用.江西医学检验,2004,22(6)：521-523