用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
高效液相色谱法测定蘑菇酸解液中氨基葡萄糖的含量
萄糖产品大多是通过贝类或其他海洋 Arium-Pro 型纯水系统，赛多利斯（德 资源的外壳酸水解生产的 [2]。目前， 国）；0.45 μm准确是 国）；SHA-2l 冷冻水浴恒温摇床，常
临床试验结果不一致的重要原因。因 州市瑞华仪器制造有限公司（中国）；
此，如何准确测定氨基葡萄糖的含量 FE 20 型实验室 pH 计，梅特勒 - 托利
成为一个值得考虑的问题。氨基葡萄 多（瑞士）。
糖的检测方法有分光光度测定法、薄
1.1.2 试剂
层色谱法、液相色谱或毛细管电泳与
D（- +）- 氨基葡萄糖盐酸盐，纯度
分光光度法、电导率法、安培法或荧 99%，Sigma-Aldrich 化学公司（美国）； 光检测法联用等 [3]，其中最常见的方 9- 芴甲基 -N- 琥珀酰亚胺基碳酸酯，
效液相色谱法，柱前衍生化是必要的。 1.2 色谱条件
目前使用的衍生化试剂有邻苯二甲醛、
ZORBAZ ODS C18 色 谱 柱（4.6 mm×
氯甲酸，9- 芴甲基氯甲酸酯、9- 芴甲 250 mm，5 μm）；柱温：40 ℃；流速：
基 -N- 琥珀酰亚胺基碳酸酯、丹酰氯、 0.8 mL/min；进样量：10 μL；检测波
本实验是利用三乙胺将游离氨基 葡萄糖释放出来，然后用 9- 芴甲基 -N琥珀酰亚胺基碳酸酯进行衍生化。因 此，释放反应的条件即三乙胺添加量、 释放反应时间和待测样品 pH 值，探讨 游离氨基葡萄糖的最佳释放条件对衍 生化和后续的定量测定具有重要意义。
2.1.1 三乙胺添加量和释放反应 时间对检测结果的影响
与应用领域，本试验采用高效液相色 11～15 min，A ∶ B=0 ∶ 100 → 70 ∶ 30；
谱法 - 紫外检测法对蘑菇酸解液中的 15 ～ 17 min，A ∶ B=70 ∶ 30。
21-资料7 NAG参考值验证资料2
N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）阳性判断值或参考区间确定资料1.阳性判断值或参考区间确定的依据根据《临床检验质量管理技术基础》，如何确定临床检验的参考值（参考范围）：批准指南（2000）文件。
该文件是确定定量临床检验项目的参考值（参考范围）的指南。
另根据《全国临床检验操作规程（第3版）》中，按N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶含量的国际单位计算参考值（参考范围）为：（0.3-12）U/L。
2. 阳性判断值或参考区间确定的方法2.1检测数据疑似离群点的判断将疑似离群点和其相邻点的差值D和数据全距R相除，D/R若小于或等于1/3不考虑为离群点；D/R若＞1/3，考虑为离群点。
若有两个或以上疑似离群点，可将最小的疑似离群点作如上处理，若D/R都＞1/3，则须将所有疑似点都剔去；若都＜1/3，则保留所有数据。
注：为保证参考值数据的可靠性，剔除离群点后的数据量不应少于120个，若还需分组统计，则每个分组应至少有120个数据。
如果剔除离群点后的数据量小于120个，应即将其他数据补上。
2.2 数据分布判断绘制分布图，了解数据的分布特性，并进行正态检验。
数据量≤2000时，以Shapiro-Wilk（W检验）为准；数据量＞2000时，以Kolmogorov-Smirnov（D检验）为准。
2.3阳性判断值或参考区间确定的方法x±s 若数据呈高斯正态分布，或者数据经转换后亦呈高斯分布，参考值可按 1.96x±s表示(99%数据分布范围)。
表示(95%数据分布范围)，或者 2.58若数据不呈高斯正态分布，则可用非参数法处理。
最常见的是以百分数法确定2.5%和97.5%位数的参考限，以确定95%参考值（参考范围）。
百分位数法的计算公式为：()C rn fW L -⨯+=100Pr 式中：Pr ——为第r 百分位数；L ——为第r 百分位数所在组的下限； W ——为第r 百分位数所在组的宽度； f ——为第r 百分位数所在组的频数； N ——表示总频数；C ——为第r 百分位数所在组的前一组的累计频数。
几丁质酶在农作物免疫防御中的应用研究进展
Food Science And Technology And Economy粮食科技与经济2023 年4月第48卷 第2期Apr. 2023Vol.48, No.4随着世界人口的日益增长，粮食的需求量随之上升，导致农作物在全球的种植面积需求越来越大，而农作物病虫害的发生是造成农作物产量和质量降低的最主要因素，每年因病虫害造成粮食（农作物）减产20％～40％，直接损失超过2 000亿美元[1]。
目前在病虫害防治方面，主要还是依靠化学防治的方式和手段[2]，然而过度依赖化学防治方式会造成环境生态污染。
为了生态环境的可持续发展，降低化学试剂对土壤环境的影响，生物技术在农业建设过程中的应用逐渐被重视。
将生物技术应用于农业病虫害防治中，能够有效减少传统的化学农药防治方法给环境带来的负面影响，推动绿色农业的可持续发展[3]，而几丁质酶在农作物生物防治方面具有巨大的潜在应用价值。
几丁质酶（Chitinase, EC 3.2.1.14）是水解几丁质的酶，能够催化几丁质的β-1,4-糖苷键，将其降解成N -乙酰葡糖胺（N -actyl glucosamine, NAG ），并能由各种微生物，包括病毒、细菌和真菌，以及昆虫、高等植物和动物合成[4]。
几丁质由β-1,4-糖苷键将N -乙酰-D -氨基葡萄糖（Be -ta -1,4-linked Repeating N-acetylaminoglucose Units, GlcNAc ）分子连接而成，以结构多糖的形式存在于真菌细胞壁、节肢动物的外骨骼、甲壳纲动物的外壳以及寄生线虫的外壳中，但尚未在植物体内鉴定出几丁质的存在[5]。
几丁质酶能够通过降解真菌性病毒细胞壁中的几丁质和破坏昆虫及线虫的消化膜等方式达到抗病虫害的效果，且不会对植物体产生伤害。
同时，几丁质酶也是植物防御系统中重要的防卫因子，可以增强植物的防御系统，在抵御病原真菌以及病虫害中发挥着重要作用[6]。
β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒(PNP比色法)
β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷，也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷，该酶广泛存在于多种组织、体液、细胞，是溶酶体中的一种酸性水解酶，其测定方法有比色法和荧光光度法。
Leagene β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)(NAG Colorimetric Assay Kit)检测原理是在酸性条件下NAG 可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的对硝基酚(p -nitrophenol ，PNP)，在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色产物，产物黄色越深，说明β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管2、 恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计或生化分析仪操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支4-NAG ，恢复至室温后溶解于2 ml NAG Assaybuffer ，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在10天内用完。
② 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM) 恢复至室温后，取10μl 溶解于编号 名称TE0063 50T Storage试剂(A): NAG Assay buffer 150ml 4℃ 试剂(B): 4-NAG 1支 -20℃ 避光 试剂(C): Alkaline buffer 1ml 4℃ 试剂(D): p -nitrophenol(10mM) 1ml -20℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份ACP Assay buffer，使p-nitrophenol达到3mM。
具有ACC脱氨酶活性的绞股蓝内生细菌的分离鉴定及其抑菌促生作用
４ １ ６ ０ ０ ０ ； ２ 伊犁师范学院 化学 与生物科学学 院， 新疆 伊 宁 ８ ３ ５ ０ ０ ０ ）
（ １ ． 吉首大学 生物资源 与环境科学学院 ， 湖南 吉首
摘
要
采用富集 筛选 法从绞 股蓝根 中筛选得 到 ６株 具有 Ａ Ｃ Ｃ脱氨 活性 的 细菌 ， 其 中茵株 Ｊ Ｄ Ｇ － ６ 、 Ｊ Ｄ Ｇ － ７ 、
Ｇ ｙ ｎ ｏ ｓ ｔ ｅ ｍｍａ ｐ ｅ ｎ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｌ ｕ ｍ ａ ｄ ｏ ｐ ｔ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｅ ｎ ｉ ｒ ｃ ｈ ｍｅ ｎ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ，ａ ｍｏ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｍ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ Ｊ Ｄ Ｇ－ ６，Ｊ ＤＧ－ ７，Ｊ ＤＧ一 １ ４，Ｊ ＤＧ・ １ ６ ａ ｎ ｄ Ｊ ＤＧ一 ２ ３ ｈ ａ ｄ ｔ ｈ ｅ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｔ ｏ ｅ ｘ ｃ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｉ ｄ ｅ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ，ｂ ｕ ｔ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ Ｊ ＤＧ一 ３ ２ ｈ ａ ｄ ｎ ｏ ｔ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ
ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ，ａ ｍｏ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｍ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ Ｊ ＤＧ一 １ ４ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗｔ ｈ ｏ ｆ Ｅ．ｃ ｏ ｌ ｉ ，Ｓ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ａ ｌ ｕ ｔ ｅ ｓ ，ａ ｕ ｎ ｄ Ｃａ ｎ ｄ ｉ ｄ ａ ａ ｌ ｂ ｉ ｃ ａ ｓ．Ｔ ｕ ｈ ｅ ｒｏ ｇ ｗ ｔ ｈ ｅ ｘ ｐ ｅ ｉ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｕ ｇ ｇ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ａ ｌ ｌ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ Ｊ Ｄ Ｇ－ ６，Ｊ ＤＧ－ ７，ａ ｎ ｄ Ｊ Ｄ Ｇ一 １ ４ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｏ ｔ ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ — ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｒ ｉ ｃ ｅ ｓ ｅ ｅ ｄ ｌ ｉ ｎ ｇ ｓ ，ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｌｌ ａ ｙ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ Ｊ ＤＧ－ １ ４ ｔ ｈ ｅ ｇ ｒ ｏ ｔｈ ｗ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ａ ｍｏ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｓ ｔ ，ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｏ ｔ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｉ ｎ —
医学检验·检查项目：尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(UNAG)_课件模板
医学检验·各论：尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（UNAG） >>>
相关疾病：
隐匿性肾小球肾炎、肾病综合征、急性肾 功能衰竭、肝硬化、小儿原发性肾病综合 征、烧伤后急性肾功能衰竭、流行性出血 热、膜性肾小球肾炎、狼疮性肾炎。
谢谢！
9.13U/g·Cr，第95百分位数16.19U/ g·Cr。
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相关检查： 血肌酐(Cr,Crea)、血清尿素氮、尿蛋白 质、尿蛋白定量。
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相关症状： 呈肾上腺素能依赖性、腹水、少尿、多尿、 发热、低血压。
医学检验·各论 尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖
苷酶（UNAG） 内容课件模板
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别名： N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶。
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简介：
尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活 性反映肾实质病变，对急性损伤和活动期 特别灵敏，可用于早期肾损伤的监测和病 程的观察。
医学检验·各论Biblioteka 尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（UNAG） >>>
临床意义： 升高：肾小球肾炎、狼疮性肾炎、先
天性肾小管病、肾小管-间质病变、肾功 能衰竭、肾病综合征、流行性出血热 。
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正常值： 尿：5～30/L。 尿：中位数
天花粉中瓜氨酸与γ-氨基丁酸的含量测定
为此 ， 笔者采用 了柱前衍生反相高效液相色谱 （ Ｐ— Ｌ ） Ｒ ＨＰ Ｃ 法对天
花粉 中瓜氨 酸 与 一 基 丁酸 含量 进 行 了 同时 测定 ， 报 道如 下 。 氨 现 １ 仪 器 与试 药 美 国 Ｗａ ｒ ６ ５型 高 效 液 相 色谱 仪 ， 括 ２ ８ ｔｓ ９ ｅ２ 包 ４ ７型 紫 外 检 测 器 ，ｍｐｗ ｒ Ｅ ｏ ｅ 色谱 工 作 站 ； 国 Ｖ ｒ ｎＣ ｒｌ０型 紫 外 可 见 分 光 光 美 ａｉ ａ Ｏ ａ 度 计 。 氨 酸 对 照 品 （ 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 ， 号 为 ８５— 瓜 中 批 ７ ２ ０ ０ ） 一氨 基 丁 酸 （ 都 市 科 龙 化 工 试 剂 厂 ， 号 为 ００３ ； 成 批 ２ ０ １０ ） 异硫 氰 酸 苯 酯 （ 京 北 分 瑞 利 ＜ 团 ＞ 限 公 司 ， 号 ０２１１ ； 北 集 有 批
对 胰 腺 癌 细胞 Ｓ １９ 胞 的生 长 及血 管 内皮生 长 因 子 （ Ｅ Ｆ表 Ｗ ９ ０细 ＶＧ）
２
方 法 与 结果
２ １ 溶 液 制 备
达的影 响， 以及作为哺乳动物摄食 和味觉的调控因子等 】因此 ， 。
测 定 天 花粉 中 的瓜 氨 酸 与 一氨基 丁酸 含 量 对 于 评 价 其 质 量 有一 定 的 意义 ， 尚未 见 有 同 时测 定 天 花 粉 中两 组 分 含 量 的 相关 文献 。 但
ａ ｄ ｔｅ ｒｃ ｖ ｒｒ ｅ ｏ ｉ ｕｌ ｅ ｗ ｓ ９ ． ５ （ Ｓ ｎ ｈ ｅｏ ｅｙ ｔ ｆ ｃｔ ｌ ｎ ａ ８ ４ ％ Ｒ Ｄ＝０ ７ ％ ） ｎ 一Ａ ｉｏ ｕ ｒ ｃ ｗ ｓ ９ ． ５ （ Ｓ ａ ｒ ｉ ．３ ａｄ ｍ ｎ ｂ ｔ ｉ ａ ｉ ａ ８ １ ％ Ｒ Ｄ＝０ ６ ％ ） Ｃ ｎ ｌｓ ｎ ｙｃ ｄ ．４ ． ｏｃ ｉ ｕ ｏ
酸度计连续滴定法测定葡萄汁中总酸和氨基氮的质量浓度
第3期2020年6月No.3 June，2020葡萄酒是以葡萄为原料，经酵母菌酒精发酵酿造出来的果酒。
葡萄汁中存在多种含氮化合物，可被酵母菌使用的有氨基酸、多肽、铵态氮等，这类氨基酸态氮可称为氨基氮。
氮源是酵母生长发酵所必需的营养物质之一，当葡萄汁中氨基氮质量浓度过高时会抑制酵母菌繁殖，过低时会使酵母菌发酵减慢或停止[1]。
葡萄汁中总酸的质量浓度对发酵后葡萄酒的风味、品质、储存等有较大的影响。
适度的酸味给人带来清新、爽口和愉快的感觉，过酸则使人感到刺口、尖锐、难受，而酸度太低的葡萄酒则易氧化败坏，不耐储存[2]。
因此，在葡萄汁发酵前要对葡萄汁中的总酸及氨基氮进行测量。
传统的方法是分别滴定两者的质量浓度，这种方法效费比低。
经改进后采用连续滴定法，即在进行完总酸测定后，直接进行氨基氮质量浓度的测定，可为葡萄酒的酿造品质的提升提供一定的保障。
1 材料与方法1.1 葡萄汁中总酸的测定利用酸碱中和原理，用NaOH 标准溶液滴定样品中的有机酸，以pH=8.2为电位滴定终点，根据消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，计算样品中总酸质量浓度[3]。
1.2 葡萄汁中氨基氮的测定氨基氮依照《GB/T 12143.2—1989》果蔬汁饮料中氨基态氮的测定方法》[4]测定。
1.3 仪器与设备雷磁PHS-25 pH 酸度计，上海仪电科学仪器股份有限公司；FA214电子分析天平，上海豪晟科学仪器有限公司。
1.4 试剂葡萄样本采自伊犁职业技术学院农业工程学院实训基地，其余试剂均为分析纯。
1.5 分析步骤酸度计的校正：打开电源，将仪器预热15 min ；采用“两点校准法”即选用pH=6.86和pH=4.00或pH=9.18两种标准缓冲溶液对pH 酸度计进行校准。
总酸的滴定：取5 mL 样品置于100 mL 烧杯中，加50 mL 纯水，插入电极，放磁子，并置于电磁搅拌器上搅拌，然后用0.05 mol/L 的NaOH 标准滴定溶液滴定。
kk京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶 活力的方法
为无荧光的底物，以此测定；三是以对—硝苯 -β- 葡萄 糖苷(pNPG)为底物进行酶解，底物水解后释放出来的配 基对—硝基苯酚可直接在 400～9420nm 之间测定。目前 国内外普遍使用的是 DN S 法和 pNP G 法，pNPG 法简单、 快速、灵敏度高，但该试剂主要依靠进口，价格昂贵， 因而限制了其使用，国内较常用的是 D N S 法，由于该 方法检测的是经β- 葡萄糖苷酶水解底物产生的极微量的 葡萄糖，反应易受干扰，且检测灵敏度不是很高。
β-glucosidase
可知，当京尼平苷浓度达到 0.625mmol/L 时，酶活达到 最大值，再增大浓度，酶活基本不变，这时酶反应与 底物浓度无关，故以下实验底物浓度取 0.625mmol/L。
2.2.2 p H 值对酶活的影响 酶活性受 pH 值的影响较大，本实验考察了β- 葡萄
糖苷酶在 pH 为 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、 10.0、11.0 的缓冲溶液中酶的活性，结果见图 3，由图 3 可知，β- 葡萄糖苷酶作用最佳 p H 为 5 . 0 。
京尼平苷(geniposide)又称栀子苷，是从茜草科植 物栀子果实中提取得到的一种环烯醚萜葡萄糖苷，易溶 于水，在栀子中的含量为 5 % 左右。研究表明，京尼 平苷经β－葡萄糖苷酶水解后的产物京尼平能与氨基酸 反应生成稳定的蓝色[4]，Jee-eun Park 等还研究了该蓝色
收稿日期：2005-06-29 基金项目：江西省自然科学基金资助项目(0430003) 作者简介：梁华正( 1 9 6 6 - ) ，男，副教授，硕士，主要从事生物技术方面的研究。
1.2.6 回收率实验 精密量取β- 葡萄糖苷酶溶液 5 份各 1.0ml，精密加
入 0.5U/ml 的β- 葡萄糖苷酶溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0ml，然后按照 2.1 的方法，在最佳反应条件下水解， 显色，测 5 9 0 n m 处 O D 值，对照标准曲线计算回收率。
用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶【摘要】目的应用vra-glcnac为底物建立检测nag活力的方法，用于尿液nag活性测定。
方法对离子强度、ph值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。
用该法在日立7180全自动生化分析仪上进行性能分析并测定多种肾病尿样nag活性，结果该法最低检出限1.5 u/l，线性范围可达200u/l(r=0.9979)，批内cv为＜4％，批间cv＜6％,回收率为101.2％。
结论本法灵敏度高，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作。
【关键词】 vra-glcnac；n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶；动力学法n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶(nag)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，尿中nag主要来源于肾近曲小管上皮细胞，当近曲小管上皮细胞受损时，尿nag活性将显著升高且早于其他尿酶，对肾小管损害的早期诊断有较大价值［1］，且nag上升程度与肾小管损伤程度成正比。
［2］可作为早期诊断肾损害的尿标志性蛋白［3］。
本文基于nag催化vra-glcnac生成红色vra产物，经反复试验确定最佳实验条件，建立检测尿nag活力的动力学分析法，该法用于尿nag 活力测定，均获得满意结果。
1 材料与方法1.1 试剂和仪器 (1)试剂1(r1)：柠檬酸缓冲液150mmol/l、vra-glcnac1.0g/l、稳定剂适量。
(2)试剂2(r2)：ph碳酸钠缓冲液（10.0）。
(3)nag标准酶和质控品，由浙江伊利康生物技术公司提供。
1.2 样本随机中段尿样。
1.3 方法1.3.1 测定原理样本中的nag催化底物vra-glcnac水解糖苷链,，生成产物vra，vra在505nm处有最大吸收峰，通过测定505nm 处每分钟的吸光度变化速率，可计算出nag的活性。
即在最佳实验条件下，1000ml样品中nag每分钟水解1μmol/l 的vra-glcnac 发生转变为1u的nag酶量为1个单位，简称u/l。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(MPT底物法)产品技术要求丹大
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT底物法）适用范围：本品用于体外定量测定人血清中抗链球菌溶血素“O”的含量。
本品用于体外定量测定人尿液中NAG的活性。
1.1规格规格1： (试剂1：15mL；试剂2： 5mL)；规格2： (试剂1：30mL；试剂2：10mL)；规格3： (试剂1：60mL；试剂2：20mL)；校准品（冻干品）：为选配规格1（0.3mL×1；2水平)；规格2（0.5mL×1；2水平)；规格3（1.0mL×1；2水平)；质控品（冻干品）：为选配规格1（0.5mL×2；2水平)；规格2（1.0mL×2；2水平)。
1.2组成试剂盒组成见表1表1 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒组成2.1试剂2.1.1外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；试剂1、试剂2为无色透明液体，不得有沉淀和絮状物。
2.1.2装量每瓶不少于标示值。
2.1.3试剂空白吸光度用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在A340nm处测定试剂空白吸光度A≤0.4，空白变化率(△A/min)≤0.005。
2.1.4分析灵敏度测定20U/L的样品，吸光度变化率(△A/min)≥0.005。
2.1.5线性范围2.1.5.1在[0.1,200] U/L内,相关系数R≥0.990。
2.1.5.2在[0.1,20]U/L内，线性绝对偏差不超过±2U/L；[20,200]U/L内，线性相对偏差不超过±10%。
2.1.6重复性重复测试(85±17) U/L和(170±34) U/L样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大5%。
2.1.7批间差测定(85±17) U/L和(170±34) U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.1.8准确度）中加入一定体积高于200 U/L的N-乙酰-在正常浓度范围的临床样本（C）或由纯品配制的标准溶液，回收率应在90%-110%β-D-氨基葡萄糖苷酶纯品（Cs范围内。
β内酰胺酶(拮抗剂)杯碟法等检测方法-内部资料
深圳市易瑞生物技术有限公司简介 企业承担部分国家科研项目
科技部科技型中小企业技术创新基金项目（项目编号： 09C26214425280） 科技部国际科技合作专项项目（项目编号：2011DFA32930） 国家“十二五”科技支撑计划项目（项目编号： 2012BAK17B10） 科技部科技型中小企业技术创新基金（项目编号： 13C26214424714 ） 深圳市科技研发资金技术研究开发计划——深港创新圈合作研发项目 （项目编号：JSE201109160036A）
一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法（2012102333772）
利用免疫层析技术区分检测具有相似分子结构的小分子 （201210547765.8）
一种超灵敏、定量免疫层析装置及检测方法（2011102041572）
具有壳核结构的磁性荧光纳米颗粒的制备方法及应用（2011102956054） 瘦肉精联检试纸条（201220716928.6）
β内酰胺酶（拮抗剂）的检测方法 β内酰胺酶（拮抗剂）的检测方法 舒巴坦敏感的β 内酰胺酶检测—杯碟法 深圳易瑞抗原抗体法快速检测—试纸条法 其他检测方法
β内酰胺酶（拮抗剂）的检测方法 β内酰胺酶（拮抗剂）的检测方法 舒巴坦敏感的β 内酰胺酶检测—杯碟法 本检测方法为间接法，用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株 藤黄微球菌作为指示菌，利用舒巴坦特异性抑制β -内酰胺酶的活 性间接测定样品是否含有β -内酰胺酶类药物。在参照杯（本方法 中的 C 和 D 杯)能证明加入的舒巴坦有活性的前提下比较判定杯 (本方法中的 A 和 B 杯)抑菌圈直径，如果抑菌圈直径相差 <3mm， 即两杯中的抗生素均未被分解，证明样品中无β -内酰胺酶残留； 如果抑菌圈直径相差≥3mm，即未加舒巴坦的 A 杯中抗生素被分 解，而加入舒巴坦的B杯中抗生素未被分解，证明样品中有β -内 酰胺酶残留。 本方法的检出限为0.5U/ml 本方法单样检测时间为 24 小时。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(MPT底物法)产品技术要求baiding
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT底物法）适用范围：用于体外定量测定人尿液中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1规格校准品(选配)：1×1mL；质控品(选配)：1×1mL。
1.2组成：注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。
2.1 外观2.1.1试剂1：无色至淡黄色液体，无浑浊，无不溶物。
2.1.2试剂2：无色至淡黄色液体。
2.1.3校准品：无色至淡黄色液体。
2.1.4质控品：无色至淡黄色液体。
2.1.5包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。
2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。
2.3 试剂空白吸光度试剂空白吸光度≤0.5；2.4 分析灵敏度样本浓度为100 U/L时，△A≥0.01 。
2.5 线性区间在[1，200] U/L范围内，线性相关系数r≥0.990；测试浓度在[1，30] U/L时，绝对偏差不超过±3 U/L，测试浓度在（30，200] U/L时，相对偏差不超过±10%。
2.6 精密度2.6.1 批內精密度用高、低2个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。
2.6.2批间差用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。
2.7 准确度回收率在85%-115%范围内。
2.8 质控品赋值有效性测试结果在质控范围内。
2.9 瓶内均匀性校准品和质控品瓶内均匀性（CV）应不大于10%。
2.10 量值溯源校准品量值溯源至公司内部工作校准品并，与北京九强生物技术股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT底物法）比对验证。
2.11 稳定性2.11.1校准品开瓶稳定性校准品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。
稳定期过后4小时内进行测试，测试结果与靶值的相对偏差不超过±10%。
2.11.2质控品开瓶稳定性质控品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。
β-N-乙酰葡萄糖苷酶的检测
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
内容 产品储存条件： 产品组成： 有效期： 重要事项说明： 产品简介： 产品选择指南： 自备仪器试剂耗材： 产品使用方法： 相关产品：
对照孔
50 -4-
试剂 A
250
250
底物缓冲液
250
混匀，37℃准确反应 15 分钟。
试剂 C
1000
1000
1000
底物缓冲液
试剂 D
25
25
25
【注】：
37℃反应时可以水浴也可以置培养箱。
产品说明书
1000 250 25
充分混匀，2000g 离心一分钟，吸取 200ul 上清液体加入 96 孔板。 用纯水调零，波长 400nm 处测定各孔的吸光度值。
贝博® BBcellProbe® β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒（PNP 比色法）（NAG Colorimetric Assay Kit）检测原理是在酸性条件下 NAG 可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解， 释放出游离的对硝基酚(p-nitrophenol，PNP)，在碱性条件下 p-nitrophenol 呈黄色产物，产物 黄色越深，说明β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法 测定 400～410nm 处吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酶活性水平。
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※ ※ ※ 重要事项 ※ ※ ※
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N -acetyl-β-D-glocosaminidase ,NAG)测定
尿N－乙酰－β－D－氨基葡萄糖苷酶（N －acetyl－β－D－
glocosaminidase ，NAG）测定
NAG是存在于肾小管及尿路上皮细胞中的溶酶体酶之一，属酸性水解酶。
通常不能被肾小球滤过，当肾脏损伤时，此酶活性可明显升高，甚至高于正常人1200 倍。
所以它对诊断肾损伤及估计其受损程度很有临床价值。
参考值
＜22 U／g 肌酐
临床意义
1．各种肾实质性疾患引起的肾小管损伤都可使N A G 浓度升高，其升高程度与肾小管损伤程度成正比，若N A G 持续升高说明病情活动或复发。
2．肾移植若出现排异反应时，通常在排异前1 ～3d 尿N A G 即可出现增高现象，所以有助于排异反应的早期诊断。
3．有肾毒性的药物如庆大霉素等可导致尿N A G 的活性增加，停药后应恢复正常。
4．临床上常将N A G 与G AL 同时监测以分析病人的肾脏功能状态。
G AL ／N A G 比值越低说明病变越严重，反之则表示损伤正在恢复中，且预后较好。
α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法
α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法2.2实验方法2.2.1α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法2.2.1.1 反应溶液的制备（1）配制底物PNPG溶液：精确称取0.3766gPNPG，加适量0.1mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，再用容量瓶准确定容到50mL，配制成25mmol/L的母液。
将母液分别稀释成0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L7个不同梯度的标准品溶液，备用。
（2）配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液。
再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶液，备用。
（3）配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精确称取0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL，配制成1000μg/mL DNJ标准母液。
将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60μg/mL六个不同梯度的标准品溶液，备用。
（6）0.2mol/L的Na2CO3：称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。
2.2.1.2 PNP标准曲线的绘制精确称取0.0278g对硝基酚（PNP），加0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，再用容量瓶定容至10mL，即得20mmol/L母液。
用蒸馏水将其母液稀释成浓度分别为1、5、10、20、40、40、80和100μmol/L的标准溶液。
取100μl上述标准液，各加入150μL 0.2mol/L 的Na2CO3，混匀 1 min ，再于405 nm处测定其吸光度，得标准曲线方程：y=128.13x+0.3579 (R2 =0.9998)，其中y 为浓度，x为吸光值。
2.2.1.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定测定方法参照Masao Hattori等试验条件，并做调整。
全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶PNP-NAG连续检测法
全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶PNP-NAG连续检测法周午琼;王向阳【期刊名称】《江西医学检验》【年(卷),期】2005(23)1【摘要】目的评价一种以PNP-NAG为基质的全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性。
方法尿样中NAG作用于底物PNP-NAG水解游离PNP(对硝基酚),其生成速率与酶活性在一定范围内成正比。
结果该方法线性范围达200U/L,平均回收率为99.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为2.7%和4.3%。
与CNP-NAG基质法有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=1.004X-0.084,r=0.9972。
103例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:1.33～11.17U/gCr(x±2s)。
结论全液体稳定试剂(PNP-NAG基质法)测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶具有操作简单、快速灵敏,结果可靠的优点,适合临床应用。
【总页数】2页(P43-43)【关键词】NAG;尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;液体试剂;PNP;临床应用;尿样;批间变异;法线;CV;对硝基酚【作者】周午琼;王向阳【作者单位】浙江省嵊州市人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446;R587【相关文献】1.全液体试剂测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶:PNP-NAG连续检测法 [J], 周午琼;王向阳2.尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估 [J], 韩平治;丁进芳3.尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白、尿α1-微量球蛋白检测对糖尿病肾病的早期诊断价值及临床意义 [J], 刘红;邢淑清;赵红娟;赵志刚;杜爽4.以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性 [J], 周午琼;王向阳5.检测尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的玻化试剂 [J], 范培昌;钱;章平;田景雯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶新型底物的合成及在肾小管疾病诊断中的应用
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶新型底物的合成及在肾小管疾病诊断中的应用徐蕾;姚莉韵;刘慧中;张建华;杨婉花【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)005【摘要】目的优化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的新型底物6-甲基-2-吡啶基-1-硫-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的合成方法,探讨其在肾小管疾病诊断中的应用价值.方法采用活泼中间物(1-氯-1-脱氧乙酰糖)与6-甲基-2-巯基吡啶成苷合成底物；以MPT-NAG为底物,采用全自动生化仪测定糖尿病肾病、肾病综合征、肾移植患者和正常对照者尿液样本中NAG的活性.结果底物MPT-NAG的结构经元素分析和1HNMR谱鉴定,高效液相色谱(HPLC)检测纯度达99.8％.NAG活性测定结果表明,糖尿病肾病、肾病综合征和肾移植患者的尿NAG 活性增高,与正常对照者比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论经优化制备工艺合成获得NAG新型底物MPT-NAG,所用原料成本低、操作简便且产物得率较高,在肾小管疾病的诊断中具有临床应用价值.%Objective To optimize the synthesis approach of 6-methyl-2-pyridyl N-acetyl-l-thio-β-D-glucosaminide (MPT-NAG) as a novel substrate for N-aeetyl-β-D-glucosaminidase ( NAG), and explore its value in diagnosis of renal tubular lesions. Methods The substrate was prepared by the use of 1-chloro-l-deoxy-tetraacelyl-D-glucosamine and 2-mercato-6-methylpyridine in glycoside reaction, and urinary NAG activities of samples from patients with diabetic nephropathy, patients with nephrotic syndrome, patients with renal transplantation andnormal controls were detected by automated analytical device with MPT-NAG as substrate. Results The structure of the substrate of MPT-NAG was identified by elemental analysis and ' HNMR, and the purity was 99. 8% determined by high performance liquid chromatography ( HPLC). It was revealed that the urinary NAG activities in patients with diabetic nephrnpathy, nephrotic syndrome and renal transplantation were significantly higher than those in the normal group ( P < 0. 01). Conclusion The synthesized novel substrate of MPT-NAG obtained by optimized approach with low cost and high production can be used in the diagnosis of renal tubular lesions.【总页数】5页(P684-688)【作者】徐蕾;姚莉韵;刘慧中;张建华;杨婉花【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院药剂科,上海200025;上海交通大学医学院药学系,上海200025;上海交通大学医学院化学生物学实验中心,上海200025;上海交通大学医学院药学系,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院药剂科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R446.122;R692.6【相关文献】1.用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 [J], 凌兰芳2.尿视黄醇结合蛋白、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶及尿蛋白检测在IgA肾病患者肾小管间质损害中的临床意义 [J], 尹晓丽;张继强3.以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性 [J], 周午琼;王向阳4.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的基质合成及其动力学法测定 [J], 周永列5.铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响 [J], 王学谦;白雪涛;尹先仁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（CNP-NAG底物法）产品技术要求senmeixikema
乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（CNP-NAG底物法）产品技术要求senmeixikemaN-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（CNP-NAG底物法）O-适用范围：用于体外定量测定人血清或尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1规格a）试剂1：1×50ml，试剂2：1×10ml；b）试剂1：4×60ml，试剂2：1×48ml；c）试剂1：1×60ml，试剂2：1×12ml；d）试剂1：1×70ml，试剂2：1×14ml；e）试剂1：1×40ml，试剂2：1×8ml；f）试剂1：1×80ml，试剂2：1×16ml；g）试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml。
1.2 组成试剂主要组分见表1：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液，试剂2：淡黄色透明溶液。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在405nm处测定试剂空白吸光度，应不超过1.2。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min应不超过0.1。
2.4 分析灵敏度测试380U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.005。
2.5 准确度回收率应在85%～115%范围内。
2.6 重复性变异系数（CV）应不超过5%。
2.7 线性2.7.1在[2,400]U/L范围内，线性回归的相关系数不低于0.990；2.7.2测试浓度(60,400]U/L的样品，相对偏差应不超过±15%；测试浓度[2,60]U/L的样品，绝对偏差应不超过±9U/L。
2.8 批间差相对极差应小于10%。
2.9 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到18个月后的试剂进行检测，应符合本技术要求2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
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用VRA-GlcNAc为底物测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
【摘要】目的应用VRA-GlcNAc为底物建立检测NAG活力的方法，用于尿液NAG活性测定。
方法对离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。
用该法在日立7180全自动生化分析仪上进行性能分析并测定多种肾病尿样NAG活性，结果该法最低检出限 1.5 U/L，线性范围可达200U/L(r=0.9979)，批内CV为＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。
结论本法灵敏度高，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作。
【关键词】VRA-GlcNAc；N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶；动力学法
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，尿中NAG主要来源于肾近曲小管上皮细胞，当近曲小管上皮细胞受损时，尿NAG活性将显著升高且早于其他尿酶，对肾小管损害的早期诊断有较大价值［1］，且NAG上升程度与肾小管损伤程度成正比。
［2］可作为早期诊断肾损害的尿标志性蛋白［3］。
本文基于NAG催化VRA-GLCNAC生成红色VRA产物，经反复试验确定最佳实验条件，建立检测尿NAG活力的动力学分析法，该法用于尿NAG活力测定，均获得满意结果。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器(1)试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液150mmol/L、VRA-GlcNAc1.0g/L、稳定剂适量。
(2)试剂2(R2)：pH碳酸钠缓冲液3 讨论近年来，随着对NAG的研究不断深入，其检测方法也在不断发展。
主要
有荧光分光光度法和可见分光光度法。
前者因所需仪器价格昂贵，且对底物溶液配制的要求较高而不宜用作一般医院常规检验；后者试剂稳定性欠佳，难以满足临床检验要求,目前都采用PNP-NAG和CNP-NAG、MNP-NAG作底物建立的方法[4-5],这些方法由于在液体状态下不稳定，造成试剂浪费严重，临床难于推广。
本文以VRA-GLCNAC底物建立的NAG测定试剂优点在于试剂在液体状态稳定性好，该方法最低检出限为1.5 U/L，线性范围可达200U/L，批内CV＜4％，批间CV＜6％,回收率为101.2％。
通过测定64例各种肾病患者和40例正常人尿NAG活性，结果肾病患者组尿NAG活性均明显高于正常对照组，两组有显著差异（P＜0.05），
综上所述，本文用VRA-GLCNAC建立的测定尿NAG活性的方法，灵敏度高，线性范围宽、精密度好，结果准确，试剂稳定，适用于全自动生化分析仪操作，有利于临床对肾脏疾病的早发现、早治疗。
参考文献
[1]丛玉隆，马骏龙.当代尿液分析技术与临床[M]．北京：中国科学技术出版社，1998：l49-150．
[2]朱立华.肾脏疾病的生化、免疫检测技术进展[M].中华检验医学杂志.2002,25(2)：307．
[3] 李晓红，盛光耀.尿p2一MG和尿NAG在儿童过敏性紫癜肾损害早期诊断中的意义.山东医药，2010,50（13）:87-88.
[4]周永列，等. N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的基质合成及其动力学法测定. 临床检验杂志,1993 11(3):114-117
[5]徐朝阳,王峰,宋克征.尿酶NAG改良速率法测定及其临床应用.江西医学检验,2004,22(6)：521-523。